เทคโนโลยีอัลตราซาวนด์ Hielscher

อัลตราโซนิกการเตรียมของซี Elegans ตัวอย่าง

คของelegans, ไส้เดือนฝอยหนอน, เป็นสิ่งมีชีวิตรูปแบบที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในชีววิทยาของ การเตรียมตัวอย่างก่อนการวิเคราะห์ต้องสลายโปรตีนและไขมันสกัดเช่นเดียวกับการกระจายตัวของอาร์เอ็นเอซึ่งสามารถดําเนินการได้อย่างน่าเชื่อถือผ่านทาง sonication อัลตราโซนิกเซลล์ disruptors มีความน่าเชื่อถือ, อุปกรณ์ที่ซับซ้อนและง่ายต่อการใช้งานสําหรับการเตรียมอย่างรวดเร็วของ C. elegans ตัวอย่าง.

อัลตราโซนิกการเตรียมของซี Elegans ตัวอย่าง

ซีเอเลแกนเป็นพยาธิตัวกลมซึ่งใช้กันอย่างแพร่หลายในห้องปฏิบัติการวิจัยเพื่อตรวจสอบจีโนมชีววิทยาการพัฒนาและโรค ยีนจํานวนมากในจีโนมของ C. elegans มีคู่ทํางานในมนุษย์. ดังนั้นหนอนไส้เดือนฝอยเป็นรูปแบบที่มีประโยชน์อย่างมากสําหรับโรคมนุษย์ ข้อดีอื่น ๆ สําหรับการใช้งานกว้างของ C. elegans เป็นการเพาะปลูกง่ายและราคาถูกบนแผ่นที่มีแบคทีเรีย (เช่น coli) ความโปร่งใสการจัดการที่สะดวกเช่นเดียวกับความเป็นไปได้ที่จะแช่แข็งและจัดเก็บหนอนเป็นเวลานาน
โปรตีนและไขมันเป็นขั้นตอนปกติในห้องปฏิบัติการและการเตรียมตัวอย่างอัลตราโซนิกเป็นวิธีการจัดตั้งขึ้นเพื่อไส้เดือนฝอย lyse C. elegans ในทุกขั้นตอนการพัฒนา (เช่นตัวอ่อนตัวอ่อน L1-L4, ผู้ใหญ่) เนื่องจาก C. elegans ยังใช้เป็นระบบการแสดงออกของโปรตีนเพื่อ over - express โปรตีนเป้าหมาย, ที่เชื่อถือได้, สลายซ้ําได้และวิธีการสกัดโปรตีน, ซึ่งจะช่วยให้อัตราผลตอบแทนโปรตีนสูง, เป็นสิ่งจําเป็น. ระบบการหยุดชะงักของเซลล์อัลตราโซนิกและการสกัดมีเป็น homogenizers ชนิดโพรบ และเป็น ultrasonicators หลายตัวอย่าง การจัดเตรียมตัวอย่างที่สะดวกและชนิดของหมายเลขขนาดตัวอย่าง Hielscher Ultrasonics มี disruptor เซลล์อัลตราโซนิกที่เหมาะสําหรับขั้นตอนห้องปฏิบัติการของคุณ
C. elegans is a widely used model organism in biological research. Ultrasonic lysis is a sophisticated, reliable, reproducible and rapid technique to prepare high-quality protein extracts from C. elegans.

อัลตราโซนิกซี elegans สลายสําหรับ

  • การเตรียมเนื้อเดียวกันหนอน
  • การสกัดโปรตีน
  • การสกัดไขมัน
  • ปริมาณโปรตีน
  • การตกตะกอนของภูมิคุ้มกัน
  • ซับตะวันตก
  • การสกัดอาร์เอ็นเอ
  • เอนไซม์ทดสอบ
มีแปดโพรบอัลตราโซนิกสําหรับ sonication ของหลุมของแผ่นไมโครไทเทอร์

มีแปดโพรบอัลตราโซนิกสําหรับ sonication ของหลุมของแผ่นไมโครไทเทอร์

ขอข้อมูล





อัลตราโซนิกโปรโตคอลสําหรับการหยุดชะงัก C. Elegans และ Lysis

อัลตราโซนิกทําให้เป็นเนื้อเดียวกันและการสลายของ C. elegans และโปรตีนที่ตามมาและการสกัดไขมันสามารถทําได้โดยใช้ขั้นตอนที่แตกต่างกันโดยใช้การทําให้เป็นเนื้อเดียวกันที่แตกต่างกันและบัฟเฟอร์ lysis ฯลฯ โปรโตคอล lysis ทั้งหมดมีเหมือนกันว่าตัวอย่างจะต้องเก็บไว้อย่างต่อเนื่องบนน้ําแข็งเพื่อป้องกันการย่อยสลายโปรตีน ด้านล่างเรานําเสนอคุณบาง lysis อัลตราโซนิกและรวดเร็วการสลายตัวและโปรโตคอลการสกัดสําหรับการเตรียมโปรตีนที่มีคุณภาพสูงหรือไขมันที่ประกอบด้วย C. elegans ตัวอย่าง

ข้อดีของอัลตราโซนิกซี elegans Lysis

  • น่าเชื่อถือ
  • ทำซ้ำได้
  • แม่นยํา- ควบคุม
  • การควบคุมกระบวนการที่เชื่อถือได้
  • วิธีอ่อนโยน
  • ง่ายต่อการใช้
  • ปลอดภัย

