Ultra-sons de lise de E. Coli

  • bactérias E. coli encontram-se as bactérias mais comumente utilizadas em microbiologia e biotecnologia.
  • disruptores de células ultrassónico fornecer resultados fiáveis ​​e reprodutíveis para a lise de E. coli.
  • cavitação e corte intensas forças ainda precisamente controláveis ​​resultar em interrupção completa e rendimentos de extracção elevadas (por exemplo, proteínas, DNA).

Por que a ruptura celular ultra-sônica de E. coli é o método preferido?

Homogeneizadores ultra-sônicos ou ultrasonicadores do tipo sonda oferecem várias vantagens para a lise de E. coli, pois o ultrassom intenso rompe eficientemente as paredes celulares e membranas. Ultrasonicators do tipo sonda são amplamente utilizados para lise de E. coli devido às seguintes razões:

  • Ruptura eficiente das paredes celulares: E. coli possui uma parede celular semirrígida composta por peptidoglicanos, que pode ser difícil de quebrar usando métodos tradicionais de lise. Um ultrasonicator do tipo sonda gera ondas ultrassônicas intensas que criam bolhas de cavitação no líquido ao redor das células. Quando essas bolhas entram em colapso, elas geram jatos líquidos de alta velocidade e ondas de choque que resultam em ruptura mecânica das paredes celulares, liberando efetivamente conteúdo celular, como biomoléculas.
  • Maior penetração: As ondas ultra-sônicas geradas pela sonda/sonotrodo podem penetrar profundamente na amostra, atingindo um número maior de células de E. coli e tratando-as uniformemente. Isso ajuda a garantir que a lise seja mais uniforme em toda a amostra, resultando em maior eficiência de ruptura celular.
  • Tempo de processamento reduzido: A energia fornecida pelo ultrasonicator do tipo sonda é altamente concentrada e localizada, levando à lise celular rápida e eficiente. Em comparação com outros métodos, como batimento de contas ou lise enzimática, a sonicação pode atingir a lise de E. coli em minutos ou até segundos. Enquanto muitas técnicas alternativas, como o congelamento-descongelamento, exigem várias rodadas de tratamento, a lise ultrassônica abre as células em uma única etapa do processo.
  • Controle de temperatura: Ultrasonicators de última geração são equipados com sensores de temperatura e software inteligente, que permite definir uma temperatura máxima de processo. O ultrasonicator pausa automaticamente quando o limite de temperatura é atingido e inicia o processo de sonicação quando um ponto de temperatura definido é atingido. O resfriamento das amostras em um banho de gelo é um método simples para manter a temperatura da amostra baixa e evitar a degradação da amostra induzida pelo calor.
  • Escalabilidade: Ultrasonicators do tipo sonda estão disponíveis em vários tamanhos, de dispositivos portáteis a modelos industriais de grande escala. Isso os torna adequados para processar pequenos volumes em laboratório ou escalar para aplicações maiores de bioprocessamento, por exemplo, produção de vacinas ou biossíntese de moléculas.
  • Versatilidade: Ultrasonicators podem ser usados para várias aplicações além da lise celular, como cisalhamento de DNA, extração de proteínas, homogeneização de tecidos, dispersão de nanopartículas e emulsificação. Portanto, investir em um ultrasonicator do tipo sonda proporciona versatilidade em ambientes de pesquisa ou industriais.
  • Ultrasonicators do tipo sonda como o UP200St são homogeneizadores de tecido confiáveis e trituradores de células, portanto, amplamente utilizados para preparação de amostras em genética, por exemplo, para lise de E.coli

    A extração de proteínas de células de E.coli é eficientemente realizada com o sonda ultra-sônica UP200St

    O ultrasonicator do tipo sonda oferece muitas vantagens para a lise de E. coli. O controle confiável e preciso sobre os parâmetros do processo ultrassônico permite otimizar os parâmetros operacionais, como potência, duração e manuseio da amostra para alcançar os resultados desejados.
     

