ულტრაბგერითი მომზადებული ბუფერული ხსნარები
ლიზისის ბუფერები შეიძლება ეფექტურად და სწრაფად მომზადდეს ულტრაბგერითი ქსოვილის ჰომოგენიზატორების გამოყენებით. ვინაიდან ულტრაბგერითი არის საოცნებო ინსტრუმენტი შერევის, დაშლისა და დაშლისთვის, ისინი საშუალებას იძლევა საიმედო და მოსახერხებელი მომზადება ლიზის ბუფერებისთვის.
ლიზის ბუფერების ულტრაბგერითი მომზადება
ულტრაბგერითი ქსოვილის ჰომოგენიზატორები არის უჯრედების დაშლის, ლიზისა და ექსტრაქციის საერთო ინსტრუმენტი, ამიტომ ხელმისაწვდომია უმეტეს ლაბორატორიებში. ზონდის ტიპის ულტრაბგერითების მეორადი განაცხადია ლიზის ბუფერების მომზადება.
ლიზისის ბუფერი არის ხსნარი, რომელიც გამოიყენება ღია (ლიზის) უჯრედების დასაშლელად და მათი შიგთავსის გასათავისუფლებლად ქვემოთ ანალიზისთვის. ლიზისის ბუფერის სპეციფიკური შემადგენლობა შეიძლება განსხვავდებოდეს ლიზირებული უჯრედების ტიპისა და ქვემოთ გამოყენების მიხედვით. თუმცა, ტიპიური ლიზის ბუფერი შეიცავს კომპონენტებს, როგორიცაა სარეცხი საშუალებები, მარილები და პროტეაზას ინჰიბიტორები. ბუფერული მარილები (მაგ. Tris-HCl) და იონური მარილები (მაგ. NaCl) ჩვეულებრივ გამოიყენება ლიზატის pH-ისა და ოსმოლარობის დასარეგულირებლად.
ლიზის ბუფერის გასაკეთებლად კომპონენტები ერთმანეთს ურევენ შესაბამის კონცენტრაციებში და pH-ში. ნარევს, როგორც წესი, ურევენ ან ურევენ, სანამ კომპონენტები არ დაიშლება და ხსნარი ერთგვაროვანი გახდება.
ულტრაბგერითი ჰომოგენიზაცია არის მეთოდი, რომელიც შეიძლება გამოყენებულ იქნას კარგი ლიზის ბუფერის შესაქმნელად კომპონენტების შერევისა და დაშლის გაუმჯობესებით. ამ მეთოდით, ულტრაბგერითი ტალღები – ჩვეულებრივ 20-დან 30 kHz-მდე დიაპაზონში – გამოიყენება ნარევზე, რომელიც ქმნის კავიტაციის ბუშტებს, რომლებიც იშლება და წარმოქმნის ინტენსიურ ადგილობრივ ენერგიას, რაც იწვევს მექანიკურ ათრევას და კომპონენტების შერევას.
ულტრაბგერითი ჰომოგენიზაციის პროცესი ხელს უწყობს კომპონენტების ნებისმიერი გროვის ან აგრეგატის დაშლას და უზრუნველყოს ხსნარის ერთგვაროვანი შერევა. შესაბამისად, ლიზისის გაუმჯობესებულმა ბუფერმა შეიძლება გამოიწვიოს უჯრედების უფრო ეფექტური დაშლა და მოპოვებული მასალის უფრო მაღალი მოსავლიანობა. გარდა ამისა, ულტრაბგერითი ჰომოგენიზაციას შეუძლია შეამციროს ლიზის ბუფერის დასამზადებლად საჭირო დრო ტრადიციულ მორევის ან შერყევის მეთოდებთან შედარებით.
საერთო ჯამში, ულტრაბგერითი ჰომოგენიზაცია არის ძლიერი ინსტრუმენტი ლიზის ბუფერის მომზადების ხარისხისა და ეფექტურობის გასაუმჯობესებლად.
