Hielscher Ultrazvukové technológie

Ultrazvukový Príprava vzoriek pre testy ELISA

Testy ako ELISA sa vo veľkej miere používajú na diagnostiku in vitro, detekciu proteínov súvisiacich s ochorením a kontrolu kvality (napr. monitorovanie potravinových alergénov). Ultrazvukový prípravok vzoriek je rýchla, spoľahlivá a reprodukovateľná technika na lyzovanie buniek a izoláciu intracelulárnych proteínov, DNA, RNA a organely. Hielscher Ultrazvukom ponúka rôzne ultrazvukové riešenia pre pohodlnú prípravu jednotlivých vzoriek, viac injekčných liekoviek, rovnako ako pre mikrotiter dosky a 96-dobre dosky.

Elisa – Enzým-Spojený Imunosorbent test

ELISA je skratka pre enzým-spojený imunosorbent test a je široko používaný biochemickej analýzy techniky kategórie ligand-záväzné testy. V ELISA sa kvapalná vzorka pridá do stacionárnej tuhej fázy so špeciálnymi väzbových vlastnosťami. Za normálnych okolností sa stacionárna tuhá fáza aplikuje ako povlak na dobre dosku alebo dosku ELISA. Potom sa postupne pridávajú, inkubujú a umyjú rôzne kvapalné činidlá tak, aby sa nakoniec v konečnej kvapaline v studničkách vyskytla optická zmena (napr. vývoj farieb produktom enzymatickej reakcie). Optická zmena umožňuje merať množstvo analytu tzv. “čítanie". Na kvantitatívne odčítanie sa na detekciu a meranie intenzity prenášaného svetla používa spektrofotometer, fluórometer alebo luminometer. Citlivosť detekcie je ovplyvnená zosilnením signálu počas analytických reakcií. Vzhľadom k tomu, enzýmové reakcie sú dobre vyšetrené a spoľahlivé zosilnenie procesov, enzýmy sa používajú na vytvorenie signálu. Enzýmy sú spojené s detekčnými činidlami v pevných pomeroch, aby sa umožnila presná kvantifikácia, čo vysvetľuje aj názov imunosorbentový test "spojený s enzýmami".
Keďže testy ELISA sa vykonávajú v mikrotiterových platniach / 96-dobre platniach, je známy ako testovacia technika na báze platničiek a používa sa napr.
Technika ELISA sa často používa ako diagnostický nástroj v medicíne, biotechnológii, rastlinnej patológii a je tiež dôležitým meraním kvality vo viacerých odvetviach.

Kompletné nastavenie VialTweeter: VialTweeter sonotrode na Ultrazvukový procesor UP200St

Ultrazvuková jednotka na prípravu vzoriek VialTweeter sa používa na bunkovú ilýzu a extrakciu bielkovín pred testami ELISA

Žiadosť o informácie





Ultrazvukový Príprava vzorky pred ELISA

Predtým, ako sa môže vykonať test ELISA, vzorky vyžadujú kroky prípravy takejto bunkovej lyzy a extrakcie intracelulárnych proteínov, DNA, RNA atď. Výhodou ultrazvukovej bunkovej lyzy a izolácie bielkovín je jeho vysoká účinnosť, spoľahlivosť a reprodukovateľnosť. Všetky tieto faktory sú dôležité na získanie vysokokvalitnej diagnostiky a výsledkov výskumu

Výhody ultrazvukovejlýlózy pred ELISA

  • Homogénna úprava vzoriek
  • Kompletná lyza
  • Kompletná extrakcia bielkovín (napr. protilátky, DNA)
  • Optimálne prispôsobenie typu bunky
  • Pre akúkoľvek veľkosť vzorky
  • Reprodukovateľné
  • Regulovaná teplota
  • Automatické protokolovanie údajov na SD karte

