Ultrazvuková lyza drosophila melanogaster vzoriek

Drosophila melanogaster je široko používaný v laboratóriách ako model organizmus. Preto sa musia často vykonávať kroky preda analytickej prípravy, ako je letéza, narušenie buniek, extrakcia bielkovín a strihanie DNA vzoriek Drosophila melanogaster. Ultrazvukové dismembrátory sú spoľahlivé a efektívne a môžu sa použiť na vykonávanie rôznych úloh, ako je rozpad, extrakcia bielkovín alebo fragmentácia DNA len úpravou ultrazvukových parametrov procesu. Ultrazvukové homogenizers sú tým flexibilné nástroje so širokou škálou aplikácií.

Ultrazvukoválýlóza a extrakcia bielkovín

Drosophila melanogaster is widely used as model organism in biological labs. Find here protocols for lysis, protein extracion and DNA shearing of D. melanogaster samples.Lyza, rozpustnosť buniek, homogenizácia tkanív a extrakcia bielkovín sú typické úlohy pre ultrazvukové dismembrators v biologických laboratóriách. Ultrazvukové dismembrátory a bunkové disruptory sú vhodné na homogenizáciu živočíšnych tkanív, hmyzu (napr. drosophila melanogaster, C. elegans) alebo rastlinných vzoriek. Následné aplikácie ultrazvukom sú lyzýza bunkových suspenzií a peliet, ako aj extrakcia intracelulárnych proteínov.
Ultrazvuková rozlýza a extrakcia bielkovín sú vysoko spoľahlivé a reprodukovateľné procesy, ktoré sa môžu vykonávať na základe stanovených protokolov. Vzhľadom k tomu, ultrazvukový proces intenzita môže byť presne upravená pomocou ultrazvukom parametre, ako je amplitúda, cyklus / pulzný režim, teplota a objem vzorky, akonáhle osvedčené protokoly sa môžu opakovať s rovnakým výsledkom znova a znova.

Výhody ultrazvukové prípravy vzoriek

  • vysoko efektívny
  • Nastaviteľný na špecifický materiál vzorky
  • Vhodné pre akýkoľvek objem
  • Neteplepové ošetrenie
  • Reprodukovateľné výsledky
  • Jednoduché a bezpečné

Ultrazvuková fragmentácia DNA a RNA

Po bunkovej lýze a extrakcii bielkovín je spoločným požadovaným krokom pri príprave vzorky strihanie a fragmentácia DNA, RNA a chromatínu, napr. Fragmentáciu DNA a RNA možno spoľahlivo dosiahnuť rozbitím kovalentných väzieb, ktoré držia DNA pohromade fyzickými silami. Pomocou fyzického strihanie, ako je ultrazvukom, najprv DNA pramene sú rozbité, potom DNA je roztrieštený na menšie kúsky.
Ultrazvuková fragmentácia DNA je spoľahlivá a účinná pri strihaní DNA na cielenú dĺžku, napr. Medzi hlavné výhody ultrazvukovej fragmentácie DNA patrí presná kontrola ultrazvukových parametrov procesu a intenzity. Ultrazvukové parametre procesu je možné nastaviť presne ladením intenzity ultrazvukom, cyklov a času. To umožňuje vytvoriť požadované veľkosti DNA a cielená dĺžka DNA môže byť spoľahlivo produkovaná, ako aj reprodukovaná. Ultrazvukové strihanie DNA je tiež ideálne na vytvorenie fragmentov DNA s vysokou molekulovou hmotnosťou.

Ultrasonicator UP200Ht with microtip S26d2 for ultrasonic lysis of Drosophila samples

Ultrasonicator UP200Ht s 2mm mikrotip S26d2 pre ultrazvukom vzoriek Drosophila

Žiadosť o informácie





Protokoly pre ultrazvukové lysis Drosophila melanogaster

Nižšie nájdete rôzne protokoly pre ultrazvukom asistovanú lyzu, extrakciu proteínov a fragmentáciu DNA alebo chromatínu drosofilných vzoriek.