สกัดโปรตีนอัลตราโซนิกจากตัวอย่าง C. elegans

อัลตราโซนิก lysis และการสกัดโปรตีนของหนอน C. elegans สามารถดําเนินการโดยใช้โปรโตคอลต่างๆ ด้านล่างนี้เรานําเสนอคุณไม่กี่โปรโตคอล lysis ที่เชื่อถือได้และรวดเร็วสําหรับผลการสกัดโปรตีนที่ทําซ้ําได้

การเตรียมการอย่างรวดเร็วของสารสกัดจาก Cytosolic จาก C. elegans หนอนโดย Sonication

ด้วยโปรโตคอลต่อไปนี้คุณสามารถเตรียม C. elegans lysates ในเวลาน้อยกว่า 30 นาที
คอลเลกชันของซีเอเลแกนส์
เลือกหนอน C. elegans ที่ต้องการลงในท่อ 1.5ml ฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ําเกลือ (PBS) หรือล้างพวกเขาจากแผ่นที่มี 1.5ml PBS. เครื่องปั่นเหวี่ยงที่สําหรับ 1 นาทีที่ 2000rpm เพื่อเม็ด. เก็บตัวอย่างได้ตลอดเวลาบนน้ําแข็ง
จากนั้นล้างหนอนสองครั้งด้วย PBS
หลังจากนั้นล้างเวิร์มสองครั้งด้วย ddH2O
ใช้เวิร์มในอย่างน้อย 500ul ของบัฟเฟอร์การทําให้เป็นเนื้อเดียวกัน (HB) ตัวอย่างหนอนอยู่ในขณะนี้พร้อมสําหรับการสลายอัลตราโซนิก
สําหรับโปรตีนที่สูงกว่าคุณภาพสารสกัดจาก, คุณอาจต้องการลดการปนเปื้อนของแบคทีเรียโดยการล้างเวิร์มสําหรับ 5min แต่ละใน PBS และปราศจากเชื้อ, น้ําบริสุทธิ์พิเศษ (ddH2O) หรือทําซูโครสลอย เก็บตัวอย่างหนอนอย่างต่อเนื่องบนน้ําแข็ง

อัลตราโซนิก C. elegans lysis โพรโทคอล

  • ตรวจสอบให้แน่ใจว่า คุณเตรียม ultrasonicator ล่วงหน้าเพื่อให้ homogenizer อัลตราโซนิกพร้อมสําหรับการใช้งาน (โพรบติดตั้ง sonication โปรแกรม pre-set)
  • Ultrasonicator UP200Ht (200 watts, 26kHz) with microtip S26d2 for the preparation of biological samplesถ้า ultrasonicator ของคุณเป็นขาตั้งติดวางน้ําแข็งอาบน้ํากับหลอดตัวอย่างของคุณภายใต้การสอบสวนอัลตราโซนิก และแทรกโพรบอัลตราโซนิกลงในหลอด 1.5ml

  • สําหรับ C. elegans lysis กับ UP200St หรือ UP200Ht ควรทํา ultrasonication โดยใช้ไมโครทิป (เช่นโพรบ 2 มม. S26d2; ดูภาพซ้าย) ที่ความกว้าง 40% สําหรับ 1 วินาทีที่มี 30 วินาทีหยุดชั่วคราวในระหว่าง รอบ sonication 5 สําหรับแต่ละ 1 วินาทีด้วยการหยุดชั่วคราว 30 วินาทีเหมาะสําหรับ C. elegans lysis หากคุณทําการสลายเป็นครั้งแรกคุณสามารถตรวจสอบความก้าวหน้าของ lysis ใน aliquots ขนาดเล็กของตัวอย่างหลังจากชีพจรแต่ละครั้งโดยใช้กล้องจุลทรรศน์
  • Lysis จะเสร็จสมบูรณ์เมื่อหนอนถูกรบกวน ผล over sonication ในความแตกแยกของนิวเคลียสและจะกลายเป็นมองเห็นได้เมื่อตัวอย่างได้รับหนืดหรือโฟม เพื่อป้องกันการย่อยสลายตัวอย่าง ให้ใช้พัลส์เพิ่มเติมหากจําเป็น อย่าเพิ่มเวลาของแต่ละวงจรชีพจรอัลตราโซนิกเพื่อให้ได้สารสกัดโปรตีนที่มีคุณภาพสูง
  • เซลล์ไลเสทโดย centrifuging หนอนไลเซดที่ 14,000 รอบต่อนาทีสําหรับ 10 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส
  • จากนั้น, โอนเหนือธรรมชาติไปยังหลอดสดและเตรียมความพร้อมสําหรับ immunoprecipitation หรือการทดสอบอื่น ๆ.

