Zastąp skrobanie komórek wysokowydajnym sonikatorem UIP400MTP

Oddzielanie i ekstrakcja przylegających linii komórkowych z płytek wielodołkowych do analizy wieloomowej jest codziennym zadaniem w laboratoriach. Wysokowydajne odłączanie komórek za pomocą sonikatora wielodołkowego UIP400MTP zastępuje ręczne skrobanie komórek, prowadząc do wyższej wydajności RNA, całkowitych lipidów i całkowitych metabolitów polarnych. Nowa metoda integruje sonikator Hielscher UIP400MTP ze stacją roboczą do obsługi cieczy Beckman Coulter i7, umożliwiając wysokowydajne, powtarzalne i wydajne przetwarzanie komórek w celu ekstrakcji RNA, metabolitów i lipidów. Przedstawiona metoda przewyższa tradycyjne ręczne metody skrobania komórek, osiągając doskonałą powtarzalność i wydajność w różnych typach komórek i warunkach eksperymentalnych.

Usprawnij odłączanie komórek za pomocą sonikatora do mikropłytek UIP400MTP

Systemy adherentnych hodowli komórkowych odgrywają kluczową rolę w badaniach toksykologicznych i biomedycznych. W tym kontekście Cruchley-Fuge i in. (2024) zajęli się istotnym wyzwaniem w projekcie PrecisionTox, koncentrującym się na wykorzystaniu technologii omicznych do oceny zagrożeń chemicznych. Celem projektu była wysokowydajna analiza tysięcy próbek poddanych działaniu różnych substancji chemicznych. Aby sprostać temu zapotrzebowaniu, naukowcy opracowali zautomatyzowany przepływ pracy łączący sonikator UIP400MTP z ustalonymi protokołami ekstrakcji dwufazowej do analizy chromatografii cieczowej ze spektrometrią mas (LC-MS). Ich badanie ocenia skuteczność sonikatora UIP400MTP Multi-Well Plate Sonicator w odrywaniu przylegających komórek w porównaniu z ręcznym skrobaniem i innymi tradycyjnymi metodami.

Usprawnienie Multi-Omics: Zautomatyzowana ekstrakcja komórek adherentnych za pomocą UIP400MTP

Zespół badawczy Laury Cruchley-Fuge z Uniwersytetu w Birmingham wykorzystał trzy ludzkie linie komórkowe: HepG2 (komórki raka wątroby), HepaRG (zróżnicowane komórki podobne do hepatocytów) i H295R (komórki raka nadnerczy). Komórki te hodowano w 24-dołkowych i 96-dołkowych płytkach i poddawano działaniu testowanych substancji chemicznych, takich jak aflatoksyna B1 i forskolina.

Projekt eksperymentalny:

• Faza 1: Optymalizacja ustawień mocy sonikatora UIP400MTP i porównanie z ręcznym skrobaniem komórek i dźwiękowymi kąpielami wodnymi. Komórki HepG2 wykorzystano do oceny odzysku RNA, metabolitów i lipidów.
• Faza 2: Integracja UIP400MTP z przepływem pracy ekstrakcji dwufazowej przy użyciu systemu Beckman Coulter i7. Walidację przeprowadzono przy użyciu komórek HepaRG i H295R.

Przepływ pracy ekstrakcji: Przepływ pracy obejmował ekspozycję chemiczną na płytkach wielodołkowych, oderwanie komórek za pomocą UIP400MTP i ekstrakcję dwufazową za pomocą Bligha. & Dyer (B&D). Analizę LC-MS przeprowadzono przy użyciu aparatu Thermo Scientific Orbitrap Exploris 120 dla związków lipofilowych i polarnych. Metoda B&Metoda D, złoty standard kwantyfikacji lipidów, obejmuje dwuetapową ekstrakcję metanolem, chloroformem i wodą, a następnie kwantyfikację lipidów w fazie chloroformowej.

Sonikator mikropłytek UIP400MTP ułatwia odłączanie przylegających linii komórkowych od płytek wielodołkowych i płytek Petriego.

Wyniki:

• Faza 1: Optymalne warunki sonikacji zostały zidentyfikowane przy 60% mocy.
  Urządzenie UIP400MTP zapewniło najwyższy odzysk RNA przy wyjątkowej powtarzalności w porównaniu z ręcznym skrobaniem i kąpielami ultradźwiękowymi.
  Odzysk metabolitów polarnych był spójny we wszystkich metodach, podczas gdy odzysk lipidów był znacznie lepszy w przypadku UIP400MTP.
• Faza 2: Walidacja na komórkach HepaRG i H295R wykazała wysoką odtwarzalność danych lipidomicznych i metabolomicznych, na co wskazują ściśle skupione wyniki PCA.
  Leczenie aflatoksyną B1 i forskoliną skutecznie odróżniono od kontroli, podkreślając czułość i niezawodność metody.

“Urządzenie do sonikacji Hielscher UIP400MTP zapewnia wysokiej jakości i powtarzalne alternatywne podejście do "złotego standardu" ręcznego skrobania komórek, prowadząc do wyższych plonów RNA, całkowitych lipidów i całkowitych metabolitów polarnych.” (Cruchley-Fuge i in., 2024)

Cruchley-Fuge i wsp. podkreślają zalety sonikatora UIP400MTP do przetwarzania komórek adherentnych. Zastępując ręczne skrobanie, metoda ta zwiększa powtarzalność, przepustowość i wydajność, co czyni ją nieocenionym narzędziem do badań na dużą skalę, takich jak PrecisionTox. Integracja UIP400MTP ze zautomatyzowanymi przepływami pracy nie tylko zmniejsza zmienność, ale także usprawnia pracochłonne procesy, umożliwiając pozyskiwanie wysokiej jakości danych multi-omicznych.

Praca Cruchley-Fuge et al. (2024) ułatwia i usprawnia przetwarzanie adherentnych kultur komórkowych do analizy wieloomowej. Integracja sonikatora UIP400MTP ze zautomatyzowanymi przepływami pracy zapewnia spójne i wydajne przygotowanie próbek, dzięki czemu idealnie nadaje się do wysokowydajnych badań toksykologicznych.
 

Projektowanie, produkcja i doradztwo – Jakość Made in Germany

Ultradźwięki Hielscher są dobrze znane z najwyższej jakości i standardów projektowych. Solidność i łatwa obsługa pozwalają na płynną integrację naszych ultradźwiękowców z obiektami przemysłowymi. Trudne warunki i wymagające środowiska są łatwo obsługiwane przez ultradźwięki Hielscher.

Hielscher Ultrasonics jest firmą posiadającą certyfikat ISO i kładzie szczególny nacisk na wysokowydajne sonikatory wyposażone w najnowocześniejszą technologię i łatwość obsługi. Oczywiście ultradźwięki Hielscher są zgodne z CE i spełniają wymagania UL, CSA i RoHs.