Protokol pre pre-ELISA ultrazvukové bunkové lysis

Typ sondy, UP200St pre lýzu

  • Pre bunkové kultúry: Pred ultrazvukovou bunkovou lalýzou odstreďujte bunky 5 minút pri 270 x g v mikroodstredivke. Supernatant odstráňte aspiráciou a resuspendujte bunky v 30 – 100 μl tlmivého roztoku RIPA. Potom inkubujte bunkový pelet na ľade 30 minút.
  • Teraz je vzorka bunky pripravená na ultrazvukovú lyzu:
    Použite ultrazvukový zvuk typu sondy (napr. UP200Ht so sondou S26d2) alebo ultrazvukovým zariadením s viacerými vzorkami (napr. VialTweeter na simultánne ultrazvukovanie až 10 injekčných liekoviek alebo UIP400MPT pre mikrotiterové platne / 96-dobre dosky) v závislosti od množstva vzoriek, ktoré potrebujete pripraviť.
    Pre ultrazvukom sondy jednej vzorky vložte bunky do 1,5 ml mikrocentrifúgových skúmaviek.
  • Prednastavte ultrazvukové trvanie, celkový príkon energie, režim cyklu a/alebo teplotné limity v digitálnom menu ultrazvukového zariadenia. To zaisťuje vysoko spoľahlivú sonikáciu a opakovateľnosť.
  • Nastavte sonotródu a zapnite ultrazvukové zariadenie. Jemne presuňte mikročip ultrazvukovej sondy cez vzorku, aby ste vzorku rovnomerne sonikujú.
    Pre väčšinu buniek sa ultrazvuková lyza dokončí po 2 -4 cykloch 10 sekúnd ultrazvukom.
  • Po ultrazvukom vyberte sonotródu zo vzorky. Vzorky by sa mali inkubovať na ľade po dobu 5 minút. Potom odstreďujte pri 10 000 x g počas 20 minút, aby sa úlomky peletili. Preneste supernatanty do novej mikrocentrifúgovej trubice. Označte analyty a uchovávajte pri teplote -20°C.
  • Ultrazvukový sonotróda sa môže čistiť tak, že sa správne utrie alkoholom alebo sonikátom v kadička naplnenej alkoholom, napr. Všetky ultrazvukové sondy vyrobené z titánu sú autoklávovateľné.

Pre homogenáty tkanív:

  • Tkanivo opláchnite ľadovo studenými PBS (0,01 M, pH =7,4), aby sa dôkladne odstránila prebytočná krv hemolýzy.
  • Odvážte tkanivo (obličky, srdce, pľúca, slezina atď.) a macerujte ho na malé kúsky, ktoré sú homogenizované v PBS. Požadovaný objem PBS súvisí s hmotnosťou tkaniva. Spravidla 1 g tkaniva vyžaduje približne 9 ml PBS. Odporúča sa pridať do PBS inhibítor proteázy. (Alternatívne sa môže použiť tlmivý roztok RIPA alebo hypotonická lýza obsahujúca proteázu a fosfatázu.)
  • V závislosti od veľkosti tkaniva môže byť pri predbežnej liečbe tkaniva užitočná krátka liečba vírom (cca 1-2 min. za 15 sekúnd).
  • Namontujte mikro-tip, napríklad S26d2, na váš ultrazvukový. Skúmavka so vzorkou s tkanivom sa umiestni do ľadového kúpeľa.
  • Vzorku osolte ultrazvukom, napr. Vzorku uchovávajte v ľadovom kúpeli.
  • Homogenáty sa potom odstreďujú, aby sa získali špecifické skupiny (cytozolické, jadrové, mitochondriálne alebo lyzozomálne), aby sa proteín obohatil na analýzu. Odstreďovanie vzorky po dobu 5 minút pri 5000 × g sa supernatant získa.
Sonotróda MTP-24-8-96 má osem ultrazvukových sond pre ultrazvukom studní mikrotiterových dosiek.

Sonotróda MTP-24-8-96 má osem ultrazvukových sond pre ultrazvukom studní mikrotiterových dosiek.

Spoľahlivá regulácia teploty počas ultrazvukom

Teplota je rozhodujúci faktor ovplyvňujúci proces, ktorý je obzvlášť dôležitý pre liečbu biologických vzoriek, napr. Ako všetky techniky mechanickej prípravy vzoriek, ultrazvukom vytvára teplo. Avšak, teplota vzoriek môže byť dobre kontrolovaná pri použití Hielscher ultrazvukom zariadenia. Predstavujeme vám rôzne možnosti na monitorovanie a kontrolu teploty vašich vzoriek pri ich príprave pomocou ultrazvukom typu sondy alebo pred analyticky VialTweeter.

