Hielscher ულტრაბგერითი ტექნოლოგია

ულტრასონიკაციით BL21 უჯრედების უჯრედების ლიზირება

BL21 უჯრედები არის E. coli- ის შტამი, რომელიც ფართოდ გამოიყენება სამეცნიერო ლაბორატორიებში, ბიოტექნოლოგიასა და სამრეწველო წარმოებაში, რადგან მათ აქვთ უნარი გამოხატონ ცილები მაღალეფექტურად. ულტრაბგერითი უჯრედების მოშლა, ლიზი და ცილის მოპოვება არის BL21 უჯრედების უჯრედული ინტერიერიდან გამოყოფილი და შეგროვებული ცილების იზოლირებისა და შეგროვების საერთო მეთოდი. ულტრასონიკაცია არღვევს უჯრედს სრულად და ათავისუფლებს ყველა გამომწვევ პროტეინს, რაც უზრუნველყოფს ცილის 100% -ს.

BL21 უჯრედები ცილების გამოხატვისთვის

E. coli bacteria such as BL21 cells are commonly lysed by ultrasonication in order to release expressed proteins, such as recombinant proteinsBL21 უჯრედი წარმოადგენს ქიმიურად კომპეტენტურ E. coli ბაქტერიულ შტამს, რომელიც შესაფერისია ტრანსფორმაციისა და მაღალი დონის ცილების გამოხატვისთვის T7 RNA პოლიმერაზას- IPTG ინდუქციური სისტემის გამოყენებით. BL21 უჯრედები იძლევა მაღალი ეფექტურობის ცილის გამოხატვას ნებისმიერი გენის შესახებ, რომელიც იმყოფება T7 პრომოტორის კონტროლის ქვეშ. E. coli შტამი BL21 (DE3) არის T7 RNA პოლიმერაზას დაფუძნებული ცილების წარმოქმნის შტამი, რომელიც შერწყმულია T7 პრომოტერზე დაფუძნებული ექსპრესიული ვექტორებით და ფართოდ გამოიყენება ლაბორატორიებსა და ინდუსტრიაში, რეკომბინანტული ცილების წარმოებისთვის. BL21 (DE3) - ში, რეკომბინანტული ცილის მაკოდირებელი გენის გამოხატვა ტრანსკომირდება ქრომოსომულად დაშიფრული T7 RNA პოლიმერაზით (T7 RNAP), რომელიც ტრანსლირდება რვაჯერ უფრო სწრაფად, ვიდრე ჩვეულებრივი E. coli RNAP. ეს ახდენს შტამის BL21 (DE3) მაღალ ეფექტურობას და აქცევს მას ერთ – ერთ ყველაზე სასურველ ცილის გამომხატველ უჯრედულ სისტემად.

პროტოკოლი ულტრაბგერითი ლიზისისა და ცილების მოპოვებისთვის BL21 უჯრედებიდან

BL21 უჯრედების უჯრედების ლიზირება ძირითადად ხორციელდება ულტრასონიკაციის გამოყენებით ნატრიუმ ლაუროილ სარკოზინატთან (აგრეთვე ცნობილი როგორც სარკოზილი) კომბინაციაში, როგორც ლიზის ბუფერული. ულტრაბგერითი უჯრედის დარღვევის და ცილის მოპოვების უპირატესობები მდგომარეობს ულტრაბგერითი მასალების საიმედოობაში, გამრავლებადობაში, ასევე მარტივ, უსაფრთხო და სწრაფ მუშაობაში. ქვემოთ მოცემული ოქმი იძლევა ეტაპობრივად მიმართულებას ულტრაბგერითი BL21 უჯრედის ლიზისისთვის:

გამოკვლევის ტიპის ინსონენტი UP200St for lysis

ულტრაბგერითი უჯრედის დამშლელი UP200St მიკრო წვერით S26d2- ით ლიზისისა და ცილის მოპოვებისთვის

ინფორმაციის მოთხოვნა




გაითვალისწინეთ ჩვენი კონფიდენციალურობის პოლიტიკა.