ულტრაბგერითი ლაბორატორიული ჰომოგენიზატორი UP200Ht პოპულარულია კვლევით ლაბორატორიებში ნიმუშის მომზადების, ლიზისის, ექსტრაქციის, დნმ-ის ფრაგმენტაციისა და დაშლის მიზნით.
ულტრაბგერითი ლიზისის ბუფერის მომზადების პროტოკოლი
ეს არის ზოგადი პროტოკოლი ლიზის ბუფერის შესაქმნელად ზონდის ტიპის ულტრაბგერითი აპარატის გამოყენებით:
მასალები:
- არჩეული სარეცხი (მაგ. Triton X-100, SDS, CHAPS)
- სასურველი მარილი(ები) (მაგ. NaCl, KCl)
- პროტეაზას ინჰიბიტორები (მაგ. PMSF, აპროტინინი, ლეუპეპტინი)
- ულტრაბგერითი
- შემრევი
- დეიონიზებული წყალი
- pH მეტრი ან pH ზოლები
ნაბიჯ-ნაბიჯ ინსტრუქციები:
- განსაზღვრეთ ლიზისის ბუფერის შემადგენლობა იმ უჯრედების ან ქსოვილის საფუძველზე, რომლებსაც თქვენ ლიზირებთ, და ქვედა დინების აპლიკაციებზე, რომლებისთვისაც გამოიყენებთ ლიზატს. მოამზადეთ სარეცხი საშუალებების, მარილების და პროტეაზას ინჰიბიტორების ხსნარი სასურველი კონცენტრაციით.
- დაამატეთ სარეცხი საშუალებების, მარილების და პროტეაზას ინჰიბიტორების მარაგის ხსნარები ჭიქაში ან კოლბაში.
- დაამატეთ დეიონიზებული წყალი, რომ მოცულობა მიიყვანეთ ბუფერის სასურველ რაოდენობამდე.
- შეურიეთ კომპონენტები სარეველების გამოყენებით, რათა მიიღოთ წინასწარ შერევის ხსნარი.
- გაზომეთ ბუფერის pH pH მრიცხველის ან pH ზოლების გამოყენებით და საჭიროების შემთხვევაში დაარეგულირეთ pH მცირე რაოდენობით მჟავას ან ფუძეს.
- გამოიყენეთ ზონდის ტიპის ულტრაბგერითი წინასწარი შერევის ხსნარის ჰომოგენიზაციისთვის ისე, რომ მიიღება უაღრესად ერთგვაროვანი ხსნარი. ამიტომ, ხსნარის გაჟღენთვა რამდენიმე წამის განმავლობაში, სანამ ხსნარი საფუძვლიანად არ არის შერეული და ნებისმიერი გროვა ან აგრეგატი არ დაიშლება. გაჟონვის ხანგრძლივობისა და სიმძლავრის ოპტიმიზირება შესაძლებელია გამოყენებული სპეციფიკური ლიზის ბუფერისა და ულტრაბგერითი აპარატის საფუძველზე.
- ულტრაბგერითი გამოკვლევის შემდეგ, ხელახლა გაზომეთ ბუფერის pH და შეცვალეთ საჭიროებისამებრ.
- გაფილტრეთ ბუფერი 0,2 მიკრონიანი ფილტრის მეშვეობით, რათა ამოიღოთ ნარჩენები ან აგრეგატები, რომლებიც შეიძლება წარმოიქმნას სონიკაციის დროს.
- ლიზის ბუფერი ახლა მზად არის გამოსაყენებლად.
შენიშვნა: ლიზისის ბუფერის ზუსტი შემადგენლობა და pH შეიძლება განსხვავდებოდეს ლიზირებული უჯრედების ან ქსოვილების და ქვედა დინების გამოყენების მიხედვით. ზემოაღნიშნული პროტოკოლი არის ზოგადი სახელმძღვანელო და შესაძლოა საჭირო გახდეს ოპტიმიზაცია კონკრეტული აპლიკაციებისთვის.
