Príprava vzorky s ultrazvukovým VialTweeter

Príprava vzorky pred analýzou môže vyžadovať rôzne predagenčné procesy, ako je homogenizácia tkanív, analýza, extrakcia proteínov, DNA, RNA, organely a iné intracelulárne látky, rozpúšťanie a odplyňovanie. VialTweeter je unikátne ultrazvukové zariadenie, ktoré pripravuje viac vzoriek rúrky súčasne za presne rovnakých podmienok. V dôsledku nepriamej ultrazvukom uzavretých skúmaviek sa zabráni krížovej kontaminácii a strate vzorky.

Ultrazvukový vzorka príprava

Ultrazvukom je bežná technika úpravy vzoriek s cieľom pripraviť vzorku na analýzy, ako sú polyméry reťazová reakcia (PCR), Západné škvrny, testy, molekulárne postupnosť, chromatografia atď. Ultrazvukom je technika široko používaný v laboratóriách na liečbu vzoriek pre-analyticky. Hlavnou výhodou ultrazvukom je, že pracovný princíp ultrazvuku je založený na čisto mechanických silách. Ultrazvuková lyza a narušenie buniek sa dosahuje sonomechanickými sheárnymi silami, čo dáva ultrazvukom výhodu, že rozpúšťadlá používané na extrakciu proteínov môžu byť použité aj počas lyózy. Ultrazvukové bunkové disruptory, ako je VialTweeter rozbiť bunkové steny / membrány a podporovať prenos hmoty medzi bunkovým interiérom a rozpúšťadlom. Tým sa analyt (napr. DNA, RNA, proteíny, organely atď.) účinne prenáša z bunkovej matrice do rozpúšťadla. To znamená, že kroky uhasenia a extrakcie sa prekrývajú s ultrazvukovým procesom narušenia buniek, čo spôsobuje, že ultrazvuková lyza je veľmi účinná. Okrem toho ultrazvukový prípravok vzorky nevyžaduje detergenty a iné činidlá nalýza, ktoré by mohli zmeniť a zničiť štruktúru lyzátu a je známy pre následné problémy s čistenia. Ďalšou metódou lyzy, enzymatické narušenie vyžaduje dlhé inkubačné časy a prináša často nereprodukovateľné výsledky. Ultrazvukový prípravok vzoriek prekonáva bežné problémy pri príprave vzoriek, ako je homogenizácia tkanív, narušenie buniek, lyza, extrakcia bielkovín a rozpustnosť lyzátu. Keďže intenzita ultrazvukovej liečby môže byť presne kontrolovaná a prispôsobená biologickej vzorke, zabráni sa degradácii a strate vzorky. Automaticky monitorovaná a riadená teplota vzorky, pulzný režim a trvanie ultrazvukom zabezpečujú optimálne výsledky.

VialTweeter je obzvlášť vhodný pre laboratórnu prácu, ktorá vyžaduje simultánne prípravu viacerých vzoriek za rovnakých podmienok. VialTweeter je ultrazvukový blok sonotródy, ktorý môže obsahovať až 10 injekčných liekoviek (napr. Vzhľadom k tomu, ultrazvuková energia je spolu cez steny injekčných liekoviek do vzorky médium, injekčné liekovky udržiavať zatvorené počas liečby. Tým sa úplne zabráni strate vzorky a krížovej kontaminácii.

Injekčné liekovky a trubice vhodné pre VialTweeter

VialTweeter je vhodný na držanie 10 spoločných kužeľových alebo okrúhlych skúmaviek, ako je Eppendorf, odstredivka, kryo-injekčné liekovky a rôzne typy injekčných liekoviek NUNC, ale otvory je možné prispôsobiť iným veľkostiam injekčnej liekovky a trubice na požiadanie. Prosím, dajte nám vedieť, aký druh skúmaviek chcete použiť, aby sme mohli podľa toho upraviť váš VialTweeter. Pre väčšie skúmavky, ako sú falcon rúrky a iné testovacie nádoby, zobáky a cievy, VialPress je vhodným riešením.

