ულტრაბგერითი პროტეინის ექსტრაქცია ქსოვილებისა და უჯრედების კულტურისგან
- პროტეინების მოპოვება არის პროტეომიის ნიმუშის მომზადება.
- პროტეინები შეიძლება მოპოვებული მცენარეებისა და ცხოველური ქსოვილებისგან, საფუარისა და მიკროორგანიზმებისგან.
- Sonication არის საიმედო, ეფექტური ცილის მოპოვების მეთოდი, რომელიც უზრუნველყოფს მაღალი ცილის შემოსავლებს მოკლე მოპოვების დროს.
ცილების მოპოვება ქსოვილებიდან და უჯრედებიდან
პროტეინის ექსტრაქცია ქსოვილებიდან და კულტივირებული უჯრედებიდან არის ნიმუშის მომზადების აუცილებელი ეტაპი, რომელიც ხორციელდება მრავალი ბიოქიმიური და ანალიტიკური ტექნიკის დროს, როგორიცაა ELISA, PAGE, Western blotting, მასის სპექტრომეტრია ან ცილის გაწმენდა. ულტრაბგერითი უჯრედების დაშლა, ლიზისი და ექსტრაქცია არის ზუსტად კონტროლირებადი, არათერმული ტექნიკა ცილების მაღალი მოსავლიანობის უზრუნველსაყოფად.
ცილის მოპოვება უჯრედებიდან ულტრაბგერითი ზონდი UP200St
- სწრაფი
- მაღალი შემოსავალი
- ძალიან ეფექტური
- პარამეტრების ზუსტი კონტროლი
- რეპროდუცირებადი შედეგები
- წრფივი scalability
ზოგადი ინსტრუქციები ულტრაბგერითი ლიზისისა და ცილის ექსტრაქციისთვის
- ტემპერატურის კონტროლი: თირკმლის დეზატარციის გარეშე მაღალი ცილის მოსავლის უზრუნველსაყოფად, კონტროლი უნდა იქნეს გამოყოფილ ტემპერატურაზე. Hielscher- ის სახელმწიფო- of- ხელოვნების ულტრაბგერითი homogenizers – ასევე მოუწოდა ულტრაბგერითი დეზინტეგრატორი ან ულტრაბგერითი – არის ზუსტად კონტროლირებადი. ისინი plugable ტემპერატურის სენსორი. ულტრაბგერითი ჰომოგენიერის პარამეტრების პარამეტრებში შეიძლება შეიქმნას მაქსიმალური ტემპერატურა. როდესაც ეს ტემპერატურა მაქსიმუმს მიაღწევს, ultrasonicator ავტომატურად შეჩერდება, სანამ ნიმუში არ დამთავრდება.
- ბუფერი: ბუფერული შესადუღებელი ბუფერის და მარჯვენა მოცულობის არჩევანი ქსოვილისგან ქსოვილისაგან განსხვავდება და უნდა იყოს გამოკვლეული და საცდელი ტესტირება.
- იზოლაცია / გამწმენდი: ცილოვანი ლაზერი შეიძლება შეიცავდეს ბიომელეკულაციის ჭარბი დოზას, როგორიცაა დნმ ან ნახშირწყლები, რომელიც შეიძლება მოიხსნას პროტეინის ნალექით (დეოქსიოქოლტატ-ტრიქლოროაქტიური მჟავა) ან ბუფერული გაცვლის გზით.
Chittapalo-მ და Noomhorm-მა (2009) თავიანთ კვლევაში განაცხადეს, რომ ცილის მოსავლიანობა გაიზარდა სონიკაციის გამოყენებით და რომ ულტრაბგერითი ქსოვილის ჰომოგენიზაციისა და ლიზისის პროცესს შეუძლია მნიშვნელოვნად გააძლიეროს არსებული ექსტრაქციის პროცესები. – ახალი კომერციული ექსტრაქციის შესაძლებლობებისთვის.