  • ჩაპერონის ცილების მოსაცილებლად BL21 ბაქტერიული მარცვლები გადაიტანეს 50 მლ ყინულის ცივი Sodium Tris-EDTA (STE) ბუფერში (შედგება 10 მმ Tris-HCL, pH 8.0, 1 მმ EDTA, 150 მმ NaCl და 100 მმ PMSF).
  • ემატება 500 ლ ლიზოციმი (10 მგ / მლ) და უჯრედები ინკუბავენ ყინულზე 15 წთ.
  • ამის შემდეგ ემატება 500 ულტრა DTT და 7 მლ სარკოზილი (10% (ც / ვ), რომელიც დამზადებულია STE ბუფერში).
  • აუცილებელია, რომ ყველა გამწმენდი ბუფერი დაცული იყოს ყინულივით ცივი და მუდმივად შენარჩუნდეს ნიმუშები ყინულზე. გაწმენდის ყველა ეტაპი უნდა განხორციელდეს ცივ ოთახში, თუ ეს შესაძლებელია.
  • VialTweeter at the ultrasonic processor UP200ST

  • ულტრაბგერითი ლიზისის და ცილის მოპოვების მიზნით, ნიმუშები გაჟღენთილია VialTweeter MultiSample ულტრაბგერითი 4 x 30 წმ-ზე 100% ამპლიტუდაზე და თითოეული მაჟორიტარიდან 2 წთ ინტერვალით. გარდა ამისა, გამოძიების ტიპის ულტრაბგერითი ჰომოგენიზატორი მიკრო წვერით, მაგ., Uf200 ः t შეიძლება გამოყენებულ იქნას S26d2 (3 x 30 წმ, 2 წთ. პაუზა ულტრაბგერით ციკლებს შორის, 80% ამპლიტუდა).
  • შემდგომი გასუფთავების ეტაპებისთვის ნიმუშები უნდა ინახებოდეს ყინულზე ან სხვაგვარად ინახებოდეს -80 ° C ტემპერატურაზე შემდგომი დამუშავებამდე.

ულტრაბგერითი ლიზი ზუსტი ტემპერატურის კონტროლის ქვეშ

ბიოლოგიური ნიმუშების დამუშავებისას გადამწყვეტი მნიშვნელობა აქვს ტემპერატურის ზუსტ და საიმედო კონტროლს. მაღალი ტემპერატურა იწვევს თერმულად გამოწვეულ ცილის დეგრადაციას ნიმუშებში.
როგორც ნიმუშის მომზადების ყველა მექანიკური ტექნიკა, სონიფიკაცია ქმნის სითბოს. ამასთან, VialTweeter– ის გამოყენებისას ნიმუშების ტემპერატურის კარგად კონტროლი შეიძლება. ჩვენ წარმოგიდგენთ სხვადასხვა ვარიანტებს თქვენი ნიმუშების ტემპერატურის მონიტორინგისა და კონტროლისთვის, ხოლო ამზადებთ მათ VialTweeter და VialPress ანალიზისთვის.

  1. ნიმუშის ტემპერატურის მონიტორინგი: ულტრაბგერითი პროცესორი UP200St, რომელიც მართავს VialTweeter- ს, აღჭურვილია ინტელექტუალური პროგრამითა და დანამატიანი ტემპერატურის სენსორით. შეაერთეთ ტემპერატურის სენსორი UP200St– ში და ჩადეთ ტემპერატურის სენსორის წვერი ერთ – ერთ ნიმუშში. ციფრული ფერადი სენსორული ეკრანის საშუალებით, UP200St- ის მენიუში შეგიძლიათ დააყენოთ ტემპერატურის სპეციფიკური დიაპაზონი თქვენი სინჯის გაჟონვისთვის. ულტრაბგერითი ავტომატურად შეჩერდება მაქსიმალური ტემპერატურის მიღწევისას და შეჩერდება მანამ, სანამ ნიმუშის ტემპერატურა დაყენებული ტემპერატურის ქვედა მნიშვნელობამდე არ შევა. შემდეგ სონიკაცია ავტომატურად იწყება. ეს ჭკვიანი თვისება ხელს უშლის სითბოს გამოწვეულ დეგრადაციას.
  2. VialTweeter ბლოკის წინასწარ გაგრილება შესაძლებელია. დააყენეთ VialTweeter ბლოკი (მხოლოდ სონოტროდი ტრანსდუქტორის გარეშე!) მაცივარში ან საყინულეში, რათა ტიტანის ბლოკი წინასწარ გააციოთ, ნიმუშში ტემპერატურის მომატების გადადება ხდება. თუ შესაძლებელია, ნიმუში შეიძლება წინასწარ გაცივდეს.
  3. გამოიყენეთ მშრალი ყინული გამაგრილებლად გაჟღენთილობის დროს. გამოიყენეთ არაღრმა უჯრა, რომელიც სავსეა მშრალი ყინულით და განათავსეთ VialTweeter ყინულზე ისე, რომ სითბო სწრაფად გაფანტოს.