หมายเหตุสําหรับบัฟเฟอร์การทําให้เป็นเนื้อเดียวกัน: เตรียมบัฟเฟอร์การทําให้เป็นเนื้อเดียวกันสําหรับโพรโทคอล lysis อัลตราโซนิกข้างต้นดังนี้:

  • 15 mM เฮปส์ pH 7.6 – 15 ml of 0.5 M
  • 10 mM KCl – 2.5 มิลลิลิตร 2 ม.
  • 1.5 mmมิลลิกรัมcl2 – 0.75 ml 1 M
  • 01.1 mmedta – 100 ul จาก 0.5 M
  • 05 mm EGTA – 2.5 มิลลิลิตร 0.1 ม.
  • 44 m ซูโครส – 14.7 ml 50 %
  • เพิ่มสิทธิก่อนการใช้งาน: 1m DTT – 1000x ของ 1M
  • บวกสารยับยั้งโปรตีเอส

อัลตราโซนิกสลายของ C. elegans สําหรับ Affinity เชิงปริมาณบริสุทธิ์ Assays

ซีเอเลแกนตัวอ่อน (∼2 ล้านต่อทําซ้ํา) ถูกเก็บเกี่ยวสดใหม่ในเชิงนิเวศโดยการฟอกสี hermaphrodites หนุ่ม gravid และ sonicated บนน้ําแข็ง (รอบ : 0.5 วินาที, แอมพลิจูด: 40-45%, 5 จังหวะ / เซสชัน, 5 ครั้ง, ช่วงเวลาระหว่างเซสชัน: 30 วินาที; โปรเซสเซอร์อัลตราโซนิก UP200S ด้วยไมโครปลาย S26d2 (Hielscher Ultrasonics GmbH)) ในบัฟเฟอร์ lysis (ปริมาณรวม: ∼600 ไมโครลิตร; 50 มิลลิเมตร Tris-HCl, pH 7.4, 100 มม. KCl, 1 mm MgCl2, 1 mm EGTA, 1 mm DTT, 10% กลีเซอรอล, สารยับยั้งโปรติเอส, 0.1% หลังจาก sonication, Nonidet P-40 ทดแทนถูกเพิ่มขึ้นไป 1% และไลเซตถูกบ่มด้วยหัวมากกว่าการหมุนหางที่ 4 ° C เป็นเวลา 30 นาทีตามด้วยการเหวี่ยงที่ 20,000 × กรัมเป็นเวลา 20 นาทีที่ 4 ° C ไลเสทถูกล้างแล้ว aspirated โดยไม่รบกวนชั้นไขมันบนและแยกออกครึ่งหนึ่งเป็นทั้งต่อต้าน GFP agarose ประคําหรือลูกปัดควบคุมที่ถูกบล็อก (40-50 ไมโครลิตร) หลังจากหัวหมุนหางที่ 4 ° C เป็นเวลา 60-90 นาทีลูกปัดถูกล้างครั้งเดียวด้วยบัฟเฟอร์ lysis ที่มี 0.1% Nonidet P-40 ทดแทน ตามด้วยสองครั้งของการซักในบัฟเฟอร์อย่างใดอย่างหนึ่ง I (25 มิลลิเมตรไตร-HCl, pH 7.4, 300 mm NaCl, 1 mm MgCl2) หรือบัฟเฟอร์ที่สอง (1 มิลลิเมตรไตร-HCl, pH 7.4, 150 มม. โซเดียมคลอไรด์, 1 mm MgCl2) หรือทั้งสองอย่าง. สําหรับการลดการดึง GFP:MBK-2 การทดสอบแยกกันสองชุดจะดําเนินการโดยใช้เงื่อนไขการซักที่แตกต่างกัน โปรตีนถูก eluted โดยวงโคจรสั่นใน 50 ไมโครลิตร 6 m urea / 2 M thiourea ที่อุณหภูมิห้อง. สําหรับการทดลองแบบดึงลง GFP MBK-:GFP โปรตีนถูก eluted สองครั้งโดยการเขย่าใน 50μl ของ 8 m guanidinium คลอไรด์ที่ 90 ° C ตามด้วยการตกตะกอนเอทานอล ตัวอย่างโปรตีนที่ eluted ถูกย่อยแล้วในสารละลาย.
(cf. เฉิน et., 2016)

VialTweeter at the ultrasonic processor UP200ST

VialTweeter หน่วยเตรียมหลายตัวอย่างสําหรับ sonication พร้อมกันของ 10 หลอดทดสอบ

อัลตราโซนิกเนื้อเดียวกันหนอนและ Lysis

สําหรับ C.elegans lysis และขั้นตอนการสกัดโปรตีน, 30,000 nemotodes ของขั้นตอนที่เกี่ยวข้องถูกเก็บรวบรวมต่อตัวอย่างและล้างในน้ําแข็งเย็น S -basal, เข้มข้นโดยการเหวี่ยงที่ 1500 รอบต่อนาทีสําหรับ 2 นาที, ล้างหกครั้งด้วยน้ําแข็งเย็น S - basal เพื่อลบที่เหลือแบคทีเรียและเก็บไว้แล้วบนน้ําแข็งจนพร้อมสําหรับการใช้งาน สําหรับการสกัดโปรตีนหนอนสําหรับผู้ใหญ่ gravid ได้รับอนุญาตให้สร้างเม็ดขนาดกะทัดรัดหลังจากล้าง S-basal ล่าสุด เม็ดหนอนถูกแล้ว resuspended ใน 1 มล. ของน้ําแข็งเย็นสกัดบัฟเฟอร์ [20 mM โพแทสเซียมฟอสเฟต, pH 7.4, 2mM EDTA, 1% Triton-X-100, สารยับยั้งโปรติเอต (Sigma P2714)] และประมวลผลทันที.
∼30,000 หนอนสําหรับผู้ใหญ่ gravid -(สอดคล้องกับน้ําหนัก∼100 mg เปียก), ถูก sonicated บนน้ําแข็งโดยใช้ ultrasonicator probe-type (เช่น UP50H กับ microtip MS2) ที่ 40% แอมพลิจูดสําหรับ 10 รอบ 3 วินาทีบน 30 วินาทีปิดใน 1 มล. ของบัฟเฟอร์การสกัดน้ําแข็งเย็น (cf. Baskharan และคณะ. 2012)

