Hielscher ულტრაბგერითი ტექნოლოგია

ულტრაბგერითი პროტეინის ექსტრაქცია ქსოვილებისა და უჯრედების კულტურისგან

  • პროტეინების მოპოვება არის პროტეომიის ნიმუშის მომზადება.
  • პროტეინები შეიძლება მოპოვებული მცენარეებისა და ცხოველური ქსოვილებისგან, საფუარისა და მიკროორგანიზმებისგან.
  • Sonication არის საიმედო, ეფექტური ცილის მოპოვების მეთოდი, რომელიც უზრუნველყოფს მაღალი ცილის შემოსავლებს მოკლე მოპოვების დროს.

 

ცილების მოპოვება ქსოვილებიდან და უჯრედებიდან

ქსოვილებისა და კულტურული უჯრედების პროტეინის მოპოვება მნიშვნელოვანი ნიმუშის პრეპარატის ნაბიჯია, რომელიც შესრულებულია მრავალი ბიოქიმიური და ანალიტიკური ტექნიკის დროს, როგორიცაა ELISA, PAGE, დასავლეთის blotting, მასობრივი სპექტრომეტრია ან ცილის გამწმენდი. ულტრაბგერითი უჯრედის დარღვევა, ლიზი და მოპოვება არის ზუსტად კონტროლირებადი ტექნიკა, რათა უზრუნველყოს ცილების მაღალი შემოსავალი.

ცილების მოპოვება ცხოველური ქსოვილისგან

სრულმასშტაბიანი ქსოვილის (მაგ. თირკმლის, გულის, ფილტვის, კუნთების და ა.შ.) მოსამზადებლად, ქსოვილი უნდა დაიყოს ძალიან პატარა ნაჭრებად სუფთა ხელსაწყოებით, სასურველია ყინულზე, და რაც შეიძლება სწრაფად, რათა თავიდან აიცილოს დეგრადაცია პროტეაზებით (მაგ. ლიზის ბუფერი, როგორიცაა RIPA ან ჰიპოტონური ლიზის ბუფერი, რომელიც შეიცავს პროტეაზას და ფოსფატაზას ინჰიბიტორის კოქტეილს). დაშლის შემდეგ, ნიმუში ჩაირთვება თხევადი აზოტით, ვადამდელი გაყინვისთვის. ნიმუში შეიძლება ინახებოდეს -80 ° C ტემპერატურაზე, მოგვიანებით გამოყენებისთვის, ან ყინულზე უნდა იყოს დაუყოვნებელი ჰომოგენიზაციისთვის. ულტრაბგერითი ექსტრაქციის დაწყებამდე, ყინულის ცივი ლიზის ბუფერული (პროტეაზას ინჰიბიტორებით DTT, ლეიპეპტინი და აფროტინიინი) სწრაფად დაამატეთ ნიმუშის მილაკი (თითო mg 10 მგ ქსოვილზე თითო ბეუფერის დანიშვნა. დაახლოებით μ 600 μL ბუფერი). დაახლ. რეკომენდებულია 20-60mg ქსოვილის მიღება თითო ნიმუშის მილში.
ულტრაბგერითი ჰომოგენიზაცია, ლიზი და მოპოვება ხორციელდება ულტრაბგერითი ჰომოგენირით, როგორიცაა Uf200 ः t ან UP200St, აღჭურვილია მიკრო-წვერიანი sonotrode. Sonication ხანგრძლივობა 60-90 წმ. ულტრაბგერითი ციკლის რეჟიმში 15 წამი. sonication და 10 წ. დასვენების დრო. ნიმუში ყოველთვის უნდა იყოს დაცული ყინულზე.
ულტრაბგერითი ჰომოგენიზაციის / მოპოვების შემდეგ, lysate centrifuged at 27,000g დაახლოებით. 20 წთ. მას შემდეგ, რაც ზემდგომმა აგროვებდა, ისე, რომ ცილის კონცენტრაცია შეიძლება განისაზღვროს ცილის შემცველობაზე, როგორიცაა Pierce protein assay BCA.

პროტეინის სონიზაცია ნიმუშის მომზადების მნიშვნელოვანი მეთოდია

ულტრაბგერითი ცილის მოპოვება უჯრედებიდან UP200St

ინფორმაციის მოთხოვნა




გაითვალისწინეთ ჩვენი კონფიდენციალურობის პოლიტიკა.


