ნიმუშის მომზადება ულტრაბგერითი VialTweeter-ით

ანალიზის წინ ნიმუშის მომზადებას შეიძლება დასჭირდეს სხვადასხვა წინასწარი ანალიტიკური პროცესი, როგორიცაა ქსოვილის ჰომოგენიზაცია, ლიზი, ცილების, დნმ, რნმ, ორგანელების და სხვა უჯრედშიდა ნივთიერებების ექსტრაქცია, დაშლა და გაზი. VialTweeter არის უნიკალური ულტრაბგერითი მოწყობილობა, რომელიც ამზადებს რამდენიმე ნიმუშის მილს ერთდროულად ზუსტად იმავე პირობებში. დახურული საცდელი მილების არაპირდაპირი გაჟღერების გამო, ჯვარედინი დაბინძურება და ნიმუშის დაკარგვა თავიდან აცილებულია.

ულტრაბგერითი ნიმუშის მომზადება

ულტრაბგერითი არის ნიმუშის დამუშავების საერთო ტექნიკა, რათა ნიმუში მზად იყოს ანალიზებისთვის, როგორიცაა პოლიმერული ჯაჭვური რეაქცია (PCR), Western Blots, ანალიზი, მოლეკულური თანმიმდევრობა, ქრომატოგრაფია და ა.შ. ანალიტიკურად. სონიკაციის მთავარი უპირატესობა ის არის, რომ ულტრაბგერითი მუშაობის პრინციპი დაფუძნებულია წმინდა მექანიკურ ძალებზე. ულტრაბგერითი ლიზისი და უჯრედების რღვევა მიიღწევა სონომექანიკური ათვლის ძალებით, რაც ულტრაბგერითი მოქმედების უპირატესობას ანიჭებს, რომ ცილის ექსტრაქციისთვის გამოყენებული გამხსნელები შეიძლება გამოყენებულ იქნას ლიზისის დროსაც. ულტრაბგერითი უჯრედების დამრღვევები, როგორიცაა VialTweeter, არღვევს უჯრედის კედლებს/მემბრანებს და ხელს უწყობს მასის გადატანას უჯრედის შიგთავსსა და გამხსნელს შორის. ამრიგად, ანალიტი (მაგ. დნმ, რნმ, ცილები, ორგანელები და ა.შ.) ეფექტურად გადადის უჯრედის მატრიციდან გამხსნელში. ეს ნიშნავს, რომ ჩაქრობისა და ექსტრაქციის ნაბიჯები ემთხვევა ულტრაბგერითი უჯრედების დაშლის პროცესს, რაც ულტრაბგერითი ლიზისს ძალიან ეფექტურს ხდის. გარდა ამისა, ულტრაბგერითი ნიმუშის მომზადება არ საჭიროებს სარეცხი საშუალებებს და სხვა ლიზის რეაგენტებს, რომლებმაც შეიძლება შეცვალონ და გაანადგურონ ლიზატის სტრუქტურა და ცნობილია შემდგომი გაწმენდის პრობლემებით. ლიზისის კიდევ ერთი მეთოდი, ფერმენტული დარღვევა მოითხოვს ხანგრძლივ ინკუბაციურ პერიოდს და იძლევა ხშირად არარეპროდუცირებად შედეგებს. ულტრაბგერითი ნიმუშის მომზადება გადალახავს საერთო პრობლემებს ნიმუშის მომზადებაში, როგორიცაა ქსოვილის ჰომოგენიზაცია, უჯრედების დარღვევა, ლიზისი, ცილის ექსტრაქცია და ლიზატის ხსნადი. ვინაიდან ულტრაბგერითი მკურნალობის ინტენსივობა შეიძლება ზუსტად იყოს კონტროლირებადი და მორგებული ბიოლოგიურ ნიმუშზე, დეგრადაცია და ნიმუშის დაკარგვა თავიდან აიცილება. ავტომატური მონიტორინგი და კონტროლირებადი ნიმუშის ტემპერატურა, პულსის რეჟიმი და გაჟონვის ხანგრძლივობა უზრუნველყოფს ოპტიმალურ შედეგებს.
 

VialTweeter განსაკუთრებით მოსახერხებელია ლაბორატორიული სამუშაოებისთვის, რომელიც მოითხოვს რამდენიმე ნიმუშის ერთდროულად მომზადებას იმავე პირობებში. VialTweeter არის ულტრაბგერითი ბლოკის სონოტროდი, რომელსაც შეუძლია დაიჭიროს 10-მდე ფლაკონი (მაგ. Eppendorf, ცენტრიგუგი, NUNC მილები, კრიო-ფლაკონი) და ინტენსიურად აჟღერებს მათ ზუსტად კონტროლირებად პირობებში. მას შემდეგ, რაც ულტრაბგერითი ენერგია წყვილდება ფლაკონების კედლებში ნიმუშის გარემოში, ფლაკონები დახურულია მკურნალობის დროს. ამგვარად, ნიმუშის დაკარგვა და ჯვარედინი დაბინძურება სრულად არის თავიდან აცილებული.

