Hielscher Ultrasonics
Z przyjemnością omówimy Twój proces.
Zadzwoń do nas: +49 3328 437-420
Napisz do nas: info@hielscher.com

Protokół inaktywacji koronawirusa SARS-CoV-2 za pomocą sonikacji

Hielscher VialTweeter to unikalne ultradźwiękowe urządzenie do przygotowywania wielu próbek, które służy do inaktywacji koronawirusa SARS-COV-2. VialTweeter umożliwia jednoczesne przygotowanie do 10 fiolek z próbkami, dzięki czemu jest idealnym urządzeniem do masowego przetwarzania próbek.

Inaktywacja koronawirusa SARS-CoV-2 za pomocą urządzenia VialTweeter

Po usunięciu utrwalacza, monowarstwy przemyto trzykrotnie solą fizjologiczną buforowaną fosforanami (PBS) przed zeskrobaniem komórek do 1 ml MEM/5% FBS i poddano sonikacji (3 × 10 sekund włączenia, 10 sekund wyłączenia przy 100% mocy i amplitudzie) przy użyciu procesora ultradźwiękowego Hielscher UP200St z głośnikiem wysokotonowym VialTweeter mocowanie. Supernatanty oczyszczono przez odwirowanie przy 3000 × g przez 10 minut. Poniżej znajduje się pełny protokół inaktywacji koronawirusa SARS-CoV-2 autorstwa Welch et al. (2020):

Komórki i wirusy

Komórki Vero E6 (Vero C1008; ATCC CRL-1586) hodowano w zmodyfikowanej minimalnej pożywce niezbędnej Eagle'a (MEM) uzupełnionej 10% (v/v) płodowej surowicy cielęcej (FCS). Zastosowanym wirusem był szczep SARS-CoV-2 hCOV-19/England/2/2020, wyizolowany przez PHE z pierwszego klastra pacjentów w Wielkiej Brytanii w dniu 29/01/2020. Wirus ten uzyskano w pasażu 1 i wykorzystano do badań inaktywacji w pasażu 2 lub 3.
Odczynniki i chemikalia stosowane do inaktywacji SARS-CoV-2, a także usuwanie cytotoksyczności odczynników można znaleźć w raporcie naukowym Welch et al. (2020).

Ultradźwiękowe urządzenie do przygotowywania próbek VialTweeter jest używane do inaktywacji koronawirusa SARS-CoV-2.

Inaktywacja wirusa przez detergenty – Protokół inaktywacji koronawirusa SARS-CoV-2 wg Welch et al. 2020

