Hielscher Ultrasonics
Radi prediskutujeme váš proces.
Zavolajte nám: +49 3328 437-420
Napíšte nám: info@hielscher.com

Ultrazvuková lýza vzoriek Drosophila Melanogaster

Drosophila melanogaster je široko používaná v laboratóriách ako modelový organizmus. Preto sa musia často vykonávať kroky predanalytickej prípravy, ako je lýza, narušenie buniek, extrakcia proteínov a strihanie DNA vzoriek Drosophila melanogaster. Ultrazvukové dismembrátory sú spoľahlivé a efektívne a môžu sa používať na jednoduché vykonávanie rôznych úloh, ako je lýza, extrakcia proteínov alebo fragmentácia DNA, iba úpravou parametrov ultrazvukového procesu. Ultrazvukové homogenizátory sú preto flexibilné nástroje so širokou škálou aplikácií.

Ultrazvuková lýza a extrakcia bielkovín

Drosophila melanogaster je široko používaná ako modelový organizmus v biologických laboratóriách. Tu nájdete protokoly pre lýzu, extrakciu proteínov a strihanie DNA vzoriek D. melanogaster.Lýza, solubilizácia buniek, homogenizácia tkanív a extrakcia proteínov sú typické úlohy pre ultrazvukové dismembátory v biologických laboratóriách. Ultrazvukové dismembátory a bunkové disruptory sú vhodné na homogenizáciu živočíšnych tkanív, hmyzu (napr. Drosophila melanogaster, C. elegans) alebo rastlinných vzoriek. Následnými aplikáciami ultrazvuku sú lýza bunkových suspenzií a peliet, ako aj extrakcia intracelulárnych proteínov.
Ultrazvuková lýza a extrakcia proteínov sú vysoko spoľahlivé a reprodukovateľné procesy, ktoré je možné vykonávať na základe zavedených protokolov. Keďže intenzitu ultrazvukového procesu je možné presne nastaviť pomocou parametrov sonikácie, ako je amplitúda, režim cyklu / pulzu, teplota a objem vzorky, po overení protokolov sa môžu opakovať s rovnakým výsledkom znova a znova.

Výhody ultrazvukovej prípravy vzoriek

  • Vysoko efektívny
  • Nastaviteľné na konkrétny materiál vzorky
  • Vhodné pre akýkoľvek objem
  • netepelné spracovanie
  • reprodukovateľné výsledky
  • Jednoduché a bezpečné

Ultrazvuková fragmentácia DNA a RNA

Po lýze buniek a extrakcii proteínov je bežným požadovaným krokom pri príprave vzorky strihanie a fragmentácia DNA, RNA a chromatínu, napr. pred imunoprecipitáciou chromatínu (ChIP). Fragmentáciu DNA a RNA možno spoľahlivo dosiahnuť rozbitím kovalentných väzieb, ktoré držia DNA pohromade fyzickými silami. Pomocou fyzického strihania, ako je sonikacia, sa najprv rozbijú vlákna DNA, potom sa DNA rozpadne na menšie kúsky.
Ultrazvuková fragmentácia DNA je spoľahlivá a účinná pri strihaní DNA na cieľovú dĺžku, napr. 500 bp (páry báz). Medzi hlavné výhody ultrazvukovej fragmentácie DNA patrí presná kontrola parametrov a intenzity ultrazvukového procesu. Parametre ultrazvukového procesu je možné upraviť presným vyladením intenzity sonikácie, cyklov a času. To umožňuje vytvoriť požadované veľkosti DNA a cieľovú dĺžku DNA je možné spoľahlivo vyrobiť aj reprodukovať. Ultrazvukové strihanie DNA je tiež ideálne na vytváranie fragmentov DNA s vysokou molekulovou hmotnosťou.