Ultrazvuková lyza pre cross-prepojenie imunoprecipitácia (CLIP) Test

Test CLIP bol vykonaný tak, ako bol predtým hlásený s niektorými úpravami. Približne 20 mg vaječníkov od 0- až 1-dňových samíc divokého typu bolo UV zoskrížených (3 × 2000 μJ/cm2), homogenizovaných na ľade v 1 ml RCB pufri (50 mM HEPES pH 7,4, 200 mM NaCl, 2,5 mM MgCl2, 0,1% Triton X-100, 250 mM sacharóza, 1 mM DTT, 1× kompletné inhibítory proteázy bez EDTA, 1 mM PMSF) doplnené o 300 U RNAseOUT a umiestnené na ľade po 30 min. Homogenát bol sonicated na ľade, na 80% výkon, päťkrát v 20 s praskne s 60 s odpočinku medzi pomocou Hielscher Ultrazvukový procesor UP100H (100 W, 30 kHz) a odstreďované (16000 × g počas 5 minút pri teplote 4°C). Rozpustný extrakt bol predčil 20 μl proteín-G dynabeads počas 20 minút pri teplote 4°C. Po odobratí vzoriek na imunoblotting a kvantifikáciu vstupu RNA (1%) bol HP1 imunoprecipitovaný protilátkou proti HP1 9A9 zo 450 μl predčisťovaného extraktu inkubáciou počas 4 hodín s 50 μl proteín-G dynabeads. Imunoprecipitáty boli 4-krát umyté RCB. Na eluovanie imunoprecipitovaných RNA sa peletované korálky varili v 100 μl vody ošetrenej UltraPure DEPC počas 5 min. 900 μl Qiazol reagencie sa pridalo do supernatantu získaného na prípravu RNA. RNA purifikované bol použitý ako šablóna syntetizovať cDNA pomocou oligo dT, náhodné hexamers a SuperScript reverznej transkriptázy III podľa protokolu výrobcu.
(Cassale a kol. 2019)

Ultrazvuková lyza pre chromatín imunoprecipitačný test

Chromatínová imunopreciciácia sa vykonala podľa metódy opísanej menetom s malými úpravami. Približne 20 mg vaječníkov od 0- do 1-dňových samíc divokého typu bolo homogenizovaných v 1 ml NEB pufra (10 mM HEPES-Na pri pH 8,0, 10 mM NaCl, 0,1 mM EGTA-Na pri pH 8, 0,5 mM EDTA-Na pri pH 8, 1 mM DTT, 0,5% NP-40, 0,5 mM spermidín, 0,15 mM spermín, 1× EDTA- free kompletné inhibítory proteázy) s homogenizátorom / ponorný dispergátor 1 min (pri 3000 ot./min.). Homogenát bol prenesený do predchladeného skleneného dounce a 15 plných ťahov bolo aplikovaných s tesným tĺčikom. Voľné jadrá sa potom odstreďovali pri 6000xg počas 10 minút pri teplote 4 °C. Pelety obsahujúce jadrá boli resuspendované v 1 ml NEB a odstredené pri 20000 × g počas 20 minút na sacharózový gradient (0, 65 ml 1, 6 M sacharózy v NEB, 0, 35 ml 0, 8 M sacharózy v NEB). Pelet bol resuspendovaný v 1 ml NEB a formaldehydu na konečnú koncentráciu 1%. Jadrá boli zosúlalené 10 minút pri izbovej teplote a ochladzované pridaním 1/10 obj. glykínu 1,375 M. Jadrá sa zbierali odstreďovaním pri 6000 × g počas 5 minút. Jadrá boli dvakrát premyté v 1 ml NEB a resuspendované v 1 ml tlmivého roztoku lýzy (15 mM HEPES-Na pri pH 7,6, 140 mM NaCl, 0, 5 mM EGTA, 1 mM EDTA pri pH 8, 1% Triton X-100, 0, 5 mM DTT, 0, 1% Na Deoxycholate, 0, 1% SDS, 0, 5% N-lauroylsarcosine a 1× EDTA-free kompletné inhibítory proteázy). Jadrá boli sonicated pomocou Hielscher ultrazvukový procesor UP100H (100 W, 30 kHz) šesťkrát za 20 s a 1 min na ľade. Sonické jadrá boli odstreďované pri 13000 × g počas 4 minút pri teplote 4°C. Väčšina sonikovaného chromatínu bola 500 až 1000 bázických párov (bp) na dĺžku. Pri každej imunoprecipitácii bolo 15 μg chromatínu inkubovaných za prítomnosti 10 μg monoklonálnej protilátky HP1 9A9 (3 hodiny pri teplote 4 °C v rotujúca kolesa). Potom sa pridalo 50 μl proteínu dynabeads G a inkubácia pokračovala cez noc pri teplote 4 °C. Supernatanty boli zlikvidované a vzorky sa dvakrát umyli v tlmivom roztoku na lyzu (každé premytie 15 minút pri teplote 4 °C) a dvakrát v Tlmivom roztoku TE (1 mM EDTA, 10 mM TrisHCl pri pH 8). Chromatín bol eluovaný z korálkov v dvoch krokoch; prvý zo 100 μl Elučného tlmivého roztoku 1 (10 mM EDTA, 1% SDS, 50 mM TrisHCl pri pH 8) pri teplote 65 °C počas 15 minút, po ktorom nasleduje odstreďovanie a regenerácia supernatantu. Materiál korálkov bol opätovne extrahovaný v 100 μl TE + 0,67% KBÚ. Kombinovaný eluát (200 μl) sa inkuboval cez noc pri teplote 65 °C, aby sa zvrátili krížové väzby a ošetril sa 50 μg/ml RNaseA počas 15 minút pri teplote 65 °C a 500 μg/ml Proteinázy K počas 3 hodín pri teplote 65 °C. Vzorky boli extrahované fenolom–chloroformom a vyzrážané etanolom. DNA bola resuspendovaná v 25 μl vody. Na maximalizáciu molekulárnych analýz s imunoprecipitovaným DNA boli kandidátske gény zosilnené v pároch prostredníctvom optimalizovaného duplexného PCR protokolu pomocou dvoch rôznych sád primárov s podobnými teplotami topenia v jednej reakcii.
(Casale a kol. 2019)

