ASTM E2799-22 Protokół oceny właściwości przeciwdrobnoustrojowych
Hielscher UIP400MTP to potężny i wydajny sonikator do płytek wielodołkowych zaprojektowany w celu usprawnienia etapu sonikacji w protokole ASTM E2799-22. Dostarczając jednolitą energię ultradźwiękową na całej płytce mikrotitracyjnej, UIP400MTP zapewnia spójne i niezawodne odrywanie biofilmów od pokrywek kołków bez uszkadzania komórek lub naruszania integralności próbki. Jego wysoka wydajność i przyjazna dla użytkownika obsługa znacznie skracają czas przetwarzania, jednocześnie zwiększając powtarzalność, co czyni go idealnym rozwiązaniem dla laboratoriów przeprowadzających testy żywotności biofilmu i testy skuteczności przeciwdrobnoustrojowej.
ASTM E2799
ASTM E2799 to znormalizowana metoda testowa zaprojektowana do oceny skuteczności środków przeciwdrobnoustrojowych przeciwko biofilmom, w szczególności skupiająca się na Pseudomonas aeruginosa. Biofilmy to złożone społeczności drobnoustrojów, które przylegają do powierzchni i wykazują zwiększoną odporność na środki przeciwdrobnoustrojowe, co czyni je poważnym wyzwaniem w kontekście opieki zdrowotnej, przemysłu i środowiska. Metoda ta wykorzystuje test Minimalnego Stężenia Eradykacji Biofilmu (MBEC), aby zapewnić wiarygodne i powtarzalne ramy do testowania środków dezynfekujących w realistycznych warunkach biofilmu.

Sonikator do płytek 96-dołkowych UIP400MTP do wysokoprzepustowych badań przesiewowych
W jaki sposób sonikacja przyczynia się do spełnienia normy ASTM E2799?
Sonikacja odgrywa kluczową rolę w protokole ASTM E2799, ułatwiając odrywanie biofilmów od badanych powierzchni, zapewniając dokładną ocenę żywotności drobnoustrojów po obróbce. Dzięki zastosowaniu kontrolowanej energii ultradźwiękowej, protokół osiąga skuteczne i spójne rozerwanie biofilmu bez uszkadzania komórek, umożliwiając uzyskanie precyzyjnych i powtarzalnych wyników. Sprawia to, że norma ASTM E2799 jest niezbędnym narzędziem do rozwoju badań nad biofilmem i opracowywania skutecznych strategii przeciwdrobnoustrojowych.
Jak przeprowadzić test MBEC zgodnie z normą ASTM E2799-22
Protokół ASTM E2799-22 określa etapy oceny skuteczności środków przeciwdrobnoustrojowych przeciwko biofilmom. W przypadku korzystania z sonikatora płytek mikrotitracyjnych Hielscher UIP400MTP, protokół można dostosować w celu włączenia tej zaawansowanej metody sonikacji do odrywania biofilmu. Poniżej znajduje się opis kroków dostosowanych do korzystania z sonikatora mikropłytek UIP400MTP:
- Przygotowanie biofilmów
Przygotuj sterylną 96-dołkową płytkę mikrotitracyjną ze zdejmowanymi pokrywkami.
Zaszczepić dołki standaryzowaną zawiesiną bakterii w odpowiednim podłożu wzrostowym.
Umieść pokrywkę z kołeczkami na płytce, upewniając się, że kołeczki są całkowicie zanurzone w zawiesinie bakteryjnej.
Inkubować płytkę w kontrolowanych warunkach (np. temperatura i czas), aby umożliwić tworzenie się biofilmu na kołkach. - Leczenie środkami przeciwdrobnoustrojowymi
Po utworzeniu biofilmu zastąpić pożywkę świeżą pożywką zawierającą testowane środki przeciwdrobnoustrojowe w różnych stężeniach.
Ponownie załóż pokrywę kołka i inkubuj w warunkach określonych w projekcie testu. - Przygotowanie do oderwania biofilmu
Po zabiegu należy przepłukać pokrywę kołka, zanurzając ją w sterylnym roztworze płuczącym w celu usunięcia pozostałości środków przeciwdrobnoustrojowych i luźno przylegających komórek planktonicznych. - Usuwanie biofilmu za pomocą sonikatora UIP400MTP
Przygotować świeżą 96-dołkową płytkę mikromiareczkową zawierającą podłoże regeneracyjne (np. bulion neutralizujący).
Oddzielić biofilmy, umieszczając pokrywkę z kołkiem w studzienkach płytki z podłożem regeneracyjnym.
Włóż płytkę do sonikatora UIP400MTP, upewniając się, że pokrywa i płytka są prawidłowo wyrównane.
Ustawić sonikator na 70%-80% amplitudy i sonikować przez 3-4 minuty w trybie cyklicznym, aby zapewnić spójne odrywanie biofilmu bez lizy komórek. - Ocena żywotności biofilmu
Po sonikacji przetworzyć pożywkę regeneracyjną zawierającą oderwane komórki biofilmu przy użyciu standardowych technik mikrobiologicznych lub analitycznych, takich jak:- Liczba jednostek tworzących kolonie (CFU): Wykonać seryjne rozcieńczenia i umieścić płytkę na agarze w celu zliczenia żywotnych komórek.
- Pomiary gęstości optycznej (OD): Użyj analizy spektrofotometrycznej do oceny gęstości komórek.
- Testy żywotności oparte na fluorescencji: Kwantyfikacja żywych i martwych komórek przy użyciu barwników fluorescencyjnych.
- analiza danych
Porównanie danych dotyczących żywotności leczonych i nieleczonych biofilmów w celu określenia skuteczności środków przeciwdrobnoustrojowych.
Obliczyć minimalne stężenie eliminacji biofilmu (MBEC) w oparciu o stężenie wymagane do wyeliminowania żywotnych komórek biofilmu. - kontrola jakości
Zapewnić spójne warunki sonikacji poprzez regularne kalibrowanie UIP400MTP i sprawdzanie, czy proces odrywania biofilmu nie powoduje znacznej lizy lub zniszczenia komórek.
Uwzględnij odpowiednie kontrole, takie jak nieleczone biofilmy i próby ślepej tylko z pożywką, aby zweryfikować wyniki.