Ultrazvuk UP200Ht s mikrohrotom S26d2 na ultrazvukovú lýzu vzoriek Drosophila

ultrazvuk UP200Ht s 2 mm mikrošpičkou S26d2 na sonikáciu vzoriek Drosophila

Žiadosť o informácie







Protokoly pre ultrazvukovú lýzu Drosophila melanogaster

Nižšie nájdete rôzne protokoly pre ultrazvukom asistovanú lýzu, extrakciu proteínov a fragmentáciu DNA alebo chromatínu vzoriek Drosophila.

Ultrazvuková lýza pre test zosieťovacej imunoprecipitácie (CLIP)

Test CLIP bol vykonaný tak, ako bolo predtým oznámené, s niekoľkými úpravami. Približne 20 mg vaječníkov z 0- až 1-dňových samíc divokého typu bolo zosieťovaných UV žiarením (3 × 2000 μJ/cm2), homogenizovaných na ľade v 1 ml tlmivého roztoku RCB (50 mM HEPES pH 7,4, 200 mM NaCl, 2,5 mM MgCl2, 0,1 % Triton X-100, 250 mM sacharózy, 1 mM DTT, 1× inhibítorov kompletnej proteázy bez EDTA, 1 mM PMSF) doplnených 300 U RNAseOUT a umiestnených na ľade na 30 minút. Homogenát bol sonikovaný na ľade pri 80% výkone päťkrát za 20 s dávky s 60 s odpočinkom medzi nimi pomocou Hielscherovho ultrazvukového procesora UP100H (100 W, 30 kHz) a odstredené (16000 × g počas 5 minút pri 4 °C). Rozpustný extrakt bol predčistený 20 μl Protein-G dynabeads počas 20 minút pri 4 °C. Po odobratí vzoriek na imunoblotáciu a kvantifikácii vstupu RNA (1 %) bol HP1 imunoprecipitovaný protilátkou anti-HP1 9A9 zo 450 μl predclearovaného extraktu inkubáciou počas 4 hodín s 50 μl Protein-G dynabeads. Imunoprecipitáty sa 4-krát premyli RCB. Na eluovanie imunoprecipitovaných RNA sa granulované guľôčky varili v 100 μl vody upravenej UltraPure DEPC po dobu 5 minút. Do supernatantu získaného na prípravu RNA sa pridalo 900 μl činidla Qiazol. Purifikovaná RNA bola použitá ako templát na syntézu cDNA pomocou oligo dT, náhodných hexamerov a reverznej transkriptázy SuperScript III podľa protokolu výrobcu.
(Cassale a kol. 2019)