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    Este tutorial explica que tipo de sonicator é melhor para suas tarefas de preparação de amostras, como lise, interrupção celular, isolamento de proteínas, fragmentação de DNA e RNA em laboratórios, análise e pesquisa. Escolha o tipo de sonicator ideal para sua aplicação, volume de amostra, número de amostra e taxa de transferência. Hielscher Ultrasonics tem o homogeneizador ultra-sônico ideal para você!

    Como encontrar o sonicator perfeito para ruptura celular e extração de proteínas em ciência e análise

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    A fragmentação do DNA ultrassônico é frequentemente usada como etapa de preparação de amostras no Sequenciamento de Próxima Geração (NGS)

    Análise eletroforética do DNA genômico de E. coli EDL933 submetida a ultrassom de 0 – 15 min. L indica a Escada de DNA.
    (estudo e imagem: ©Basselet et al. 2008)

    Ruptura celular usando cavitação ultra-sônica

    Os homogeneizadores do tipo sonda ultra-sônica operam com aproximadamente 20.000 ciclos por segundo (a 20kHz) e causam cavitação em líquidos ou suspensões. Cavitação acústica, áreas microscópicas de pressões semelhantes a vácuo e altas temperaturas que separam as células. Embora as temperaturas possam chegar a vários milhares de graus Celsius, os volumes de cavitação são tão pequenos que não aquecem o processo significativamente. O ultrassom gerou cavitação acústica e forças de cisalhamento perfuraram ou romperam a membrana celular de células bacterianas como a E.coli. Os ultrasonicators Hielscher permitem o controle preciso sobre os parâmetros do processo, como intensidade ultrassônica, amplitude, entrada de energia e temperatura. Assim, o processo de lise ultra-sônica pode ser ajustado de forma ideal para o tipo de célula, cultura de células e objetivo do processo.
     

    Vantagens de ultra-som de lise

    • controlo preciso de lise (intensidade, amplitude, temperatura)
    • resultados confiáveis e reprodutíveis
    • adaptação óptima para amostras específicas
    • controle de temperatura
    • para amostras muito pequenas para muito grandes (pL-se a litros)
    • Tratamento puramente mecânico
    • operação fácil de usar e segura
    • scale-up linear de laboratório para produção
    O dispositivo de ultra-sons VialTweeter permite a preparação de amostras simultânea de até 10 frascos sob as mesmas condições de processo. (Clique para ampliar!)

    VialTweeter para a lise de ultra-sons

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    Homogeneizador ultra-sônico vs outras técnicas de lise

    Enquanto a lise química e enzimática pode ser problemática – uma vez que a lise química pode alterar as estruturas de proteínas e introduzir problemas de purificação e de lise enzimática requer longos tempos de incubação e não é reproduzível – disrupção ultra-sônica é um método sofisticado rompimento celular rápido.
    A lise ultra-sônica é baseada apenas em forças mecânicas. Nenhum produto químico é adicionado, a sonicação quebra a parede celular por forças de cisalhamento. A lise química pode alterar a estrutura da proteína e introduzir problemas de purificação. A ruptura enzimática requer longos tempos de incubação e não é reprodutível. A ruptura celular ultra-sônica de células de bactérias E.coli é rápida, simples, confiável e reprodutível. É por isso que os ultrasonicators Hielscher são usados em laboratórios biológicos e bioquímicos em todo o mundo para preparação de amostras, pré-analistas, diagonásticos in vitro e ensaios múltiplos.

    Recomendações gerais para lise ultra-sônica

    A sonicação é a técnica mais popular para lisar pequenas, médias e grandes quantidades de suspensões de células – de pico-litros até 100L / h (utilizando uma célula de fluxo de ultra-sons). As células são submetidas a lise por cisalhamento líquido e cavitação. DNA também é cisalhado durante a sonicação, por isso, não é necessário adicionar DNase à suspensão celular.
     