მსოფლიოში მომხმარებლები იყენებენ VialTweeter- ს და VialPress- ს ყოველდღიური ნიმუშის მოსამზადებლად ბიოლოგიურ, ბიოქიმიურ, სამედიცინო და კლინიკურ ლაბორატორიებში. ინტელექტუალური პროგრამული უზრუნველყოფა და UP200St პროცესორის ტემპერატურის კონტროლი, ტემპერატურა საიმედოდ კონტროლდება და თავიდან აცილება ხდება სითბოსგან გამოწვეული სინჯის დეგრადაცია. ულტრაბგერითი ნიმუშის მომზადება VialTweeter- ით და VialPress- ით უზრუნველყოფს საიმედო და განმეორებად შედეგებს!

იპოვეთ ოპტიმალური ულტრაბგერითი გამშლელი თქვენი Lysis აპლიკაციისთვის

Hielscher's industrial processors of the hdT series can be comfortable and user-friendly operated via browser remote control.Hielscher Ultrasonics არის დიდი ხნის განმავლობაში გამოცდილი მწარმოებლის მაღალი ხარისხის ულტრაბგერითი უჯრედის დამშლელებისა და ჰომოგენიზატორების ლაბორატორიებისთვის, სკამებისა და სამრეწველო მასშტაბის სისტემებისთვის. თქვენი ბაქტერიული უჯრედების კულტურის ზომა, თქვენი კვლევის ან წარმოების მიზანი და უჯრედის დამუშავება საათში ან დღეში არის მნიშვნელოვანი ფაქტორები, რომ იპოვოთ ულტრაბგერითი უჯრედის სწორი დარღვევა თქვენი გამოყენებისათვის.
Hielscher Ultrasonics გთავაზობთ მრავალფეროვან გადაწყვეტილებას მრავალპროფილიანი სინდრომის ერთდროულად გამჟღავნებისათვის (10 ფლაკონი VialTweeter– ით) და მასობრივი ნიმუშებისთვის (მაგ., მიკროტიტერის ფირფიტები / ELISA ფირფიტები UIP400MTP– ით), ასევე კლასიკური გამოძიების ტიპის ლაბორატორიული ულტრაბგერითი ენერგიის დონე 50-დან 400 ვატამდე სრულად ინდუსტრიული ულტრაბგერითი პროცესორებით 16000 ვატამდე ერთეულზე კომერციული უჯრედების მოშლისა და ცილების მოპოვებისთვის დიდი წარმოებისათვის. ყველა Hielscher ულტრაბგერითი აგებულია 24/7/365 ოპერაციისთვის სრული დატვირთვით. სიმტკიცე და საიმედოობა ჩვენი ულტრაბგერითი მოწყობილობების ძირითადი მახასიათებელია.
ყველა ციფრული ულტრაბგერითი ჰომოგენიზატორი აღჭურვილია ჭკვიანი პროგრამით, ფერადი სენსორული დისპლეით და მონაცემთა ავტომატური პროტოკოლირებით, რომლებიც ულტრაბგერითი მოწყობილობას ლაბორატორიულ და საწარმოო საშუალებებში მოსახერხებელ სამუშაო იარაღად აქცევს.
გვაცნობეთ, რა სახის უჯრედები, რა მოცულობით, რა სიხშირით და რა სამიზნე გაქვთ თქვენი ბიოლოგიური ნიმუშების დამუშავება. ჩვენ გირჩევთ ულტრაბგერითი უჯრედის ყველაზე ხელსაყრელ პროცესს თქვენი მოთხოვნების შესაბამისად.