VialTweeter s VialPress

Zatiaľ čo samotný VialTweeter s 10 otvormi pre trubice je už jedinečným a vysoko funkčným ultrazvukovým zariadením, doplnok VialPress robí VialTweeter ešte všestrannejším a flexibilnejším pre prevádzku. VialPress je príslušenstvo pre VialTweeter pozostávajúce z upínacej tyče, ktorá umožňuje fixovať väčšie skúmavky so vzorkou, ako sú skúmavky Falcon alebo iné malé až stredne veľké skúšobné zobáky na čelo VialTweeter. Na obrázku vľavo je vidieť VialTweeter drží 10 Eppendorf injekčné liekovky v bloku, zatiaľ čo VialPress fixuje jednu väčšiu skúmavku na prednej strane pre ultrazvukom. VialPress je schopný držať až 5 väčších skúmaviek pre intenzívnu ultrazvukom.

Protokoly prípravy vzoriek vialTweeter

VialTweeter sa široko používa na sonikovanie biologických vzoriek. Pred analýzou sa vzorky musia pripraviť na biochemické alebo biofyzikálne analýzy a testy, napr. VialTweeter spoľahlivo spĺňa tieto ultrazvukové procesy a prináša reprodukovateľné výsledky. Bežnou aplikáciou VialTweeteru je narušenie lyzy/buniek tkanív cicavcov (ľudských a živočíšnych), ako aj bakteriálnych buniek a vírusových častíc. Biologické vzorky liečené VialTweeterom zahŕňajú epitelové bunky ľudských pľúc, hematopoetické kmeňové bunky, myeloidné bunky leukémie, Escherichia coli (Escherichia coli), Bacillus subtilis, Bacillus anthracis Bacillus anthracis Bacillus anthracis Bacill, Francisella tularensis (Francisella tularensis), Yersinia pestis (Yersinia pestis), Streptokoky pyogenes, Caulobacter crescentus (Caulobacter crescentus), Mykoplazma pneumoniae Mycoplasma pneumoniae Mycoplasma pneumoniae My, mykobaktérie / Komplex mycobacterium tuberculosis (MTBC) a mnoho ďalších bakteriálnych, botanických a mikrobiálnych buniek.
Nižšie nájdete niekoľko vybraných protokolov predstavovať VialTweeter.

E.Coli Lysis s VialTweeterom na stanovenie glutatiónu in vivo

Baktérie Escherichia coli kmeňa MG1655 sa pestovali v minimálnom médiu MOPS v celkovom objeme 200 ml, až kým sa nedosiahol A600 0, 5. Kultúra bola rozdelená do 50 ml kultúr na stresovú liečbu. Po 15 minútach inkubácie allicínom 0,79 mM, diamidom 1 mM alebo dimetylfoxidom (kontrola) sa bunky zbierali pri teplote 4000 g pri teplote 4 °C počas 10 minút. Bunky boli dvakrát premyté KPE tlmivým roztokom pred resuspenziou peliet v 700μl KPE tlmivého roztoku. Na deprotemináciu sa pred narušením buniek ultrazvukom pridalo 300 μl 10% (w/v) kyseliny sulfosalicylovej (3 x 1 min; VialTweeter ultrazvukom). Supernatanty sa zbierali po odstreďovania (30 min, 13 000 g, 4°C). Koncentrácie kyseliny sulfosalicylovej sa znížili na 1% pridaním 3 objemov KPE tlmivého roztoku. Merania celkového glutatiónu a GSSG sa vykonali tak, ako je popísané vyššie. Bunkové koncentrácie glutatiónu boli vypočítané na základe objemu E. coli buniek 6,7×10-15 litrov a hustoty buniek A600 0,5 (čo zodpovedá 1×108 bunkám ml-1 kultúry). Koncentrácie GSH sa vypočítali odpočítaním 2[GSSG] od celkového glutatiónu. (Müller a kol. 2016)