ულტრაბგერითი cuphorn მრავალი ნიმუშის ერთდროული, მაღალეფექტური ნიმუშის მოსამზადებლად ერთსა და იმავე პირობებში ცილის იზოლაციისა და დნმ-ის ფრაგმენტაციისთვის.
ცილების მოპოვება ცხოველური ქსოვილისგან
სრულმასშტაბიანი ქსოვილის (მაგ. თირკმლის, გულის, ფილტვის, კუნთების და ა.შ.) მოსამზადებლად, ქსოვილი უნდა დაიყოს ძალიან პატარა ნაჭრებად სუფთა ხელსაწყოებით, სასურველია ყინულზე, და რაც შეიძლება სწრაფად, რათა თავიდან აიცილოს დეგრადაცია პროტეაზებით (მაგ. ლიზის ბუფერი, როგორიცაა RIPA ან ჰიპოტონური ლიზის ბუფერი, რომელიც შეიცავს პროტეაზას და ფოსფატაზას ინჰიბიტორის კოქტეილს). დაშლის შემდეგ, ნიმუში ჩაირთვება თხევადი აზოტით, ვადამდელი გაყინვისთვის. ნიმუში შეიძლება ინახებოდეს -80 ° C ტემპერატურაზე, მოგვიანებით გამოყენებისთვის, ან ყინულზე უნდა იყოს დაუყოვნებელი ჰომოგენიზაციისთვის. ულტრაბგერითი ექსტრაქციის დაწყებამდე, ყინულის ცივი ლიზის ბუფერული (პროტეაზას ინჰიბიტორებით DTT, ლეიპეპტინი და აფროტინიინი) სწრაფად დაამატეთ ნიმუშის მილაკი (თითო mg 10 მგ ქსოვილზე თითო ბეუფერის დანიშვნა. დაახლოებით μ 600 μL ბუფერი). დაახლ. რეკომენდებულია 20-60mg ქსოვილის მიღება თითო ნიმუშის მილში.
ულტრაბგერითი ჰომოგენიზაცია, ლიზისი და ექსტრაქცია ხორციელდება ულტრაბგერითი ჰომოგენიზატორით, როგორიცაა UP100H ან UP200Ht, რომელიც აღჭურვილია მიკრო-წვერის სონოტროდით. გახმოვანების ხანგრძლივობაა 60-90 წმ. ულტრაბგერითი ციკლის რეჟიმში 15 წმ. გაჟონვა და 10 წმ. დასვენების დრო. ნიმუში მუდმივად უნდა ინახებოდეს ყინულში.
ულტრაბგერითი ჰომოგენიზაციის / მოპოვების შემდეგ, lysate centrifuged at 27,000g დაახლოებით. 20 წთ. მას შემდეგ, რაც ზემდგომმა აგროვებდა, ისე, რომ ცილის კონცენტრაცია შეიძლება განისაზღვროს ცილის შემცველობაზე, როგორიცაა Pierce protein assay BCA.
პროტეინის მოპოვება სისხლის შრატში
შრატისა და ფოსფატის ბუფერის ერთგვაროვანი ნარევისთვის, ნიმუში პირველად ტრიალებს უჯრედების ულტრაბგერითი ლიზისამდე. ულტრაბგერითი ლიზისისთვის, ნიმუში ხდება ულტრაბგერითი ლაბორატორიული ჰომოგენიზატორით, როგორიცაა UP100H 8 ციკლისთვის 20% ამპლიტუდაზე, თითოეული 5 წამის ჩართვისა და 15 წამის გამორთვის ციკლისთვის. ცილის ექსტრაქცია ხორციელდება ციკლური ხმით (პულსაციის რეჟიმი) და ნიმუშის ყინულზე მოთავსებით, რათა თავიდან იქნას აცილებული ნიმუშის გადახურება და თერმული დეგრადაცია. ვინაიდან შრატი შეიცავს დიდი რაოდენობით მაღალი მოლეკულური წონის ცილებს (როგორიცაა ალბუმინი, α1-ანტიტრიფსინი, ტრანსფერინი, ჰაპტოგლობულინი, იმუნოგლობულინი G და იმუნოგლობულინი A), რომლებიც ხელს უშლიან დაბალი მოლეკულური წონის ცილების გამოყოფას IEF-ის დროს, რეკომენდებულია მათი გამოფიტვა. შრატიდან ამოწურვის სვეტის გამოყენებით.
