Preparação ultrassônica de soro rico em plaquetas
- O plasma rico em plaquetas (PRP) é o plasma sanguíneo enriquecido com plaquetas, que é usado para tratamentos médicos e estéticos.
- A lise e o condicionamento ultrassônicos são um método muito eficaz para preparar plasma rico em plaquetas.
- A Hielscher Ultrasonics oferece vários sistemas ultrassônicos que atendem aos requisitos do tratamento de sangue (por exemplo, para preparação interna e externa de uma sala limpa).
soro rico em plaquetas
A sonicação é um método confiável e fácil de lisar as plaquetas no soro sanguíneo autólogo para liberar os fatores de crescimento. As frações derivadas de plaquetas – também conhecido como soro condicionado autólogo (SCA) – são usados para reparo de tecidos ou tratamentos estéticos. Para obter os melhores resultados, o PRP é enriquecido antes da injeção.
Para preparar plasma enriquecido com fatores de crescimento celular, a sonicação é um método muito eficaz e eficiente para lisar as membranas celulares e liberar quase todos os fatores de crescimento celular das plaquetas. Por lise e condicionamento ultrassônico, até mesmo sangue anticoagulado pode ser usado.
O condicionamento do PRP via sonicação é uma maneira conveniente e econômica de produzir fatores de crescimento concentrados.
Lise ultrassônica de plasma rico em plaquetas (PRP)
Efeitos de lise ultrassônica
O tratamento ultrassônico do soro sanguíneo resulta em uma lise homogênea das plaquetas para liberar os fatores de crescimento aprisionados (fator de crescimento AB (PDGF-AB), fator de crescimento AA (PDGF-AA), fator de crescimento BB (PDGF-BB), fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), fator de crescimento transformador β (TGF-β), fator de crescimento epidérmico (EGF), fator de crescimento semelhante à insulina (IGF), fator de crescimento de células epiteliais ECGF e fator de crescimento fibroblástico (FGF)). As plaquetas e seus grânulos alfa são interrompidos pela sonicação, usando o fenômeno de cavitação acústica. O uso de cavitação ultrassônica para lise plaquetária diminui o possível impacto negativo na atividade do fator de crescimento do método de congelamento e descongelamento repetido.
Protocolo para preparação de PRP ultrassônico
Aprox. 16mL de amostra de sangue autólogo recém-coletado são suavemente invertidos 8 a 10 vezes em um tubo para que o sangue e os anticoagulantes sejam bem misturados. Em seguida, a amostra é centrifugada a 1800 g por 20 min em temperatura ambiente. Após a centrifugação, as plaquetas e as células mononucleares constroem uma camada esbranquiçada na parte inferior da camada de plasma, conhecida como plasma rico em plaquetas (PRP). A camada superior é conhecida como plasma pobre em plaquetas (PPP). As células mononucleares podem ser removidas ou permanecer na amostra. Muitas vezes, as células mononucleares permanecem na amostra de PRP para evitar etapas adicionais, que apresentam risco de contaminação.
Nota: O tratamento ultrassônico do PRP autólogo deve ser realizado em condições estéreis.
O PRP e o PPP são separados e coletados. Ao PPP, adiciona-se 1,5mL de solução de cloreto de cálcio a 10%, enquanto ao PRP adiciona-se 0,5mL de etanol a 5%. Ambas as suspensões são suavemente agitadas e deixadas em repouso por 5 min em temperatura ambiente. Finalmente, 1mL de PPP é adicionado à suspensão do PRP e é deixado em repouso até que um coágulo de fibrina se forme.
Tratamento ultrassônico: Como o gel de plaquetas formado atua como um reservatório para os fatores de crescimento liberados, o gel de fibrina deve ser interrompido para liberar os fatores de crescimento disponíveis. Os parâmetros para a lise ultrassônica e liberação do fator de crescimento são os seguintes: Sonicar com um UP200Ht ou UP200St (200W, 26kHz) com sonotrodo S26d2 a amostra no tubo. Para evitar o superaquecimento da amostra de sangue, a sonicação pode ser realizada em ciclos pulsantes (por exemplo, 10 segundos ligado, 30 segundos desligado). A amostra deve ser colocada no gelo para arrefecimento, de modo a que a temperatura seja mantida de forma óptima entre 2 – 5°C. Após a sonicação, a amostra é centrifugada a 16000 g durante 5 minutos à temperatura ambiente. O sobrenadante é coletado e pode ser armazenado a -70°C.
A concentração de plaquetas na fração PRP foi enriquecida 1,7 – 4,5 vezes no método sonicado quando comparado com a contagem média de plaquetas no sangue total da literatura.
O PRP foi combinado com terapia com células-tronco derivadas do tecido adiposo (células-tronco autólogas liberadas por ultrassom do tecido adiposo, misturado com PRP e injetado de volta no tecido do paciente para reparo).