ულტრაბგერითი ჰომოგენიზატორები ჩვეულებრივ გამოიყენება უჯრედის დაშლისა და უჯრედშიდა მოლეკულების ექსტრაქციისთვის. ამიტომ ლიზისის მრავალი აპლიკაცია იყენებს ზონდის ტიპის სონიკას არა მხოლოდ ლიზის ბუფერის მოსამზადებლად, არამედ უჯრედის მექანიკური დაშლისა და ექსტრაქციისთვის.
ეს ხდის ულტრაბგერითი ქსოვილის ჰომოგენიზატორების მრავალმხრივ იარაღს ლაბორატორიებისთვის და ხსნის ულტრაბგერითი აპარატების ფართო გამოყენებას მიკრობიოლოგიაში, ბიოტექნოლოგიასა და სიცოცხლის მეცნიერებაში.
ულტრაბგერითი ლაბორატორიული ჰომოგენიზატორები
Hielscher Ultrasonics აწარმოებს და აწვდის ულტრაბგერით ჰომოგენიზატორებს და ზონდებს (სონოტროდები) სხვადასხვა სიმძლავრის რეიტინგებით და ნიმუშის მოცულობით. ეს საშუალებას გვაძლევს შემოგთავაზოთ ყველაზე შესაფერისი ულტრაბგერითი დამრღვევი თქვენი ნიმუშის მომზადებისთვის. ჩვენ ფოკუსირებული ვართ უმაღლესი ხარისხის, მომხმარებლისთვის გამორჩეული კომფორტისა და სანდო ზონირების შედეგებზე. ყველა ციფრული ულტრაბგერითი აღჭურვილია ჭკვიანი პროგრამული უზრუნველყოფის, პროგრამირება და წინასწარი დაყენება sonication პროტოკოლები, ბრაუზერის დისტანციური მართვა, ტემპერატურის კონტროლი, ნიმუში განათება, ისევე როგორც მონაცემთა ავტომატური ჩაწერა ჩაშენებული SD-ბარათზე.
დიზაინი, წარმოება და კონსულტაცია – ხარისხი დამზადებულია გერმანიაში
Hielscher ულტრაბგერითები ცნობილია მათი უმაღლესი ხარისხისა და დიზაინის სტანდარტებით. გამძლეობა და მარტივი მუშაობა საშუალებას იძლევა ჩვენი ულტრაბგერითი აპარატების გლუვი ინტეგრაცია სამრეწველო ობიექტებში. უხეში პირობები და მომთხოვნი გარემო ადვილად უმკლავდება Hielscher ულტრაბგერითებს.
Hielscher Ultrasonics არის ISO სერთიფიცირებული კომპანია და განსაკუთრებული აქცენტი კეთდება მაღალი ხარისხის ულტრაბგერაზე, რომელიც აღჭურვილია უახლესი ტექნოლოგიით და მომხმარებლის კეთილგანწყობით. რა თქმა უნდა, Hielscher ულტრაბგერითები შეესაბამება CE და აკმაყოფილებს UL, CSA და RoHs მოთხოვნებს.
ქვემოთ მოყვანილი ცხრილი გაძლევთ მიმოხილვას ჩვენი სხვადასხვა ლაბორატორიული ულტრაბგერითი აპარატების შესახებ:
| VialTweeter UP200 St | 200 W | 26 kHz | მცირე ფლაკონების ულტრაბგერითი გამომუშავება, მაგ. Eppendorf 1.5მლ |
| UP50H | 50 ვტ | 30 kHz | ხელის ან დგას ლაბორატორიული ჰომოგენიზატორი |
| UP100H | 100 W | 30 kHz | ხელის ან დგას ლაბორატორიული ჰომოგენიზატორი |
| UP200Ht | 200 W | 26 kHz | ხელის ან დგას ლაბორატორიული ჰომოგენიზატორი |
| UP200 ქ | 200 W | 26 kHz | დამონტაჟებული ლაბორატორიული ჰომოგენიზატორი |
| UP400 ქ | 400 W | 24 kHz | დამონტაჟებული ლაბორატორიული ჰომოგენიზატორი |
| SonoStep | 200 W | 26 kHz | ლაბორატორიული რეაქტორის კომბინირება, ულტრაბგერითი გამომუშავება, ტუმბო, შემრევი და ჭურჭელი |
| GDmini2 | 200 W | 26 kHz | დაბინძურებისგან თავისუფალი ნაკადის უჯრედი |
| ჭიქის რქა | 200 W | 26 kHz | ინტენსიური ულტრაბგერითი აბაზანა ფლაკონებისა და ჭიქებისთვის |
| UIP400MTP | 400 W | 24 kHz | ულტრაბგერითი სისტემა მრავალ ჭაბურღილის ფირფიტებისთვის? მიკროტიტრული ფირფიტებისთვის |
ულტრაბგერითი CupHorn დახურული მილებისა და ფლაკონების ინტენსიური გაჟონვისთვის ნიმუშების სტერილური ჰომოგენიზაციისთვის.
Დაგვიკავშირდით!? Გვკითხე ჩვენ!
ულტრაბგერითი ლაბორატორიული ჰომოგენიზატორი UP400St ჩვეულებრივ გამოიყენება ლიზისის ბუფერის მომზადებისა და შემდგომი უჯრედების დარღვევისთვის.
ლიტერატურა? ლიტერატურა
- Fernandes, Luz; Santos, Hugo; Nunes-Miranda, J.; Lodeiro, Carlos; Capelo, Jose (2011): Ultrasonic Enhanced Applications in Proteomics Workflows: single probe versus multiprobe. Journal of Integrated OMICS 1, 2011.
- Priego-Capote, Feliciano; Castro, María (2004): Analytical uses of ultrasound – I. Sample preparation. TrAC Trends in Analytical Chemistry 23, 2004. 644-653.
- Welna, Maja; Szymczycha-Madeja, Anna; Pohl, Pawel (2011): Quality of the Trace Element Analysis: Sample Preparation Steps. In: Wide Spectra of Quality Control; InTechOpen 2011.
- Nico Böhmer, Andreas Dautel, Thomas Eisele, Lutz Fischer (2012): Recombinant expression, purification and characterisation of the native glutamate racemase from Lactobacillus plantarum NC8. Protein Expr Purif. 2013 Mar;88(1):54-60.
- Brandy Verhalen, Stefan Ernst, Michael Börsch, Stephan Wilkens (2012): Dynamic Ligand-induced Conformational Rearrangements in P-glycoprotein as Probed by Fluorescence Resonance Energy Transfer Spectroscopy. J Biol Chem. 2012 Jan 6;287(2): 1112-27.
- Claudia Lindemann, Nataliya Lupilova, Alexandra Müller, Bettina Warscheid, Helmut E. Meyer, Katja Kuhlmann, Martin Eisenacher, Lars I. Leichert (2013): Redox Proteomics Uncovers Peroxynitrite-Sensitive Proteins that Help Escherichia coli to Overcome Nitrosative Stress. J Biol Chem. 2013 Jul 5; 288(27): 19698–19714.
- Elahe Motevaseli, Mahdieh Shirzad, Seyed Mohammad Akrami, Azam-Sadat Mousavi, Akbar Mirsalehian, Mohammad Hossein Modarressi (2013): Normal and tumour cervical cells respond differently to vaginal lactobacilli, independent of pH and lactate. ed Microbiol. 2013 Jul; 62(Pt 7):1065-1072.
Hielscher Ultrasonics აწარმოებს მაღალი ხარისხის ულტრაბგერითი ჰომოგენიზატორებისგან ლაბორატორია რომ სამრეწველო ზომა.