პროტეინის მოპოვება მცენარეული ქსოვილისგან
მცენარეთა ახალი, რბილი ქსოვილები, მაგალითად ხავსი და ა.შ., მარტივად შეიძლება დაიშალოს სონიკაციის მისაღებად დაჭრილი ნიმუშის მასალის მისაღებად ლიზის ბუფერში. მცენარეთა მკაცრი, თხელი ქსოვილები, როგორიცაა თესლი, ნაძვის ნემსი და ა.შ., მშრალი უნდა იყოს. ზოგიერთი ხისტი, ხის მცენარეული მასალა უნდა იყოს გაყინული და გაჟღენთილი იყოს თხევადი აზოტით, სანამ არ მოხდება მათი გამოყოფა. მცენარეთა უჯრედების კულტურის შეჩერებისთვის, ულტრაბგერითი მკურნალობა 30-დან 150 წამამდე ლიზის ბუფერშია საკმარისი. გოგრის თესლის უფრო მკაცრი მასალა მოითხოვს უფრო ინტენსიურ სონიზაციას, როგორც ეს ქვემოთ აღწერილია.
ალბუმინის ულტრაბგერითი მოპოვების პროტოკოლი გოგრის თესლისგან
ულტრაბგერითი ცილის გამოყვანისთვის ალბუმინის წვრილად დაფქული გოგრის თესლის ფხვნილიდან, 250 მლ შუშის ჭიქაში ემატება 10 გ ცხიმოვანი გოგრის თესლის ფხვნილი და 100 მლ დეიონიზირებული წყალი, როგორც გამხსნელი. ცილის ექსტრაქცია შედგება ორ ეტაპად: პირველი, ნიმუშის გაჟონვა ხდება ზონდის ტიპის ულტრაბგერითი UP400St (400W, 24kHz) აღჭურვილი sonotrode S24d7. ულტრაბგერითი ჰომოგენიზაციის დროს მინის ჭიქა მოთავსებულია ცივი წყლის აბაზანაში. ჩართვის ტემპერატურის სენსორი და ულტრაბგერითი UP400St ტემპერატურის კონტროლის პარამეტრები უზრუნველყოფს ნიმუშის ტემპერატურის შენარჩუნებას ყოველთვის 30°C-ზე დაბლა. სონიკაციის დროს ტემპერატურის ზუსტი კონტროლით, ალბუმინის დენატურაცია თავიდან აცილებულია. მეორეც, ექსტრაქცია ხდებოდა მიქსერით 200 rpm სიჩქარით და 30°C-ზე. შემდეგ ჭიქა გადადის თერმოსტატულ შეკერში. გლობულინი გამოიყოფა გამოხდილი წყლით დიალიზის გზით. გლობულინის მოცილების შემდეგ, ცილის ექსტრაქტის ნიმუშის აღება შესაძლებელია ალბუმინის პროფილის დასადგენად და შემდგომში მორგებულია pI=3.0-ზე 0.1 M HCl-ის გამოყენებით ალბუმინის კოაგულაციისთვის. მყარი ფაზა გამოყოფილია ცენტრიფუგირებით 5000გრ, 20°C-ზე და ხელახლა იხსნება დეიონიზებულ წყალში. ალბუმინის კოაგულაცია ტარდება ორჯერ, რათა გაიზარდოს ცილის თანაფარდობა ალბუმინის კონცენტრატში.
ულტრაბგერითი ტუტე ცილა მოპოვების ცილის კონცენტრატის საწყისი ბრინჯი ქატო გვიჩვენებს, რომ ულტრაბგერითი მკურნალობის შედეგების უმაღლესი ცილის სარგებელი მნიშვნელოვნად მოკლე მოპოვების დროს – შედარებით ჩვეულებრივი მოპოვების მეთოდები.