    Controle de temperatura durante a lise ultra-sônica de E.coli
    Disruptor celular ultra-sônico UP100H (100W) para interrupção celular e extração de compostos vegetais.Ao pré-arrefecimento da amostra e manter a amostra durante a sonicação em gelo, a amostra a degradação térmica da amostra pode ser facilmente prevenido.
    Idealmente, as amostras devem ser mantidas geladas durante a lise, mas para a maioria das amostras é suficiente se a temperatura não subir acima da temperatura da cultura ou da fonte de tecido. Portanto, recomenda-se, manter a suspensão no gelo e sonicar com vários pulsos ultrassônicos curtos de 5-10 seg e pausas de 10-30 seg. Durante as pausas, o calor pode se dissipar para restabelecer uma baixa temperatura. Para amostras de células maiores, vários reatores de células de fluxo com camisas de resfriamento estão disponíveis.
    Leia aqui dicas detalhadas e recomendações para uma lise ultrassônica bem-sucedida!

    Protocolos para a preparação ultra-sônica de lisados de E. coli

    Os pesquisadores usam homogeneizadores ultra-sônicos Hielscher para a ruptura celular de E.coli. Abaixo você pode encontrar vários protocolos testados e comprovados para lise de E.coli usando homogeneizadores ultrassônicos Hielscher para várias aplicações relacionadas a E. coli.
     

    Este vídeo mostra o homogeneizador ultrassônico Hielscher UP100H, um ultrassonônico amplamente utilizado para preparação de amostras em laboratórios.

    Homogeneizador ultrassônico UP100H

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    Crescimento Celular, Reticulação e Preparação de Extratos Celulares de E. coli utilizando Ultrasonics

    Para SEQA e ARN polimerase ChIP-Chip E. coli MG1655 ou MG1655 ΔseqA foi cultivada a 37 ° C até um OD600 de cerca de 0,15 em 50 ml de LB (+ 0,2% de glicose) antes de adicionar 27 μl de formaldeído (37%) por ml de meio (concentração final de 1%). A reticulação foi realizada a agitação lenta (100 rpm) à temperatura ambiente durante 20 minutos, seguida de extinção com 10 ml de glicina 2,5 M (concentração final 0,5 M). Para experiências de choque térmico, E. coli MG1655 foi cultivada em 65 ml de meio LB a 30 ° C até uma OD600 de cerca de 0,3. Em seguida, 30 ml de cultura foram transferidos para um frasco pré-aquecido a 43°C e o restante mantido a 30°C. A reticulação e a têmpera foram as descritas acima, exceto que as células foram mantidas a 30 ou 43°C por 5 minutos antes de novas agitações lentas à temperatura ambiente. As células foram coletadas por centrifugação e lavadas duas vezes com TBS a frio (pH7,5). Após ressuspensão em 1 ml de tampão de lise (10 mM Tris (pH 8,0), 20% de sacarose, 50 mM de NaCl, 10 mM de EDTA, 10 mg/ml de lisozima) e incubação a 37°C por 30 min seguida de adição de 4 ml de tampão IP, as células foram sonicadas em gelo com quebras de 12 vezes 30 seg e 30 seg usando o processador ultrassônico Hielscher UP400St a 100% de potência. Após centrifugação por 10 min a 9000 g, alíquotas de 800 μl do sobrenadante foram armazenadas a -20°C. (Waldminghaus 2010)
     

