Preparação ultra-sónica de soro rico em plaquetas
- O plasma rico em plaquetas (PRP) é o plasma sanguíneo enriquecido com plaquetas, utilizado em tratamentos médicos e estéticos.
- A lise e o condicionamento por ultra-sons é um método muito eficaz para preparar plasma rico em plaquetas.
- A Hielscher Ultrasonics oferece vários sistemas de ultra-sons que correspondem aos requisitos do tratamento do sangue (por exemplo, para a preparação interior e exterior de uma sala limpa).
soro rico em plaquetas
A sonicação é um método fiável e fácil para lisar as plaquetas no soro de sangue autólogo, a fim de libertar os factores de crescimento. As fracções derivadas de plaquetas – também conhecido como soro autólogo condicionado (ACS) – são utilizados para a reparação de tecidos ou para tratamentos estéticos. Para obter resultados óptimos, o PRP é enriquecido antes da injeção.
A fim de preparar plasma enriquecido com factores de crescimento celular, a sonicação é um método muito eficaz e eficiente para lisar as membranas celulares e libertar quase completamente os factores de crescimento celular das plaquetas. Através da lise e do condicionamento por ultra-sons, é possível utilizar até mesmo sangue anticoagulado.
O condicionamento do PRP através da sonicação é uma forma conveniente e económica de produzir factores de crescimento concentrados.
Lise ultra-sónica do plasma rico em plaquetas (PRP)
Efeitos de lise ultra-sónica
O tratamento ultrassónico do soro sanguíneo provoca uma lise homogénea das plaquetas para libertar os factores de crescimento aprisionados (fator de crescimento AB (PDGF-AB), fator de crescimento AA (PDGF-AA), fator de crescimento BB (PDGF-BB), fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), fator de crescimento transformador β (TGF-β), fator de crescimento epidérmico (EGF), fator de crescimento semelhante à insulina (IGF), fator de crescimento das células epiteliais ECGF e fator de crescimento fibroblástico (FGF)). As plaquetas e os seus grânulos alfa são rompidos por sonicação, utilizando o fenómeno de Cavitação acústica. A utilização da cavitação ultra-sónica para a lise das plaquetas diminui o possível impacto negativo na atividade do fator de crescimento do método repetido de congelação-descongelação.
Protocolo para a preparação de PRP por ultra-sons
Cerca de 16 ml de amostra de sangue autólogo fresco colhido são suavemente invertidos 8 a 10 vezes num tubo para que o sangue e os anticoagulantes fiquem bem misturados. Em seguida, a amostra é centrifugada a 1800 g durante 20 minutos à temperatura ambiente. Após a centrifugação, as plaquetas e as células mononucleares formam uma camada esbranquiçada na parte inferior da camada de plasma, que é conhecida como plasma rico em plaquetas (PRP). A camada superior é conhecida como plasma pobre em plaquetas (PPP). As células mononucleares podem ser removidas ou permanecer na amostra. Muitas vezes, as células mononucleares permanecem na amostra de PRP para evitar passos adicionais, que acarretam o risco de contaminação.
Nota: O tratamento ultrassónico do PRP autólogo tem de ser efectuado em condições estéreis.
O PRP e o PPP são separados e recolhidos. Ao PPP, é adicionado 1,5 ml de solução de cloreto de cálcio a 10%, enquanto ao PRP é adicionado 0,5 ml de etanol a 5%. Ambas as suspensões são agitadas suavemente e deixadas a repousar durante 5 minutos à temperatura ambiente. Finalmente, adiciona-se 1mL de PPP à suspensão de PRP e deixa-se repousar até se formar um coágulo de fibrina.
Tratamento por ultra-sons: Uma vez que o gel de plaquetas formado actua como um reservatório para os factores de crescimento libertados, o gel de fibrina tem de ser rompido para libertar os factores de crescimento disponíveis. Os parâmetros para a lise ultra-sónica e a libertação de factores de crescimento são os seguintes Sonicar com um UP200Ht OU UP200St (200W, 26kHz) com o sonotrodo S26d2 a amostra no tubo. Para evitar o sobreaquecimento da amostra de sangue, a sonicação pode ser efectuada em ciclos pulsantes (por exemplo, 10 seg. ligado, 30 seg. desligado). A amostra deve ser colocada em gelo para arrefecimento, de modo a que a temperatura seja mantida de forma óptima entre 2 – 5°C. Após a sonicação, a amostra é centrifugada a 16000 g durante 5 min. à temperatura ambiente. O sobrenadante é recolhido e pode ser armazenado a -70°C.
A concentração de plaquetas na fração de PRP foi enriquecida em 1,7 – 4,5 vezes no método sonicado quando comparado com a contagem média de plaquetas da literatura no sangue total.
O PRP foi combinado com a terapia com células estaminais derivadas do tecido adiposo (células estaminais autólogas libertadas por ultra-sons do tecido adiposomisturado com PRP e injetado de novo no tecido do doente para reparação).