ფუნქციური iNOS ფერმენტის ნიმუშის მომზადების პროტოკოლი
სრულად ფუნქციონალური iNOS ფერმენტის მისაღებად (მაგ. წამლების სკრინინგისთვის), რეკომენდებულია შემდეგი პროტოკოლი: უჯრედის სუსპენზია უნდა განთავსდეს ყინულზე და ჩატარდეს სონიკით UP100H 10 μm ამპლიტუდაზე ციკლის რეჟიმში 5 წამში. გაჟონვა და 25 წმ. დაისვენე ყინულზე. პროცედურა უნდა განმეორდეს დაახლ. 3 - ჯერ. დასვენების დრო სონიკაციის ციკლებს შორის ამცირებს ტემპერატურის მატებას და შესაბამისად ამცირებს დენატურაციის რისკს.
ულტრაბგერითი ცილების Solubilization
Sonication შეიძლება დააჩქაროს ცილის solubilization პროცესი, რომელიც, როგორც წესი, მოითხოვს რამდენიმე საათის განმავლობაში. იმისათვის, რომ არ გაანადგურა ნიმუში და არ დაუშვას პროტეინის დეგრადაცია და მოდიფიკაცია შარდოვან შემცველი ხსნარებში, ულტრაბგერითი ბზარები არ უნდა გაგრძელდეს რამდენიმე წამში.
ულტრაბგერითი UP200Ht 2მმ მიკროწვერით S26d2 მცირე ნიმუშების სონიკაციისთვის.
ულტრაბგერითი მოწყობილობა პროტეინის ექსტრაქცია
Hielscher Ultrasonics გთავაზობთ ფართო სპექტრი ულტრაბგერითი homogenizers დაშლის უჯრედების, ქსოვილების, ბაქტერიების, მიკროორგანიზმების, საფუარი და სპორები.
Hielscher-ის ლაბორატორიის ულტრაბგერითი აპარატები მძლავრი და მარტივი გამოსაყენებელია. შექმნილია 24/7 მუშაობისთვის, ისინი შექმნილია როგორც მძლავრი და ეფექტური ლაბორატორიული და სკამიანი მოწყობილობები. ყველა მოწყობილობისთვის ენერგიის გამომუშავება და ამპლიტუდის ზუსტად კონტროლი შესაძლებელია. აქსესუარების ფართო სპექტრი ხსნის დაყენების შემდგომ ვარიანტებს. ციფრულ ულტრაბგერას, როგორიცაა VialTweeter, UP200Ht, UP200St და UP400St აქვს ინტეგრირებული ტემპერატურის კონტროლი და ჩაშენებული SD ბარათი მონაცემთა ავტომატური ჩაწერისთვის.
მრავალი ნიმუშის არაპირდაპირი, ჯვარედინი დაბინძურების გარეშე და ერთდროული გაჟღერებისთვის, ჩვენ გთავაზობთ VialTweeter ან ულტრაბგერითი CupHorn.
ქვემოთ მოყვანილი ცხრილი გაძლევთ მიმოხილვას ჩვენი ულტრაბგერითი აპარატების ნიმუშების მომზადებისთვის, უჯრედების დაშლისა და ექსტრაქციისთვის. დააწკაპუნეთ მოწყობილობის ტიპზე, რომ მიიღოთ მეტი ინფორმაცია თითოეული ულტრაბგერითი ჰომოგენიზატორის შესახებ. ჩვენი კარგად გაწვრთნილი და დიდი ხნის გამოცდილების მქონე ტექნიკური პერსონალი სიამოვნებით დაგეხმარებათ აირჩიოთ ყველაზე შესაფერისი ულტრაბგერითი თქვენი ნიმუშის მომზადებისთვის!