อัลตราโซนิกไขมันสกัดจากซีเอเลแกน

ใน lipidomics, สาขาของเมตาบอลิม, เติมเต็มไขมันของระบบชีวภาพที่โดดเด่นและวิเคราะห์. ค. elegans ใช้กันอย่างแพร่หลายใน lipidomics เพื่อตรวจสอบปฏิสัมพันธ์ของไขมันเผาผลาญและผลกระทบต่อสุขภาพและอายุการใช้งาน.
การสลายอัลตราโซนิกและการสกัดจะใช้เพื่อปล่อยไขมันเช่น sphingolipids จาก C. elegans ตัวอ่อนตัวอ่อนและหนอนผู้ใหญ่ Ultrasonication ถูกใช้เพื่อเตรียมเนื้อเดียวกันหนอนและต่อมาเพื่อแยกไขมันจากตัวอย่าง
โพรโทคอลสําหรับการสกัดไขมันอัลตราโซนิกจาก C. elegans
ละลาย C. elegans เม็ดบนน้ําแข็งและ resuspend กับ 0.5 มล. อุลตร้าวอเตอร์. 
ตัวอย่าง elegans C. ใน 1,5mL หลอดทดสอบ, ในขณะที่การรักษาตัวอย่างอย่างต่อเนื่องบนน้ําแข็ง.
Sonication สามารถดําเนินการโดยใช้ ultrasonicstor โพรบเช่น Uf200 ःทีหน่วยเตรียมตัวอย่างอัลตราโซนิก VialTweeter (sonication พร้อมกันของ10ตัวอย่าง) หรือ UIP400MTP (สําหรับ sonication ของแผ่นหลายดีเช่นแผ่น 96 ดี) สําหรับสลายอัลตราโซนิกกับ UP200Ht ใช้ micro-tip S26d2. ตั้งค่าโหมดวงจรอัลตราโซนิกในเมนูดิจิตอล ตั้งค่าแอมพลิจูดเป็น 10% และโหมดวงจร sonication ของ 2 วินาทีพัลส์ของ 20 รอบด้วยการหยุดชั่วคราว 30 วินาทีระหว่างการระเบิดของ ultrasonic pulsation แต่ละครั้ง
โอนเหนือไปหลอดแก้วด้วยฝาเกลียว 
ดําเนินการสกัด Folch โดยการเพิ่ม 1 ml ultrawater หลอดแก้วแต่ละตามด้วยการเพิ่ม 6 มล. ของคลอโรฟอร์ม / เมทานอล (อัตราส่วน = 2:1) ผสมกับหลอดแก้วแต่ละหลอด
Vortexหลอดแก้วแต่ละเป็นเวลา30วินาทีสําหรับ4ครั้งของ 
หมุนเหวี่ยงหลอดที่ 1,258 x กรัมสําหรับ 15 นาที (Eppendorf, 5810 R) เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพการแยกเฟส 
โอนเศษน้ําที่ต่ํากว่าไปยังหลอดแก้วสะอาดโดยแก้วพาสเจอร์ปิเปต. 
แห้งส่วน hydrophobic ต่ํากว่าภายใต้การไหลของไนโตรเจนในระเหยไนโตรเจน. 
เก็บเม็ดแห้งใน -80 °C แช่แข็งจนกว่าจะใช้.

อัลตราโซนิกการเตรียมของหนอนไลเสท

หนอนไลเสท : หนอนระยะ L4 ถูกเก็บเกี่ยวและล้างสามครั้งด้วยบัฟเฟอร์ M9 (42.26 mM Na2HPO4, 22.04 mM KH2Po4, 85.56 mM โซเดียมคลอไรด์ และ 0.87 mM MgSO4) เพื่อกําจัดแบคทีเรียทั้งหมด หลังจากลบมากที่สุดของบัฟเฟอร์ M9, เวิร์มถูก resuspended ในบัฟเฟอร์ lysis: 50 mM HEPES, 50 mM KCl, 1mM EDTA, 1m EGTA, 5 mm ฟอสเฟต β กลีเซอรอล, 0.1% (v/v) ไทรทัน X-100, 50 mM โซเดียมฟลูออไรด์, 1 mM โซเดียม orthovanadate, 5 mM โซเดียมไพโรฟอสเฟต, 0.2 mM ฟีนิลเมทานิลและยับยั้งโปรติ. หนอนถูกแช่แข็งในไนโตรเจนเหลวและละลายที่ 37 ° C สําหรับสามครั้งแล้วหนอนถูก sonicated บนน้ําแข็งแห้งกับหน่วย VialTweeter อัลตราโซนิกสําหรับการเตรียมพร้อมกันของหลอดตัวอย่าง 10 Sonication ได้ดําเนินการที่ 50% ความกว้างในรอบ 10 ของ 2 วินาที. ด้วยการหยุด 30 วินาทีระหว่างระเบิด sonication. หลังจากนั้นตัวอย่างถูกหมุนเหวี่ยงที่ 12000 รอบต่อนาทีที่ 4 ° C เป็นเวลา 15 นาที มีการเก็บและเก็บที่อุณหภูมิ -70 องศาเซลเซียส ใช้ปริมาณโปรตีนโดยการทดสอบแบรดฟอร์ด
การกําหนดกลูตาไธโอนรวม GSH และ GSSG: สําหรับปริมาณกลูตาไธโอน, ไลเสทและความมุ่งมั่นได้ทําในวันเดียวกัน. กลูโคสเลี้ยงและควบคุม L4 ตัวอ่อนถูกเก็บเกี่ยวและล้างด้วยบัฟเฟอร์ M9 สามครั้ง หลังจากลบมากที่สุดของบัฟเฟอร์ M9, เวิร์มถูก resuspend ในกรดเมตาฟอสฟออริน้ําแข็งเย็น (5% w / v), แล้วหนอนถูก sonicated ในน้ําแข็งที่มี VialTweeter อัลตราโซนิกที่แอมพลิจูด 50% ในรอบเสียง tenation ของ 2 วินาทีกับ 30 วินาที. หลังจากนั้นหมุนเหวี่ยงที่ 12000 รอบต่อนาทีที่ 4 ̊C เป็นเวลา 15 นาที
(อัลกันตาร์-เฟอร์นันเดซ และคณะ, 2018)