ფლაკონები და მილები, რომლებიც მორგებულია VialTweeter-ზე

VialTweeter განკუთვნილია 10 ჩვეულებრივი კონუსური ან მრგვალი ფსკერის მილის შესანახად, როგორიცაა Eppendorf, ცენტრიფუგა, კრიო-ფლაკონი და სხვადასხვა ტიპის NUNC ფლაკონი, მაგრამ ხვრელების მორგება შესაძლებელია სხვა ფლაკონისა და მილის ზომის მიხედვით. გთხოვთ, შეგვატყობინოთ, რომელი ტიპის საცდელი მილები გსურთ გამოიყენოთ, რათა ჩვენ შევცვალოთ თქვენი VialTweeter შესაბამისად. უფრო დიდი საცდელი მილებისთვის, როგორიცაა Falcon მილები და სხვა სატესტო კონტეინერები, ჭიქები და ჭურჭელი, VialPress არის მოსახერხებელი გადაწყვეტა.

VialTweeter VialPress-ით

მიუხედავად იმისა, რომ თავად VialTweeter თავისი 10 მილის ხვრელით უკვე უნიკალური და მაღალფუნქციონალური ულტრაბგერითი მოწყობილობაა, VialPress-ის დანამატი VialTweeter-ს კიდევ უფრო მრავალმხრივს და მოქნილს ხდის მუშაობისთვის. VialPress არის VialTweeter-ის აქსესუარი, რომელიც შედგება დამჭერი ზოლისგან, რომელიც საშუალებას გაძლევთ დააფიქსიროთ უფრო დიდი ნიმუშის მილები, როგორიცაა Falcon მილები ან სხვა მცირე და საშუალო ზომის სატესტო ჭიქა VialTweeter-ის წინა მხარეს. მარცხნივ სურათზე ნაჩვენებია VialTweeter, რომელსაც უჭირავს 10 Eppendorf ფლაკონი ბლოკში, ხოლო VialPress აფიქსირებს ერთ უფრო დიდ სინჯარას წინა მხარეს ზონირებისთვის. VialPress-ს შეუძლია დაიჭიროს 5-მდე დიდი საცდელი მილი ინტენსიური სონიკაციისთვის.

VialTweeter-ის ნიმუშის მომზადების პროტოკოლები

VialTweeter ფართოდ გამოიყენება ბიოლოგიური ნიმუშების ზონირებისთვის. ანალიზის დაწყებამდე, ნიმუშები უნდა მომზადდეს ბიოქიმიური ან ბიოფიზიკური ანალიზებისა და ანალიზისთვის, მაგ., ლიზისით, ქსოვილის ჰომოგენიზაციის, ცილის ექსტრაქციის, დნმ/რნმ-ის გათიშვა, დეგაზირების და ა.შ. VialTweeter-ის საერთო გამოყენებაა ძუძუმწოვრების (ადამიანის და ცხოველის) ქსოვილების, ასევე ბაქტერიების უჯრედების და ვირუსული ნაწილაკების ლიზისი/უჯრედების დარღვევა. VialTweeter-ის წარმატებით დამუშავებული ბიოლოგიური ნიმუშები მოიცავს ადამიანის ფილტვის ეპითელურ უჯრედებს, ჰემატოპოეზურ ღეროვან უჯრედებს, მიელოიდური ლეიკემიის უჯრედებს, ეშერიხია კოლი, Bacillus subtilis, Bacillus anthracis, Francisella tularensis, Yersinia pestis, Streptococcus pyogenes, Caulobacter crescentus, Mycoplasma pneumoniae, მიკობაქტერია / Mycobacterium tuberculosis კომპლექსი (MTBC) და მრავალი სხვა ბაქტერიული, ბოტანიკური და მიკრობული უჯრედი.
ქვემოთ შეგიძლიათ იპოვოთ რამდენიმე შერჩეული პროტოკოლი VialTweeter-ით.