| Batch მოცულობა | დინების სიჩქარე | რეკომენდირებული მოწყობილობები |
|---|---|---|
| 10-მდე ფლაკონი ან ტუბი | na | VialTweeter |
| მულტიბელ / მიკროტიტრული ფირფიტები | na | UIP400MTP |
| მრავალი მილები / ჭურჭელი | na | თასი |
| 1-დან 500 მლ-მდე | 10 დან 200 მლ / წთ | UP100H |
| 10-დან 1000 მლ-მდე | 20-დან 200 მლ/წთ-მდე | Uf200 ः t, UP200St |
| 10 დან 2000 მლ | 20 დან 400 მლ / წთ | UP400St |
თქვენი აპლიკაციის, მასალისა და ნიმუშის მოცულობის მიხედვით, ჩვენ გირჩევთ თქვენი ნიმუშის მოსამზადებლად გამოსაყენებლად შესაფერისი შედგენა. დაგვიკავშირდით დღეს!
დაგვიკავშირდით! / გვკითხე ჩვენ!
Hielscher ციფრული ულტრაბგერითი აღჭურვილია ბრაუზერის დისტანციური მართვის პულტით და მონაცემთა ავტომატური პროტოკოლით ინტეგრირებულ SD ბარათზე.
VialTweeter არაპირდაპირი sonication.
ფაქტები Worth Knowing
პროტეომიკა
პროტეომიკა არის კვლევითი სფერო, რომელიც იძიებს ცილებს და პროტეინს. პროტეინები ავსებენ სასიცოცხლო ფუნქციების ფართო სპექტრს ორგანიზმში. პროტომია არის მთელი რიგი ცილების გამოხატული გენომი, საკანში, ქსოვილის ან ორგანიზმის გარკვეული დროის განმავლობაში. პროტომი მერყეობს დროსა და განსხვავებულ მოთხოვნებთან, ან ხაზს უსვამს, რომ საკანში ან ორგანიზმში გადიან. უფრო კონკრეტულად, ეს არის განსაზღვრული პირობების გათვალისწინებით მოცემულ დროს, მოცემული ტიპის საკანში ან ორგანიზმში გამოხატული პროტეინების კომპლექტი. ტერმინი ცილებისა და გენომის ნაზავია. Proteomics არის შესწავლა proteome.
პროტეინი
ცილები დიდი ბიომელეკულებია, ე.წ. მაკრომოლეკულები – რომლებიც შედგება ამინომჟავის ნარჩენების ერთი ან მეტი ხანგრძლივი ქსელისაგან. პროტეინები წარმოდგენილია როგორც მცენარეული, ისე ცხოველური წარმოშობის ყველა ორგანიზმში და ისინი მნიშვნელოვანია ბიოლოგიური ფუნქციების უმრავლესობისთვის. პროტეინები შეიცავს ბიოლოგიურ ინფორმაციას, მათ ამოიღეს ანალიტიკური მიზნისთვის, მაგ. პროტეინების მიერ ჩატარებული ყველაზე მნიშვნელოვანი ფუნქცია მოიცავს მეტაბოლური რეაქციების, დნმ-ის რეპლიკაციის, სტიმულირებისა და მოლეკულების ტრანსპორტირებას ერთი ადგილიდან მეორეზე. პროტეინები ერთმანეთისაგან განსხვავდებიან, ძირითადად, ამინომჟავების თანმიმდევრობით, რომლებიც გვირგვინდება მათი გენების ნუკლეოტიდის თანმიმდევრობით და, რაც, ჩვეულებრივ, იწვევს ცილის დასაკეციში კონკრეტული სამგანზომილებიანი სტრუქტურას, რომელიც განსაზღვრავს მის საქმიანობას. ცილები არიან – გარდა პეპტიდები – ერთი ძირითადი კომპონენტი საკვები. აქედან გამომდინარე, პროტეომიკა არის ძლიერი იარაღია სურსათის მეცნიერებაში ოპტიმიზაციის პროცესი, სურსათის უვნებლობა და კვების შეფასება.
