Preparação de ultra-sons Rico em Plaquetas Soro
- -Plasma rico em plaquetas (PRP) é plasma sanguíneo que tenha sido enriquecido com plaquetas, que é usado para tratamentos médicos e estethic.
- Ultra-sons e a lise condicionado é um método muito eficaz para preparar plasma rico em plaquetas.
- Hielscher Ultrasonics oferece vários sistemas de ultra-sons que correspondem aos requisitos do tratamento de sangue (por exemplo, para dentro e fora da preparação de uma sala limpa).
Rico em Plaquetas Soro
A sonicação é um método de confiança e fácil de efectuar a lise das plaquetas em soro de sangue autólogo, a fim de libertar os factores de crescimento. As fracções derivadas de plaquetas – também conhecido como soro autólogo condicionado (ACS) – são utilizados para a reparação de tecidos ou tratamentos estéticos. Para obter resultados óptimos, o PRP está enriquecido antes da injecção.
A fim de preparar plasma enriquecido com factores de crescimento celular, ultra-sons é um método muito eficaz e eficiente para efectuar a lise das membranas celulares e para libertar quase os factores de crescimento de células completas a partir das plaquetas. Por lise de ultra-sons e condicionado, mesmo sangue anti-coagulado pode ser utilizado.
Condicionado de PRP através de ultra-sons é uma forma conveniente e de baixo custo para produzir em factores de crescimento concentradas.
Efeitos de ultra-sons de lise
tratamento de ultra-sons de resultados no soro sanguíneo em uma lise homogénea das plaquetas de modo a libertar os factores de crescimento aprisionadas (factor de crescimento AB (PDGF-AB), factor de crescimento AA (FCDP-AA), factor de crescimento BB (PDGF-BB), vascular factor de crescimento endotelial (VEGF), factor de crescimento de transformação β (TGF-beta), factor de crescimento epidérmico (EGF), factor de crescimento semelhante à insulina (IGF), factor de crescimento epitelial células ECGF e factor de crescimento fibroblástico (FGF)). As plaquetas e os alfa-grânulos são rompidas por sonicação, utilizando o fenómeno de cavitação acústica. Usando cavitação ultra-sónica para a lise das plaquetas diminui o eventual impacto negativo sobre a actividade do factor de crescimento do método de congelação-descongelação repetidas.
Protocolo para Ultrasonic PRP Preparação
Aprox. 16 mL de amostra de sangue autólogo recolhido fresco é suavemente invertido 8-10 vezes em um tubo de modo que o sangue e os anticoagulantes são bem misturados. Em seguida, a amostra é centrifugada a 1800 g durante 20 min à temperatura ambiente. Após a centrifugação, as plaquetas e células mononucleares de construir uma camada esbranquiçada na parte inferior da camada de plasma, o qual é conhecido como plasma rico em plaquetas (PRP). A camada superior é conhecido como plasma pobre em plaquetas (PPP). As células mononucleares pode ser removida ou manter-se na amostra. Muitas vezes, as células mononucleares permanecem na amostra de PRP para evitar passos adicionais, que carregam o risco de contaminação.
Nota: O tratamento de ultra-sons de PRP autólogo deve ser levada a cabo sob condições estéreis.
PRP e PPP são separados e recolhidos. Para a solução de cloreto de cálcio PPP, 1,5 mL de 10% é adicionado, enquanto o etanol a PRP 0,5 mL de 5% é adicionado. Ambas as suspensões são suavemente agitada e deixada em repouso durante 5 min à temperatura ambiente. Finalmente, 1 ml de PPP é adicionado à suspensão e PRP é deixado em repouso até se formar um coágulo de fibrina.
tratamento de ultra-sons: À medida que os actos de gel de plaquetas formado como um reservatório para os factores de crescimento libertados, o gel de fibrina deve ser interrompido, a fim de libertar os factores de crescimento disponíveis. Os parâmetros para a lise de ultra-sons e a libertação do factor de crescimento, são as seguintes: Sonicar com um UP200Ht ou UP200St (200W, 26kHz) com sonotrodo S26d2 a amostra no tubo. Para evitar o sobreaquecimento da amostra de sangue, de ultra-sons pode ser efectuada em pulsação ciclos (por exemplo, 10 seg. Na, 30 seg. Desligado). A amostra deve ser colocada em gelo para arrefecimento de modo a que a temperatura é mantida entre dois optimamente – 5 ° C. Depois de sonicao, a amostra é centrifugada a 16.000 g durante 5 min. à temperatura ambiente. O sobrenadante é recolhido e pode ser armazenado a -70 ° C.
A concentração de plaquetas na fracção PRP foi enriquecida 1,7 – 4,5 vezes no método de ultra-sons quando comparada com a contagem de plaquetas médio literatura em sangue total.
PRP foi combinada com a terapia de células estaminais derivadas de tecido adiposo (ultrassonicamente libertado células estaminais autólogas a partir de tecido adiposo, Misturada com PRP, e injectadas de novo no tecido do paciente para reparação).