Inaktywacja SARS-CoV-2

W przypadku produktów komercyjnych, preparaty wirusa (płyn do hodowli tkankowych, miana w zakresie od 1 × 106 do 1 × 108 PFU/ml) poddano działaniu odczynników w stężeniach i czasach kontaktu zalecanych w instrukcjach użytkowania producenta, o ile były dostępne, lub w stężeniach i czasach specjalnie wymaganych przez laboratoria badawcze. W przypadku, gdy producent podał zakres stężeń, badano najniższy stosunek produktu do próbki (tj. najniższe zalecane stężenie badanego produktu). Odczynniki w probówkach do transportu próbek były testowane przy użyciu stosunku jednej objętości płynu do hodowli tkankowej do dziesięciu objętości odczynnika, chyba że stosunek objętości płynu do próbki do odczynnika został określony przez producenta. Detergenty, utrwalacze i rozpuszczalniki testowano we wskazanych stężeniach przez wskazany czas. Wszystkie etapy inaktywacji przeprowadzono w temperaturze pokojowej (18-25°C). W celu przetestowania alternatywnych typów próbek, wirus został wprowadzony do wskazanej matrycy próbki w stosunku 1:9, a następnie poddany działaniu odczynników testowych, jak powyżej. Wszystkie eksperymenty obejmowały potrójne kontrolne próbki pozorowane z równoważną objętością PBS zamiast odczynnika testowego. Natychmiast po upływie wymaganego czasu kontaktu, 1 ml poddanej działaniu odczynnika próbki przetwarzano przy użyciu odpowiednio dobranej matrycy filtracyjnej. Usuwanie odczynnika do testów inaktywacji przeprowadzono w większym formacie kolumny wirówkowej przy użyciu kolumn wirówkowych Pierce 4mL Detergent Removal Spin Columns (Thermo Fisher) lub poprzez wypełnienie pustych kolumn wirówkowych Pierce o pojemności 10mL (Thermo Fisher) kulkami SM2 Bio-Beads, Sephacryl S-400HR lub Sephadex LH-20, aby uzyskać 4mL upakowanych kulek/żywicy. W celu oczyszczenia za pomocą filtrów Amicon, próbki 2 × 500 μl oczyszczono za pomocą dwóch filtrów odśrodkowych metodą opisaną wcześniej, a następnie połączono razem. W przypadku formaldehydu i formaldehydu z usuwaniem aldehydu glutarowego użyto jednego filtra o objętości próbki 1 × 500 μl, ponownie zawieszono po przetworzeniu w 500 μl PBS i dodano do 400 μl MEM/5% FBS. Do inaktywacji zainfekowanych VialTweeter w procesorze ultradźwiękowym UP200STmonowarstwy, 12,5 cm2 kolby z komórkami Vero E6 (2,5 × 106 komórek/kolbę w 2,5 ml MEM/5% FBS) zakażono przy MOI 0,001 i inkubowano w temperaturze 37°C/5% CO2 przez 24 godziny. Supernatant usunięto, a komórki utrwalono przy użyciu 5 ml formaldehydu lub formaldehydu i aldehydu glutarowego w temperaturze pokojowej przez 15 lub 60 minut. Utrwalacz usunięto, a monowarstwy przemyto trzykrotnie PBS przed zeskrobaniem komórek do 1 ml MEM/5% FBS i poddano działaniu ultradźwięków (3 × 10 sekund włączenia, 10 sekund wyłączenia przy 100% mocy i amplitudzie) przy użyciu UP200St z przystawką VialTweeter (Hielscher Ultrasound Technology). Supernatanty oczyszczono przez odwirowanie przy 3000 × g przez 10 minut.

VialTweeter do intensywnej sonikacji zamkniętych fiolek

VialTweeter do intensywnej sonikacji zamkniętych fiolek

Zapytanie o informacje







Różne odczynniki zostały przetestowane pod kątem inaktywacji koronawirusa SARS-CoV-2 przy użyciu ultradźwiękowego urządzenia do przygotowywania próbek VialTweeter.

Szczegóły odczynnika stosowanego do inaktywacji koronawirusa SARS-CoV-2 za pomocą ultradźwiękowego VialTweeter zgodnie z protokołem Welch et al. 2020

Pełny protokół, w tym użycie Hielscher VialTweeter, można znaleźć tutaj:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

Wielopróbkowy ultrasonograf VialTweeter umożliwia jednoczesne przygotowanie próbek do 10 fiolek w tych samych warunkach procesowych. VialTweeter jest uznanym urządzeniem ultradźwiękowym stosowanym do inaktywacji wirusa koronowego SARS-CoV-2 (kliknij, aby powiększyć!).

VialTweeter do ultradźwiękowej inaktywacji wirusów

Zalety głośnika VialTweeter w skrócie

  • Sonikacja do 10 fiolek jednocześnie
  • Brak zanieczyszczeń krzyżowych
  • Brak utraty próbki
  • automatyczny zapis danych
  • Łatwa i bezpieczna obsługa
VialTweeter jest również używany do

  • liza komórek
  • Zakłócenie cząsteczek wirusa
  • Ekstrakcja kwasów nukleinowych: Izolacja DNA/RNA
  • Fragmentacja DNA/RNA
  • solubilizacja lizatu
  • Zaawansowane dysmembratory ultradźwiękowe i zakłócacze komórek