    Superprodução e purificação de enzimas com uma sonda ultra-sônica

    Ultrassonicator UP100H é um homogeneizador de laboratório frequentemente usado para a preparação de amostras de placas de cultura celular.Para a superprodução de proteínas marcadas com decahistidina (His10), E. coli BL21(DE3) foi transformada com construções pET19b. Um pré-cultivo noturno foi colhido por centrifugação, e 1% foi usado para inocular uma cultura de expressão. Células portadoras de pET19mgtB foram cultivadas a 22°C até uma densidade óptica de 600 nm (OD600) de 0,7. A cultura foi transferida para 17°C e induzida por 100 μM IPTG. Após 16 h, a cultura foi colhida por centrifugação a 7.500 × g a 4°C. As células foram ressuspensas em solução salina tamponada com fosfato (PBS) 50 mM com NaCl 0,3 M em pH 7,4 e interrompidas por ultrassom com um sonotrodo de microponta S2 no ultrasonicator Hielscher UP200St em um ciclo de 0,5 e uma amplitude de 75%.
    A superprodução de gtfC decahistidine-etiquetado foi induzida a 37 ° C a uma OD600 de 0,6 com 100? M de IPTG. As células foram então incubadas durante 4 horas, colhidas e lisadas conforme indicado anteriormente para MgtB.
    Extratos brutos de células foram centrifugados a 15.000 × g e 4°C para sedimentar os restos celulares. Os extratos clarificados foram carregados em colunas HisTrap FF Crude de 1 ml usando um sistema ÄKTAprime Plus. As enzimas foram purificadas de acordo com o protocolo do fabricante para eluição em gradiente de proteínas marcadas com His. As soluções proteicas eluídas foram dialisadas duas vezes contra 1.000 volumes de PBS 50 mM, pH 7,4, com NaCl 0,3 M a 4°C. A purificação foi analisada por SDS-PAGE a 12%. A concentração de proteína foi determinada pelo método de Bradford utilizando Roti-Quant. (Rabausch et al. 2013)
     

    Extração ultra-sônica de proteína de bactérias E. coli
    A proteína isco de interesse (neste caso, MTV1 de Arabidopsis thaliana) é fundido a um tag de GST e expressos em células BL21 de Escherichia coli (E. coli).

    1. Tomar um pellet de GST-MTV1 e GST (correspondente a 50 ml de cultura bacteriana) e ressuspender cada um em 2,5 mL de tampão de extração gelado.
    2. Use um ultrasonicator UP100H (equipado com microponta-sonotrodo MS3 para pequenos volumes de aproximadamente 2-5mL) para interromper as células bacterianas até que elas sejam lisadas, o que é indicado pela opacidade reduzida e viscosidade aumentada. Isso tem que ser realizado no gelo, e recomenda-se sonicar em intervalos (por exemplo, 10 segundos de sonicação seguido de 10 segundos de pausa no gelo e assim por diante). É preciso tomar cuidado para não soncar com intensidade muito alta. Se for detectada formação de espuma ou a formação de um precipitado branco, a intensidade precisa ser reduzida.
    3. Transfira a solução de bactérias lisadas para tubos de microcentrífuga de 1,5 mL e centrifuga a 4°C, 16.000 x g por 20 min.

     

    Sondas ultra-sônicas usam as forças da cavitação acústica para interromper a célula e extrair moléculas e DNA de E.coli.

    Ultrasonicators do tipo sonda, como o UP400St utilizar o princípio de funcionamento da cavitação acústica para a lise eficiente de E.coli.

    Análise de Expressão e Purificação de Proteínas Recombinantes utilizando Sonicação

    A pelota de E. coli foi sonicada com o ultrasonicator Hielscher UP100H. Para isso, o pellet celular foi ressuspendido em tampão de lise resfriado (50 mM Tris-HCl pH=7,5, 100 mM NaCl, 5 mM DTT, 1 mM PMSF) e resfriado em gelo por 10 min. Em seguida, a suspensão celular foi sonicada com 10 rajadas curtas de 10 s seguidas de intervalo de 30 s para resfriamento. Finalmente, restos celulares foram removidos por ultracentrifugação a 4°C por 15 min a 14000 rpm. Para confirmação da expressão de RPr, o sobrenadante foi executado em gel de poliacrilamida a 12% e analisado por SDS-PAGE e Western blotting. A purificação da RPr foi feita com resina Ni2+-NTA (Invitrogen, EUA) de acordo com o guia do fabricante. Nesta etapa, foi utilizado o método de purificação nativo. A pureza da proteína purificada foi avaliada por eletroforese no gel de poliacrilamida a 12% e posterior coloração com azul de Coomassie. A concentração de proteína purificada foi medida pelo kit de ensaio proteico Micro BCA (PIERCE, EUA). (Azarnezhad et al. 2016)
     

    Este vídeo mostra o cuphorn ultrassônico de 200 watts para dispersão, homogeneização, extração ou desgaseamento de amostras de laboratório.