Equipamento ultra-som
Hielscher Ultrasonics é especialista em tecnologia de ultra-som sofisticado e confiável. Os nossos dispositivos de ultra-sons são usados em todo o mundo para a lise, extracção e preparação de amostras – pela direta e indireta. autoclavável assim como descartável acessórios garantir um livre de contaminação- tratamento de amostras de sangue autólogas. A maioria dos nossos sistemas podem ser usados para a lise de ultra-som de células-tronco e PRP, que faz com que nossos dispositivos ultra-sônicos economicamente ainda mais eficiente.
Esta tabela abaixo lista os dispositivos de ultra-sons, que são adequados para a preparação de plasma rico em plaquetas, e seu volume recomendado de amostra, respectivamente. ultrasonicators maiores e sistemas personalizados estão disponíveis, também.
Dispositivo | Potência [W] | Frequencia. [KHz] | Tipo | Volume [ml] | ||
---|---|---|---|---|---|---|
VialTweeter | 200 | 26 | estar sozinho | 0.5 | – | 1,5 |
UP50H | 50 | 30 | handheld ou standmounted | 00,01 | – | 250 |
UP100H | 100 | 30 | handheld ou standmounted | 00,01 | – | 500 |
UP200Ht | 200 | 26 | handheld ou standmounted | 0.1 | – | 1000 |
UP200St | 200 | 26 | Handheld | 0.1 | – | 1000 |
UP400St | 400 | 24 | Handheld | 5 | – | 2000 |
UP200St-SonoStep | 200 | 26 | estar sozinho | 30 | – | 500 |
GDmini2 | 200 | 26 | célula de fluxo livre de contaminação |
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Literatura / Referências
- Fortunato, T. M .; Beltrami, Ch .; Emanueli, C .; De Bank, P.A :; Pula, G. (2016): gel de lisado de plaquetas e células progenitoras endoteliais estimular a formação da rede microvascular in vitro: implicações para engenharia de tecidos. Sei. Rep. 6, de 2016.
- Hamid, M.S.A .; Yusof, Ashril; Ali, Mohamed Razif Mohamed (2014): Plasma Rico em Plaquetas (PRP) para a lesão muscular aguda: uma revisão sistemática. PLoS One Volume 9, Issue 2, 2014.
Fatos, vale a pena conhecer
Plasma Rico em Plaquetas
Plasma rico em plaquetas contém o factor de crescimento AB (PDGF-AB), derivado de plaquetas do factor de crescimento AA (FCDP-AA), derivado de plaquetas fator de crescimento BB (PDGF-BB), o factor de crescimento endotelial vascular (VEGF), transformando β do factor de crescimento (TGF -β), factor de crescimento epidérmico (EGF), factor de crescimento semelhante à insulina (IGF), factor de crescimento de células epiteliais ECGF e factor de crescimento fibroblástico (FGF), que são estimulantes importantes para o crescimento celular e a renovação.
Autólogo soro condicionado (ACS)
Plasma condicionado autólogo (ACP) é um plasma rico em plaquetas que é extraído do sangue autólogo que é usado para apoiar a regeneração em uma variedade de condições ortopédicas e procedimentos cirúrgicos. O soro condicionado é preparado separando o plasma dos outros componentes sanguíneos (como eritrócitos) e concentre-o. ACP é um plasma rico em plaquetas (PRP). O PRP é um termo geral para um tipo de plasma que contém uma concentração significativamente maior de trombócitos quando comparado com o sangue total. É extraído do sangue inteiro. Os principais componentes do ACP incluem trombócitos (plaquetas), e vários fatores de crescimento que desempenham um papel importante no processo de cicatrização. Ao contrário de outras formulações plasmáticas ricas em plaquetas, o ACP distingue-se por uma baixa concentração de glóbulos brancos, tais como granulócitos de neutrófilos, que podem ser prejudiciais para o processo de cicatrização quando presentes em concentrações elevadas.
Rico em Plaquetas injeções de plasma
O plasma rico em plaquetas é usada como injecção em medicina regenerativa, bem como em procedimentos cosméticos. A aplicação de PRP promete aceleração significativa da cura muscular e recuperação muscular. Além disso, ele é usado com sucesso para tratar a inflamação, artrite, dor, feridas, curativos de feridas abertas lento, e queimaduras na pele graves. O PRP contém um elevado nível de factores de crescimento, que estimulam e protegem as células de cura AO que o tecido danificado está reparados.
Para treaments cosméticos, PRP tem sido demonstrado eficaz para estimular o crescimento do cabelo, a renovação da pele (também conhecido como tratamento vampiro).
Factores de crescimento derivados de plaquetas (PDGF)
O factor de crescimento derivado de plaquetas termo (PDGF) refere-se aos factores de PDGF-A, PDGF-B, o PDGF-C e PDGF-D. É uma rede de sinalização de quatro ligandos (PDGF-A, PDGF-B, o PDGF-C e PDGF-D), e dois receptores, PDGFR-alfa e PDGFR-beta.
Os factores de crescimento ou proteínas, regulam o crescimento e divisão celular. À medida que o mitogénio principais encontrados no soro de mamífero, que é libertada a partir das plaquetas durante a formação de coágulos, que desempenha um papel significativo na formação dos vasos sanguíneos (angiogénese), o crescimento de vasos sanguíneos a partir de tecido de vaso sanguíneo já existente.