ულტრაბგერითი ნიმუშის მოსამზადებელი ELISA ანალიზებისთვის

ანალიზები, როგორიცაა ELISA, ფართოდ გამოიყენება ინ-ვიტრო დიაგნოსტიკისთვის, დაავადებებთან დაკავშირებული ცილების გამოვლენისა და ხარისხის კონტროლისთვის (მაგ. საკვები ალერგენების მონიტორინგი). ულტრაბგერითი ნიმუშის მომზადება არის სწრაფი, საიმედო და განმეორებადი ტექნიკა უჯრედში ლიზიზირებისა და უჯრედშიდა ცილების, დნმ-ის, რნმ-ისა და ორგანოს გამოსაყოფად. Hielscher Ultrasonics გთავაზობთ სხვადასხვა ულტრაბგერით გადაწყვეტილებებს ერთჯერადი ნიმუშების, მრავალი ფლაკონის, აგრეთვე მიკროტიტერული ფირფიტებისა და 96 ჭაბურღილის ფირფიტების მოსახერხებლად მოსამზადებლად.

ELISA – ფერმენტთან დაკავშირებული იმუნოსორბენტის ანალიზი

ELISA აღნიშნავს ფერმენტთან დაკავშირებული იმუნოსორბენტის ანალიზს და არის ლიგანდის სავალდებულო ანალიზების კატეგორიის ბიოქიმიური ანალიზის ტექნიკა. ELISA– ში თხევადი ნიმუში ემატება სტაციონარულ მყარ ფაზას, სპეციალური სავალდებულო თვისებებით. ჩვეულებრივ, სტაციონარული მყარი ფაზა გამოიყენება, როგორც საფარი ჭაბურღილის ფირფიტაზე ან ELISA ფირფიტაზე. შემდეგ, სხვადასხვა თხევადი რეაგენტები თანმიმდევრულად ემატება, ინკუბაციას და ირეცხება, რომ საბოლოოდ მოხდეს ოპტიკური ცვლილება (მაგ., ფერმენტული რეაქციის პროდუქტით ფერის განვითარება) საბოლოო სითხეში ჭაში. ოპტიკური ცვლილება საშუალებას იძლევა გაზომოთ ანალიზატორის რაოდენობა ე.წ რაოდენობრივი “კითხვა". რაოდენობრივი კითხვისთვის გამოიყენება სპექტროფოტომეტრი, ფლუომეტრი, ან ლუმინომეტრი გადაცემული სინათლის ინტენსივობის დასადგენად და გასაზომად. გამოვლენის მგრძნობელობაზე გავლენას ახდენს ანალიტიკური რეაქციების დროს სიგნალის გაძლიერება. მას შემდეგ, რაც ფერმენტების რეაქციები კარგად არის გამოკვლეული და საიმედო გამაძლიერებელი პროცესები, სიგნალის შესაქმნელად გამოიყენება ფერმენტები. ფერმენტები უკავშირდება გამოვლენის რეაგენტებს ფიქსირებული პროპორციებით, რათა მოხდეს ზუსტი რაოდენობრივი განსაზღვრა, რაც განმარტავს აგრეთვე სახელწოდებას "ფერმენტთან დაკავშირებული" იმუნოსორბენტი.
ვინაიდან ELISA- ს ანალიზი ტარდება მიკროტიტერულ ფირფიტებში / 96 ჭაბურღილის ფირფიტებში, იგი ცნობილია როგორც ფირფიტებზე დაფუძნებული ანალიზის ტექნიკა და გამოიყენება მაგ. In vitro კლინიკურ დიაგნოზში, კვლევაში, წამლის შემუშავებაში და ა.შ. ანტისხეულების, პეპტიდების, ცილების, გამოვლენისა და რაოდენობრივი განსაზღვრისათვის და ჰორმონები.
ELISA ტექნიკა ხშირად გამოიყენება როგორც დიაგნოსტიკური საშუალება მედიცინაში, ბიოტექნიკაში, მცენარეთა პათოლოგიაში და ასევე წარმოადგენს ხარისხის კონტროლის მნიშვნელოვან გაზომვას მრავალ ინდუსტრიაში.

ულტრაბგერითი ნიმუშის მომზადება ELISA- მდე

ELISA- ს ანალიზის ჩატარებამდე, ნიმუშების მომზადება მოითხოვს უჯრედების ლიზისის და უჯრედშიდა ცილების, დნმ-ის, რნმ-ის მოპოვებას და ა.შ. ულტრაბგერითი უჯრედების ლიზისის და ცილის იზოლაციის უპირატესობა არის მისი მაღალი ეფექტურობა, საიმედოობა და გამრავლება. ყველა ეს ფაქტორი მნიშვნელოვანია მაღალი ხარისხის დიაგნოსტიკისა და კვლევის შედეგების მისაღებად