Ultrazvuková lýza pre test imunoprecipitácie chromatínu

Imunoprecipitácia chromatínu bola vykonaná podľa metódy opísanej Menetom s malými úpravami. Približne 20 mg vaječníkov od 0- až 1-dňových samíc divokého typu bolo homogenizovaných v 1 ml pufra NEB (10 mM HEPES-Na pri pH 8,0, 10 mM NaCl, 0,1 mM EGTA-Na pri pH 8, 0,5 mM EDTA-Na pri pH 8, 1 mM DTT, 0,5% NP-40, 0,5 mM spermidínu, 0,15 mM spermínu, 1× inhibítorov kompletnej proteázy bez EDTA) s homogenizátorom / ponorným dispergátorom 1 min (pri 3000 ot./min). Homogenát sa preniesol do predchladeného skleneného pohára a 15 plných ťahov sa aplikovalo pevným tĺčikom. Voľné jadrá sa potom odstredili pri 6000xg počas 10 minút pri 4 °C. Pelety obsahujúce jadrá boli resuspendované v 1 ml NEB a odstredené pri 20000 × g počas 20 minút na gradiente sacharózy (0,65 ml z 1,6 M sacharózy v NEB, 0,35 ml z 0,8 M sacharózy v NEB). Peleta bola resuspendovaná v 1 ml NEB a formaldehydu na konečnú koncentráciu 1 %. Jadrá boli zosieťované 10 minút pri izbovej teplote a uhasené pridaním 1/10 obj. 1,375 M glycínu. Jadrá sa zbierali centrifugáciou pri 6000 × g počas 5 minút. Jadrá boli dvakrát premyté v 1 ml NEB a resuspendované v 1 ml lýzneho pufra (15 mM HEPES-Na pri pH 7,6, 140 mM NaCl, 0,5 mM EGTA, 1 mM EDTA pri pH 8, 1% Triton X-100, 0,5 mM DTT, 0,1% Na deoxycholát, 0,1% SDS, 0,5% N-lauroylsarkozín a 1× inhibítory kompletnej proteázy bez EDTA). Jadrá boli sonikované pomocou ultrazvukového procesora Hielscher UP100H (100 W, 30 kHz) šesťkrát na 20 s na ľade a 1 minútu na ľade. Sonikované jadrá sa odstredili pri 13000 × g po dobu 4 minút pri 4 °C. Väčšina sonikovaného chromatínu mala dĺžku 500 až 1000 párov báz (bp). Pre každú imunoprecipitaciu sa inkubovalo 15 μg chromatínu v prítomnosti 10 μg monoklonálnej protilátky HP1 9A9 (3 hodiny pri 4 °C v rotujúcom kolese). Potom sa pridalo 50 μl proteínu dynabeads G a inkubácia pokračovala cez noc pri 4 °C. Supernatanty sa zlikvidovali a vzorky sa dvakrát premyli v Lysis Buffer (každé umývanie 15 minút pri 4 °C) a dvakrát v TE Buffer (1 mM EDTA, 10 mM TrisHCl pri pH 8). Chromatín bol eluovaný z guľôčok v dvoch krokoch; najprv v 100 μl Eluition Buffer 1 (10 mM EDTA, 1% SDS, 50 mM TrisHCl pri pH 8) pri 65 °C počas 15 minút, po ktorom nasleduje centrifugácia a regenerácia supernatantu. Materiál guľôčok bol opätovne extrahovaný v 100 μl TE + 0,67% SDS. Kombinovaný eluát (200 μl) sa inkuboval cez noc pri 65 °C na reverzné zosieťovanie a ošetroval 50 μg/ml RNázy počas 15 minút pri 65 °C a 500 μg/ml proteinázy K počas 3 hodín pri 65 °C. Vzorky boli extrahované fenol-chloroformom a vyzrážané etanolom. DNA bola resuspendovaná v 25 μl vody. Na maximalizáciu molekulárnych analýz s imunoprecipitovanou DNA boli kandidátske gény amplifikované v pároch prostredníctvom optimalizovaného duplexno-PCR protokolu pomocou dvoch rôznych sád primérov s podobnými teplotami topenia v jednej reakcii.
(Casale a kol. 2019)
 

Tento návod vysvetľuje, aký typ sonikátora je najlepší pre vaše úlohy prípravy vzoriek, ako je lýza, narušenie buniek, izolácia proteínov, fragmentácia DNA a RNA v laboratóriách, analýza a výskum. Vyberte si ideálny typ sonikátora pre vašu aplikáciu, objem vzorky, počet vzoriek a priepustnosť. Spoločnosť Hielscher Ultrasonics má pre vás ideálny ultrazvukový homogenizátor!

Ako nájsť dokonalý sonikátor na narušenie buniek a extrakciu proteínov vo vede a analýze

Miniatúra videa

UP200St TD_CupHorn na nepriamu sonikáciu vzoriek

UP200St TD_CupHorn na nepriamu sonikaciu vzoriek, ako je strihanie DNA a chromatínu

