Stem Ultrasonic isolamento de células
- cavitação ultra-sónica é um método mecânico altamente eficaz para isolar células estaminais a partir de tecido adiposo humano.
- Ultrassonicamente fracção do estroma vascular isolado (SVF), mostram um elevado potencial de regeneração para aplicações médicas.
- Hielscher Ultrasonics oferece várias opções de sonicação direta e indireta para a colheita de células estaminais.
Isolamento de ultra-sons de células estaminais
A partir do corpo humano tecido adiposo extraída (por meio de lipoaspiração) é tratado por ultra-sons para remover o tecido a partir de células estaminais e outras células de crescimento. Esta porção separada de células é conhecida como células fracção do estroma vascular (SVF).
A técnica de isolamento de ultra-sons de células estaminais do tecido adiposo se baseia unicamente no princípio de funcionamento de cavitação ultra-derivado, o qual é de corte mecânico. As forças de cisalhamento cavitacionais perturbar o tecido adiposo, de modo que as células estaminais são libertados a partir da estrutura do tecido adiposo. O isolamento de células estaminais de ultra-sons é um procedimento livre de enzima, evitando a utilização de colagenase, a tripsina, dispase ou.
Para separar as células estaminais extraídos, as células estaminais mesenquimais, precursores endoteliais e outros tipos de células de crescimento, o tecido adiposo sonicado é centrifugado.
As células estaminais separadas são recolhidas e analisadas para a sua qualidade, incluindo contagem de células, viabilidade, endotoxina, e coloração de Gram antes usado imediatamente para o transplante autólogo são preservadas ou em crio-armazenamento.
Por que evitar enzimas?
Uma vez que a digestão enzimática para o isolamento de células estaminais é acompanhada com custos elevados e os possíveis riscos de segurança, bem como falta de eficácia [Oberbauer et al. 2015], os métodos de isolamento não enzimáticos, tais como ultra-sons são preferidas cavitação. O passo de isolamento ultra-sónico substitui a digestão enzimática, separando as células e agregados de células mecanicamente a partir do tecido adiposo.
GDmini2 no transdutor UP200St-TD (200 watts)
- rápido
- eficiente
- reprodutível
- seguro
- Livre de enzimas
- económicamente viáveis
- Opções estéreis
células estaminais derivadas de tecido adiposo
Stem Rendimento celular
Publicado método de isolamento de SVF usando rendimento cavitação no 1,67-2,24 × 107 células com uma viabilidade de 97.1 – 98.9% [Victor, S., 2014]. Os rendimentos celulares de cerca de 2 – 4 milhões de células/grama de tecido adiposo foram obtidos pela lise ultra-sônica de adipócitos maduros em tecido adiposo dissociado [Bright et al., 2014].
Ultrassonicamente preparado células possuem igualmente elevado potencial de diferenciação osteogénica adipogica e, em comparação com um método de isolamento enzimático padrão [Oberbauer et al. 2015].
Sistemas de ultra-som para isolamento de células-tronco
Para garantir maior segurança e melhor qualidade, equipamentos de ultra confiável, o que permite o controle preciso sobre o tratamento com células-tronco, é um fator chave para o sucesso do tratamento dos pacientes. Hielscher Ultrasonics oferece várias opções para um processo de separação por ultra-sons autólogo cavitação para isolar e haste colheita e culas precursoras endoteliais.
sonicação direta
Para o processo de isolamento de células estaminais através de sonicação directa, a corneta ultra-sónica (sonotrodo, ponta de ultra-sons / sonda) é imersa dentro do tecido adiposo gordo. Através do sonotrode, as ondas de ultra-sons são acoplados directamente na gordura autóloga de modo que a cavitação ultra liberta as células estaminais e as células do estroma de tecido residual. Os processadores de ultra-sons Hielscher UP200Ht e UP200St com sonotrodo S26d14 são sistemas comummente utilizados para o tratamento de células estaminais autóloga. O isolamento SVF por sonicação directa é principalmente adequado para utilização em instalações de salas limpas.
sonicao indirecta
Uma vez que as células estaminais são usados para aplicações de autólogos, esterilidade do processo é muito importante. Portanto, Hielscher desenvolveu várias opções de sonicação indireta, como GDmini2, VialTweeter e outros sistemas personalizados. Por sonicao indirecta, as ondas de ultra-sons são acoplados através do recipiente de parede para o tecido adiposo. A fracção do estroma vascular (SVF) é dissociada do tecido adiposo por cavitação ultra-sónica como mesmos que durante a sonicação directa.
O processo de sonicao indirecta oferece a vantagem de processar as células em um recipiente fechado sob condições livres de contaminação uma vez que o risco de contaminação cruzada através da inserção da trompa ultra-som (sonotrode) é eliminado. O isolamento de células é realizada num sistema fechado, garantindo condições de processo estéreis.
dispositivos ultra-sônicos digitais da Hielscher pode ser controlada com precisão através de tela sensível ao toque ou controle de navegador. procedimentos de sonicação pode ser pré-configurado através do menu intuitivo. Os dispositivos ultra-sônicos são equipados com a gravação de um conjunto de dados automáticos (todos os dados proces sonicação são armazenados em um sistema integrado SD-Card). A entrada de energia de ultra-sons pode ser ajustado exactamente para o protocolo de isolamento de células.