ქვემოთ მოყვანილ ცხრილში მოცემულია ჩვენი ულტრაბგერითი სისტემების სავარაუდო დამუშავების მოცულობა კომპაქტური ხელის ჰომოგენიზატორებიდან და MultiSample ულტრაბგერითიდან დამთავრებული ულტრაბგერითი პროცესორებით კომერციული პროგრამებით:

Batch მოცულობა დინების სიჩქარე რეკომენდირებული მოწყობილობები
96 ჭაბურღილი / მიკროტიტერის ფირფიტები na UIP400MTP
10 ფლაკონი 0.5-დან 1.5 მლ-მდე na VialTweeter ზე UP200St
0.01-დან 250 მლ-მდე 5-დან 100 მლ / წთ UP50H
0.01-დან 500 მლ-მდე 10 დან 200 მლ / წთ UP100H
10 დან 2000 მლ 20 დან 400 მლ / წთ Uf200 ः t, UP400St
01-დან 20 ლ-მდე 02-დან 4 ლ / წთ UIP2000hdT
10-დან 100 ლ 2-დან 10 ლ / წთ UIP4000hdT
na 10-დან 100 ლ / წთ UIP16000
na უფრო დიდი კასეტური UIP16000

დაგვიკავშირდით! / გვკითხე ჩვენ!

სთხოვეთ დამატებითი ინფორმაციის მისაღებად

გთხოვთ, გამოიყენოთ ქვემოთ მოცემული ფორმა, რომ მოითხოვოთ დამატებითი ინფორმაცია ულტრაბგერითი პროცესორების, აპლიკაციების და ფასის შესახებ. მოხარული ვიქნებით, რომ ჩვენთან ერთად ვიმსჯელოთ თქვენს პროცესზე და შემოგთავაზოთ ულტრაბგერითი სისტემა, რომელიც აკმაყოფილებს თქვენს მოთხოვნებს!









გთხოვთ გაითვალისწინოთ ჩვენი კონფიდენციალურობის პოლიტიკა.


Ultrasonicator UP200Ht with microtip S26d2 for ultrasonic lysis of biological samples

ულტრაბგერითი Uf200 ः t 2 მმ მიკროტიპით S26d2 მცირე ზომის ნიმუშების გამაგრებისთვის

ლიტერატურა / ცნობები



ფაქტები Worth Knowing

ეშერიხია კოლის ბაქტერიები

Escherichia coli არის ბაქტერიების ტიპი, რომელიც არ არის სპორების წარმომქმნელი, გრამუარყოფითი და ხასიათდება სწორი ჯოხის ფორმით. E.coli ბაქტერიები იმყოფება გარემოში, საკვებ პროდუქტებსა და ადამიანისა და ცხოველების ნაწლავებში. E. coli, როგორც წესი, მოძრავია პერიტრიკული ფლაგელის გამოყენებით, მაგრამ არსებობს არამამოძრავებელი ტიპებიც. E.coli ე.წ ფაკულტატურად ანაერობული ქიმიორგანოტროპული ორგანიზმებია, რაც ნიშნავს, რომ მათ შეუძლიათ როგორც რესპირატორული, ისე დუღილის მეტაბოლიზმი. E.coli– ს ტიპების უმეტესობა კეთილთვისებიანია და ასრულებს სასარგებლო ფუნქციებს ორგანიზმში, მაგ: ახშობს მავნე ბაქტერიული სახეობების ზრდას, სინთეზირებს ვიტამინებს და ა.შ.
ეშერიხია კოლის ბაქტერიების უჯრედები, ე.წ. B ტიპის, წარმოადგენს E.coli შტამების სპეციალურ კატეგორიას, რომლებიც ფართოდ გამოიყენება კვლევის დროს ისეთი მექანიზმების შესასწავლად, როგორიცაა ბაქტერიოფაგების მგრძნობელობა ან შეზღუდვის მოდიფიკაციის სისტემები. გარდა ამისა, E.coli ბაქტერიები ფასდება, როგორც საიმედო სამუშაო ძალის ბიოტექნოლოგიისა და სიცოცხლის მეცნიერების ლაბორატორიებში ცილების გამოხატვისთვის. მაგალითად, E.coli გამოიყენება სამრეწველო მასშტაბით ისეთი ნაერთების, როგორიცაა ცილები და ოლიგოსაქარიდები სინთეზისთვის. სპეციფიკური მახასიათებლების გამო, როგორიცაა პროტეაზას დეფიციტი, აცეტატის დაბალი წარმოება გლუკოზის მაღალ დონეზე და გაძლიერებული გამტარობა, E. coli B უჯრედები ის ყველაზე ხშირად იყენებენ მასპინძელ უჯრედებს გენმოდიფიცირებული ცილების წარმოებისთვის.