Vysokovýkonné ultrazvukové disruptory buniek pre biologické vzorky

Spoločnosť Hielscher Ultrasonics je vaším dlhoročným skúseným partnerom, pokiaľ ide o vysokovýkonné ultrazvukové prístroje na narušenie buniek, lýzu, extrakciu proteínov, fragmentáciu DNA, RNA a chromatínu, ako aj ďalšie kroky prípravy predanalytických vzoriek. Spoločnosť Hielscher ponúka komplexné portfólio ultrazvukových laboratórnych homogenizátorov a jednotiek na prípravu vzoriek a má ideálne ultrazvukové zariadenie pre vašu biologickú aplikáciu a požiadavky.
Sondový insonizátor UP200St na lýzuKlasický ultrazvukový prístroj sondového typu s mikrohrotom, ako je UP200St (200 W; pozri obrázok vľavo) alebo jednu z ultrazvukových jednotiek na prípravu vzoriek VialTweeter alebo UP200St_TD_CupHorn s VialHolder sú obľúbené modely vo výskumných a analytických laboratóriách. Ideálna je klasická ultrazvuková sonda, pri príprave je potrebné lyzovať, extrahovať alebo fragmentovať menej vzoriek. Jednotky na prípravu vzoriek VialTweeter a UP200St_TD_CupHorn umožňujú súčasnú sonikáciu až 10 alebo 5 injekčných liekoviek.
Ak sa musí spracovať vysoký počet vzoriek (napr. 96-jamkové platne, mikrotitračné platne atď.), UIP400MTP je ideálne nastavenie sonikácie. UIP400MTP funguje ako väčší hrnček, ktorý je naplnený vodou a má dostatok priestoru na uloženie mikrojamkových tanierov. UIP400MTP poháňaný 400 wattovým výkonným ultrazvukovým procesorom poskytuje veľmi rovnomernú a intenzívnu sonikáciu viacjamkových platničiek s cieľom narušiť bunky, lyzovať vzorky, rozpustiť pelety, extrahovať proteíny alebo šmykovú DNA.

Presné ovládanie pomocou inteligentného softvéru

Hielscher's industrial processors of the hdT series can be comfortable and user-friendly operated via browser remote control.Všetky ultrazvukové riešenia Hielscher od 200 W vyššie sú vybavené digitálnou farebnou dotykovou obrazovkou a inteligentným softvérom. Prostredníctvom inteligentného protokolovania údajov sa všetky parametre ultrazvukového procesu automaticky ukladajú ako súbor CSV na vstavanú SD kartu hneď po spustení ultrazvuku. Vďaka tomu je výskum a protokolovanie oveľa pohodlnejšie. Po pokusoch sonikácie alebo príprave vzoriek môžete jednoducho skontrolovať parametre sonikácie každého sonikácie a porovnať ich.
Prostredníctvom intuitívneho menu je možné pred sonikáciou prednastaviť množstvo parametrov: Napríklad na reguláciu teploty vo vzorke a zabránenie jej tepelnej degradácii je možné nastaviť hornú hranicu teploty vzorky. Zásuvný snímač teploty, ktorý sa dodáva s ultrazvukovou jednotkou, poskytuje ultrazvukovému procesoru spätnú väzbu o skutočnej teplote sonikácie. Po dosiahnutí hornej hranice teploty sa ultrazvukový prístroj pozastaví, kým sa nedosiahne dolná hranica nastaveného ∆T, a potom sa automaticky znova začne sonikovať.
Ak je potrebná sonikacia so špecifickým energetickým vstupom, môžete prednastaviť konečnú ultrazvukovú energiu sonikácie. Samozrejme, ultrazvukovú pulzáciu a režim cyklu je možné nastaviť aj individuálne.
Ak chcete znova použiť svoje najúspešnejšie parametre sonikácie, môžete uložiť rôzne režimy sonikácie (napr. čas sonikácie, intenzita, režim cyklu atď.) ako prednastavené režimy, aby sa dali ľahko a rýchlo znova spustiť.
Pre väčšie pohodlie pri obsluhe je možné všetky digitálne ultrazvukové jednotky ovládať pomocou diaľkového ovládača prehliadača v akomkoľvek bežnom prehliadači (napr. InternetExplorer, Safari, Chrome atď.). Pripojenie LAN je jednoduché nastavenie plug-n-play a nevyžaduje žiadnu ďalšiu inštaláciu softvéru.
My v spoločnosti Hielscher vieme, že úspešná sonikácia biologických vzoriek si vyžaduje presnosť a opakovateľnosť. Preto sme naše ultrazvukové prístroje navrhli ako inteligentné zariadenia so všetkými funkciami, ktoré umožňujú efektívnu, spoľahlivú, reprodukovateľnú a pohodlnú prípravu vzoriek.