წინასწარი ELISA უჯრედების ულტრაბგერითი ლიზისის პროტოკოლი

• უჯრედების კულტურებისთვის: ულტრაბგერითი უჯრედის ლიზისამდე, ცენტრიფუგა უჯრედები 5 წუთის განმავლობაში, 270 xg მიკროცენტრიფუგში. ზეწოლის ამოღება ასპირაციის გზით და უჯრედების ხელახლა შეჩერება RIPA ბუფერში 30 - 100 მკლ. შემდეგ, უჯრედის ნალექის ინკუბაცია ყინულზე 30 წუთის განმავლობაში.
• ახლა, უჯრედის ნიმუში მზად არის ულტრაბგერითი ლიზისისთვის:
  გამოიყენეთ გამოძიების ტიპის ულტრაბგერითი (მაგ.) Uf200 ः t S26d2 ზონდით) ან ულტრაბგერითი მრავალ სინჯის მოწყობილობა (მაგ. VialTweeter 10 ფლაკონის ერთდროული გაჟღენთვისთვის ან UIP400MPT მიკროტიტერის ფირფიტებისთვის / 96 ჭაბურღილის ფირფიტებისთვის) დამოკიდებულია ნიმუშების ოდენობაზე, რომელთა მომზადებაც გჭირდებათ.
  ცალკეული ნიმუშის გამოძიების ტიპის სონიკაციისთვის, უჯრედები მოათავსეთ 1.5 მლ მიკროცენტრიფუგის მილებში.
• ულტრაბგერითი მოწყობილობის ციფრულ მენიუში წინასწარ დააყენეთ ულტრაბგერითი ხანგრძლივობა, ენერგიის მთლიანი შეყვანა, ციკლის რეჟიმი და / ან ტემპერატურის შეზღუდვები. ეს უზრუნველყოფს მაღალ საიმედო შუამავალობას და განმეორებადობას.
• ჩადეთ სონოტროდი და ჩართეთ ულტრაბგერითი მოწყობილობა. ნაზად გადაიტანეთ ულტრაბგერითი ზონდის მიკრო წვერი ნიმუშის საშუალებით, რომ ნიმუში ერთგვაროვანი გახდეს.
  უჯრედების უმეტესობისთვის ულტრაბგერითი ლიზისი დასრულდება 10 წმ-ის გამახვილების 2 -4 ციკლის შემდეგ.
• სონიკაციის შემდეგ ამოიღეთ სონოტროდი ნიმუშიდან. ნიმუშები უნდა იყოს ინკუბაცია ყინულზე 5 წთ. შემდეგ, ცენტრიფუგა 10,000 xg– ზე 20 წთ ნარჩენების დასაგროვებლად. ზედმეტი ნივთიერებები გადაიტანეთ ახალ მიკროცენტრიფუგის მილში. აანალიზეთ ლეიბლები და შეინახეთ -20 ° C ტემპერატურაზე.
• ულტრაბგერითი სონოტროდის გაწმენდა შესაძლებელია მისი ალკოჰოლით ან სონიკით სათანადოდ წაშლით ალკოჰოლით სავსე ჭიქაში, მაგ. 70% ეთანოლით. ტიტანისგან დამზადებული ულტრაბგერითი ზონდები ავტოკლავირებულია.

ქსოვილის ჰომოგენატებისთვის:

• ჩამოიბანეთ ქსოვილი ცივი PBS- ით (0,01 მ, pH = 7,4), რომ ზედმეტი ჰემოლიზის სისხლი კარგად ამოიღონ.
• აწონეთ ქსოვილი (თირკმელი, გული, ფილტვები, ელენთა და ა.შ.) და მაკეციეთ იგი პატარა ნაჭრებად, რომლებიც ჰომოგენიზებულია PBS– ში. საჭირო PBS- ის მოცულობა დაკავშირებულია ქსოვილის წონასთან. როგორც წესი, 1 გ ქსოვილი მოითხოვს დაახლ. 9 მლ PBS. რეკომენდებულია PBS– ს პროტეაზას ინჰიბიტორის დამატება. (RIPA ან ჰიპოტონური ლიზის ბუფერი, რომელიც შეიცავს პროტეაზას და ფოსფატაზას ინჰიბიტორულ კოქტეილს, შეიძლება გამოყენებულ იქნას ალტერნატიულად.)
• ქსოვილის ზომიდან გამომდინარე, მოკლე მორევის მკურნალობა (დაახლ. 1-2 წთ. 15 წმ. იმპულსებში) შეიძლება სასარგებლო იყოს ქსოვილის წინასწარი მკურნალობისთვის.
• თქვენს ულტრაბგერით დამონტაჟებულია მიკრო წვერი, მაგ. S26d2. მოათავსეთ ნიმუში მილის ქსოვილი ყინულის აბაზანაში.
• გაასუფთავეთ ნიმუში ულტრაბგერითი საშუალებით, მაგ. UP200St (80% ამპლიტუდა) 1 წთ. პულსის რეჟიმში (15 წმ ჩართულია, 15 წმ პაუზა). ნიმუში შეინახეთ ყინულის აბაზანაში.
• შემდეგ ჰომოგენატების ცენტრიფუგა ხდება სპეციფიკური აუზების მისაღებად (ციტოზოლიური, ბირთვული, მიტოქონდრიული ან ლიზოსომული), რათა პროტეინი გამდიდრდეს ანალიზისთვის. ნიმუშის ცენტრიფუგით 5 წუთის განმავლობაში 5000 × გ-ზე, ხდება სუპერნატანის მიღება.