Equipamento ultrassónico
A Hielscher Ultrasonics é especialista em tecnologia de ultra-sons sofisticada e fiável. Os nossos aparelhos de ultra-sons são utilizados em todo o mundo para lise, extração e preparação de amostras – por direta e indireta. Autoclavável bem como descartáveis acessórios asseguram uma livre de contaminação tratamento de amostras de sangue autólogo. A maioria dos nossos sistemas pode ser utilizada para a lise ultra-sónica de células estaminais e PRP, o que torna os nossos aparelhos de ultra-sons economicamente ainda mais eficientes.
A tabela seguinte apresenta os nossos aparelhos de ultra-sons, que são adequados para a preparação de plasma rico em plaquetas, e o respetivo volume de amostra recomendado, respetivamente. Também estão disponíveis ultrasonicadores maiores e sistemas personalizados.
| Dispositivo | Potência [W] | Freq. [kHz] | Tipo | Volume [mL] | ||
|---|---|---|---|---|---|---|
| VialTweeter | 200 | 26 | autónomo | 0.5 | – | 1.5 |
| UP50H | 50 | 30 | de mão ou de pé | 0.01 | – | 250 |
| UP100H | 100 | 30 | de mão ou de pé | 0.01 | – | 500 |
| UP200Ht | 200 | 26 | de mão ou de pé | 0.1 | – | 1000 |
| UP200St | 200 | 26 | montado em pé | 0.1 | – | 1000 |
| UP400ST | 400 | 24 | montado em pé | 5.0 | – | 2000 |
| UP200St-SonoStep | 200 | 26 | autónomo | 30 | – | 500 |
| GDmini2 | 200 | 26 | célula de fluxo livre de contaminação | |||
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GDmini2 no transdutor UP200St-TD (200 watts)
Literatura/Referências
- Fortunato, T. M.; Beltrami, Ch.; Emanueli, C.; De Bank, P.A:; Pula, G. (2016): Gel de lisado de plaquetas e progenitores endoteliais estimulam a formação de rede microvascular in vitro: implicações para a engenharia de tecidos. Sci. Rep. 6, 2016.
- Hamid, M.S.A.; Yusof, Ashril; Ali, Mohamed Razif Mohamed (2014): Plasma rico em plaquetas (PRP) para lesão muscular aguda: Uma revisão sistemática. PLOS ONE Volume 9, Edição 2, 2014.
Fatos, vale a pena conhecer
Plasma rico em plaquetas
O plasma rico em plaquetas contém o fator de crescimento AB (PDGF-AB), o fator de crescimento derivado das plaquetas AA (PDGF-AA), o fator de crescimento derivado das plaquetas BB (PDGF-BB), o fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), o fator de crescimento transformador β (TGF-β), o fator de crescimento epidérmico (EGF), o fator de crescimento semelhante à insulina (IGF), o fator de crescimento das células epiteliais ECGF e o fator de crescimento fibroblástico (FGF), que são importantes estimulantes do crescimento e da renovação celular.
Soro autólogo condicionado (ACS)
O Plasma Autólogo Condicionado (ACP) é um plasma rico em plaquetas extraído do sangue autólogo, utilizado para apoiar a regeneração numa variedade de condições ortopédicas e procedimentos cirúrgicos. O soro condicionado é preparado separando o plasma dos outros componentes do sangue (como os eritrócitos) e concentrando-o. O ACP é um plasma rico em plaquetas (PRP). O PRP é um termo geral para um tipo de plasma que contém uma concentração significativamente mais elevada de trombócitos quando comparado com o sangue total. É extraído do sangue total. Os principais componentes do ACP incluem trombócitos (plaquetas) e vários factores de crescimento que desempenham um papel importante no processo de cicatrização. Ao contrário de outras formulações de plasma rico em plaquetas, o ACP distingue-se por uma baixa concentração de glóbulos brancos, tais como granulócitos neutrófilos, que podem ser prejudiciais para o processo de cicatrização quando presentes em concentrações elevadas.
injecções de plasma rico em plaquetas
O plasma rico em plaquetas é utilizado como injeção na medicina regenerativa, bem como em procedimentos cosméticos. A aplicação do PRP promete uma aceleração significativa da cicatrização e da recuperação muscular. Além disso, é utilizado com êxito no tratamento da inflamação, artrite, dor, feridas, feridas abertas de cicatrização lenta e queimaduras graves da pele. O PRP contém um elevado nível de factores de crescimento, que estimulam e protegem as células de cicatrização para que o tecido danificado seja reparado.
Nos tratamentos cosméticos, o PRP tem-se revelado eficaz para estimular o crescimento do cabelo e a renovação da pele (também conhecido como tratamento vampiro).
Factores de crescimento derivados de plaquetas (PDGF)
O termo fator de crescimento derivado das plaquetas (PDGF) refere-se aos factores PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C e PDGF-D. Trata-se de uma rede de sinalização composta por quatro ligandos (PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C e PDGF-D) e dois receptores, o PDGFR-alfa e o PDGFR-beta.
Os factores de crescimento, ou proteínas, regulam o crescimento e a divisão celular. Como principal mitogénio presente no soro dos mamíferos, que é libertado pelas plaquetas durante a formação de coágulos, desempenha um papel importante na formação de vasos sanguíneos (angiogénese), o crescimento de vasos sanguíneos a partir de tecido de vasos sanguíneos já existentes.