E.Coli Lysis ერთად VialTweeter in-Vivo გლუტათიონის განსაზღვრისთვის

Escherichia coli შტამის MG1655 ბაქტერია გაიზარდა MOPS მინიმალურ გარემოში 200 მლ საერთო მოცულობით, სანამ არ მიიღწევა A600 0,5-მდე. კულტურა დაყოფილი იყო 50 მლ კულტურებად სტრესის სამკურნალოდ. 15 წუთის ინკუბაციიდან 0,79 მმ ალიცინით, 1 მმ დიამიდით ან დიმეთილ სულფოქსიდით (საკონტროლო), უჯრედები აღებული იქნა 4000 გ-ზე 4°C-ზე 10 წუთის განმავლობაში. უჯრედები ორჯერ გაირეცხა KPE ბუფერით მარცვლების ხელახლა შეჩერებამდე 700 μl KPE ბუფერში. დეპროტეინაციისთვის, 300µl 10% (w/v) სულფოსალიცილის მჟავა დაემატა ულტრაბგერითი უჯრედების დაშლამდე (3 x 1 წთ; VialTweeter ულტრაბგერითი). სუპერნატანტები შეგროვდა ცენტრიფუგაციის შემდეგ (30 წთ, 13000გრ, 4°C). სულფოსალიცილის მჟავას კონცენტრაცია შემცირდა 1%-მდე KPE ბუფერის 3 მოცულობის დამატებით. მთლიანი გლუტათიონისა და GSSG-ის გაზომვები ჩატარდა, როგორც ზემოთ იყო აღწერილი. უჯრედული გლუტათიონის კონცენტრაცია გამოთვლილი იყო E. coli უჯრედების მოცულობის საფუძველზე 6.7×10-15 ლიტრი და უჯრედის სიმკვრივე A600 0.5 (ექვივალენტური 1×108 უჯრედი მლ-1 კულტურისა). GSH კონცენტრაციები გამოთვლილი იყო 2[GSSG]-ის გამოკლებით მთლიანი გლუტათიონიდან. (მიულერი და სხვ. 2016)

ალფა-სინუკლეინის ფიბრილის ფრაგმენტაცია VialTweeter-ით

VialTweeter sonicator ფართოდ გამოიყენება ალფა-სინუკლეინის ფიბრილების და ლენტების საიმედო და ეფექტური ფრაგმენტაციისთვის. დააწკაპუნეთ აქ VialTweeter-ით ალფა-სინუკლეინის ფრაგმენტაციის დეტალური აღწერილობების, პროტოკოლებისა და ცნობების სანახავად!

უჯრედის ლიზისი VialTweeter-ით გრაფიტის ღუმელის ატომური შთანთქმის სპექტრომეტრიამდე

Bacillus subtilis 168 (trpC2) ექვემდებარებოდა 15 წთ ანტიბიოტიკურ სტრესს, შემდეგ უჯრედები აღებული იქნა 3,320 xg, გარეცხილი ხუთჯერ 100 mM Tris/1 mM EDTA, pH 7.5, ხელახლა სუსპენდირებულ იქნა 10 მმ Tris-ში, pH 7.5 და დაიშალა ულტრაბგერით. Hielscher VialTweeter ინსტრუმენტში. (ვენზელი და სხვ. 2014)

VialTweeter-ის ნიმუშის მომზადება მასსპექტრომეტრიამდე

ადამიანის CD34 ჰემატოპოეტური ღეროვანი/პროგენიტორული უჯრედების ლიოფილიზებული გრანულები ხელახლა სუსპენდირებულ იქნა 10 μl (200 μl HEK293 ნაყარი მომზადებისთვის პეპტიდის განზავების სერიისთვის) 8 M შარდოვანაში 100 მმ ამონიუმის წყალბადის კარბონატით, გაჟღენთილი და გაჟღენთილი. ამპლიტუდაზე 60%, ციკლი 60% და ხანგრძლივობა 20 წამი სამჯერ ყინულზე შუალედური გაგრილებით. (ამონი და სხვ. 2019)

ნიმუშების მომზადების პროტოკოლები VialPress-ის გამოყენებით

ახალი სალათის ფოთოლი (Lactuca sativa) ჰომოგენიზირებული იყო 0.5 M HEPES ბუფერში (pH 8, KOH მორგებული) 1 გ მცენარის (ახალი წონა) 200, 100, 50 ან 20 მლ ბუფერულ ხსნართან თანაფარდობით. მცენარის მასის თანაფარდობა ბუფერული ხსნარის მოცულობასთან იცვლებოდა, რათა მთლიანი ჰომოგენატის მოცულობა შენარჩუნებულიყო 3,5-დან 12 მლ-მდე. მცენარის მასის თანაფარდობა ბუფერული ხსნარის მოცულობასთან იცვლებოდა, რათა შენარჩუნებულიყო მთლიანი ჰომოგენატის მოცულობა 3.5-დან 12 მლ-მდე, რაც საშუალებას მისცემს ჰომოგენიზაციას ზონდით. შემდეგ ჰომოგენატები გაიარეს არაპირდაპირი ულტრაბგერითი UP200St-ის გამოყენებით VialTweeter-ით, რომელიც აღჭურვილია 200xt VialPress-ით (Hielscher Ultrasonics GmbH, გერმანია) 3 წუთის განმავლობაში (80% პულსი და 100% სიმძლავრე). ამ მოწყობილობის გამოყენებით თავიდან აიცილეთ დაბინძურება. (Laughton et al. 2019)

