პროტოკოლი SARS-CoV-2 კორონავირუსის ინაქტივაციისთვის გახმოვანებით

Hielscher VialTweeter არის უნიკალური ულტრაბგერითი მრავალნიმუშის მოსამზადებელი განყოფილება, რომელიც გამოიყენება SARS-COV-2 კორონავირუსის ინაქტივაციისთვის. VialTweeter საშუალებას იძლევა ერთდროულად მოამზადოს 10-მდე ნიმუშის ფლაკონი და ამით იდეალური ერთეულია ნიმუშის მასობრივი დამუშავებისთვის.

SARS-CoV-2 კორონავირუსის ინაქტივაცია VialTweeter-ით

ფიქსატორის მოხსნის შემდეგ, მონოშრეები სამჯერ გაირეცხა ფოსფატ-ბუფერული ფიზიოლოგიური ხსნარით (PBS), სანამ უჯრედები 1 მლ MEM/5% FBS-ში გადაიჭრება და ხმოვანი (3 × 10 წამი, 10 წამი გამორთვა 100% სიმძლავრეზე და ამპლიტუდაზე) Hielscher-ის გამოყენებით. ულტრაბგერითი პროცესორი UP200St VialTweeter-ით დანართი. სუპერნატანტები გაიწმინდა ცენტრიფუგირებით 3000 × გ 10 წუთის განმავლობაში. წაიკითხეთ სრული პროტოკოლი აქ SARS-CoV-2 კორონავირუსის ინაქტივაციისთვის Welch et al. (2020) ქვემოთ:

უჯრედები და ვირუსი

Vero E6 cells (Vero C1008; ATCC CRL-1586) were cultured in modified Eagle’s minimum essential medium (MEM) supplemented with 10% (v/v) fetal calf serum (FCS). Virus used was SARS-CoV-2 strain hCOV-19/England/2/2020, isolated by PHE from the first patient cluster in the UK on 29/01/2020. This virus was obtained at passage 1 and used for inactivation studies at passage 2 or 3.
რეაგენტებისა და ქიმიკატების შესახებ, რომლებიც გამოიყენება SARS-CoV-2-ის ინაქტივაციისთვის, ასევე რეაგენტის ციტოტოქსიკურობის მოსაშორებლად, გთხოვთ, იხილოთ Welch et al-ის სამეცნიერო მოხსენება. (2020).

ვირუსის ინაქტივაცია სარეცხი საშუალებებით – SARS-CoV-2 Coronavirus Inactivation Protocol by Welch et al. 2020 წელი