Kontaktujte nás teraz a povedzte nám o svojich biologických vzorkách a požadovaných krokoch prípravy. Navrhneme vám najvhodnejší ultrazvukový prístroj na prípravu vzoriek a pomôžeme vám s ďalšími informáciami, ako sú protokoly a odporúčania.

Nasledujúca tabuľka uvádza približnú kapacitu spracovania našich ultrazvukových systémov od ultrazvukových mikrohrotov a klasických ultrazvukových homogenizátorov až po ultrazvukové ultrazvukové zariadenia MultiSample pre pohodlnú a spoľahlivú prípravu mnohých vzoriek:

Objem dávky Prietok Odporúčané zariadenia
96-jamkové / mikrotitračné platne N.A. UIP400MTP
10 injekčných liekoviek s objemom 0,5 až 1,5 ml N.A. VialTweeter na UP200St
CupHorn na nepriamu sonikáciu, napr. do 5 injekčných liekoviek N.A. UP200St_TD_CupHorn
00,01 až 250 ml 5 až 100 ml/min UP50H
001 až 500 ml 10 až 200 ml/min UP100H
002 až 1 l 20 až 400 ml/min UP200Ht / UP200St
10 až 2000 ml 20 až 400 ml/min UP200Ht, UP400St
025 až 5 l 00,05 až 1 l/min UIP500hdT

Kontaktujte nás! / Opýtajte sa nás!

Požiadajte o ďalšie informácie

Pomocou nižšie uvedeného formulára si môžete vyžiadať ďalšie informácie o ultrazvukových procesoroch, aplikáciách a cene. Radi s vami prediskutujeme váš proces a ponúkneme vám ultrazvukový systém spĺňajúci vaše požiadavky!









Vezmite prosím na vedomie naše Zásady ochrany osobných údajov.




VialTweeter je multiSample Ultraonicator, ktorý umožňuje spoľahlivú prípravu vzoriek za presne kontrolovaných teplotných podmienok.

Ultrazvuková jednotka na prípravu viacerých vzoriek VialTweeter Umožňuje súčasnú sonikaciu až 10 injekčných liekoviek. Pomocou upínacieho zariadenia VialPress je možné dopredu stlačiť až 4 ďalšie skúmavky pre intenzívnu sonikaciu.



Fakty, ktoré stoja za to vedieť

Metabolomika

Metabolomika je štúdium malých molekúl, známych ako metabolity, prítomných v bunkách, biotekutinách, tkanivách alebo organizmoch. Tieto malé molekuly a ich interakcie v biologickom systéme sú zhrnuté pod zastrešujúcim pojmom "metabolóm" a oblasť výskumu sa nazýva metabolomika. Výskum metabolómov je úzko spätý s rýchlo sa rozvíjajúcou oblasťou presnej medicíny. Pochopenie metabolómu a jeho vzťahu k rôznym chorobám pomáha rozvíjať stratégie prevencie chorôb a klinickej starostlivosti pri individuálnej variabilite prostredia, životného štýlu, genetiky a molekulárneho fenotypu. Na uvoľnenie molekúl metabolitov z buniek sa ultrazvuk často používa v biologických laboratóriách na predanalytickú prípravu vzoriek, ako je narušenie buniek, lýza a extrakcia proteínov, lipidov a iných molekúl.


Literatúra / Referencie


Spoločnosť Hielscher Ultrasonics dodáva vysokovýkonné ultrazvukové homogenizátory od laboratórnych až po priemyselné veľkosti.

Vysoko výkonné ultrazvuky! Sortiment produktov spoločnosti Hielscher pokrýva celé spektrum od kompaktného laboratórneho ultrazvuku cez stolové jednotky až po plne priemyselné ultrazvukové systémy.

Radi prediskutujeme váš proces.

Let's get in contact.