პროტეინის მოპოვება სისხლის შრატში

შრატისა და ფოსფატის ბუფერის ერთგვაროვანი ნაერთისთვის, ნიმუში პირველია ულტრაბგერითი უჯრედის ლიზისის წინ. იყიდება ულტრაბგერითი ლიზის, ნიმუში sonicated ერთად ულტრაბგერითი ლაბორატორია homogenizer როგორიცაა UP100H 8 ციკლისთვის 20% ამპლიტუდისთვის, თითოეული 5 წამის ციკლისთვის და 15 წამის განმავლობაში. სუნთქვა ხორციელდება ციკლებში გამოსაყოფად და ყინულის ნიმუშის განთავსებით, რათა თავიდან იქნას აცილებული ნიმუში და თერმული დეგრადაცია. მას შემდეგ, რაც შრატში შეიცავს მაღალი მოლეკულური წონის პროტეინების დიდი რაოდენობით (როგორიცაა ალბუმინი, α1- ანტიტრიფსინი, ტრანსფრენი, ჰუტოგლობულინი, იმუნოგლობულინი და იმუნოგლობულინი A), რომელიც იწვევს IEF- ის დროს დაბალი მოლეკულური წონის პროტეინების გამიჯვნას, რეკომენდირებულია საწყისი შრატში გამოყენებით შლის სვეტი.

პროტეინის მოპოვება მცენარეული ქსოვილისგან

მცენარეთა ახალი, რბილი ქსოვილები, მაგალითად ხავსი და ა.შ., მარტივად შეიძლება დაიშალოს სონიკაციის მისაღებად დაჭრილი ნიმუშის მასალის მისაღებად ლიზის ბუფერში. მცენარეთა მკაცრი, თხელი ქსოვილები, როგორიცაა თესლი, ნაძვის ნემსი და ა.შ., მშრალი უნდა იყოს. ზოგიერთი ხისტი, ხის მცენარეული მასალა უნდა იყოს გაყინული და გაჟღენთილი იყოს თხევადი აზოტით, სანამ არ მოხდება მათი გამოყოფა. მცენარეთა უჯრედების კულტურის შეჩერებისთვის, ულტრაბგერითი მკურნალობა 30-დან 150 წამამდე ლიზის ბუფერშია საკმარისი. გოგრის თესლის უფრო მკაცრი მასალა მოითხოვს უფრო ინტენსიურ სონიზაციას, როგორც ეს ქვემოთ აღწერილია.

ალბუმინის ულტრაბგერითი მოპოვების პროტოკოლი გოგრის თესლისგან

ულტრაბგერითი ქსოვილის ჰომოგენიზატორი UP400St ერთად S24d40 - ცილების მოპოვებისა და ცხოველური ქსოვილისთვის (დააჭირეთ გასადიდებლად!)ულტრაბგერითი ცილების ექსტრაქციისათვის ალბუმინის ექსტრაქტებით, სასიამოვნო ნიადაგის გოგრის სათესლე ფხვნილისგან, 10 გრ დეფატირებული გოგრის თესლის ფხვნილისა და 100 მლ deionised წყლით, როგორც გამხსნელი, დაემატება 250 მლ მინის მტვერს. ცილის მოპოვება შედგება ორი საფეხურით: პირველ რიგში, ნიმუშია sonicated with probe-type ultrasonicator UP400St (400W, 24kHz) დამონტაჟებული sonotrode S24d7. შუშის მტვერი ცივი წყლის აბაზანაში მოთავსებულია ულტრაბგერითი ჰომოგენიზაციის დროს. ულტრაბგერითი პარამეტრი UP400St დანამატის ტემპერატურის სენსორი უზრუნველყოფილია, რომ ნიმუშის ტემპერატურა ყოველთვის 30 ° C ქვემოთ არის დაცული. გამონაბოლქვის დროს ზუსტი ტემპერატურის კონტროლით, ალბუმინის დენატურას თავიდან აცილება. მეორე, ექსტრაქცია ჩატარდა შერევით 200 წამში სიჩქარით და 30 ° C- ზე. მას შემდეგ, რაც ბეიკერი გადადის თერმოსტატულ shaker. Globulin ამოღებულია დიალიზით გამოხდილი წყალი. გლობულინის მოცილების შემდეგ, ალბინინის პროფილის განსაზღვრისათვის შეიძლება გამოვლინდეს ცილის ექსტრაქტი და შემდგომში მორგებული იქნება PI = 3.0 0.1 M HCl ალბუმინის კოაგულაციისთვის. მყარი ფაზა განცალკევებით ხდება 5000 გ-ზე, 20 ° C- ზე და დეზინფიცირებული წყალში. ალბუმინის კოაგულაცია ხორციელდება ორჯერ შესრულდება ალბუმინის კონცენტრატის პროტეინის თანაფარდობის გაზრდის მიზნით.