Equipamento ultrassônico
A Hielscher Ultrasonics é especialista em tecnologia ultrassônica sofisticada e confiável. Nossos dispositivos ultrassônicos são usados em todo o mundo para lise, extração e preparação de amostras – por direto e indireto. Autoclavável bem como Descartável acessórios garantem um livre de contaminação tratamento de amostras de sangue autólogo. A maioria dos nossos sistemas pode ser usada para lise ultrassônica de células-tronco e PRP, que torna nossos dispositivos ultrassônicos economicamente ainda mais eficientes.
Esta tabela abaixo lista nossos dispositivos ultrassônicos, que são adequados para a preparação de plasma rico em plaquetas, e seu volume de amostra recomendado, respectivamente. Ultrasonicadores maiores e sistemas personalizados também estão disponíveis.
| Dispositivo | Potência [W] | Freq. [kHz] | Tipo | Volume [mL] | ||
|---|---|---|---|---|---|---|
| VialTweeter | 200 | 26 | autônomo | 0.5 | – | 1.5 |
| UP50H | 50 | 30 | de mão ou montado em suporte | 0.01 | – | 250 |
| UP100H | 100 | 30 | de mão ou montado em suporte | 0.01 | – | 500 |
| UP200Ht | 200 | 26 | de mão ou montado em suporte | 0.1 | – | 1000 |
| UP200St | 200 | 26 | montada em pé | 0.1 | – | 1000 |
| UP400St | 400 | 24 | montada em pé | 5.0 | – | 2000 |
| UP200St-SonoStep | 200 | 26 | autônomo | 30 | – | 500 |
| GDmini2 | 200 | 26 | célula de fluxo livre de contaminação | |||
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GDmini2 no transdutor UP200St-TD (200 watts)
Literatura/Referências
- Fortunato, T. M.; Beltrami, Ch.; Oliveira, C.; De Bank, P.A:; Pula, G. (2016): O gel de lisado de plaquetas e os progenitores endoteliais estimulam a formação de redes microvasculares in vitro: implicações da engenharia de tecidos. Sci. Rep. 6, 2016.
- Hamid, M.S.A.; Yusof, Ashril; Ali, Mohamed Razif Mohamed (2014): Plasma rico em plaquetas (PRP) para lesão muscular aguda: uma revisão sistemática. PLOS ONE Volume 9, Edição 2, 2014.
Fatos, vale a pena conhecer
Plasma Rico em Plaquetas
O plasma rico em plaquetas contém fator de crescimento AB (PDGF-AB), fator de crescimento derivado de plaquetas AA (PDGF-AA), fator de crescimento derivado de plaquetas BB (PDGF-BB), fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), fator de crescimento transformador β (TGF-β), fator de crescimento epidérmico (EGF), fator de crescimento semelhante à insulina (IGF), fator de crescimento de células epiteliais ECGF e fator de crescimento fibroblástico (FGF), que são estimulantes importantes para o crescimento e renovação celular.
Soro Condicionado Autólogo (ACS)
O Plasma Condicionado Autólogo (ACP) é um plasma rico em plaquetas extraído do sangue autólogo que é usado para apoiar a regeneração em uma variedade de condições ortopédicas e procedimentos cirúrgicos. O soro condicionado é preparado separando o plasma dos outros componentes do sangue (como eritrócitos) e concentrando-o. ACP é um plasma rico em plaquetas (PRP). PRP é um termo geral para um tipo de plasma que contém uma concentração significativamente maior de trombócitos quando comparado com o sangue total. É extraído do sangue total. Os principais componentes do ACP incluem trombócitos (plaquetas) e vários fatores de crescimento que desempenham um papel importante no processo de cicatrização. Ao contrário de outras formulações de plasma rico em plaquetas, o ACP se distingue por uma baixa concentração de glóbulos brancos, como granulócitos neutrófilos, que podem ser prejudiciais ao processo de cicatrização quando presentes em altas concentrações.
injeções de plasma rico em plaquetas
O plasma rico em plaquetas é usado como injeção na medicina regenerativa, bem como em procedimentos cosméticos. A aplicação do PRP promete uma aceleração significativa da cicatrização muscular e da recuperação muscular. Além disso, é usado com sucesso para tratar inflamação, artrite, dor, feridas, feridas abertas de cicatrização lenta e queimaduras graves na pele. O PRP contém um alto nível de fatores de crescimento, que estimulam e protegem as células de cicatrização ao reparar o tecido danificado.
Para tratamentos cosméticos, o PRP tem se mostrado eficaz para estimular o crescimento do cabelo, a renovação da pele (também conhecido como tratamento de vampiro).
Fatores de crescimento derivados de plaquetas (PDGF)
O termo fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF) refere-se aos fatores PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C e PDGF-D. É uma rede de sinalização de quatro ligantes (PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C e PDGF-D) e dois receptores, PDGFR-alfa e PDGFR-beta.
Os fatores de crescimento, ou proteínas, regulam o crescimento e a divisão celular. Como o principal mitógeno encontrado no soro de mamíferos, que é liberado das plaquetas durante a formação do coágulo, ele desempenha um papel significativo na formação de vasos sanguíneos (angiogênese), o crescimento de vasos sanguíneos a partir de tecido de vasos sanguíneos já existente.