Komórki biofilmu utworzone na szpilkach zostały usunięte za pomocą sonikacji (Hielscher Ultrasound Technology, Teltow, Niemcy, UIP250MTP) przez 5 minut w 96-dołkowych płytkach zawierających świeżą pożywkę do odzyskiwania komórek.
(Zdjęcie i opracowanie: ©de Oliveira et al., 2016)
Dzięki zintegrowaniu UIP400MTP z przepływem pracy ASTM E2799-22, proces usuwania biofilmu jest zoptymalizowany pod kątem spójności, wydajności i aplikacji o wysokiej wydajności.
Literatura / Referencje
- FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- ASTM E2799-22 Standard Test Method for Testing Disinfectant Efficacy against Pseudomonas aeruginosa Biofilm using the MBEC Assay
- De Oliveira A, Cataneli Pereira V, Pinheiro L, Moraes Riboli DF, Benini Martins K, Ribeiro de Souza da Cunha MDL (2016): Antimicrobial Resistance Profile of Planktonic and Biofilm Cells of Staphylococcus aureus and Coagulase-Negative Staphylococci. International Journal of Molecular Sciences 17(9):1423; 2016.
- Martins KB, Ferreira AM, Pereira VC, Pinheiro L, Oliveira A, Cunha MLRS (2019): In vitro Effects of Antimicrobial Agents on Planktonic and Biofilm Forms of Staphylococcus saprophyticus Isolated From Patients With Urinary Tract Infections. Frontiers in Microbiology 2019.
często zadawane pytania
Co to jest ASTM E2799?
ASTM E2799 to standardowa metoda testowa ustanowiona przez ASTM International do testowania skuteczności środka dezynfekującego przeciwko biofilmowi Pseudomonas aeruginosa przy użyciu testu MBEC. Metoda ta jest szeroko stosowana do oceny tworzenia biofilmu, skuteczności przeciwdrobnoustrojowej i interakcji powierzchni materiału, umożliwiając znormalizowane porównania w badaniach związanych z biofilmem.
Jaka jest różnica między ASTM E2799-22 a ASTM E2799-11, ASTM E2799-12 i ASTM E2799-17?
ASTM E2799 to znormalizowana metoda testowa, która ocenia skuteczność środków dezynfekujących przeciwko biofilmom Pseudomonas aeruginosa przy użyciu testu MBEC (Minimalne Stężenie Eradykacji Biofilmu). Metoda ta została poddana kilku zmianom w celu zwiększenia jej dokładności i możliwości zastosowania.
- ASTM E2799-11: Było to pierwsze wydanie standardu, ustanawiające podstawowe procedury oceny skuteczności środka dezynfekującego wobec biofilmów P. aeruginosa przy użyciu testu MBEC.
- ASTM E2799-12: W tej wersji wprowadzono drobne aktualizacje techniczne w celu poprawy jasności i rozwiązania niejasności zidentyfikowanych w wersji z 2011 roku.
- ASTM E2799-17: W tej aktualizacji wprowadzono bardziej znaczące modyfikacje protokołu, w tym dostosowania do procesu hodowli biofilmu, stosowania leczenia i procedur neutralizacji, mające na celu zwiększenie odtwarzalności i dostosowanie do postępów w badaniach nad biofilmem.
- ASTM E2799-22: Najnowsza wersja odzwierciedla najnowszą wiedzę naukową i postęp technologiczny w badaniach biofilmu. Obejmuje ona udoskonalone metodologie wzrostu, obróbki i analizy biofilmu, zapewniając, że metoda testowa pozostaje odpowiednia i skuteczna w bieżących ocenach skuteczności środków dezynfekujących.
Każda rewizja normy ASTM E2799 została wprowadzona w celu poprawy niezawodności, odtwarzalności i przydatności metody, zapewniając jej aktualność wraz z postępem naukowym i technologicznym w dziedzinie badań nad biofilmem.
Jaka jest różnica między testami MBEC i MBIC?
Kluczowa różnica między testami MBEC (Minimum Biofilm Eradication Concentration) i MBIC (Minimum Biofilm Inhibitory Concentration) polega na ich ukierunkowaniu:
Testy MBEC mierzy najniższe stężenie środka przeciwdrobnoustrojowego wymagane do całkowitego wyeliminowania wstępnie uformowanych biofilmów, oceniając zdolność substancji do zabijania mikroorganizmów osadzonych w biofilmie.
Testy MBIC określić najniższe stężenie środka przeciwdrobnoustrojowego, które zapobiega początkowemu tworzeniu się biofilmów, oceniając jego zdolność do hamowania rozwoju biofilmów.
Oba testy mają kluczowe znaczenie dla zrozumienia skuteczności środków przeciwdrobnoustrojowych przeciwko biofilmom, ale są ukierunkowane na różne etapy cyklu życia biofilmu.
Dowiedz się, jak sonikator mikropłytek UIP400MTP jest używany do usuwania biofilmu w testach MBIC!

Hielscher Ultrasonics produkuje wysokowydajne homogenizatory ultradźwiękowe od laboratorium do rozmiar przemysłowy.