Roztwory buforowe przygotowane za pomocą ultradźwięków

Bufory lizujące można skutecznie i szybko przygotować za pomocą ultradźwiękowych homogenizatorów tkanek. Ponieważ ultradźwięki są wymarzonym narzędziem do mieszania, rozpuszczania i dyspergowania, pozwalają one na niezawodne i przyjazne dla użytkownika przygotowanie buforów lizujących.

Ultradźwiękowe przygotowanie buforów do lizy

Ultradźwiękowe homogenizatory tkanek są powszechnym narzędziem do rozbijania, lizy i ekstrakcji komórek, dlatego są dostępne w większości laboratoriów. Wtórnym zastosowaniem ultrasonografów typu sondowego jest przygotowanie buforów lizujących.

Bufor lizujący to roztwór używany do otwierania (lizy) komórek i uwalniania ich zawartości do dalszej analizy. Specyficzny skład buforu lizującego może się różnić w zależności od rodzaju lizowanych komórek i dalszego zastosowania. Typowy bufor lizujący zawiera jednak takie składniki jak detergenty, sole i inhibitory proteaz. Sole buforujące (np. Tris-HCl) i sole jonowe (np. NaCl) są powszechnie stosowane do regulacji pH i osmolarności lizatu.
Aby utworzyć bufor lizujący, składniki miesza się ze sobą w odpowiednich stężeniach i pH. Mieszanina jest zwykle mieszana lub wstrząsana do momentu rozpuszczenia składników i uzyskania jednorodnego roztworu.
Homogenizacja ultradźwiękowa to metoda, która może być stosowana do tworzenia dobrego buforu lizującego poprzez poprawę mieszania i rozpuszczania składników. W tej metodzie fale ultradźwiękowe – zwykle w zakresie od 20 do 30 kHz – są przykładane do mieszaniny, co tworzy pęcherzyki kawitacyjne, które zapadają się i generują intensywną lokalną energię, prowadząc do mechanicznego ścinania i mieszania składników.
Proces homogenizacji ultradźwiękowej może pomóc w rozbiciu wszelkich grudek lub agregatów składników i zapewnić równomierne wymieszanie roztworu. W konsekwencji, taki ulepszony bufor lizujący może prowadzić do bardziej efektywnego rozbijania komórek i wyższej wydajności ekstrahowanego materiału. Dodatkowo, homogenizacja ultradźwiękowa może skrócić czas potrzebny do wytworzenia buforu lizującego w porównaniu z tradycyjnymi metodami mieszania lub wytrząsania.
Ogólnie rzecz biorąc, homogenizacja ultradźwiękowa jest potężnym narzędziem do poprawy jakości i wydajności przygotowania buforu lizującego.

Protokół przygotowania buforu do lizy ultradźwiękowej

Jest to ogólny protokół sporządzania buforu lizującego przy użyciu ultrasonografu z sondą:
 
Materiały:

• Detergent(y) do wyboru (np. Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Wybrana sól (np. NaCl, KCl)
• Inhibitory proteazy (np. PMSF, aprotynina, leupeptyna)
• ultrasonicator
• Mieszadło
• Woda dejonizowana
• Miernik pH lub paski pH

 
 
Instrukcje krok po kroku:

1. Określić skład buforu do lizy w oparciu o komórki lub tkanki, które będą poddawane lizie, oraz dalsze zastosowania, do których lizat będzie używany. Przygotuj roztwory podstawowe detergentów, soli i inhibitorów proteaz w pożądanych stężeniach.
2. Dodać roztwory podstawowe detergentów, soli i inhibitorów proteaz do zlewki lub kolby.
3. Dodać wodę dejonizowaną, aby zwiększyć objętość do żądanej ilości buforu.
4. Wymieszać składniki za pomocą mieszadła w celu uzyskania roztworu wstępnego.
5. Zmierz pH buforu za pomocą pH-metru lub pasków pH i w razie potrzeby dostosuj pH za pomocą niewielkich ilości kwasu lub zasady.
6. Do homogenizacji wstępnie wymieszanego roztworu należy użyć ultrasonografu z sondą, aby uzyskać wysoce jednorodny roztwór. Dlatego sonikację roztworu należy prowadzić przez kilka sekund, aż roztwór zostanie dokładnie wymieszany, a wszelkie grudki lub agregaty zostaną rozbite. Czas trwania i moc sonikacji można zoptymalizować w oparciu o konkretny bufor lizujący i zastosowany ultrasonograf.
7. Po ultradźwiękach ponownie zmierzyć pH buforu i dostosować w razie potrzeby.
8. Przefiltrować bufor przez filtr 0,2 mikrona, aby usunąć wszelkie zanieczyszczenia lub agregaty, które mogły powstać podczas sonikacji.
9. Bufor do lizy jest teraz gotowy do użycia.

 
Uwaga: Dokładny skład i pH buforu do lizy mogą się różnić w zależności od lizowanych komórek lub tkanek i dalszych zastosowań. Powyższy protokół jest ogólną wytyczną i może wymagać optymalizacji pod kątem konkretnych zastosowań.
 
Homogenizatory ultradźwiękowe są powszechnie stosowane do rozbijania komórek i ekstrakcji cząsteczek wewnątrzkomórkowych. W związku z tym wiele aplikacji do lizy wykorzystuje sonikację typu sondy nie tylko do przygotowania buforu do lizy, ale także do mechanicznego rozbijania i ekstrakcji komórek.
To sprawia, że ultradźwiękowe homogenizatory tkanek są wszechstronnym narzędziem dla laboratoriów i wyjaśnia szerokie zastosowanie ultrasonografów w mikrobiologii, biotechnologii i naukach przyrodniczych.

homogenizatorów ultradźwiękowych do laboratorium

Hielscher Ultrasonics produkuje i dostarcza homogenizatory ultradźwiękowe i sondy (sonotrody) o różnych mocach i objętościach próbek. Pozwala nam to zaoferować najbardziej odpowiedni ultradźwiękowy zakłócacz do przygotowania próbki. Koncentrujemy się na najwyższej jakości, wyjątkowym komforcie użytkowania i niezawodnych wynikach sonikacji. Wszystkie cyfrowe ultradźwięki są wyposażone w inteligentne oprogramowanie, programowanie i wstępne ustawianie protokołów sonikacji, zdalne sterowanie przez przeglądarkę, kontrolę temperatury, oświetlenie próbki, a także automatyczne rejestrowanie danych na wbudowanej karcie SD.

Projektowanie, produkcja i doradztwo – Jakość Made in Germany

Ultradźwięki Hielscher są dobrze znane z najwyższej jakości i standardów projektowych. Solidność i łatwa obsługa pozwalają na płynną integrację naszych ultradźwiękowców z obiektami przemysłowymi. Trudne warunki i wymagające środowiska są łatwo obsługiwane przez ultradźwięki Hielscher.

Hielscher Ultrasonics jest firmą posiadającą certyfikat ISO i kładzie szczególny nacisk na wysokowydajne ultradźwięki z najnowocześniejszą technologią i łatwością obsługi. Oczywiście ultradźwięki Hielscher są zgodne z CE i spełniają wymagania UL, CSA i RoHs.

Poniższa tabela zawiera przegląd naszych różnych ultrasonografów laboratoryjnych: