ბუფერული ხსნარების მომზადება ულტრაბგერითი დამუშავებით
ლიზის ბუფერები შეიძლება ეფექტურად და სწრაფად მომზადდეს ულტრაბგერითი ქსოვილის ჰომოგენიზატორების გამოყენებით. რადგან ულტრაბგერითი დამუშავების აპარატები იდეალური ინსტრუმენტებია შერევის, გახსნისა და დისპერსიისთვის, ისინი საშუალებას იძლევა ლიზის ბუფერების საიმედო და მომხმარებლისთვის მოსახერხებელი მომზადება.
ლიზის ბუფერების ულტრაბგერითი მომზადება
ულტრაბგერითი ქსოვილის ჰომოგენიზატორები უჯრედების დანგრევის, ლიზისა და ექსტრაქციისთვის საერთო ინსტრუმენტებია, ამიტომ ისინი ხელმისაწვდომია ლაბორატორიების უმეტესობაში. პრობის ტიპის ულტრაბგერითი დამუშავების აპარატების მეორეული გამოყენებაა ლიზის ბუფერების მომზადება.
ლიზის ბუფერი არის ხსნარი, რომელიც გამოიყენება უჯრედების გასატეხად (ლიზისთვის) და მათი შიგთავსის გამოსათავისუფლებლად შემდგომი ანალიზისთვის. ლიზის ბუფერის კონკრეტული შემადგენლობა შეიძლება განსხვავდებოდეს იმის მიხედვით, თუ რომელი ტიპის უჯრედები განიცდიან ლიზს და რა არის შემდგომი გამოყენება. თუმცა, ტიპიური ლიზის ბუფერი შეიცავს ისეთ კომპონენტებს, როგორიცაა დეტერგენტები, მარილები და პროტეაზის ინჰიბიტორები. ბუფერული მარილები (მაგ. Tris-HCl) და იონური მარილები (მაგ. NaCl) ჩვეულებრივ გამოიყენება ლიზატის pH-ისა და ოსმოლარობის რეგულირებისთვის.
ლიზის ბუფერის შესამზადებლად, კომპონენტები ერევა ერთმანეთს შესაბამის კონცენტრაციებში და pH-ში. ნარევი ჩვეულებრივ ირევა ან ირწევა კომპონენტების გახსნამდე და ხსნარის ჰომოგენულობამდე.
ულტრაბგერითი ჰომოგენიზაცია არის მეთოდი, რომელიც შეიძლება გამოიყენებოდეს კარგი ლიზის ბუფერის მომზადებაში კომპონენტების შერევისა და გახსნის გაუმჯობესებით. ამ მეთოდში, ულტრაბგერითი ტალღები – ჩვეულებრივ 20-დან 30 kHz-მდე დიაპაზონში – მოქმედებენ ნარევზე, რაც ქმნის კავიტაციის ბუშტუკებს, რომლებიც იმსხვრევა და წარმოქმნის ინტენსიურ ადგილობრივ ენერგიას, რაც იწვევს კომპონენტების მექანიკურ ძვრასა და შერევას.
ულტრაბგერითი ჰომოგენიზაციის პროცესი შეიძლება დაეხმაროს კომპონენტების ნებისმიერი კოშტების ან აგრეგატების დაშლას და უზრუნველყოს ხსნარის თანაბარი შერევა. შესაბამისად, ასეთმა გაუმჯობესებულმა ლიზის ბუფერმა შეიძლება გამოიწვიოს უჯრედების დანგრევის უფრო ეფექტური პროცესი და ექსტრაგირებული მასალის უფრო მაღალი გამოსავლიანობა. გარდა ამისა, ულტრაბგერითი ჰომოგენიზაცია შეიძლება შეამციროს ლიზის ბუფერის მომზადებისთვის საჭირო დრო ტრადიციულ რევის ან რხევის მეთოდებთან შედარებით.
ზოგადად, ულტრაბგერითი ჰომოგენიზაცია არის მძლავრი ინსტრუმენტი ლიზის ბუფერის მომზადების ხარისხისა და ეფექტურობის გასაუმჯობესებლად.
ულტრაბგერითი ლაბორატორიული ჰომოგენიზატორი UP200Ht პოპულარულია სამეცნიერო ლაბორატორიებში ნიმუშების მომზადების, ლიზის, ექსტრაქციის, დნმ-ის ფრაგმენტაციისა და გახსნისთვის.
ულტრაბგერითი ლიზის ბუფერის მომზადების პროტოკოლი
ეს არის ზოგადი პროტოკოლი პრობის ტიპის ულტრაბგერითი დამუშავების აპარატის გამოყენებით ლიზის ბუფერის მომზადებისთვის:
მასალები:
- არჩეული დეტერგენტი(ები) (მაგ. Triton X-100, SDS, CHAPS)
- არჩეული მარილი(ები) (მაგ. NaCl, KCl)
- პროტეაზის ინჰიბიტორები (მაგ. PMSF, აპროტინინი, ლეუპეპტინი)
- ულტრაბგერითი დამუშავების აპარატი
- სარევი
- დეიონიზებული წყალი
- pH-მეტრი ან pH-ის ზოლები
ნაბიჯ-ნაბიჯ ინსტრუქციები:
- დაადგინეთ ლიზის ბუფერის შემადგენლობა იმ უჯრედების ან ქსოვილის მიხედვით, რომლებსაც ლიზს გაუკეთებთ, და იმ შემდგომი გამოყენებების მიხედვით, რომლებისთვისაც ლიზატს გამოიყენებთ. მოამზადეთ დეტერგენტების, მარილებისა და პროტეაზის ინჰიბიტორების საწყისი ხსნარები სასურველ კონცენტრაციებში.
- დაასხით დეტერგენტების, მარილებისა და პროტეაზის ინჰიბიტორების საწყისი ხსნარები ჭურჭელში ან კოლბაში.
- დაასხით დეიონიზებული წყალი ბუფერის მოცულობის სასურველ რაოდენობამდე მისაყვანად.
- შეურიეთ კომპონენტები სარევის გამოყენებით, რათა მიიღოთ წინასწარი შერევის ხსნარი.
- გაზომეთ ბუფერის pH pH-მეტრის ან pH-ის ზოლების გამოყენებით და შეასწორეთ pH საჭიროების შემთხვევაში მჟავას ან ფუძის მცირე რაოდენობებით.
- გამოიყენეთ პრობის ტიპის ულტრაბგერითი დამუშავების აპარატი წინასწარი შერევის ხსნარის ჰომოგენიზაციისთვის, რათა მიიღოთ მაღალი ხარისხის ჰომოგენური ხსნარი. ამიტომ, ულტრაბგერითად დამუშავეთ ხსნარი რამდენიმე წამის განმავლობაში, სანამ ხსნარი სრულად არ აირევა და ნებისმიერი კოშტები ან აგრეგატები არ დაიშლება. ულტრაბგერითი დამუშავების ხანგრძლივობა და სიმძლავრე შეიძლება ოპტიმიზირდეს კონკრეტული ლიზის ბუფერისა და გამოყენებული ულტრაბგერითი დამუშავების აპარატის მიხედვით.
- ულტრაბგერითი დამუშავების შემდეგ, ხელახლა გაზომეთ ბუფერის pH და შეასწორეთ საჭიროების შემთხვევაში.
- გაფილტრეთ ბუფერი 0,2 მიკრონიანი ფილტრით ნებისმიერი ნამსხვრევების ან აგრეგატების მოსაშორებლად, რომლებიც შეიძლება წარმოიქმნა ულტრაბგერითი დამუშავების დროს.
- ლიზის ბუფერი ახლა გამოსაყენებლად მზადაა.
შენიშვნა: ლიზის ბუფერის ზუსტი შემადგენლობა და pH შეიძლება განსხვავდებოდეს იმ უჯრედების ან ქსოვილის მიხედვით, რომლებიც განიცდიან ლიზს, და შემდგომი გამოყენებების მიხედვით. ზემოთ მოცემული პროტოკოლი არის ზოგადი ხელმძღვანელო და შეიძლება საჭიროებდეს ოპტიმიზაციას კონკრეტული გამოყენებებისთვის.
ულტრაბგერითი ჰომოგენიზატორები ჩვეულებრივ გამოიყენება უჯრედების დანგრევისა და უჯრედშიდა მოლეკულების ექსტრაქციისთვის. ამიტომ, ბევრი ლიზის გამოყენება იყენებს პრობის ტიპის ულტრაბგერით დამუშავებას არა მხოლოდ ლიზის ბუფერის მომზადებისთვის, არამედ მექანიკური უჯრედების დანგრევისა და ექსტრაქციისთვის.
ეს ულტრაბგერით ქსოვილის ჰომოგენიზატორებს აქცევს ლაბორატორიებისთვის მრავალმხრივ ინსტრუმენტს და ხსნის ულტრაბგერითი დამუშავების აპარატების ფართო გამოყენებას მიკრობიოლოგიაში, ბიოტექნოლოგიასა და სიცოცხლის მეცნიერებებში.
ულტრაბგერითი ლაბორატორიული ჰომოგენიზატორები
Hielscher Ultrasonics აწარმოებს და აწვდის ულტრაბგერით ჰომოგენიზატორებსა და პრობებს (სონოტროდებს) სხვადასხვა სიმძლავრის რეიტინგებითა და ნიმუშების მოცულობებით. ეს საშუალებას გვაძლევს, შემოგთავაზოთ თქვენი ნიმუშების მომზადებისთვის ყველაზე შესაფერისი ულტრაბგერითი დანგრევის აპარატი. ჩვენ ვაკონცენტრირებთ უმაღლეს ხარისხზე, გამორჩეულ მომხმარებლის კომფორტსა და საიმედო ულტრაბგერითი დამუშავების შედეგებზე. ყველა ციფრული ულტრაბგერითი დამუშავების აპარატი მუშაობს სმარტ პროგრამული უზრუნველყოფით, ულტრაბგერითი დამუშავების პროტოკოლების დაპროგრამებითა და წინასწარი პარამეტრებით, ბრაუზერის დისტანციური მართვით, ტემპერატურის კონტროლით, ნიმუშის განათებით, ასევე ავტომატური მონაცემთა ჩაწერით ჩაშენებულ SD-ბარათზე.
დიზაინი, წარმოება და კონსალტინგი – ხარისხი დამზადებულია გერმანიაში
Hielscher ულტრაბგერითი დამუშავების აპარატები ცნობილია თავისი უმაღლესი ხარისხითა და დიზაინის სტანდარტებით. მდგრადობა და მარტივი ექსპლუატაცია საშუალებას იძლევა ჩვენი ულტრაბგერითი დამუშავების აპარატების მარტივი ინტეგრაციისა სამრეწველო ობიექტებში. მკაცრი პირობები და მოთხოვნადი გარემო Hielscher ულტრაბგერითი დამუშავების აპარატებისთვის მარტივად დასაძლევია.
Hielscher Ultrasonics არის ISO სერტიფიცირებული კომპანია და განსაკუთრებულ მნიშვნელობას ანიჭებს მაღალეფექტურ ულტრაბგერით დამუშავების აპარატებს, რომლებიც მუშაობენ თანამედროვე ტექნოლოგიითა და მომხმარებლისთვის მოსახერხებლობით. რა თქმა უნდა, Hielscher ულტრაბგერითი დამუშავების აპარატები შეესაბამება CE სტანდარტს და აკმაყოფილებენ UL, CSA და RoHs მოთხოვნებს.
ქვემოთ მოცემული ცხრილი გაჩვენებთ ჩვენი სხვადასხვა ლაბორატორიული ულტრაბგერითი დამუშავების აპარატების მიმოხილვას:
| VialTweeter UP200St-ზე | 200W | 26kHz | მცირე ფლაკონების ულტრაბგერითი დამუშავება, მაგ. Eppendorf 1,5mL |
| UP50H | 50W | 30kHz | ხელსაწყო ან სტენდზე დამაგრებული ლაბორატორიული ჰომოგენიზატორი |
| UP100H | 100W | 30kHz | ხელსაწყო ან სტენდზე დამაგრებული ლაბორატორიული ჰომოგენიზატორი |
| UP200Ht | 200W | 26kHz | ხელსაწყო ან სტენდზე დამაგრებული ლაბორატორიული ჰომოგენიზატორი |
| UP200St | 200W | 26kHz | სტენდზე დამაგრებული ლაბორატორიული ჰომოგენიზატორი |
| UP400St | 400W | 24kHz | სტენდზე დამაგრებული ლაბორატორიული ჰომოგენიზატორი |
| SonoStep | 200W | 26kHz | ლაბორატორიული რეაქტორი, რომელიც აერთიანებს ულტრაბგერით დამუშავებას, ტუმბოს, სარევსა და ჭურჭელს |
| GDmini2 | 200W | 26kHz | დაბინძურებისგან თავისუფალი ნაკადური უჯრედი |
| CupHorn | 200W | 26kHz | ინტენსიური ულტრაბგერითი აბაზანა ფლაკონებისა და ჭურჭლებისთვის |
| UIP400MTP | 400W | 24kHz | ულტრაბგერითი სისტემა მრავალმილაკიანი ფირფიტებისთვის / მიკროტიტრაციული ფირფიტებისთვის |
ულტრაბგერითი CupHorn დახურული მილებისა და ფლაკონების ინტენსიური ულტრაბგერითი დამუშავებისთვის ნიმუშების სტერილური ჰომოგენიზაციისთვის.
დაგვიკავშირდით! / დაგვისვით!
ულტრაბგერითი ლაბორატორიული ჰომოგენიზატორი UP400St ჩვეულებრივ გამოიყენება ლიზის ბუფერის მომზადებისა და შემდგომი უჯრედების დანგრევისთვის.
ლიტერატურა / რეფერენსები
- Fernandes, Luz; Santos, Hugo; Nunes-Miranda, J.; Lodeiro, Carlos; Capelo, Jose (2011): Ultrasonic Enhanced Applications in Proteomics Workflows: single probe versus multiprobe. Journal of Integrated OMICS 1, 2011.
- Priego-Capote, Feliciano; Castro, María (2004): Analytical uses of ultrasound – I. Sample preparation. TrAC Trends in Analytical Chemistry 23, 2004. 644-653.
- Welna, Maja; Szymczycha-Madeja, Anna; Pohl, Pawel (2011): Quality of the Trace Element Analysis: Sample Preparation Steps. In: Wide Spectra of Quality Control; InTechOpen 2011.
- Nico Böhmer, Andreas Dautel, Thomas Eisele, Lutz Fischer (2012): Recombinant expression, purification and characterisation of the native glutamate racemase from Lactobacillus plantarum NC8. Protein Expr Purif. 2013 Mar;88(1):54-60.
- Brandy Verhalen, Stefan Ernst, Michael Börsch, Stephan Wilkens (2012): Dynamic Ligand-induced Conformational Rearrangements in P-glycoprotein as Probed by Fluorescence Resonance Energy Transfer Spectroscopy. J Biol Chem. 2012 Jan 6;287(2): 1112-27.
- Claudia Lindemann, Nataliya Lupilova, Alexandra Müller, Bettina Warscheid, Helmut E. Meyer, Katja Kuhlmann, Martin Eisenacher, Lars I. Leichert (2013): Redox Proteomics Uncovers Peroxynitrite-Sensitive Proteins that Help Escherichia coli to Overcome Nitrosative Stress. J Biol Chem. 2013 Jul 5; 288(27): 19698–19714.
- Elahe Motevaseli, Mahdieh Shirzad, Seyed Mohammad Akrami, Azam-Sadat Mousavi, Akbar Mirsalehian, Mohammad Hossein Modarressi (2013): Normal and tumour cervical cells respond differently to vaginal lactobacilli, independent of pH and lactate. ed Microbiol. 2013 Jul; 62(Pt 7):1065-1072.
Hielscher Ultrasonics აწარმოებს მაღალეფექტურ ულტრაბგერით ჰომოგენიზატორებს ლაბორატორიული დან სამრეწველო ზომამდე.