Bunková lyza s VialTweeter pred grafitovej pece atómovej absorpčnej spektrometrie

Bacillus subtilis 168 (trpC2) bol vystavený 15 min antibiotickej záťaži, potom boli bunky zozbierané pri 3320 x g, päťkrát premyté 100 mM Tris/1 mM EDTA, pH 7,5, resuspendované v 10 mM tris, pH 7,5 a narušené ultrazvukom v Hielscher VialTweeter nástroj. (Wenzel a kol. 2014)

Príprava vzorky vialtweeteru pred hmotnostnou spektrometriou

Lyofilizované bunkové pelety ľudských CD34􏰀 krvotvorných kmeňových/progenitorových buniek boli resuspendované v 10μ􏰇l (200 μl pre hromadný prípravok HEK293 na sériu peptidových zriedení) 8 M močovinya v 100 mM uhličitanu amónny a lysed pomáhal ultrazvukom s Hielscher VialTweeter na amplitúdu 60%, cyklus 60% a trvanie 20s po dobu troch krát s medzichladenie na ľade. (Amon a kol. 2019)

Protokoly na prípravu vzoriek pomocou vialpressu

Čerstvý šalát (Lactuca sativa) bol homogenizovaný v 0, 5 M HEPES tlmivom roztoku (pH 8, upravenom KOH) v pomere 1 g rastliny (čerstvá hmotnosť) k 200, 100, 50 alebo 20 ml tlmivého roztoku. Pomer hmotnosti rastliny k objemu tlmivého roztoku sa menil tak, aby sa celkový objem homogenátu udržal medzi 3,5 a 12 ml. Pomer hmotnosti rastliny k objemu tlmivého roztoku sa menil tak, aby celkový objem homogenátu bol medzi 3,5 a 12 ml, čo umožnilo homogenizáciu so sondou. Homogenates potom podstúpil nepriamu ultrazvukom pomocou UP200St s VialTweeter vybavený 200xt VialPress (Hielscher Ultrasonics GmbH, Nemecko) po dobu 3 min (80% pulz a 100% výkon). Používaním tohto zariadenia sa zabránilo kontaminácii. (Smiech a kol. 2019)

Spoľahlivá regulácia teploty počas ultrazvukom s VialTweeter

Teplota je rozhodujúci faktor ovplyvňujúci proces, ktorý je obzvlášť dôležitý pre liečbu biologických vzoriek. Ako všetky techniky mechanickej prípravy vzoriek, ultrazvukom vytvára teplo. Avšak, teplota vzoriek môže byť dobre kontrolovaná pri použití VialTweeter. Predstavujeme vám rôzne možnosti pre monitorovanie a kontrolu teploty vašich vzoriek pri ich príprave s VialTweeter a VialPress pre analýzu.

1. Monitorovanie teploty vzorky: Ultrazvukový procesor UP200St, ktorý poháňa VialTweeter, je vybavený inteligentným softvérom a príkonovým teplotným snímačom. Zapojte snímač teploty do UP200St a zasuňte špičku snímača teploty do jednej zo skúmaviek so vzorkou. Prostredníctvom digitálneho farebného dotykového displeja môžete nastaviť v ponuke UP200St špecifický teplotný rozsah pre vašu sonikáciu vzoriek. Ultrazvukom sa automaticky zastaví, keď sa dosiahne maximálna teplota, a pozastaví sa, až kým teplota vzorky nedosiahne nižšiu hodnotu nastavenej teploty ∆. Potom sa ultrazvukom spustí automaticky znova. Táto inteligentná funkcia zabraňuje degradácii vyvolanej teplom.
2. Blok VialTweeter je možné predchladiť. Vložte blok VialTweeter (iba sonotróda bez prevodníka!) do chladničky alebo mrazničky, aby sa predchladil titánový blok, ktorý pomáha odložiť zvýšenie teploty vo vzorke. Ak je to možné, vzorka sama o sebe môže byť pre-chladené taky.
3. Použite suchý ľad vychladnúť počas ultrazvukom. Použite plytký podnos naplnený suchým ľadom a položte VialTweeter na suchý ľad, aby sa teplo rýchlo rozptýlilo.