คของelegansเตรียมตัวอย่างก่อนการตกตะกอนและทิชชู่ตะวันตก

ในระยะสั้นสําหรับสารสกัดจากตัวอ่อนตัวอ่อนตัวอ่อน elegans L1 เติบโตในขนาดใหญ่ของเหลว S -กลางวัฒนธรรมเป็นผู้ใหญ่ ตัวอ่อนถูกเก็บรวบรวมโดยใช้วิธีการฟอกสีมาตรฐานและระงับในบัฟเฟอร์ lysis (50 mM Tris, pH 7.5, 100 mM KCl, 1 mM EDTA, 1 mM MgCl2, 8.7% กลีเซอรอล, 0.05% NP-40, 1􏰅 โปรติเอสยับยั้งค๊อกเทล, และ 1􏰅 สารยับยั้งฟอสฟาตาส I และ II), แช่แข็งอย่างรวดเร็วในไนโตรเจนเหลว, และ lysed โดยการทําลายเซลล์อัลตราโซนิกโดยใช้อัลตราโซนิกด้วยไมโครทิปเช่น Uf200 ःที กับ s26d2 สําหรับ10ชีพจรมากกว่า10วินาทีที่30%แอมพลิจูดของ ถ้าจํานวนตัวอย่างที่ใหญ่ขึ้นต้องเตรียมอัลตราโซนิก VialTweeter หรือเครื่องอัลตราโซนิกมัลติเอนกประสงค์ UIP400MTP สําหรับแผ่นดีขอแนะนํา หลังจาก sonication, สารสกัดถูกล้างล่วงหน้าโดยการปั่นเหวี่ยงที่ 30,000 กรัมสําหรับ 20 นาทีที่ 4 ° C. สารสกัดที่ล้างก่อน (300μg ของโปรตีนทั้งหมด) ถูกบ่มด้วย 40μ􏰂กรัมของ anti-CDC-25.1 แอนติบอดี affinity บริสุทธิ์ (การศึกษานี้) ข้ามเชื่อมโยงกับโปรตีน A-agarose, หรือเป็นตัวควบคุม, จํานวนที่คล้ายกันของ immunoglobulin กระต่าย (Ig) G ข้ามที่เชื่อมโยงกับโปรตีน A-agarose ถูกนํามาใช้ในปริมาณรวมของ 200μl ของบัฟเฟอร์ lysis ที่มี 1% NP-40, รวมของลดลงซึ่งการผูกกันไม่เฉพาะเจาะจงของโปรตีนไปยังเมทริกซ์. ตัวอย่างถูกหมุนสําหรับ 1 ชั่วโมงที่ 4 ° C, ลูกปัดถูกล้างสามครั้งด้วยบัฟเฟอร์ lysis, และ eluted กับ 30μl ของ glycine / HCl และ 200 mM NaCl, pH 2.2. หลังจาก immunoprecipitation, eluates ถูกเจือจางใน 30μ􏰂l ของบัฟเฟอร์ตัวอย่าง SDS, ร้อนถึง 95 ° C เป็นเวลา 4 นาทีและโดยทั่วไป 3% ของรวมสําหรับการป้อนข้อมูลและ 30% สําหรับ eluates ถูกนําไปใช้ SDS-PAGE ตามด้วยตะวันตก blotting กับป้องกัน CDC-25.1 (1:400), ต่อต้าน -LIN -23 (1:750), ต่อต้าน ubiquitin (1:1000), anti -GSK3􏰁 (1:500), หรือต่อต้าน􏰁β actin (1:2000) แอนติบอดี ซึ่งสารสกัดไม่ได้รับความตกตะกอนภูมิคุ้มกัน, จํานวนเดียวกันของโปรตีนทั้งหมดที่ได้มาจากสารสกัดเหล่านั้นถูก resuspended ในบัฟเฟอร์ตัวอย่าง SDS, อุ่นถึง 95 ° C, แล้วโดยตรงนําไปใช้ SDS-PAGE และวิเคราะห์โดย blotting ตะวันตก. (cf. Segref et al. 2020)