    Cuphorn ultrassônico (200 Watts)

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    Homogeneizadores ultra-sônicos para E. coli Lysis

    Hielscher Ultrasonics projeta, fabrica e fornece homogeneizadores ultra-sônicos de alto desempenho para a lise confiável e eficiente de bactérias E. coli e outros tipos de células, tecidos e culturas de células.
    O amplo portfólio de sondas ultra-sônicas, bem como sistemas de sonicação indireta, nos permite oferecer o homogeneizador de tecido ultrassônico ideal para sua interrupção celular e aplicação de extração.

    Design, Fabricação e Consultoria – Qualidade Made in Germany

    Os ultrassonicadores hielscher podem ser controlados remotamente através do controle do navegador. Os parâmetros de sonicação podem ser monitorados e ajustados precisamente aos requisitos do processo.Os ultrasonicators Hielscher são bem conhecidos por seus mais altos padrões de qualidade e design. Software inteligente, menu intuitivo, configurações programáveis e protocolo automático de dados são apenas alguns recursos dos ultrassons Hielscher. A robustez e a fácil operação permitem a integração suave de nossos ultrasonicators em instalações de pesquisa e biotecnologia. Mesmo condições adversas e ambientes exigentes são facilmente manuseados pelos ultrassonicators Hielscher.

    A Hielscher Ultrasonics é uma empresa certificada ISO e coloca ênfase especial em ultrasonicators de alto desempenho com tecnologia de ponta e facilidade de uso. Naturalmente, os ultrasonicators Hielscher são compatíveis com CE e atendem aos requisitos da UL, CSA e RoHs.

    A tabela abaixo dá-lhe uma indicação da capacidade de processamento aproximado de nossos ultrasonicators:

    Volume batch Quociente de vazão Dispositivos Recomendados
    placas multi-bem /microtiter n / D. UIP400MTP
    CupHorn para frascos para injetáveis ou copo n / D. cuphorn ultra-sônica
    Reator ultra-sônico de micro-fluxo n / D. GDmini2
    até 10 frascos para injetáveis com 0,5 a 1,5ml n / D. VialTweeter
    00,5 a 1,5 mL n / D. VialTweeter
    1 a 500mL 10 a 200 mL / min UP100H
    10 a 2000 mL 20 a 400 mL / min UP200Ht, UP400St
    0.1 a 20L 00,2 a 4 L / min UIP2000hdT
    10 a 100L 2 de 10L / min UIP4000
    n / D. 10 a 100L / min UIP16000
    n / D. maior aglomerado de UIP16000

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    O vídeo mostra o sistema de preparação de amostras ultrassônicas UIP400MTP, que permite a preparação confiável da amostra de qualquer placa multi-bem padrão usando ultrassom de alta intensidade. Aplicações típicas do UIP400MTP incluem lise celular, DNA, RNA e cromatina, bem como extração de proteínas.

    Ultrassonicator UIP400MTP para sônica de placa multi-bem

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    Protocolos adicionais para E. coli ultra-sônica Lysis