საიმედო ტემპერატურის კონტროლი VialTweeter-ით სონიკაციის დროს

ტემპერატურა გადამწყვეტი პროცესის გავლენის ფაქტორია, რომელიც განსაკუთრებით მნიშვნელოვანია ბიოლოგიური ნიმუშების დამუშავებისთვის. როგორც ყველა მექანიკური ნიმუშის მომზადების ტექნიკა, sonication ქმნის სითბოს. თუმცა, ნიმუშების ტემპერატურა კარგად შეიძლება კონტროლდებოდეს VialTweeter-ის გამოყენებისას. ჩვენ წარმოგიდგენთ სხვადასხვა ვარიანტს თქვენი ნიმუშების ტემპერატურის მონიტორინგისა და კონტროლისთვის, სანამ ამზადებთ მათ VialTweeter-ით და VialPress-ით ანალიზისთვის.

1. ნიმუშის ტემპერატურის მონიტორინგი: ულტრაბგერითი პროცესორი UP200St, რომელიც მართავს VialTweeter-ს, აღჭურვილია ინტელექტუალური პროგრამული უზრუნველყოფით და ჩართვის ტემპერატურის სენსორით. შეაერთეთ ტემპერატურის სენსორი UP200St-ში და ჩადეთ ტემპერატურის სენსორის წვერი ნიმუშის ერთ-ერთ მილში. ციფრული ფერადი სენსორული დისპლეის საშუალებით შეგიძლიათ დააყენოთ UP200St-ის მენიუში სპეციფიკური ტემპერატურის დიაპაზონი თქვენი ნიმუშის გაჟონვისთვის. მაქსიმალური ტემპერატურის მიღწევისას ულტრაბგერითი ავტომატურად გაჩერდება და შეჩერდება მანამ, სანამ ნიმუშის ტემპერატურა არ დაიწევს დაყენებული ტემპერატურის Δ დაბალ მნიშვნელობამდე. შემდეგ ხმოვანი გამოსხივება ისევ ავტომატურად იწყება. ეს ჭკვიანი ფუნქცია ხელს უშლის სითბოს გამოწვეულ დეგრადაციას.
2. VialTweeter-ის ბლოკი შეიძლება წინასწარ გაცივდეს. ჩადეთ VialTweeter-ის ბლოკი (მხოლოდ სონოტროდი გადამყვანის გარეშე!) მაცივარში ან საყინულეში, რათა წინასწარ გაცივდეს ტიტანის ბლოკი, რაც ხელს უწყობს ნიმუშის ტემპერატურის აწევის გადადებას. თუ შესაძლებელია, თავად ნიმუშიც შეიძლება წინასწარ გაცივდეს.
3. გამოიყენეთ მშრალი ყინული გაციებისას სონიკაციის დროს. გამოიყენეთ არაღრმა უჯრა, სავსე მშრალი ყინულით და მოათავსეთ VialTweeter მშრალ ყინულზე, რათა სითბო სწრაფად გაიფანტოს.

მომხმარებლები მთელ მსოფლიოში იყენებენ VialTweeter-ს და VialPress-ს ყოველდღიური ნიმუშის მომზადებისთვის ბიოლოგიურ, ბიოქიმიურ, სამედიცინო და კლინიკურ ლაბორატორიებში. UP200St პროცესორის ინტელექტუალური პროგრამული უზრუნველყოფა და ტემპერატურის კონტროლი, ტემპერატურა საიმედოდ კონტროლდება და აცილებულია თერმით გამოწვეული ნიმუშის დეგრადაცია. ულტრაბგერითი ნიმუშის მომზადება VialTweeter-ით და VialPress-ით იძლევა უაღრესად სანდო და გამეორებად შედეგებს!