Probe ชนิด insonifier UP200St สำหรับสลาย

รบกวนเซลล์อัลตราโซนิก UP200St ไมโครทิป S26d2 สําหรับการสลายและโปรตีนสกัด

อัลตราโซนิกสลายภายใต้การควบคุมอุณหภูมิ Prescise

The VialTweeter is a MultiSample Ultraonicator that allows for reliable sample preparation under precisely controlled temperature conditions.การควบคุมอุณหภูมิที่แม่นยําและเชื่อถือได้เป็นสิ่งสําคัญเมื่อจัดการกับตัวอย่างทางชีวภาพ อุณหภูมิสูงเริ่มการย่อยสลายโปรตีนที่เกิดจากความร้อนในตัวอย่าง
เป็นทุกเทคนิคการเตรียมตัวอย่างเชิงกล sonication สร้างความร้อน อย่างไรก็ตามอุณหภูมิของตัวอย่างสามารถควบคุมได้ดีเมื่อใช้ VialTweeter เรานําเสนอตัวเลือกต่างๆในการตรวจสอบและควบคุมอุณหภูมิของตัวอย่างของคุณในขณะที่การเตรียมพวกเขาด้วย VialTweeter และ VialPress สําหรับการวิเคราะห์

  1. การตรวจสอบอุณหภูมิตัวอย่าง: ตัวประมวลผลอัลตราโซนิก UP200St ซึ่งไดรฟ์ VialTweeter เป็นอุปกรณ์ที่มีซอฟต์แวร์อัจฉริยะและเซ็นเซอร์อุณหภูมิแบบเสียบได้ เสียบเซ็นเซอร์อุณหภูมิเข้ากับ UP200St และสอดปลายเซ็นเซอร์อุณหภูมิในหลอดตัวอย่าง ผ่านจอสัมผัสสีดิจิตอลคุณสามารถตั้งค่าในเมนูของ UP200St ช่วงอุณหภูมิที่เฉพาะเจาะจงสําหรับ sonication ตัวอย่างของคุณ เครื่อง ultrasonicator จะหยุดโดยอัตโนมัติเมื่อถึงอุณหภูมิสูงสุดและหยุดชั่วคราวจนกว่าอุณหภูมิตัวอย่างจะลดลงไปต่ํากว่าค่าอุณหภูมิที่ตั้งไว้∆ จากนั้น sonication เริ่มโดยอัตโนมัติอีกครั้ง คุณสมบัติอัจฉริยะนี้ช่วยป้องกันการย่อยสลายที่เกิดจากความร้อน
  2. บล็อก VialTweeter สามารถระบายความร้อนก่อน ใส่บล็อก VialTweeter (เฉพาะ sonotrode โดยไม่ต้องแปลงสัญญาณ!) ลงในตู้เย็นหรือช่องแช่แข็งเพื่อก่อนเย็นบล็อกไทเทเนียมช่วยเลื่อนอุณหภูมิเพิ่มขึ้นในตัวอย่าง ถ้าเป็นไปได้ตัวอย่างตัวเองสามารถระบายความร้อนก่อนเกินไป
  3. ใช้น้ําแข็งแห้งเย็นในระหว่าง sonication ใช้ถาดตื้นที่เต็มไปด้วยน้ําแข็งแห้งและวาง VialTweeter บนน้ําแข็งแห้งเพื่อให้ความร้อนอย่างรวดเร็วสามารถกระจาย.

ค้นหา Disruptor เซลล์อัลตราโซนิกที่ดีที่สุดสําหรับโปรแกรมประยุกต์ Lysis ของคุณ

Hielscher Ultrasonics เป็นผู้ผลิตที่มีประสบการณ์เป็นเวลานานของ disrupters เซลล์อัลตราโซนิกที่มีประสิทธิภาพสูงและ homogenizers สําหรับห้องปฏิบัติการ, ม้านั่งด้านบนและระบบอุตสาหกรรมมาตราส่วน ขนาดเพาะเชื้อแบคทีเรียของคุณ, เป้าหมายการวิจัยหรือการผลิตของคุณและปริมาณของเซลล์การประมวลผลต่อชั่วโมงหรือวันเป็นปัจจัยสําคัญที่จะหา disruptor เซลล์อัลตราโซนิกขวาสําหรับโปรแกรมประยุกต์ของคุณ.
Hielscher Ultrasonics นําเสนอโซลูชั่นต่างๆสําหรับ sonication พร้อมกันหลายตัวอย่าง (ถึง 10 ขวด) เช่นเดียวกับตัวอย่างมวล (เช่น, แผ่นไมโครไทเทอร์ / แผ่น 96-ดี), ultrasonicator lab probe-type คลาสสิกที่มีระดับพลังงานที่แตกต่างกันจาก 50-400 วัตต์เพื่อการประมวลผลอัลตราโซนิกอุตสาหกรรมอย่างเต็มที่ที่มีถึง 16,000 วัตต์ต่อหน่วยสําหรับการหยุดชะงักของเซลล์เชิงพาณิชย์และการสกัดโปรตีนในการผลิตขนาดใหญ่ อัลตราโซนิก Hielscher ทั้งหมดถูกสร้างขึ้นสําหรับการดําเนินงาน 24/7/365 ภายใต้การโหลดเต็มรูปแบบ ความทนทานและความน่าเชื่อถือเป็นคุณสมบัติหลักของอุปกรณ์อัลตราโซนิกของเรา
ทั้งหมด homogenizers อัลตราโซนิกดิจิตอลมีการติดตั้งซอฟต์แวร์สมาร์ท, สัมผัสสีและอัตโนมัติข้อมูล protocolling ซึ่งทําให้อุปกรณ์อัลตราโซนิกเป็นเครื่องมือทํางานสะดวกในห้องปฏิบัติการและการผลิตสิ่งอํานวยความสะดวก
แจ้งให้เราทราบชนิดของเซลล์ปริมาณสิ่งที่มีความถี่และสิ่งที่มีเป้าหมายที่คุณต้องดําเนินการตัวอย่างทางชีวภาพของคุณ เราจะแนะนําให้คุณรบกวนเซลล์อัลตราโซนิกที่เหมาะสมที่สุดสําหรับความต้องการกระบวนการของคุณ