    Proteínas modificadas por alicina em E. coli usando um VialTweeter ultra-sônico

    VialTweeter no processador ultrassônico UP200STDeterminação do Conteúdo por sulfidrilo (DTNB) Ensaio de 5,5'-Ditiobis (ácido 2-nitrobenzóico)
    Uma cultura noturna de E. coli MG1655 foi utilizada para inocular meio mínimo de MOPS (1:100). A cultura foi cultivada aerobicamente até atingir um A600 de 0,4. A cultura foi dividida em três culturas de 15 ml para tratamento do estresse. Uma cultura não tratada serviu como controle negativo. Alicina 0,79 mM (128 μg ml-1) ou diamida 1 mM foi adicionada a uma das duas culturas restantes cada. As culturas foram incubadas por 15 min.5 ml de cada cultura foram colhidas por centrifugação (8.525 × g, 4°C, 10 min). As células foram lavadas duas vezes com 1 ml de PBS (NaCl 137 mM, KCl 2,7 mM, Na2HPO4 10 mM, KH2PO4 2 mM, pH 7,4, armazenadas anaerobicamente antes do uso) e centrifugadas (13.000 × g, 4°C, 10 min). As células foram ressuspensas em tampão de lise (PBS com 6 mM guanidinium HCl, pH 7,4) antes da ruptura a 4°C por ultrassom (VialTweeter ultrasonicator, Hielscher GmbH, Alemanha) (3 × 1 min). Os restos celulares foram peletizados por centrifugação (13.000 × g, 4 °C, 15 min). O sobrenadante foi transferido para uma cubeta QS-macro de 3,5 ml (10 mm) com uma barra de agitação magnética e misturado com 1 ml de tampão de lise. A extinção das amostras foi monitorada a 412 nm com espectrofotômetro Jasco V-650 equipado com o porta-células PSC-718 com temperatura controlada à temperatura ambiente. Foram adicionados 100μl de uma solução de ditiobis (ácido 2-nitrobenzóico) 3 mM. A extinção foi monitorada até atingir a saturação. O cálculo da concentração de tióis foi realizado utilizando-se o coeficiente de extinção ε412 = 13700 M-1 de Cm-1 de por tio-2-nitrobenzóico (TNB). tiol concentrações celulares foram calculados com base num volume de células de E. coli de 6,7 × 10-15 litro e uma densidade celular de A600 = 0,5 (equivalente a 1 × 108 células ml-1 de cultura). (Muller et al. 2016)
     

    Determinação in vivo de glutationa usando um triturador de células ultra-sônico

    E.coli MG1655 foi cultivada em meio mínimo MOPS em um volume total de 200ml até atingir um A600 de 0,5. A cultura foi dividida em culturas de 50 ml para tratamento do estresse. Após 15 min de incubação com alicina 0,79 mM, diamida 1 mM ou dimetilsulfóxido (controle), as células foram colhidas a 4.000g a 4°C por 10 min. As células foram lavadas duas vezes com tampão KPE antes da ressuspensão dos pellets em 700μl de tampão KPE. Para a desproteinação, 300l de ácido sulfosalicílico a 10% (p/v) foram adicionados antes da ruptura das células por ultrassom (3 x 1 min; VialTweeter ultrasonicator). Os sobrenadantes foram recolhidos após centrifugação (30 min, 13,000g, 4 ° C). As concentrações de ácido sulf ossalicílico foram diminuiu para 1% através da adição de 3 volumes de tampão de KPE. Medições de glutationa e GSSG totais foram realizadas como descrito acima. As concentrações de glutationa celular foram calculados com base num volume de E. células de 6,7 coli×10-15 litro e uma densidade celular de A600 0,5 (equivalente a 1×108 células ml-1 de cultura). as concentrações de GSH foram calculados por subtracção do 2 [GSSG] a partir de glutationa total. (Muller et al. 2016)

    Expressão de mAspAT humano em E. coli utilizando homogeneizador ultra-sônico

    Ultra-sons disruptor celular UP400St (400W) para a extracção de matéria intracelular (por exemplo, proteínas, organelos, ADN, ARN, etc.)A única colónia da estirpe BL21 de E. coli (DE3) que alberga o vector de expressão em 30 mL de meio de Luria-Bertani (LB) contendo 100? G / mL de ampicilina, e em seguida cultivou-se a 37 ° C até a densidade óptica (OD600) Atingiu 0,6. As células foram colhidas por centrifugação a 4000 × g durante 10 minutos, e ressuspensas em meio LB fresco contendo 3L 100 / mL de ampicilina.
    Posteriormente, a expressão proteica foi induzida com 1 mM de isopropil β-ᴅ-1-thiogalactopyranoside (IPTG) por 20 h a 16ºC. As células foram colhidas por centrifugação a 8.000 × g por 15 min e lavadas com tampão A (NaH2PO4 20 mM, NaCl 0,5 M, pH 7,4). Aproximadamente 45g (peso úmido) de células foram obtidas a partir de 3 L de cultura. Após a centrifugação, os pellets celulares foram ressuspensos em 40 mL (para 1 L de cultura) de tampão de extração gelado A e lisados por ultrassonografia em temperatura gelada usando o triturador de células ultrassônicas Hielscher UP400St. A lise celular foi centrifugada a 12.000 rpm por 15 min para separar as frações solúvel (sobrenadante) e precipitada (pellet). (Jiang et al. 2015)
     