UP200St TD_CupHorn pre nepriamu ultrazvukom vzoriek

UP200St TD_CupHorn na nepriamu sonikáciu vzoriek, ako je strihanie DNA a chromatínu

Vysokovýkonné ultrazvukové bunkové disruptory pre biologické vzorky

Hielscher Ultrazvukom je váš dlho-skúsený partner, pokiaľ ide o high-výkon ultrazvukom pre narušenie buniek, lyza, extrakcia bielkovín, DNA, RNA, a chromatínu fragmentácie, rovnako ako ďalšie pre-analytické kroky prípravy vzoriek. Ponúka komplexné portfólio ultrazvukové laboratórne homogenizátory a jednotky pre prípravu vzoriek, Hielscher má ideálne ultrazvukové zariadenie pre vaše biologické aplikácie a požiadavky.
Typ sondy, UP200St pre lýzuKlasický ultrazvukový snímač typu sondy s mikročipom, ako je UP200St (200W; pozri obrázok vľavo) alebo jednu z ultrazvukových jednotiek na prípravu vzoriek VialTweeter alebo UP200ST_TD_CupHorn s VialHolder sú obľúbené modely vo výskumných a analytických laboratóriách. Klasická ultrazvuková sonda je ideálna, pri príprave musí byť menej vzoriek lyzované, extrahované alebo roztrieštené. Jednotky na prípravu vzorky VialTweeter a UP200St_TD_CupHorn umožňujú simultánne ultrazvukom až 10 alebo 5 injekčných liekoviek.
Ak sa musia spracovať vysoké počty vzoriek (napr. 96-vsuvové platne, mikrotiterové platne atď.), UIP400MTP (UIP400MTP) je ideálne nastavenie ultrazvukom. UIP400MTP funguje ako väčší cuphorn, ktorý je naplnený vodou a má dostatok priestoru na držanie mikro-dobre dosky. Poháňaný 400 wattov výkonný ultrazvukový procesor, UIP400MTP prináša veľmi jednotnú a intenzívnu sonikáciu multi-dobre dosky s cieľom narušiť bunky, lyzúzové vzorky, rozpustné pelety, extrahovať bielkoviny alebo strihové DNA.

Presné ovládanie pomocou inteligentného softvéru

Hielscher priemyselné procesory rady hdT môžu byť pohodlné a užívateľsky príjemné prevádzkované cez diaľkové ovládanie prehliadača.Všetky hielscherové ultrazvukové riešenia od 200 W smerom nahor sú vybavené digitálnou farebnou dotykovou obrazovkou a inteligentným softvérom. Prostredníctvom inteligentného dátového protokolu sa všetky ultrazvukové parametre procesu automaticky uložia ako súbor CSV na vstavanú SD kartu hneď po spustení ultrazvukom. Vďaka tomu je výskum a protokolovanie oveľa pohodlnejšie. Po ultrazvukom skúšky alebo príprava vzorky, môžete jednoducho skontrolovať ultrazvukom parametre každého ultrazvukom spustiť a porovnať ich.
Prostredníctvom intuitívne menu, početné parameter môže byť prednastavený pred ultrazvukom: Napríklad, na reguláciu teploty vo vzorke a aby sa zabránilo jeho tepelnej degradácie, horná hranica teploty vzorky môže byť nastavená. Zásuvný snímač teploty, ktorý je dodávaný s ultrazvukovou jednotkou, dáva ultrazvukový procesor spätnú väzbu na skutočnú teplotu ultrazvukom. Keď sa dosiahne horný teplotný limit, ultrazvukové zariadenie sa pozastaví, kým sa nedosadne dolná hranica nastaveného ∆T a začne sa automaticky sonicating znova.
Ak je potrebná ultrazvukom so špecifickým príkonom energie, môžete prednastavenie konečnej ultrazvukovej energie ultrazvukom spustiť. Samozrejme, ultrazvukové pulzácie a cyklus režim môže byť individuálne nastavený, taky.
Ak chcete opätovne použiť svoje najúspešnejšie parametroch ultrazvukom, môžete uložiť rôzne režimy ultrazvukom (napr. čas sonikácie, intenzitu, režim cyklu atď.) ako prednastavené režimy, aby mohli byť jednoduché a rýchlo sčasné znova.
Pre väčšie prevádzkové pohodlie môžu byť všetky digitálne ultrazvukové jednotky prevádzkované pomocou diaľkového ovládania prehliadača v akomkoľvek spoločnom prehliadači (napr. Pripojenie k sieti LAN je jednoduché nastavenie plug-n-play a nevyžaduje žiadnu ďalšiu inštaláciu softvéru.
My v Hielscher vieme, že úspešná ultrazvukom biologických vzoriek vyžaduje presnosť a opakovateľnosť. Preto sme navrhli naše ultrasonicators ako inteligentné zariadenia so všetkými funkciami, ktoré umožňujú efektívnu, spoľahlivú, reprodukovateľnú a pohodlnú prípravu vzoriek.