  1. Monitorovanie teploty vzorky: Všetky digitálne ultrazvukové procesory Hielscher sú vybavené inteligentným softvérom a pripojením teplotného snímača. Zapojte snímač teploty do ultrazvukového zariadenia (napr. UP200Ht, UP200St, VialTweeter, UIP400MTP) a vložte špičku snímača teploty do jednej zo skúmaviek so vzorkou. Prostredníctvom digitálneho farebného dotykového displeja môžete nastaviť v ponuke ultrazvukového procesora špecifický teplotný rozsah pre vašu sonikáciu vzoriek. Ultrazvukom sa automaticky zastaví, keď sa dosiahne maximálna teplota, a pozastaví sa, až kým teplota vzorky nedosiahne nižšiu hodnotu nastavenej teploty ∆. Potom sa ultrazvukom spustí automaticky znova. Táto inteligentná funkcia zabraňuje degradácii vyvolanej teplom.
  2. Pokiaľ ide o ultrazvukové jednotky s viacerými vzorkami VialTweeter, titánový blok, ktorý drží skúmavky so vzorkou, sa môže predchladiť. Vložte blok VialTweeter (iba sonotróda bez prevodníka!) do chladničky alebo mrazničky, aby sa predchladil titánový blok, ktorý pomáha odložiť zvýšenie teploty vo vzorke. Ak je to možné, vzorka sama o sebe môže byť pre-chladené taky.
  3. Použite ľadový kúpeľ alebo suchý ľad vychladnúť počas ultrazvukom. Počas ultrazvuku vložte vzorkovacie trubice do ľadového kúpeľa. Pre VialTweeter, použite plytký zásobník naplnený suchým ľadom a miesto VialTweeter na suchom ľade tak, aby teplo môže rýchlo rozptýliť.

Zákazníci po celom svete používajú Hielscher sonda-ultrasonicators, rovnako ako multi-vzorky ultrazvukom jednotky VialTweeter a UIP400MTP pre ich každodennú prípravu vzoriek práce v biologických, biochemických, lekárskych a klinických laboratórií. Inteligentný softvér a regulácia teploty procesorov Hielscher, teplota je spoľahlivo regulovaná a tepelne-indukovanej degradácie vzoriek vyhnúť. Ultrazvuková príprava vzoriek s ultrazvukovým roztokom Hielscher prináša vysoko spoľahlivé a reprodukovateľné výsledky!

Kontaktuj nás! / Opýtajte sa nás!

Požiadajte o ďalšie informácie

Prosím, použite formulár nižšie požiadať o ďalšie informácie o ultrazvukové procesory, aplikácie a ceny. Budeme radi diskutovať o vašom procese s vami a ponúknuť vám Ultrazvukový systém spĺňajúci vaše požiadavky!









Vezmite prosím na vedomie naše Zásady ochrany osobných údajov,


Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

Hielscher Ultrazvukom vyrába vysokovýkonné ultrazvukové homogenizátory pre miešanie aplikácií, disperzie, emulgácie a extrakcie na laboratórne, pilotné a priemyselné meradle.

Literatúra/referencie



Fakty stojí za to vedieť

Typy ELISA

Existuje niekoľko typov ELISA, ktoré sa vyznačujú ich princípom fungovania. Sú známe ako priame ELISA, nepriame ELISA, sendvič ELISA, konkurenčné ELISA, a reverznej ELISA. Nižšie vám predstavujeme prehľad rôznych typov ELISA a ich hlavných charakteristík a rozdielov.
ELISA sa môže spustiť v kvalitatívnom alebo kvantitatívnom formáte. Kvalitatívne výsledky poskytujú jednoduchý pozitívny alebo negatívny výsledok, zatiaľ čo v kvantitatívnom ELISA sa optická hustota (OD) vzorky porovná so štandardnou krivkou, ktorá je zvyčajne sériovým zriedením roztoku známej koncentrácie cieľovej molekuly.

Priama elisa

Priama ELISA je najjednoduchšia testovaná forma Elisy, kde sa používa len primárna protilátka označená enzýmom a sekundárne protilátky sa nevyžadujú. Primárna protilátka označená enzýmom sa viaže priamo na cieľ, t. j. antigén. Pufrovaný antigénový roztok sa pridá do každej vedre mikrotiterovej platničky (zvyčajne 96-dobre platničiek, ELISA platní), kde sa priľne k plastovému povrchu prostredníctvom nabíjacích interakcií. Keď enzým spojený s primárnou protilátkou reaguje so substrátom, vytvára viditeľný signál, ktorý sa dá merať spektrofotometrom, fluórometrom alebo luminometrom.