SARS-CoV-2 ინაქტივაცია

კომერციული პროდუქტებისთვის, ვირუსული პრეპარატები (ქსოვილის კულტურის სითხე, ტიტრები 1 × 10-დან⁶ 1 × 10-მდე⁸ PFU/ml) were treated in triplicate with reagents at concentrations and for contact times recommended in the manufacturers’ instructions for use, where available, or for concentrations and times specifically requested by testing laboratories. Where a range of concentrations was given by the manufacturer, the lowest ratio of product to sample was tested (i.e. lowest recommended concentration of test product). Specimen transport tube reagents were tested using a ratio of one volume of tissue culture fluid to ten volumes of reagent, unless a volume ratio of sample fluid to reagent was specified by the manufacturer. Detergents, fixatives and solvents were tested at the indicated concentrations for the indicated times. All inactivation steps were performed at ambient room temperature (18 – 25°C). For testing of alternative sample types, virus was spiked into the indicated sample matrix at a ratio of 1:9, then treated with test reagents as above. All experiments included triplicate control mock-treated samples with an equivalent volume of PBS in place of test reagent. Immediately following the required contact time, 1mL of treated sample was processed using the appropriately selected filtration matrix. Reagent removal for inactivation testing was carried out in a larger spin column format using Pierce 4mL Detergent Removal Spin Columns (Thermo Fisher), or by filling empty Pierce 10mL capacity centrifuge columns (Thermo Fisher) with SM2 Bio-Beads, Sephacryl S-400HR or Sephadex LH-20 to give 4mL packed beads/resin. For purification using Amicon filters, 2 × 500μl samples were purified using two centrifugal filters by the method previously described, then pooled together. For formaldehyde and formaldehyde with glutaraldehyde removal, one filter was used with 1× 500μl sample volume, resuspended after processing in 500μl PBS, and added to 400ul MEM/5% FBS. For inactivation of infected მონოფენები, 12,5 სმ² Vero E6 უჯრედების კოლბები (2.5 × 10⁶ უჯრედები/კოლბა 2.5 მლ MEM/5% FBS) დაინფიცირდა MOI 0.001-ზე და ინკუბირებული იყო 37°C/5% CO-ზე₂ 24 საათის განმავლობაში. სუპერნატანტი ამოღებულია და უჯრედები ფიქსირდება 5 მლ ფორმალდეჰიდის, ან ფორმალდეჰიდისა და გლუტარალდეჰიდის გამოყენებით ოთახის ტემპერატურაზე 15 ან 60 წუთის განმავლობაში. ფიქსატორი ამოღებულ იქნა და მონოშრეები სამჯერ გაირეცხა PBS-ით, სანამ უჯრედები 1 მლ MEM/5% FBS-ში გადაიჭრება და ხმოვანი (3 × 10 წამი ჩართული, 10 წამი გამორთულია 100% სიმძლავრეზე და ამპლიტუდაზე) UP200St-ის გამოყენებით VialTweeter დანართით (Hielscher Ultrasound). ტექნოლოგია). სუპერნატანტები გაიწმინდა ცენტრიფუგირებით 3000 × გ 10 წუთის განმავლობაში.

რეაგენტის დეტალები, რომელიც გამოიყენება SARS-CoV-2 კორონავირუსის ინაქტივაციისთვის ულტრაბგერითი VialTweeter-ით Welch et al-ის პროტოკოლის მიხედვით. 2020 წელი

სრული პროტოკოლი Hielscher VialTweeter-ის გამოყენების ჩათვლით შეგიძლიათ იხილოთ აქ:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

დახვეწილი ულტრაბგერითი გამანადგურებლები და უჯრედების დამრღვევები

მრავალნიმუშიანი ულტრაბგერითი VialTweeter არის მხოლოდ ერთი მრავალი ულტრაბგერითი ხსნარი ნიმუშის მოსამზადებლად ბიოლოგიურ, ბიოქიმიურ და კლინიკურ ლაბორატორიებში. Hielscher Ultrasonics გთავაზობთ იდეალურ ულტრაბგერით დისემბრატორს თქვენი გამოყენებისთვის, მაგ.: უჯრედების ლიზისი, უჯრედის ექსტრაქცია, ქსოვილის ჰომოგენიზაცია, ლიზატის ხსნადიზაცია, დაშლა, ნიმუშის დეგაზირება და ა.შ.
შეგვატყობინეთ რამდენი ნიმუშის დამუშავება გჭირდებათ საათში და დღეში, თუ გირჩევნიათ პირდაპირი თუ არაპირდაპირი სონიკა და რა არის ულტრაბგერითი ნიმუშის დამუშავების მიზანი. ჩვენ შემოგთავაზებთ ყველაზე შესაფერის ულტრაბგერით მოწყობილობას თქვენი ყოველდღიური მუშაობისთვის!
Hielscher Ultrasonics’ digital ultrasonic processors are equipped with smart software, automatic data recording, easy pre-setting options for temperature control, sonication duration, cycle/pulse mode as well as sample illumination and browser remote control. We strive to make our ultrasonic devices as smart as possible so that your research and work routine becomes as convenient and successful as possible.
დააწკაპუნეთ აქ, რომ იპოვოთ მეტი აპლიკაცია VialTweeter-ით ულტრაბგერითი ნიმუშის მომზადების პროტოკოლების ჩათვლით!