Bufory lizujące można sprawnie i szybko przygotować przy użyciu ultradźwiękowych homogenizatorów tkankowych. Ponieważ ultradźwięki są wymarzonym narzędziem do mieszania, rozpuszczania i dyspergowania, pozwalają na niezawodne i przyjazne dla użytkownika przygotowanie buforów lizujących.

Ultradźwiękowe przygotowanie buforów do lizy

Ultradźwiękowe homogenizatory tkankowe są powszechnym narzędziem do rozbijania, lizy i ekstrakcji komórek, dlatego są dostępne w większości laboratoriów. Drugorzędnym zastosowaniem ultradźwięków sondowych jest przygotowywanie buforów do lizy.

Bufor lizujący jest roztworem używanym do otwierania (lizowania) komórek i uwalniania ich zawartości do dalszych analiz. Specyficzny skład buforu lizującego może się różnić w zależności od rodzaju lizowanych komórek i dalszego zastosowania. Jednakże typowy bufor lizujący zawiera składniki takie jak detergenty, sole i inhibitory proteazy. Sole buforowe (np. Tris-HCl) i sole jonowe (np. NaCl) są powszechnie stosowane do regulacji pH i osmolarności lizatu.
Aby wykonać bufor lizujący, miesza się składniki w odpowiednich stężeniach i pH. Mieszaninę zwykle miesza się lub wstrząsa do momentu rozpuszczenia składników i uzyskania jednorodnego roztworu.
Homogenizacja ultradźwiękowa jest metodą, która może być stosowana do pomocy w tworzeniu dobrego buforu lizującego poprzez poprawę mieszania i rozpuszczania składników. W tej metodzie, fale ultradźwiękowe – zwykle w zakresie od 20 do 30 kHz – są stosowane do mieszaniny, co powoduje powstanie pęcherzyków kawitacyjnych, które zapadają się i generują intensywną energię lokalną, prowadząc do mechanicznego ścinania i mieszania składników.
Proces homogenizacji ultradźwiękowej może pomóc w rozbiciu wszelkich grudek lub agregatów składników i zapewnić, że roztwór jest jednolicie wymieszany. W konsekwencji, taki ulepszony bufor do lizy może prowadzić do bardziej efektywnego rozbicia komórek i większej wydajności ekstrahowanego materiału. Dodatkowo, homogenizacja ultradźwiękowa może skrócić czas potrzebny do wykonania buforu lizującego w porównaniu z tradycyjnymi metodami mieszania lub wytrząsania.
Ogólnie rzecz biorąc, homogenizacja ultradźwiękowa jest potężnym narzędziem do poprawy jakości i wydajności przygotowania buforu lizującego.

Protokół przygotowania buforu do lizy ultradźwiękowej

Jest to ogólny protokół wykonania buforu do lizy przy użyciu ultradźwiękowca z sondą:
 
Materiały:

• Wybrane detergenty (np. Triton X-100, SDS, CHAPS)
• wybrana sól (np. NaCl, KCl)
• Inhibitory proteaz (np. PMSF, aprotynina, leupeptyna)
• ultradźwięk
• mieszadło
• Woda dejonizowana
• pH-metr lub paski pH

 
 
Instrukcje krok po kroku:

1. Określić skład buforu lizującego na podstawie komórek lub tkanek, które będą lizowane, oraz dalszych zastosowań, do których będzie wykorzystywany lizat. Przygotować roztwory podstawowe detergentów, soli i inhibitorów proteaz o pożądanych stężeniach.
2. Do zlewki lub kolby dodać roztwory podstawowe detergentów, soli i inhibitorów proteaz.
3. Dodaj wodę dejonizowaną, aby doprowadzić objętość do pożądanej ilości buforu.
4. Wymieszać składniki za pomocą mieszadła w celu uzyskania wstępnie wymieszanego roztworu.
5. Zmierzyć pH buforu za pomocą pehametru lub pasków pH i w razie potrzeby dostosować pH za pomocą niewielkich ilości kwasu lub zasady.
6. Użyć ultradźwiękowca z sondą do homogenizacji wstępnie wymieszanego roztworu, tak aby uzyskać wysoce jednorodny roztwór. Dlatego należy poddawać roztwór sonikacji przez kilka sekund, aż roztwór zostanie dokładnie wymieszany, a wszelkie grudki lub agregaty zostaną rozbite. Czas trwania i moc sonikacji można zoptymalizować na podstawie konkretnego buforu do lizy i używanego ultradźwiękowca.
7. Po ultradźwiękach ponownie zmierzyć pH buforu i dostosować w razie potrzeby.
8. Przefiltrować bufor przez filtr 0,2 mikrona w celu usunięcia wszelkich zanieczyszczeń lub agregatów, które mogły powstać podczas sonikacji.
9. Bufor lizujący jest teraz gotowy do użycia.

 
Uwaga: Dokładny skład i pH buforu lizującego mogą się różnić w zależności od lizowanych komórek lub tkanek oraz dalszych zastosowań. Powyższy protokół jest ogólną wskazówką i może wymagać optymalizacji dla konkretnych zastosowań.
 
Homogenizatory ultradźwiękowe są powszechnie stosowane do rozbijania komórek i ekstrakcji cząsteczek wewnątrzkomórkowych. Dlatego w wielu aplikacjach do lizy wykorzystuje się sonikację typu sonda nie tylko do przygotowania buforu lizującego, ale także do mechanicznego rozbijania i ekstrakcji komórek.
To czyni ultradźwiękowe homogenizatory tkankowe wszechstronnym narzędziem dla laboratoriów i wyjaśnia szerokie zastosowanie ultradźwięków w mikrobiologii, biotechnologii i naukach przyrodniczych.

homogenizatorów ultradźwiękowych do laboratorium

Hielscher Ultrasonics produkuje i dostarcza homogenizatory ultradźwiękowe i sondy (sonotrody) o różnych mocach i objętościach próbek. Dzięki temu możemy zaoferować Państwu najbardziej odpowiednie urządzenie ultradźwiękowe do przygotowania próbki. Stawiamy na najwyższą jakość, wyjątkowy komfort obsługi i niezawodne wyniki sonikacji. Wszystkie cyfrowe ultradźwięki posiadają inteligentne oprogramowanie, które umożliwia programowanie i wstępne ustawianie protokołów sonikacji, zdalne sterowanie przez przeglądarkę, kontrolę temperatury, oświetlenie próbki, jak również automatyczną rejestrację danych na wbudowanej karcie SD.

Projektowanie, produkcja i doradztwo – Jakość Made in Germany

Ultradźwięki firmy Hielscher są znane z najwyższej jakości i standardów konstrukcyjnych. Solidność i łatwa obsługa pozwalają na płynną integrację naszych ultradźwięków z obiektami przemysłowymi. Surowe warunki i wymagające środowiska są łatwo obsługiwane przez ultradźwięki Hielscher.

Hielscher Ultrasonics jest firmą posiadającą certyfikat ISO i kładzie szczególny nacisk na ultradźwięki o wysokiej wydajności, charakteryzujące się najnowocześniejszą technologią i łatwością obsługi. Oczywiście ultradźwięki Hielscher są zgodne z CE i spełniają wymagania UL, CSA i RoHs.

The table below gives you an overview of our various lab ultrasonicators: