პროტოკოლი SARS-CoV-2 კორონავირუსის ინაქტივაციისთვის გახმოვანებით

Hielscher VialTweeter არის უნიკალური ულტრაბგერითი მრავალნიმუშის მოსამზადებელი განყოფილება, რომელიც გამოიყენება SARS-COV-2 კორონავირუსის ინაქტივაციისთვის. VialTweeter საშუალებას იძლევა ერთდროულად მოამზადოს 10-მდე ნიმუშის ფლაკონი და ამით იდეალური ერთეულია ნიმუშის მასობრივი დამუშავებისთვის.

SARS-CoV-2 კორონავირუსის ინაქტივაცია VialTweeter-ით

ფიქსატორის მოხსნის შემდეგ, მონოშრეები სამჯერ გაირეცხა ფოსფატ-ბუფერული ფიზიოლოგიური ხსნარით (PBS), სანამ უჯრედები 1 მლ MEM/5% FBS-ში გადაიჭრება და ხმოვანი (3 × 10 წამი, 10 წამი გამორთვა 100% სიმძლავრეზე და ამპლიტუდაზე) Hielscher-ის გამოყენებით. ულტრაბგერითი პროცესორი UP200St VialTweeter-ით დანართი. სუპერნატანტები გაიწმინდა ცენტრიფუგირებით 3000 × გ 10 წუთის განმავლობაში. წაიკითხეთ სრული პროტოკოლი აქ SARS-CoV-2 კორონავირუსის ინაქტივაციისთვის Welch et al. (2020) ქვემოთ:

უჯრედები და ვირუსი

Vero E6 უჯრედები (Vero C1008; ATCC CRL-1586) კულტივირებული იყო Eagle-ის მოდიფიცირებულ მინიმალურ არსებით გარემოში (MEM), რომელსაც დაემატა 10% (v/v) ნაყოფის ხბოს შრატი (FCS). გამოყენებული ვირუსი იყო SARS-CoV-2 შტამი hCOV-19/ინგლისი/2/2020, იზოლირებული PHE-ს მიერ ბრიტანეთში პირველი პაციენტთა კლასტერიდან 29/01/2020. ეს ვირუსი მიღებულ იქნა 1 პასაჟზე და გამოიყენებოდა ინაქტივაციის კვლევებისთვის მე-2 ან მე-3 პასაჟზე.
რეაგენტებისა და ქიმიკატების შესახებ, რომლებიც გამოიყენება SARS-CoV-2-ის ინაქტივაციისთვის, ასევე რეაგენტის ციტოტოქსიკურობის მოსაშორებლად, გთხოვთ, იხილოთ Welch et al-ის სამეცნიერო მოხსენება. (2020).

ვირუსის ინაქტივაცია სარეცხი საშუალებებით – SARS-CoV-2 Coronavirus Inactivation Protocol by Welch et al. 2020 წელი

SARS-CoV-2 ინაქტივაცია

კომერციული პროდუქტებისთვის, ვირუსული პრეპარატები (ქსოვილის კულტურის სითხე, ტიტრები 1 × 10-დან⁶ 1 × 10-მდე⁸ PFU/ml) დამუშავდა სამჯერ რეაგენტებით კონცენტრაციით და კონტაქტის დროისთვის, რომლებიც რეკომენდებულია მწარმოებლის გამოყენების ინსტრუქციებში, სადაც ეს შესაძლებელია, ან კონცენტრაციებისა და დროებისთვის, რომლებიც სპეციალურად მოთხოვნილი იყო ტესტირების ლაბორატორიების მიერ. სადაც მწარმოებლის მიერ იყო მოცემული კონცენტრაციების დიაპაზონი, შემოწმებული იყო პროდუქტის ყველაზე დაბალი თანაფარდობა ნიმუშთან (ანუ ტესტის პროდუქტის ყველაზე დაბალი რეკომენდებული კონცენტრაცია). ნიმუშის სატრანსპორტო მილის რეაგენტები შემოწმებული იყო ქსოვილის კულტურის სითხის ერთი მოცულობის თანაფარდობის გამოყენებით რეაგენტის ათ მოცულობასთან, გარდა იმ შემთხვევისა, როდესაც მწარმოებლის მიერ არ იყო მითითებული ნიმუშის სითხის მოცულობის თანაფარდობა რეაგენტთან. სარეცხი საშუალებები, ფიქსატორები და გამხსნელები ტესტირებული იყო მითითებულ კონცენტრაციებზე მითითებულ დროში. ინაქტივაციის ყველა ნაბიჯი შესრულდა გარემოს ოთახის ტემპერატურაზე (18 - 25°C). ალტერნატიული ნიმუშების ტიპების შესამოწმებლად, ვირუსი შეიყვანეს მითითებულ ნიმუშის მატრიცაში 1:9 თანაფარდობით, შემდეგ დამუშავდა სატესტო რეაგენტებით, როგორც ზემოთ. ყველა ექსპერიმენტი მოიცავდა სამჯერ საკონტროლო იმიტირებულ ნიმუშებს PBS-ის ექვივალენტური მოცულობით სატესტო რეაგენტის ნაცვლად. საჭირო კონტაქტის დროის შემდეგ დაუყოვნებლივ, დამუშავებული ნიმუშის 1 მლ დამუშავდა სათანადოდ შერჩეული ფილტრაციის მატრიცის გამოყენებით. რეაგენტის ამოღება ინაქტივაციის ტესტირებისთვის განხორციელდა უფრო დიდი დატრიალების სვეტის ფორმატში Pierce 4 მლ სარეცხი საშუალებების მოცილების ტრიალების სვეტების გამოყენებით (თერმო ფიშერი), ან Pierce 10 მლ ტევადობის ცენტრიფუგის ცარიელი სვეტების (თერმო ფიშერი) შევსებით SM2 Bio-Beads, Sephacryl S-40. Sephadex LH-20 4 მლ შეფუთული მძივების/ფისის მისაცემად. Amicon-ის ფილტრების გამოყენებით გასაწმენდად, 2 × 500 μl ნიმუშები გაიწმინდა ორი ცენტრიდანული ფილტრის გამოყენებით ადრე აღწერილი მეთოდით, შემდეგ გაერთიანდა ერთად. ფორმალდეჰიდისა და გლუტარალდეჰიდის მოცილებით ფორმალდეჰიდისთვის გამოყენებული იყო ერთი ფილტრი 1×500μl ნიმუშის მოცულობით, ხელახლა შეჩერდა 500μl PBS-ში დამუშავების შემდეგ და დაემატა 400 მულ MEM/5% FBS. ინფიცირებულის ინაქტივაციისთვის მონოფენები, 12,5 სმ² Vero E6 უჯრედების კოლბები (2.5 × 10⁶ უჯრედები/კოლბა 2.5 მლ MEM/5% FBS) დაინფიცირდა MOI 0.001-ზე და ინკუბირებული იყო 37°C/5% CO-ზე₂ 24 საათის განმავლობაში. სუპერნატანტი ამოღებულია და უჯრედები ფიქსირდება 5 მლ ფორმალდეჰიდის, ან ფორმალდეჰიდისა და გლუტარალდეჰიდის გამოყენებით ოთახის ტემპერატურაზე 15 ან 60 წუთის განმავლობაში. ფიქსატორი ამოღებულ იქნა და მონოშრეები სამჯერ გაირეცხა PBS-ით, სანამ უჯრედები 1 მლ MEM/5% FBS-ში გადაიჭრება და ხმოვანი (3 × 10 წამი ჩართული, 10 წამი გამორთულია 100% სიმძლავრეზე და ამპლიტუდაზე) UP200St-ის გამოყენებით VialTweeter დანართით (Hielscher Ultrasound). ტექნოლოგია). სუპერნატანტები გაიწმინდა ცენტრიფუგირებით 3000 × გ 10 წუთის განმავლობაში.

რეაგენტის დეტალები, რომელიც გამოიყენება SARS-CoV-2 კორონავირუსის ინაქტივაციისთვის ულტრაბგერითი VialTweeter-ით Welch et al-ის პროტოკოლის მიხედვით. 2020 წელი

სრული პროტოკოლი Hielscher VialTweeter-ის გამოყენების ჩათვლით შეგიძლიათ იხილოთ აქ:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

დახვეწილი ულტრაბგერითი გამანადგურებლები და უჯრედების დამრღვევები

მრავალნიმუშიანი ულტრაბგერითი VialTweeter არის მხოლოდ ერთი მრავალი ულტრაბგერითი ხსნარი ნიმუშის მოსამზადებლად ბიოლოგიურ, ბიოქიმიურ და კლინიკურ ლაბორატორიებში. Hielscher Ultrasonics გთავაზობთ იდეალურ ულტრაბგერით დისემბრატორს თქვენი გამოყენებისთვის, მაგ.: უჯრედების ლიზისი, უჯრედის ექსტრაქცია, ქსოვილის ჰომოგენიზაცია, ლიზატის ხსნადიზაცია, დაშლა, ნიმუშის დეგაზირება და ა.შ.
შეგვატყობინეთ რამდენი ნიმუშის დამუშავება გჭირდებათ საათში და დღეში, თუ გირჩევნიათ პირდაპირი თუ არაპირდაპირი სონიკა და რა არის ულტრაბგერითი ნიმუშის დამუშავების მიზანი. ჩვენ შემოგთავაზებთ ყველაზე შესაფერის ულტრაბგერით მოწყობილობას თქვენი ყოველდღიური მუშაობისთვის!
Hielscher Ultrasonics-ის ციფრული ულტრაბგერითი პროცესორები აღჭურვილია ჭკვიანი პროგრამული უზრუნველყოფით, მონაცემთა ავტომატური ჩაწერით, ტემპერატურის კონტროლისთვის წინასწარ დაყენების მარტივი ვარიანტებით, ჟღერადობის ხანგრძლივობით, ციკლის/პულსის რეჟიმით, ასევე ნიმუშის განათებით და ბრაუზერის დისტანციური მართვის პულტით. ჩვენ ვცდილობთ გავხადოთ ჩვენი ულტრაბგერითი მოწყობილობები რაც შეიძლება ჭკვიანი, რათა თქვენი კვლევისა და სამუშაო რუტინა მაქსიმალურად მოსახერხებელი და წარმატებული გახდეს.
დააწკაპუნეთ აქ, რომ იპოვოთ მეტი აპლიკაცია VialTweeter-ით ულტრაბგერითი ნიმუშის მომზადების პროტოკოლების ჩათვლით!