ตารางด้านล่างจะช่วยให้คุณบ่งชี้ของความจุการประมวลผลโดยประมาณของระบบอัลตราโซนิกของเราจาก homogenizers มือถือขนาดกะทัดรัดและ Ultrasonicators MultiSample เพื่อประมวลผลอัลตราโซนิกอุตสาหกรรมสําหรับการใช้งานเชิงพาณิชย์:

ปริมาณชุด อัตราการไหล อุปกรณ์ที่แนะนำ
แผ่นไมโครไทเตอร์ 96 หลุม N.A. UIP400MTP
10 ขวด à 0.5 ถึง 1.5mL N.A. VialTweeter ที่ UP200St
001 ถึง 250mL 5 ถึง 100mL / นาที UP50H
001 ถึง 500mL 10 ถึง 200mL / นาที UP100H
10 ถึง 2000ml 20 ถึง 400ml / นาที Uf200 ःที, UP400St
00.1 เพื่อ 20L 00.2 เพื่อ 4L / นาที UIP2000hdT
10 100L 2 ถึง 10L / นาที UIP4000hdT
N.A. 10 100L / นาที UIP16000
N.A. ที่มีขนาดใหญ่ กลุ่มของ UIP16000

ติดต่อเรา! / ถามเรา!

สอบถามข้อมูลเพิ่มเติม

กรุณาใช้แบบฟอร์มด้านล่างเพื่อขอข้อมูลเพิ่มเติมเกี่ยวกับตัวประมวลผลอัลตราโซนิกโปรแกรมประยุกต์และราคา เราจะยินดีที่จะหารือเกี่ยวกับกระบวนการของคุณกับคุณและเพื่อให้คุณระบบอัลตราโซนิกการประชุมความต้องการของคุณ!










Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

Hielscher Ultrasonics ผลิต homogenizers อัลตราโซนิกประสิทธิภาพสูงสําหรับการใช้งานผสมกระจาย emulsification และสกัดในห้องปฏิบัติการนักบินและอุตสาหกรรมขนาด

วรรณกรรม / อ้างอิง



ข้อเท็จจริงที่รู้

กานีออร์ฮับอักเสบเอเลแกนส์

ค. elegans เป็นไส้เดือนฝอยโปร่งใส (พยาธิตัวกลม) ที่มีความยาวประมาณ 1 มม. ซึ่งกินแบคทีเรีย (เช่น. coli) และมีวงจรชีวิตที่ค่อนข้างสั้น ที่ 20 °Cสายพันธุ์ห้องปฏิบัติการของ C. elegans (N2) มีอายุการใช้งานเฉลี่ยประมาณ 2-3 สัปดาห์และเวลารุ่น 3 ถึง 4 วัน เมื่อ C. elegans เติบโตขึ้นเป็นจํานวนมากซึ่งสามารถทําได้ง่ายภายใต้เงื่อนไขห้องปฏิบัติการที่ควบคุมอย่างแม่นยําพวกเขาสามารถคัดกรองได้ง่ายสําหรับหลักการทํางานของยานวนิยายรวมถึงผลกระทบและปฏิสัมพันธ์ภายในกระบวนการโมเลกุลที่ซับซ้อนในโรคของมนุษย์ จีโนมสั้น, วงจรชีวิตสั้นและการจัดการที่เรียบง่ายในการตั้งค่าห้องปฏิบัติการทําให้ C. elegans เป็นสิ่งมีชีวิตแบบจําลองที่เหมาะสําหรับการวิจัยเช่นจีโนมิกส์, proteomics, ชีววิทยาการพัฒนา, การวิจัยโรค, การพัฒนายาเสพติดฯลฯ.
พยาธิตัวอักเสบสามารถเป็นได้ทั้งเพศชายหรือตุ๊ด มีทั้งอวัยวะสืบพันธุ์ชายและหญิง อย่างไรก็ตามหนอนหญิงไม่มีอยู่ ตุ๊ดสามารถทั้งตนเองปุ๋ยหรือยังสามารถผสมพันธุ์กับหนอนชาย คของelegansสามารถผลิตมากกว่า1,000ไข่ทุกวันของ
ตั้งแต่ C. elegans เป็นหนึ่งในสิ่งมีชีวิตที่ง่ายที่สุดที่มีระบบประสาทหนอนไส้เดือนฝอยถูกนํามาใช้ตั้งแต่ปี 1963 เป็นสิ่งมีชีวิตแบบสําหรับการวิจัย เซลล์ประสาทไม่ยิงศักยภาพการกระทําและไม่แสดงแรงดันไฟฟ้าช่องโซเดียมใด ๆ ในตุ๊ด, ระบบนี้ประกอบด้วย 302 เซลล์ประสาทรูปแบบของซึ่งได้รับการแมปครอบคลุม, ในสิ่งที่เรียกว่าการเชื่อมต่อ.
ยีนในจีโนม C. elegans มีหลายคู่ทํางานในมนุษย์ซึ่งทําให้รูปแบบที่มีประโยชน์อย่างมากสําหรับโรคของมนุษย์และเช่นใช้ในการศึกษาการพัฒนาชีววิทยา, ริ้วรอยและปัจจัยที่มีอิทธิพลต่ออายุยืนยาว. นอกจากนี้, C. elegans กลายพันธุ์ให้แบบจําลองสําหรับโรคของมนุษย์จํานวนมากรวมทั้งความผิดปกติทางระบบประสาท (เช่นอัลไซเมอร์), โรคหัวใจแต่กําเนิดและโรคไต.
ปัจจัยเหล่านี้ทําให้ C. elegans เป็นแบบจําลองที่มีคุณค่าสูงสําหรับเขตข้อมูลการวิจัยจํานวนมาก. ดังนั้น C. elegans เป็นสิ่งมีชีวิตหลายเซลล์แรกที่จะมีลําดับจีโนมทั้ง จีโนมมีประมาณ 20,470 ยีนโปรตีนรหัส. ประมาณ 35% ของยีน C. elegans มี homologs มนุษย์ อย่างน่าทึ่ง, ยีนของมนุษย์ได้รับการแสดงซ้ําๆเพื่อแทนที่ C. elegans homologs เมื่อนําเข้าสู่ C. elegans. ตรงกันข้าม, ยีน elegans ซีจํานวนมากสามารถทํางานคล้ายกับยีนเลี้ยงลูกด้วยนม.