რეკომბინანტული ცილა

რეკომბინანტული ცილები (rProt) მნიშვნელოვან მნიშვნელობას იძენს მრავალფეროვან ტოტებში, მათ შორის ქიმიური წარმოების, ფარმაცევტული, კოსმეტიკური, ადამიანისა და ცხოველების მედიცინაში, სოფლის მეურნეობაში, საკვებ პროდუქტებში, ასევე ნარჩენების დამუშავების ინდუსტრიებში.
რეკომბინანტული ცილის წარმოება მოითხოვს ექსპრესიული სისტემის გამოყენებას. როგორც კომბინირებული დნმ-ის წარმოქმნის უჯრედული სისტემები, შეიძლება გამოყენებულ იქნას როგორც პროკარიოტული, ასევე ეუკარიოტული უჯრედები. მიუხედავად იმისა, რომ ბაქტერიული უჯრედები ყველაზე ფართოდ გამოიყენება ცილის გამოხატვისთვის, ისეთი ფაქტორების გამო, როგორიცაა დაბალი ღირებულება, მარტივი მასშტაბურობა და მარტივი გარემო პირობები, ძუძუმწოვრების, საფუარის, წყალმცენარეების, მწერების და უჯრედისგან თავისუფალი სისტემები დადგენილია ალტერნატივად. ცილის ტიპი, ფუნქციური აქტივობა და ასევე გამოხატული ცილის საჭირო მოსავლიანობა გავლენას ახდენს უჯრედული სისტემის შერჩევაზე, რომელიც გამოიყენება ცილების გამოხატვისთვის.
რეკომბინანტული ცილის გამოსახატავად, კონკრეტული უჯრედი უნდა გადაინფიცირდეს დნმ-ვექტორით, რომელიც შეიცავს რეკომბინანტული დნმ-ის შაბლონს. შემდეგ ხდება კულტივირება შაბლონით გადასინჯული უჯრედების. უჯრედული მექანიზმის შედეგად, უჯრედები ტრანსკრიბირებენ და თარგმნიან საინტერესო ცილას და ამით წარმოქმნიან მიზნობრივ ცილას.
როგორც გამოხატული ცილები ხვდება უჯრედულ მატრიქსში, უჯრედისი უნდა მოხდეს ლიზიზირება (დარღვევა და გატეხვა) ცილების გასათავისუფლებლად. შემდგომი გამწმენდის ეტაპზე ცილა გამოიყოფა და იწმინდება.
მკურნალობის დროს გამოყენებული პირველი რეკომბინანტული ცილა იყო რეკომბინანტული ადამიანის ინსულინი 1982 წელს. დღესდღეობით, მსოფლიოში 170 – ზე მეტი სახის რეკომბინანტული ცილა წარმოებულია სამკურნალოდ. მედიცინაში ჩვეულებრივ გამოიყენება რეკომბინანტული ცილები, მაგალითად, რეკომბინანტული ჰორმონები, ინტერფერონები, ინტერლეიკინები, ზრდის ფაქტორები, სიმსივნის ნეკროზის ფაქტორები, სისხლის შედედების ფაქტორები, თრომბოლიზური საშუალებები და ფერმენტები ძირითადი დაავადებების სამკურნალოდ, როგორიცაა დიაბეტი, ჯუჯა, მიოკარდიუმის ინფარქტი, გულის შეგუბებითი უკმარისობა, ცერებრალური აპოპლექსია, გაფანტული სკლეროზი, ნეიტროპენია, თრომბოციტოპენია, ანემია, ჰეპატიტი, რევმატოიდული ართრიტი, ასთმა, კრონის დაავადება და კიბოს მკურნალობა. (შდრ. Phuc V. Pham, Omics Technologies and Bio-Engineering- ში, 2018)


Hielscher Ultrasonics supplies high-performance ultrasonic homogenizers from lab to industrial size.

მაღალი ხარისხის ულტრაბგერითი საშუალებები! Hielscher– ის პროდუქციის ასორტიმენტი მოიცავს მთელ სპექტრს კომპაქტური ლაბორატორიული ულტრაბგერითიდან დამთავრებული ქვედანაყოფებით დამთავრებული ულტრაბგერითი სისტემის სრულ ინდუსტრიულ სისტემებამდე.