    Wielopróbkowy ultrasonograf VialTweeter jest tylko jednym z wielu rozwiązań ultradźwiękowych do przygotowywania próbek w laboratoriach biologicznych, biochemicznych i klinicznych. Hielscher Ultrasonics oferuje idealny ultradźwiękowy demembrator do danego zastosowania, np. do lizy komórek, ekstrakcji komórek, homogenizacji tkanek, solubilizacji lizatu, rozpuszczania, odgazowywania próbek itp.
    Daj nam znać, ile próbek musisz przetworzyć w ciągu godziny i dnia, jeśli wolisz bezpośrednią lub pośrednią sonikację i jaki jest cel ultradźwiękowej obróbki próbki. Polecimy Ci najbardziej odpowiednią jednostkę ultradźwiękową do codziennej rutyny pracy!
    Cyfrowe procesory ultradźwiękowe firmy Hielscher Ultrasonics są wyposażone w inteligentne oprogramowanie, automatyczne rejestrowanie danych, łatwe opcje wstępnego ustawiania kontroli temperatury, czasu trwania sonikacji, trybu cyklu / impulsu, a także oświetlenie próbki i zdalne sterowanie przez przeglądarkę. Staramy się, aby nasze urządzenia ultradźwiękowe były tak inteligentne, jak to tylko możliwe, aby badania i rutyna pracy stały się tak wygodne i skuteczne, jak to tylko możliwe.
    Kliknij tutaj, aby znaleźć więcej zastosowań, w tym protokoły ultradźwiękowego przygotowania próbek za pomocą VialTweeter!

    Skontaktuj się z nami! / Zapytaj nas!

    Poproś o więcej informacji

    Skorzystaj z poniższego formularza, aby uzyskać dodatkowe informacje na temat procesorów ultradźwiękowych, aplikacji i ceny. Z przyjemnością omówimy z Tobą Twój proces i zaoferujemy Ci system ultradźwiękowy spełniający Twoje wymagania!









    Zwróć uwagę na nasze Polityka prywatności.




    Ultradźwiękowe homogenizatory o wysokim ścinaniu są stosowane w procesach laboratoryjnych, laboratoryjnych, pilotażowych i przemysłowych.

    Hielscher Ultrasonics produkuje wysokowydajne homogenizatory ultradźwiękowe do mieszania, dyspersji, emulgowania i ekstrakcji na skalę laboratoryjną, pilotażową i przemysłową.

    Literatura / Referencje



    Fakty, które warto znać

    Czym są komórki Vero?

    Vero E6, znana również jako Vero C1008 (ATCC nr CRL-1586) jest klonowaną linią komórkową Vero 76 i jest wykorzystywana w badaniach nad koronawirusami SARS-CoV i SARS-CoV-2. Komórki Vero to linia komórek wykorzystywanych w hodowlach komórkowych. Linia "Vero’ została wyizolowana z komórek nabłonka nerek pobranych od afrykańskiej małpy zielonej (Chlorocebus sp.).
    Komórki Vero E6 wykazują pewną inhibicję kontaktową, więc są odpowiednie do rozprzestrzeniania wirusów, które replikują się powoli. Linie komórkowe Vero E6 są powszechnie stosowane do badania cytopatologii koronawirusów SARS-CoV i SARS-CoV-2, ponieważ komórki Vero (komórki nerki afrykańskiej małpy zielonej) wykazują obfitą ekspresję receptorów enzymu konwertującego angiotensynę 2 (ACE2). Receptory ACE2 są głównym miejscem dokowania koronawirusa SARS-CoV-2.
    Na przykład Ogando i wsp. (2020) stwierdzili, że SARS-CoV-2 – w porównaniu do SARS-CoV – generowały wyższe poziomy wewnątrzkomórkowego wirusowego RNA, ale uderzająco około 50-krotnie mniej zakaźnego wirusowego potomstwa zostało odzyskane z pożywki hodowlanej. Ponadto ustalili, że wrażliwość obu wirusów na trzy uznane inhibitory replikacji koronawirusa (Remdesivir, Alisporivir i chlorochina) jest bardzo podobna, ale infekcja SARS-CoV-2 była znacznie bardziej wrażliwa na wstępne leczenie komórek pegylowanym interferonem alfa. Ważną różnicą między tymi dwoma wirusami jest fakt, że – po pasażowaniu w komórkach Vero E6 – SARS-CoV-2 najwyraźniej znajduje się pod silną presją selekcyjną, aby nabyć mutacje adaptacyjne w swoim genie białka kolca. Mutacje te zmieniają lub usuwają domniemane "miejsce rozszczepienia podobne do furyny" w regionie łączącym domeny S1 i S2 i powodują bardzo wyraźną zmianę fenotypową w testach płytki nazębnej.

    Z przyjemnością omówimy Twój proces.

    Let's get in contact.