Kontaktujte nás a povedzte nám o vašich biologických vzorkách a požadovaných postupoch prípravy. Navrhneme vám najvhodnejšie ultrazvukové zariadenie na prípravu vzoriek a pomôžeme vám s ďalšími informáciami, ako sú protokoly a odporúčania.

Nižšie uvedená tabuľka vám dáva indikáciu približnej spracovateľskej kapacity našich ultrazvukových systémov od ultrazvukových mikro-tipov a klasických ultrazvukových homogenizers po MultiSample ultrasonicators pre pohodlnú a spoľahlivú prípravu mnohých vzoriek:

Objem šarže prietok Odporúčané Devices
96-dobre / mikrotiter dosky neuv UIP400MTP (UIP400MTP)
10 injekčných liekoviek à 0,5 až 1,5 ml neuv VialTweeter, UP200St
CupHorn na nepriamu sonikáciu, napr. neuv UP200ST_TD_CupHorn
0.01 až 250 ml 5 až 100 ml/min. UP50H
0.01 až 500 ml 10 až 200mL/min UP100H
0.02 až 1L 20 až 400mL/min UP200Ht / UP200St
10 až 2000mL 20 až 400mL/min UP200Ht, UP400St
00,25 až 5L 0.05 až 1L/min. UIP500hdT

Kontaktuj nás! / Opýtajte sa nás!

Požiadajte o ďalšie informácie

Prosím, použite formulár nižšie požiadať o ďalšie informácie o ultrazvukové procesory, aplikácie a ceny. Budeme radi diskutovať o vašom procese s vami a ponúknuť vám Ultrazvukový systém spĺňajúci vaše požiadavky!









Vezmite prosím na vedomie naše Zásady ochrany osobných údajov,


The VialTweeter is a MultiSample Ultraonicator that allows for reliable sample preparation under precisely controlled temperature conditions.

Ultrazvuková jednotka na prípravu viacerých vzoriek VialTweeter umožňuje simultánne ultrazvukom až 10 injekčných liekoviek. S upínacím zariadením VialPress je možné na prednej strane pritlačiť až 4 ďalšie trubice pre intenzívnu sonikáciu.

Literatúra/referencie



Hielscher Ultrasonics supplies high-performance ultrasonic homogenizers from lab to industrial size.

Vysokovýkonné ultrazvukom! Produktový rad Hielscher pokrýva celé spektrum od kompaktného laboratórneho ultrasonicatoru cez stolové jednotky až po plnoindustriálne ultrazvukové systémy.


Fakty stojí za to vedieť

Metabolomics Metabolomics Metabolomics Metabol

Metabolomika je štúdium malých molekúl, známych ako metabolity, prítomných v bunkách, biofluidoch, tkanivách alebo organizmoch. Tieto malé molekuly a ich interakcie v rámci biologického systému sú zhrnuté pod zastrešujúcim termínom "metabolóm" a výskumná oblasť sa nazýva metabolomika. Metabolómový výskum je úzko spojený s rýchlo sa rozvíjajúcu oblasťou precíznej medicíny. Pochopenie metabolómu a jeho vzťahu k rôznym chorobám pomáha rozvíjať stratégie prevencie chorôb a klinickej starostlivosti, zatiaľ čo individuálna variabilita životného prostredia, životného štýlu, genetiky a molekulárneho fenotypu. S cieľom uvoľniť molekuly metabolitov z buniek sa ultrazvukom často používa v biologických laboratóriách na prípravu preda analytických vzoriek, ako je narušenie buniek, analýza a extrakcia bielkovín, lipidov a iných molekúl.