Cloud Point Extraction
Cloud Point Extraction არის წინასწარი ანალიტიკური პროცედურა ანალიზების გამოყოფისა და წინასწარ კონცენტრირებისთვის. ულტრაბგერითთან ერთად, ღრუბლის წერტილის მოპოვება შეიძლება გაძლიერდეს, რაც პროცესს უფრო ეფექტურს, სწრაფს და ეკოლოგიურად კეთილგანწყობილს ხდის. ულტრაბგერითი, ღრუბლის წერტილის მოპოვება ანალიტის მომზადების მნიშვნელოვნად უფრო ეფექტური მეთოდია. წაიკითხეთ მეტი ულტრაბგერითი დახმარებით ღრუბლის წერტილის ამოღების შესახებ!ლარი ელექტროფორეზი
ლარი ელექტროფორეზი არის მაკრომოლეკულების, როგორიცაა დნმ-ის, რნმ-ის და ცილების გამოყოფისა და ანალიზის ძირითადი მეთოდი, აგრეთვე მათი ფრაგმენტები, მათი ზომისა და ბრალდებით. იგი გამოიყენება კლინიკურ ქიმიაში, რომელიც ბიტუმიის, მოლეკულური ბიოლოგიისა და პროტომომენტების, დნმ-ისა და რნმ-ს ფრაგმენტების სიგრძის გამოყოფის მიზნით, პროტეინების დაპროგრამების და / ან ზომის პროტეინების გამოყოფა (IEF აგარაზი, არსებითად დამოუკიდებელი) და დნმ-ის ზომა და RNA ფრაგმენტები ან პროტეინების გამოყოფა.
უჯრედის კულტურა
უჯრედის კულტურა არის კონტროლირებადი მზარდი პროცესი, რომლის საშუალებითაც უჯრედები გაყვანილია კონტროლირებადი პირობებით. უჯრედის კულტურის პირობები განსხვავდება თითოეული უჯრედის ტიპისთვის. ზოგადად, უჯრედის კულტურის გარემოს შედგება სათანადო გემოს (მაგ. პეტრიური კერძი), რომელიც შეიცავს სუბსტრატს ან ნიადაგს, რომელიც აწვდის მნიშვნელოვან საკვებ ნივთიერებებს (ამინომჟავები, ნახშირწყლები, ვიტამინები, მინერალები), ზრდის ფაქტორები, ჰორმონები და გაზები2, ო2), და არეგულირებს ფიზიო-ქიმიური გარემოს (pH ბუფერი, ოსმოტური ზეწოლა, ტემპერატურა). უჯრედთა უმრავლესობა სჭირდება ზედაპირულ ან ხელოვნურ სუბსტრატს, ხოლო სხვა უჯრედების კულტურა შეიძლება კულტივირებული იყოს კულტურული მემკვიდრეობის პირობებში (შეჩერების კულტურა, საკანში შეჩერება).
ცხოველური უჯრედების ხაზების მასობრივი კულტურა გამოიყენება ვირუსული ვაქცინების სამრეწველო წარმოებასა და სხვა ბიოტექნოლოგიურად წარმოებულ პროდუქტებში. ადამიანის ღეროვანი უჯრედები კულტივირებული არიან უჯრედების რაოდენობის გაზრდაზე და უჯრედების დიფერენცირება სხვადასხვა სომატური უჯრედების ტიპებში ტრანსპლანტაციის მიზნით.
ქსოვილის ნიმუშები
ტერმინი ქსოვილი აღწერს უჯრედულ შუალედს, სადაც უჯრედის მასალაა საკნების და ორგანოს შორის ორგანიზაციული დონე. ქსოვილში, ანალოგიური უჯრედები, ერთი და იგივე წარმოშობისგან, რომლებიც ერთად ატარებენ კონკრეტულ ფუნქციას, შეიკრიბებიან. მრავლობითი ქსოვილების ფუნქციური დაჯგუფებით იქმნება ორგანოების კომპლექსური სტრუქტურები.