Zákazníci po celom svete používajú VialTweeter a VialPress pre ich každodennú prípravu vzoriek práce v biologických, biochemických, lekárskych a klinických laboratórií. Inteligentný softvér a regulácia teploty procesora UP200St, teplota je spoľahlivo regulovaná a tepelne vyvolaná degradácia vzorky sa zabránilo. Ultrazvukový príprava vzoriek s VialTweeter a VialPress prináša vysoko spoľahlivé a reprodukovateľné výsledky!

Technické podrobnosti o VialTweeter

VialTweeter je blok sonotróda vyrobená z titánu, ktorý môže držať až 10 injekčných liekoviek v otvoroch v bloku. Okrem toho, až 5 väčších skúmaviek môže byť upnutý na VialTweeter predné pomocou VialPress. VialTweeter je navrhnutý tak, aby ultrazvuková energia je rovnomerne rozdelená do každej vloženej injekčnej liekovky, aby sa zabezpečili spoľahlivé a jednotné výsledky ultrazvukom. Malý čap upraví vialTweeter sonotródu na nerovnomernú zem a zvisle zarovná skúmavky.

Výhody VialTweeter na prvý pohľad

• Intenzívna sonikácia až 10 injekčných liekoviek súčasne
• Nepriame ultrazvukom pri vysokej ultrazvukovej intenzite cez stenu nádoby do vzorky
• Nepriame ultrazvukom vyhýba krížovej kontaminácii a strata vzorky
• Reprodukovateľné výsledky vďaka nastaviteľnej a ovládateľnej amplitúde ultrazvukom
• VialPress umožňuje Sonikujte väčšie rúrky
• Nastaviteľná amplitúda od 20 do 100%
• Nastaviteľný pulzný režim od 0 do 100%
• Autoclavable

VialTweeter je poháňaný UP200St, výkonný ultrazvukový procesor s výkonom 200 W. UP200St je vybavený inteligentným softvérom, ktorý umožňuje presnú kontrolu nad všetkými dôležitými ultrazvukové parametre procesu, ako je amplitúda, sonikácia čas, pulzácia, a teplota. Vďaka tomu je VialTweeter spoľahlivým nástrojom pre úspešné reprodukovateľné výsledky procesu v biologických a biochemických laboratóriách.
Amplitúda môže byť upravená medzi 20 a 100% a umožňuje tým prispôsobiť ultrazvukovú intenzitu vašej vzorke. Napríklad strihanie a fragmentácia DNA a RNA si vyžaduje miernejší amplitúdu, aby sa zabránilo produkcii príliš malých fragmentov DNA, homogenizácia tkaniva mozgu myší potrebuje vysokú intenzitu ultrazvukom. Vyberte si ideálnu amplitúdu, intenzitu a trvanie ultrazvukom prostredníctvom inteligentného a intuitívneho menu na procesore UP200St. Menu a nastavenia sú ľahko prístupné a ovládané prostredníctvom farebného dotykového displeja. V nastaveniach môžete vopred nastaviť parametre ultrazvukom, ako je amplitúda, pulzácia / cyklus režim, ultrazvukom trvania, celkový príkon energie, a teplotné limity. Vo výskume a výrobe je rozhodujúca opakovateľnosť skúšok a výsledkov testov. To znamená, že presné zaznamenávanie procesných podmienok a ultrazvukom protokoly sú úplne dôležité. Automatické protokolovanie údajov zapisuje všetky sonikačné údaje do súboru CSV na integrovanej SD karte, takže môžete jednoducho skontrolovať a porovnať rôzne sonikácie beží. Všetky ultrazvukové procesné dáta možno ľahko pristupovať a zdieľať ako CSV súbor.
Hielscher Ultrazvukom sa snaží poskytnúť vám pokročilé technológie pre uľahčenie a zlepšenie vašej výskumnej práce!