อายุการใช้งานของ C. elegans ประมาณ 3 สัปดาห์และประกอบด้วยหกขั้นตอนชีวิต: ตัวอ่อน (ไข่) สี่ระยะตัวอ่อน (L1 ถึง L4) และระยะผู้ใหญ่ ไส้เดือนฝอยฟักจากไข่เป็นตัวอ่อน L1 ประกอบด้วย 560 เซลล์ การเจริญเติบโตในแต่ละระยะตัวอ่อนเกิดขึ้นโดยการแบ่งเซลล์และโดยเซลล์ที่มากเกินไป ตัดต่อ punctuates แต่ละระยะตัวอ่อน หากสภาวะแวดล้อมที่รุนแรงส่งสัญญาณไปยังหนอนพัฒนาที่เงื่อนไขไม่น่าจะสนับสนุนความอุดมสมบูรณ์ของผู้ใหญ่ C. elegans สามารถเปลี่ยนแปลงการพัฒนาและรูปแบบขั้นตอนอื่น L3 ตัวอ่อนที่ตัวอ่อนเข้าสู่ขั้นตอน dauer ในรัฐนี้, สัตว์เลี้ยงเป็นพิเศษความเครียดความอดทนและระยะยาวและสามารถอยู่รอดได้สามถึงเก้าเดือน. ตัวอ่อน Dauer แยกตัวเองจากความยากลําบากโดยการปิดผนึกทั้งฟันผุและทวารหนักของพวกเขาหดตัวในลําไส้ของพวกเขาและเปิดโปรแกรมทางพันธุกรรมที่ขึ้นอยู่กับ DAF-16 / FOXO ที่เหนือสิ่งอื่นใดนําไปสู่การแสดงออกของหนังกําพร้าเฉพาะของ Dauer (cf. เฮนเดอร์สันและคณะ 2006)

ตัวอ่อนเอเลแกนดาเออร์

ตัวอ่อนของ Dauer เป็นคําสําหรับตัวอ่อนไส้เดือนฝอยซึ่งเข้าสู่ขั้นตอนการพัฒนาทางเลือก คําว่า "Dauer ตัวอ่อน" ถูกนํามาใช้โดยเฉพาะสําหรับเวิร์มของครอบครัว rhabditids รวมทั้ง elegans Caenorhabditis คําว่า "Dauer" เป็นของต้นกําเนิดของเยอรมันและหมายถึง "ระยะเวลา” ในความหมายของ “ระยะเวลาหนึ่ง" ตัวอ่อน Dauer เข้าไปในภาวะหยุดนิ่งและสามารถอยู่รอดได้ ถ้าและเมื่อตัวอ่อนเข้าสู่ขั้นตอน dauer จะขึ้นอยู่กับสภาพแวดล้อม ตัวอ่อน Dauer มีการศึกษาอย่างกว้างขวางในชีววิทยาเพราะ laravaa แสดงความสามารถพิเศษในการอยู่รอดในสภาพแวดล้อมที่รุนแรงและมีชีวิตอยู่เป็นเวลานาน ตัวอย่างเช่นตัวอ่อน elegans dauer สามารถอยู่รอดได้ถึงสี่เดือนนานกว่าอายุการใช้งานเฉลี่ยประมาณสามสัปดาห์ในช่วงการพัฒนาระบบสืบพันธุ์ปกติ