ქსოვილის შერჩევა ხდება ბიოლოგიის, ჰისტოლოგიის / ჰისტოპათოლოგიის, პარაზიტოლოგიის, ბიოქიმიის, იმუნოჰისტოქიმიის, აგრეთვე დნმ-ის დასამუშავებლად და მოპოვებისთვის. იგი შეიძლება განვასხვავოთ ცხოველთაგან (ქვედანაყოფი: ძუძუმწოვარი ქსოვილი) და მცენარის ქსოვილებს შორის. ცხოველური ქსოვილები გაერთიანებულია შემაერთებელი, კუნთოვანი, ნერვული და ეპითელური ქსოვილის ოთხი ძირითადი ტიპით. მცენარეთა ქსოვილი იყოფა შემდეგ სამ ქსოვილოვან სისტემაში: ეპიდერმისის, გრუნტის ქსოვილის და სისხლძარღვთა ქსოვილის.
ქსოვილის ნიმუშები შეიძლება მომზადდეს ცხოველთა ან მცენარეული ნაწილებისგან, მაგ. ძვლების, კუნთების, ფოთლების და ა.შ.
სხეულის სითხეები
სისხლი, შრატი, პლაზმა, ცერებროსპინალური სითხე, ნერწყვისა და სინოვიალური სითხე არის სხეულის სითხეები, რომლებიც დიაგნოსტიკურად მნიშვნელოვანი ინფორმაციის წყაროს წარმოადგენს. აქედან გამომდინარე, მნიშვნელოვანია ანალიზისთვის სხეულის სითხის ნიმუშების დახვეწა. პირველი სირთულე უკავშირდება სხეულის სითხეში არსებულ კომპონენტთა ფართო დინამიურ სპექტრს.
ცილების კონცენტრაციის განსაზღვრა
ბრედფორდის აზვიადება, დაბალია ავადმყოფი და ბიჩინქოლინის მჟავა (BCA) assay საერთო პროექტები, რათა დადგინდეს ცილების კონცენტრაცია. Bovine შრატის ალბუმინი (BSA) არის ერთ ერთი ყველაზე ხშირად გამოყენებული ცილის სტანდარტი.
ლიზის ბუფერი
ლოსიონი უნდა აირჩიოთ საკანში ან ქსოვილის შესაბამისად (ქსოვილის კულტურა, მცენარეები, ბაქტერიები, სოკოები და სხვ.) და თუ საკნები სტრუქტურასა და სტრუქტურაშია. ცილების, მემბრანისა და ორგანიზმების მოპოვებისათვის ლიზონური ბუფერის ფართო სპექტრს ჩამოყალიბებულია ერთი ან მეტი სარეცხი საშუალებით. სარეცხი საშუალება ჩვეულებრივ შეირჩევა საცდელი და შეცდომების მეშვეობით – თუ არის შესაძლებელი – არსებული ცილის მოპოვების პროტოკოლის შესაბამისად. სარეცხი უნდა იყოს შეესაბამება ქსოვილის წყაროს და ცილებს. ზოგადად, რბილი ხსნარი, რომელიც მუშაობს კონკრეტული ქსოვილის / ცილისთვის, აირჩევა ექსტრაქტის მაქსიმალური ფუნქციონირების შესანარჩუნებლად. გარდა ამისა, მემბრანისა და ორგანიზმების მოპოვების შემთხვევაში, რბილი სარეცხი ფარავს მემბრანის ინტრაქტს. ხშირად გამოიყენება სარეზერვო ლიფტების ბუფერში, ძირითადად, არაობიური ან ზვირიონიონი, მაგალითად, CHAPS, დეოქსიოქოლტატი, Triton ™ X-100, NP40 და Tween 20.
მაგალითად, ქსოვილები, როგორიცაა ტვინი, ღვიძლის, ნაწლავის, თირკმლის, ელენთა და ა.შ. შეიძლება უბრალოდ buffered ერთად RIPA – თუმცა პროტეაზას ინჰიბიტორები და DTT (მაგალითად, ელექტროფორეზისთვის) უნდა მოიცავდეს.