Nepriama ELISA

Pri nepriamom teste ELISA je potrebná primárna protilátka aj sekundárna protilátka. Na rozdiel od priameho ELISA však nie primárna protilátka, ale sekundárna protilátka je označená enzýmom. Antigén je znehybnený na dobre platňu a viazaný primárnou protilátkou. Následne sa sekundárna protilátka označená enzýmom viaže na primárnu protilátku. Nakoniec enzým spojený so sekundárnou protilátkou reaguje so substrátom na vytvorenie viditeľného signálu, ktorý sa dá zistiť.

Sendvič ELISA

Zatiaľ čo pri priamych a nepriamych testoch ELISA je antigén znehybnený a potiahnutý na povrch vedre, v sendviči ELISA sa protilátka znehybní na plastový povrch platne ELISA. Imobilizované protilátky v sendviči ELISA sú známe ako zachytávacie protilátky. Okrem zachytávania protilátok je v sendviči ELISA potrebná aj takzvaná detekčné protilátky. Detekčné protilátky zahŕňajú neoznačenú primárnu detekčnú protilátku a sekundárnu detekčnú protilátku označenú enzýmom.
Postupne sa antigén záujmu viaže na zachytiť protilátku imobilizovanú na platňu. Potom sa primárna detekčné protilátky viaže na antigén. Potom sa sekundárna detekčná protilátka viaže na primárnu detekčnú protilátku. V konečnom reakčnej kroku enzým reaguje so substrátom, aby vytváral viditeľný signál, ktorý možno zistiť opticky.

Konkurenčná ELISA

Konkurenčná ELISA, tiež známa ako inhibícia ELISA, je najzložitejší typ ELISA, pretože zahŕňa použitie inhibítorového antigénu. Každý z troch formátov, priamy, nepriamy a sendvič ELISA, môže byť prispôsobený konkurenčnému formátu ELISA. V konkurenčnom ELISA, inhibítor antigén a antigén záujmu súťažiť o väzbu na primárnu protilátku.
V prípade konkurenčného ELISA sa neoznačená protilátka inkubuje v prítomnosti jej antigénu, t. j. vzorky. Tieto viazané protilátky / antigén komplexy sa potom pridajú do antigén-potiahnuté dobre.
Platňa sa umyje tak, aby sa odstránili neviazané protilátky. Konkurenčná ELISA má svoj názov vzhľadom na skutočnosť, že viac antigénu je vo vzorke, tým viac antigén-protilátky komplexy sú tvorené. To znamená, že v studne je menej neviazaných protilátok, ktoré sa viažu na antigén a antigény musia súťažiť o dostupnú protilátku. Pridá sa sekundárna protilátka zodpovedajúca primárnej protilátke. Táto druhá protilátka je spojená s enzýmom. Po pridaní substrátu zostávajúce enzýmy vytvárajú chromogénny alebo fluorescenčný signál.
V tomto bode sa reakcia zastaví, aby sa zabránilo prípadnému nasýteniu signálu.
Niektoré konkurenčné súpravy ELISA zahŕňajú antigén spojený s enzýmami namiesto protilátky spojenej s enzýmami. Označený antigén konkuruje miestam viažucim primárne protilátky s antigénom vzorky (neoznačeným). Menej antigénu vo vzorke, tým viac označený antigén je zachovaný v studne a silnejší signál.

Reverzné ELISA

Reverzná ELISA nepoužíva dobré platne, ale ponecháva antigény suspendované v testovacej tekutine. Reverzný test ELISA meria množstvo viazaných protilátok antigénom. Bol vyvinutý špeciálne na detekciu a vyšetrenie proteínu obálky západonílského vírusu a na to, ako je schopný nájsť protilátky špecifické pre vírus.

Enzymatická značka používaná pre ELISA

Nižšie uvedený zoznam uvádza najbežnejšie enzymatické markery používané v testoch ELISA, ktoré umožňujú merať výsledky testu po dokončení.

  • OPD (o-fenyléndiamíndihydrochlorid) sa zmení na jantárovú na detekciu HRP (Peroxidáza chrenu), ktorá sa často používa ako konjugovaný proteín.
  • TMB (3,3′,5,5′-tetrametylbenzidín) sa pri zisťovaní HRP zmodrí a po pridaní kyseliny sírovej alebo fosforečnej zožltne.
  • ABTS (2,2′-Azinobis [3-etylbenzotiazolín-6-sulfónová kyselina]-diamónna soľ) sa pri zisťovaní HRP mení na zelenú.
  • PNPP (p-nitrofenylfosfát, sodná soľ) zožltne pri zisťovaní alkalickej fosfatázy.