    Fatos, vale a pena conhecer

    E. coli

    Escherichia coli (E. coli) é uma bactéria coliforme gram-negativa, facultativamente anaeróbia, em forma de bastoneira, do gênero Escherichia, comumente encontrada no intestino inferior de organismos de sangue quente (endotérmicos). Há um grande número de cepas de E. coli (ou subtipos) com características diversas. A maioria das cepas de E. coli são inofensivas para os seres humanos, por exemplo, cepas B e K-12 que são usadas comumente para aplicações de pesquisa em laboratórios. No entanto, algumas cepas são prejudiciais e podem causar doenças graves.
    E. coli tem um papel importante na engenharia biológica moderna e microbiologia industrial desde a bactéria é fácil de manipular. aplicações de laboratório comuns que envolvem muitas vezes a utilização de E. coli, v.g. para criar o ácido desoxirribonucleico (ADN) recombinante ou para actuar como um organismo modelo.
    E. coli é um hospedeiro muito versátil para a produção de proteínas heterólogas, e sistemas de expressão de proteínas múltiplas estão disponíveis para a produção de proteínas recombinantes em E. coli. Utilizando os plasmídeos que permitem a expressão de nível elevado de proteína, os genes podem ser introduzidos nas bactérias, o que permite produzir tais proteínas em quantidades elevadas em processos de fermentação industrial.
    E.coli são usados como fábricas de células para produzir insulina. Outras aplicações incluem o uso de células de E. coli modificadas para desenvolver e produzir vacinas e enzimas imobilizadas, para produzir biocombustíveis, bem como para biorremediação.
    A estirpe K-12 é uma forma mutante de E. coli que sobre-expressa a enzima fosfatase alcalina (ALP). Esta mutação ocorre devido a um defeito no gene que codifica para constantemente a enzima. Se um gene que produz um produto sem qualquer inibição isto é conhecido como actividade constitutiva. Esta forma mutante específico é utilizado para o isolamento e purificação da enzima ALP.
    As bactérias E. coli também são amplamente utilizadas como fábricas de células. Micróbios projetados (por exemplo, bactérias) e células vegetais podem ser usados como as chamadas fábricas de células. Essas células geneticamente modificadas produzem moléculas, produtos químicos, polímeros, proteínas e outras substâncias, que são usadas, por exemplo, na indústria farmacêutica, alimentar e química. Para liberar as moléculas produzidas no interior dessas células bioengenharia, a lise ultrassônica é um método comum para interromper as paredes celulares e transferir as substâncias-alvo para o líquido circundante. Leia mais sobre a lise das células bioengenharia!

    Ultra-sons ADN Shearing

    Forças de cisalhamento ultra-sônicas são um método comumente usado para liberar moléculas, organelas e proteínas do interior da célula, bem como para quebrar fitas de DNA em pedaços. A cavitação acústica rompe as paredes celulares e membranas para extrair DNA das células e gerar fragmentos de cerca de 600 – 800 pb de comprimento, o que é ideal para análise.
    Clique aqui para saber mais sobre homogeneizadores ultra-sons para a fragmentação do DNA!

    Literatura / Referências


    Ultrassônicos de alto desempenho! A linha de produtos Hielscher abrange todo o espectro desde o ultrassônico de laboratório compacto sobre unidades de bancada até sistemas ultrassônicos industriais completos.

    Hielscher Ultrasonics fabrica homogeneizadores ultrassônicos de alto desempenho de Laboratório para tamanho industrial.


    Ficaremos felizes em discutir seu processo.

    Vamos entrar em contato.