საიმედოობის დროს ტემპერატურის კონტროლი

ტემპერატურა მნიშვნელოვან პროცესზე ზემოქმედების ფაქტორია, რომელიც განსაკუთრებით მნიშვნელოვანია ბიოლოგიური ნიმუშების მკურნალობისთვის, მაგალითად, ცილების თერმული დეგრადაციის თავიდან ასაცილებლად. როგორც ნიმუშის მომზადების ყველა მექანიკური ტექნიკა, სონიფიკაცია ქმნის სითბოს. ამასთან, ნიმუშების ტემპერატურა კარგად კონტროლდება Hielscher Ultrasonics მოწყობილობების გამოყენებისას. ჩვენ წარმოგიდგენთ სხვადასხვა ვარიანტებს თქვენი ნიმუშების ტემპერატურის მონიტორინგისა და კონტროლისთვის, ხოლო მათი მომზადება ზონდის ტიპის ულტრაბგერითი ან VialTweeter– ით წინასწარ ანალიზურად.

1. ნიმუშის ტემპერატურის მონიტორინგი: ყველა Hielscher ციფრული ულტრაბგერითი პროცესორი აღჭურვილია ინტელექტუალური პროგრამითა და დამაკავშირებელი ტემპერატურის სენსორით. შეაერთეთ ტემპერატურის სენსორი ულტრაბგერით მოწყობილობაში (მაგ., Uf200 ः t, UP200St, VialTweeter, UIP400MTP) და ჩადეთ ტემპერატურის სენსორის წვერი ერთ-ერთ ნიმუშში. ციფრული ფერადი სენსორული ეკრანის საშუალებით, ულტრაბგერითი პროცესორის მენიუში შეგიძლიათ დააყენოთ ტემპერატურის სპეციფიკური დიაპაზონი თქვენი სინჯის გამაჯანსაღებისთვის. ულტრაბგერითი ავტომატურად შეჩერდება მაქსიმალური ტემპერატურის მიღწევისას და შეჩერდება მანამ, სანამ ნიმუშის ტემპერატურა დაყენებული ტემპერატურის ქვედა მნიშვნელობამდე არ შევა. შემდეგ სონიკაცია ავტომატურად იწყება. ეს ჭკვიანი თვისება ხელს უშლის სითბოს გამოწვეულ დეგრადაციას.
2. ულტრაბგერითი მრავალ სინჯის ერთეულთან დაკავშირებით VialTweeter, ტიტანის ბლოკი, რომელიც იკავებს სინჯის მილებს, შეიძლება წინასწარ გაცივდეს. დააყენეთ VialTweeter ბლოკი (მხოლოდ სონოტროდი ტრანსდუქტორის გარეშე!) მაცივარში ან საყინულეში, რათა ტიტანის ბლოკი წინასწარ გააციოთ, ნიმუშში ტემპერატურის მომატების გადადება ხდება. თუ შესაძლებელია, ნიმუში შეიძლება წინასწარ გაცივდეს.
3. გამოიყენეთ ყინულის აბაზანა ან მშრალი ყინული გამაგრილებლად გამაჟღერების დროს. განათავსეთ თქვენი სინჯის მილები სონიკაციის დროს ყინულის აბაზანაში. VialTweeter– ისთვის გამოიყენეთ არაღრმა უჯრა, რომელიც სავსეა მშრალი ყინულით და განათავსეთ VialTweeter მშრალ ყინულზე, რათა სითბო სწრაფად გაფანტოს.

მსოფლიოში მომხმარებლები იყენებენ Hielscher probe-ultrasonicators- ს, ასევე მრავალ ნიმუშის გამაძლიერებელ ერთეულებს VialTweeter- სა და UIP400MTP- ს ბიოლოგიურ, ბიოქიმიურ, სამედიცინო და კლინიკურ ლაბორატორიებში ყოველდღიური ნიმუშების მოსამზადებლად. Hielscher პროცესორების ინტელექტუალური პროგრამული უზრუნველყოფა და ტემპერატურის კონტროლი, ტემპერატურა საიმედოდ კონტროლდება და სითბოსგან გამოწვეული ნიმუშის დეგრადაციის თავიდან აცილება ხდება. ულტრაბგერითი ნიმუშის მომზადება Hielscher ულტრაბგერითი გადაწყვეტილებებით იძლევა საიმედო და განმეორებად შედეგებს!