Preparação ultrassónica de soro rico em plaquetas

• O plasma rico em plaquetas (PRP) é plasma sanguíneo que foi enriquecido com plaquetas e que é utilizado em tratamentos médicos e estéticos.
• A lise e o condicionamento ultrassónicos constituem um método muito eficaz para preparar plasma rico em plaquetas.
• A Hielscher Ultrasonics oferece vários sistemas ultrassónicos que satisfazem os requisitos do tratamento do sangue (por exemplo, para a preparação dentro e fora de uma sala limpa).

Soro rico em plaquetas

A sonicação é um método fiável e simples para lisar as plaquetas no soro sanguíneo autólogo, de modo a libertar os fatores de crescimento. As frações derivadas das plaquetas – também conhecidas como soro autólogo condicionado (ACS) – são utilizadas na reparação de tecidos ou em tratamentos estéticos. Para obter resultados ótimos, o PRP é enriquecido antes da injeção.
Para preparar plasma enriquecido com fatores de crescimento celular, a sonicação é um método muito eficaz e eficiente para lisar as membranas celulares e libertar quase todos os fatores de crescimento celular das plaquetas. A lise e o condicionamento ultrassónicos permitem utilizar até mesmo sangue anticoagulado.
O condicionamento do PRP por sonicação é uma forma prática e económica de obter fatores de crescimento concentrados.

Lise ultrassónica de plasma rico em plaquetas (PRP)

Efeitos da lise ultrassónica

O tratamento ultrassónico do soro sanguíneo resulta numa lise homogénea das plaquetas, de modo a libertar os fatores de crescimento retidos (fator de crescimento AB (PDGF-AB), fator de crescimento AA (PDGF-AA), fator de crescimento BB (PDGF-BB), fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), fator de crescimento transformante β (TGF-β), fator de crescimento epidérmico (EGF), fator de crescimento semelhante à insulina (IGF), fator de crescimento das células epiteliais ECGF e fator de crescimento fibroblástico (FGF)). As plaquetas e os seus grânulos alfa sofrem rutura por sonicação, utilizando o fenómeno de cavitação acústica. A utilização da cavitação ultrassónica para a lise das plaquetas reduz o possível impacto negativo do método de congelação e descongelação repetidas na atividade dos fatores de crescimento.

Protocolo para a preparação ultrassónica de PRP

Uma amostra de aproximadamente 16mL de sangue autólogo acabado de colher é suavemente invertida 8–10 vezes num tubo, para que o sangue e os anticoagulantes fiquem bem misturados. Em seguida, a amostra é centrifugada a 1800 g durante 20 min à temperatura ambiente. Após a centrifugação, as plaquetas e as células mononucleares formam uma camada esbranquiçada na parte inferior da camada de plasma, conhecida como plasma rico em plaquetas (PRP). A camada superior é conhecida como plasma pobre em plaquetas (PPP). As células mononucleares podem ser removidas ou permanecer na amostra. Frequentemente, as células mononucleares permanecem na amostra de PRP para evitar etapas adicionais, que comportam um risco de contaminação.
Nota: O tratamento ultrassónico do PRP autólogo tem de ser realizado em condições estéreis.
O PRP e o PPP são separados e recolhidos. Ao PPP, adicionam-se 1,5mL de solução de cloreto de cálcio a 10%, enquanto ao PRP se adicionam 0,5mL de etanol a 5%. Ambas as suspensões são suavemente agitadas e deixadas em repouso durante 5 min à temperatura ambiente. Por fim, adiciona-se 1mL de PPP à suspensão de PRP, que é deixada em repouso até se formar um coágulo de fibrina.
Tratamento ultrassónico: Como o gel de plaquetas formado atua como reservatório dos fatores de crescimento libertados, o gel de fibrina tem de sofrer rutura para libertar os fatores de crescimento disponíveis. Os parâmetros para a lise ultrassónica e a libertação dos fatores de crescimento são os seguintes: Submeter a amostra no tubo a sonicação com um UP200Ht ou UP200St (200W, 26kHz), equipado com o sonotrodo S26d2. Para evitar o sobreaquecimento da amostra de sangue, a sonicação pode ser realizada em ciclos pulsados (por exemplo, 10 seg. ligado, 30 seg. desligado). A amostra deve ser colocada sobre gelo para arrefecimento, de modo a manter a temperatura, idealmente, entre 2–5°C. Após a sonicação, a amostra é centrifugada a 16 000 g durante 5 min. à temperatura ambiente. O sobrenadante é recolhido e pode ser armazenado a -70°C.
A concentração de plaquetas na fração de PRP foi enriquecida 1,7–4,5 vezes com o método de sonicação, em comparação com a contagem média de plaquetas no sangue total indicada na literatura.

O PRP tem sido combinado com a terapia com células estaminais derivadas de tecido adiposo (células estaminais autólogas libertadas de tecido adiposo por ultrassons, misturadas com PRP e reinjetadas no tecido do doente para reparação).

Equipamento ultrassónico

A Hielscher Ultrasonics é especialista em tecnologia ultrassónica sofisticada e fiável. Os nossos dispositivos ultrassónicos são utilizados em todo o mundo para lise, extração e preparação de amostras – de forma direta e indireta. Autoclaváveis e também descartáveis , os acessórios asseguram um tratamento isento de contaminação de amostras de sangue autólogo. A maioria dos nossos sistemas pode ser utilizada para a lise ultrassónica de células estaminais e de PRP, o que torna os nossos dispositivos ultrassónicos ainda mais eficientes do ponto de vista económico.
A tabela abaixo apresenta os nossos dispositivos ultrassónicos adequados para a preparação de plasma rico em plaquetas e o respetivo volume de amostra recomendado. Também estão disponíveis sonicadores maiores e sistemas personalizados.

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