VialTweeter-ის ტექნიკური დეტალები

VialTweeter არის ტიტანისგან დამზადებული ბლოკის სონოტროდი, რომელსაც შეუძლია ბლოკის შიგნით არსებული ხვრელების 10-მდე ფლაკონში შენახვა. გარდა ამისა, 5-მდე დიდი საცდელი მილი შეიძლება დამაგრდეს VialTweeter-ის წინა მხარეს VialPress-ის გამოყენებით. VialTweeter ისეა შექმნილი, რომ ულტრაბგერითი გამომუშავების ენერგია თანაბრად ნაწილდება თითოეულ ჩადგმულ ფლაკონში, რათა უზრუნველყოს სანდო და ერთგვაროვანი ხმოვანი შედეგები. პატარა საყრდენი არეგულირებს VialTweeter sonotrode-ს არათანაბარ მიწაზე და ასწორებს საცდელ მილებს ვერტიკალურად.

VialTweeter-ის უპირატესობები ერთი შეხედვით

• 10-მდე ფლაკონის ერთდროულად ინტენსიური ზონირება
• მაღალი ულტრაბგერითი ინტენსივობით არაპირდაპირი სონიკა ჭურჭლის კედლის გავლით ნიმუშში
• არაპირდაპირი ბგერითი გამოყოფა თავიდან აიცილებს ჯვარედინი დაბინძურებას და ნიმუშის დაკარგვას
• რეპროდუცირებადი შედეგები რეგულირებადი და კონტროლირებადი ხმოვანი ამპლიტუდის გამო
• VialPress გაძლევთ საშუალებას მოახდინოთ უფრო დიდი მილების ზონირება
• რეგულირებადი ამპლიტუდა 20-დან 100%-მდე
• რეგულირებადი პულსის რეჟიმი 0-დან 100%-მდე
• ავტოკლავირებადი

VialTweeter იკვებება UP200 ქ, 200 ვატიანი ძლიერი ულტრაბგერითი პროცესორი. UP200St აღჭურვილია ინტელექტუალური პროგრამული უზრუნველყოფით, რომელიც საშუალებას იძლევა ზუსტი კონტროლი ულტრაბგერითი პროცესის ყველა მნიშვნელოვან პარამეტრზე, როგორიცაა ამპლიტუდა, გაჟღერების დრო, პულსაცია და ტემპერატურა. ეს აქცევს VialTweeter-ს საიმედო ინსტრუმენტად წარმატებული რეპროდუცირებადი პროცესის შედეგებისთვის ბიოლოგიურ და ბიოქიმიურ ლაბორატორიებში.
ამპლიტუდის რეგულირება შესაძლებელია 20-დან 100%-მდე და ამით საშუალებას გაძლევთ ადაპტირდეს ულტრაბგერითი ინტენსივობა თქვენს ნიმუშზე. მაგალითად, დნმ-ისა და რნმ-ის ცვეთა და ფრაგმენტაცია მოითხოვს უფრო რბილ ამპლიტუდას, რათა თავიდან აიცილოს დნმ-ის ძალიან მცირე ფრაგმენტების წარმოქმნა, თაგვის ტვინის ქსოვილის ჰომოგენიზაციას სჭირდება მაღალი ინტენსივობის სონიკა. აირჩიეთ იდეალური ამპლიტუდა, ბგერითი ინტენსივობა და ხანგრძლივობა UP200St პროცესორის ჭკვიანი და ინტუიციური მენიუს მეშვეობით. მენიუსა და პარამეტრებზე ადვილად წვდომა და მართვა შესაძლებელია ფერადი სენსორული ეკრანის საშუალებით. პარამეტრებში შეგიძლიათ წინასწარ დააყენოთ ბგერითი პარამეტრები, როგორიცაა ამპლიტუდა, პულსაციის / ციკლის რეჟიმი, გაჟონვის ხანგრძლივობა, მთლიანი ენერგიის შეყვანა და ტემპერატურის ლიმიტები. კვლევასა და წარმოებაში ცდებისა და ტესტის შედეგების განმეორებადობა გადამწყვეტია. ეს ნიშნავს, რომ პროცესის პირობების ზუსტი ჩაწერა და ხმოვანი პროტოკოლები ძალზე მნიშვნელოვანია. მონაცემთა ავტომატური პროტოკოლი წერს ყველა სონიკაციის მონაცემს CSV ფაილში ინტეგრირებულ SD-ბარათზე, ასე რომ თქვენ შეგიძლიათ მარტივად შეამოწმოთ და შეადაროთ სხვადასხვა სონიკაციის გაშვებები. ულტრაბგერითი პროცესის ყველა მონაცემი ადვილად ხელმისაწვდომი და გაზიარებულია CSV ფაილის სახით.
Hielscher Ultrasonics ცდილობს მოგაწოდოთ მოწინავე ტექნოლოგია თქვენი კვლევის მუშაობის გასაადვილებლად და გასაუმჯობესებლად!