Literatura / Referências
- Oliveira, a.; Fernandes, a.; De, de Christoph; Garcia, Cristiano; De; Wolbank, Susanne (2015): sistemas enzimáticos e não-enzimáticos da isolação para pilhas tecido-derivadas do adiposo: estado atual da arte. Regeneração celular (2015) 4:7.
Fatos, vale a pena conhecer
células-tronco
As células-tronco são células indiferenciadas de um organismo multicelular que têm a capacidade de produzir indefinidamente mais células do mesmo tipo. Eles são caracterizados pelo potencial notável para se desenvolver em vários tipos de células diferentes no corpo durante o estado inicial de vida e crescimento. A característica mais distintiva das células-tronco é a capacidade de se renovar pela divisão celular e sua capacidade de se transformar em células específicas de órgãos ou órgãos com funções especiais. As células-tronco pluripotentes têm o potencial de se diferenciar em qualquer uma das três células germinais: endoderma (forro interno do estômago, trato gastrointestinal, pulmões), mesoderma (músculo, osso, sangue, urogenital) ou ectodermo (tecidos epidérmicos e sistema nervoso).
Em alguns órgãos, como a medula intestino e ossos, células-tronco dividir regularmente para reparar e substituir desgastadas ou danificadas tecidos. Em outros órgãos, como o pâncreas eo coração, as células-tronco somente reparte em condições especiais.
Mesenquimais do estroma / células estaminais (MSC), que oferecem um elevado potencial para aplicações terapêuticas múltiplas em medicina regenerativa e aestethic, são encontradas principalmente na medula óssea, mas pode ser isolado a partir de outros tecidos (por exemplo, cartilagem, gordura, células musculares), também. as células estaminais mesenquimais são consideradas como células estaminais adultas prototípicos que são caracterizados pela sua capacidade de auto-renovação.
investigação sobre células estaminais e tratamentos são utilizados para cultivar tecidos e órgãos para fins de transplante (engenharia de tecidos). Outros campos da medicina para a aplicação de células estaminais pode ser encontrado no tratamento de doenças cerebrais (por exemplo, de Parkinson e doença de Alzheimer), terapia de deficiência de células, doença arterial (por exemplo, leucemia), degeneração das articulações e da cartilagem (por exemplo, osteoartrite), bem como tratamentos cosméticos (por exemplo, tratamentos de anti-envelhecimento). Em geral, as células estaminais têm um tamanho de aprox. 15-25 mícron de diâmetro.
as células estaminais mesenquimais (MSC) s culas multipotentes do estroma, que têm a capacidade de se diferenciar em uma variedade de tipos celulares, incluindo osteoblastos (células ósseas), condrócitos (células de cartilagem), miócitos (células musculares) e adipócitos (células de gordura).
Estroma vascular Fracção (SVF)
Estroma vascular Fracção (SVF) é um componente do lipoaspirado que pode ser extraída por meio de lipoaspiração a partir de tecido adiposo no corpo humano. O lipoaspirado consiste em uma mistura heterogénea de células e tem um elevado teor de células estaminais, conhecidas como células derivadas de tecido adiposo estaminais (ASC ou adsc), que mostram semelhanças com as células estaminais da medula óssea, tais como a sua capacidade para se diferenciarem em células multilinhagem.
A população heterogénea de SVF inclui células endoteliais, fibroblastos, eritrócitos, linfócitos, monócitos / macrófagos, e os pericitos, entre outros, bem como uma fracção importante das células estaminais derivadas de tecido adiposo.
As culas do estroma / estaminais derivadas de tecido adiposo (ASC)
As células estaminais / estaminais derivadas de adipose (ASC / ADSC) liberam níveis elevados de fatores de crescimento bioativo, como o fator de crescimento epidérmico (EGF), o fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), o fator básico de crescimento de fibroblastos (bFGF), o fator de crescimento de queratinócitos (KGF) , factor de crescimento derivado de plaquetas (PDGF), fator de crescimento de hepatócitos (HGF), factor de crescimento transformante beta (TGF-β), fator de crescimento de insulina (IGF) e fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF). A ACS não apenas libera fatores de crescimento, mas também segrega citocinas, incluindo o ligando de tinasina quinase 3 (flt-3) relacionado à fms, o fator estimulante da colônia de granulócitos (G-CSF), o fator estimulante das colônias de macrófagos de granulócitos (GM-CSF), os macrófagos - Fator de estimulação de colônias (M-CSF), interleucina (IL), como IL-6, IL-7, IL-8, IL-11 e IL-12, fator inibidor de leucemia (LIF) e fator de necrose tumoral alfa (TNF-α).
Extração de Tipos Stem Cell
Os Microbot Medical Inc adultos autólogos dos seres humanos podem ser extraídos das seguintes fontes:
- medula óssea, o que requer a extracção por colheita, ou seja, a perfuração no osso.
- O tecido adiposo (células de lipidos), o que requer a extracção por lipoaspiração.
- O sangue, o que requer a extracção por meio de aférese, em que o sangue a partir do dador passa através de um “diálise” máquina onde as células estaminais são extraídas enquanto que os outros componentes do sangue são retornados ao dador.