ლიმფური ბუფერი ჩონჩხის კუნთოვანი ქსოვილისთვის (ცივი ცივი): 20 მმ ტუზი (pH 7.8), 137 მმ ნაკლს, 2.7 მმ KCl, 1 მმ MgCl2, 1% Triton X-100, 10% (w / v) გლიცეროლი, 1 მმ EDTA 1 მმ დითიოტრიტოლი დაემატა პროტეაზას და ფოსფატაზას ინჰიბიტორ კოქტეილს
საერთო ბუფერისა და მათი pH დიაპაზონის ცხრილი. ზოგადად, ეს ბუფერები ჩვეულებრივ იყენებენ 20-50 მმ კონცენტრაციას.
| ბუფერი | pH სპექტრი |
|---|---|
| Ლიმონმჟავა – NaOH | 2.2 – 6.5 |
| ნატრიუმის ციტრატი – Ლიმონმჟავა | 3.0 – 6.2 |
| Ნატრიუმის აცეტატი – ძმარმჟავა | 3.6 – 5.6 |
| კაკადილის მჟავა ნატრიუმის მარილი – HCl | 5.0 – 7.4 |
| განათლებისა და მეცნიერების სამინისტრო – NaOH | 5.6 – 6.8 |
| ნატრიუმის დიჰიდროგენი ფოსფატი – დისდოდიუმის წყალბადის ფოსფატი | 5.8 – 8.0 |
| იმედიზოლი – HCl | 6.2 – 7.8 |
| MOPS – KOH | 6.6 – 7.8 |
| ტრიეტანოლამინის ჰიდროქლორიდი – NaOH | 6.8 – 8.8 |
| Tris – HCl | 7.0 – 9.0 |
| HEPES – NaOH | 7.2 – 8.2 |
| ტრიკინი – NaOH | 7.6 – 8.6 |
| ნატრიუმის tetraborate – ბორის მჟავა | 7.6 – 9.2 |
| Bicine – NaOH | 7.7 – 8.9 |
| გლიცინი – NaOH | 8.6 – 10.6 |
ყველაზე ბუფერულები აჩვენებენ pH- დამოკიდებულებას ტემპერატურაზე. ეს განსაკუთრებით ეხება Tris ბუფერით. PKa იცვლება 8.06-დან 25 ° C- დან 8.85-მდე 0 ° C -მდე.
(pH და pKa of ბუფერი: pH ზომავს წყალბადის იონების კონცენტრაციას წყალხსნარში pKa (= მჟავა დისოციაციის მუდმივი) არის დაკავშირებული, მაგრამ უფრო კონკრეტული ღონისძიება, რომელიც ეხმარება პროგნოზირება, თუ როგორ მოლეკულა იმოქმედებს კონკრეტულ pH მნიშვნელობა.)
ტრიზოლი
TRIZOL არის ქიმიური ხსნარი, რომელიც გამოიყენება გრანინიუმის თიოციანაზა-ფენოლ-ქლოროფრაფის მოპოვებისას RNA / DNA / ცილის ამონაწერი. გამოყენების ულტრაბგერითი დახმარებით TRIzol მოპოვების შედეგების მაღალი დნმ, RNA და ცილის შემოსავალი იგივე ნიმუში და excels ამით სხვა მოპოვების მეთოდები.
ლიტერატურა / ლიტერატურა
- Chittapalo T, Noomhorm A (2009): Ultrasonic assisted alkali extraction of protein from defatted rice bran and properties of the protein concentrates. Int J Food Sci Technol 44: 1843–1849.
- Simões, André E.S:; Pereira, Diane M.; Amaral, Joana D.; Nunes, Ana F.; Gomes, Sofia E.; Rodrigues, Pedro M.; Lo, Adrian C.; D’Hooge, Rudi; Steer, Clifford J.; Thibodeau, Stephen N.; Borralho, Pedro M.; Rodrigues, Cecília M.P. (2013): Efficient recovery of proteins from multiple source samples after trizol or trizol LS RNA extraction and long-term storage. BMC Genomics 2013, 14:181.