ულტრაბგერითი ტუტე ცილა მოპოვების ცილის კონცენტრატის საწყისი ბრინჯი ქატო გვიჩვენებს, რომ ულტრაბგერითი მკურნალობის შედეგების უმაღლესი ცილის სარგებელი მნიშვნელოვნად მოკლე მოპოვების დროს – შედარებით ჩვეულებრივი მოპოვების მეთოდები.

ულტრაბგერითი მოწყობილობა VialTweeter for ცილის მოპოვების ქსოვილის ნიმუშები (დააჭირეთ გასადიდებლად!)

VialTweeter არაპირდაპირი sonication.

უპირატესობები

  • სწრაფი
  • მაღალი შემოსავალი
  • ძალიან ეფექტური
  • პარამეტრების ზუსტი კონტროლი
  • რეპროდუცირებადი შედეგები
  • წრფივი scalability

ფუნქციური iNOS ფერმენტის ნიმუშის მომზადების პროტოკოლი

სრულად ფუნქციონალური iNOS ენზიმის მოსაპოვებლად (მაგ. ნარკოტიკების სკრინინგისთვის), შემდეგი პროტოკოლი რეკომენდირებულია: უჯრედის შეჩერება უნდა განთავსდეს ყინულისა და sonicate UP100H 10 მმ ამპლიტუდაზე 5 წმ-ის ციკლის რეჟიმში sonication და 25 წ. დასვენება ყინულზე. პროცედურა უნდა განმეორდეს. 3 - ჯერ. დამონტაჟება ციკლის ციკლებს შორის ამცირებს ტემპერატურის ზრდას და ამცირებს დენატის რისკს.

ულტრაბგერითი ცილების Solubilization

Sonication შეიძლება დააჩქაროს ცილის solubilization პროცესი, რომელიც, როგორც წესი, მოითხოვს რამდენიმე საათის განმავლობაში. იმისათვის, რომ არ გაანადგურა ნიმუში და არ დაუშვას პროტეინის დეგრადაცია და მოდიფიკაცია შარდოვან შემცველი ხსნარებში, ულტრაბგერითი ბზარები არ უნდა გაგრძელდეს რამდენიმე წამში.

ზოგადი ინსტრუქციები

ტემპერატურის კონტროლი: თირკმლის დეზატარციის გარეშე მაღალი ცილის მოსავლის უზრუნველსაყოფად, კონტროლი უნდა იქნეს გამოყოფილ ტემპერატურაზე. Hielscher- ის სახელმწიფო- of- ხელოვნების ულტრაბგერითი homogenizers – ასევე მოუწოდა ულტრაბგერითი disintegrator ან sonicator – არის ზუსტად კონტროლირებადი. ისინი plugable ტემპერატურის სენსორი. ულტრაბგერითი ჰომოგენიერის პარამეტრების პარამეტრებში შეიძლება შეიქმნას მაქსიმალური ტემპერატურა. როდესაც ეს ტემპერატურა მაქსიმუმს მიაღწევს, ultrasonicator ავტომატურად შეჩერდება, სანამ ნიმუში არ დამთავრდება.
ბუფერი: ბუფერული შესადუღებელი ბუფერის და მარჯვენა მოცულობის არჩევანი ქსოვილისგან ქსოვილისაგან განსხვავდება და უნდა იყოს გამოკვლეული და საცდელი ტესტირება.
იზოლაცია / გამწმენდი: ცილოვანი ლაზერი შეიძლება შეიცავდეს ბიომელეკულაციის ჭარბი დოზას, როგორიცაა დნმ ან ნახშირწყლები, რომელიც შეიძლება მოიხსნას პროტეინის ნალექით (დეოქსიოქოლტატ-ტრიქლოროაქტიური მჟავა) ან ბუფერული გაცვლის გზით.

Chittapalo და Noomhorm (2009) იტყობინება, რომ ცილის სარგებელი გაიზარდა გამოყენებით sonication და რომ ულტრაბგერითი ქსოვილის ჰომოგენიზაციის და ლიზის პროცესი შეიძლება გააძლიეროს არსებული მოპოვების პროცესების მნიშვნელოვნად – ახალი კომერციული ექსტრაქციის შესაძლებლობებისთვის.

ხმის დაცვა Hielscher- ის ხმის დანართი SPB-L და ულტრაბგერითი მოწყობილობა UP200St. (დააჭირეთ გასადიდებლად!)

ულტრაბგერითი ქსოვილის ჰომოგენიზატორი UP200St ეფექტური ცილის მოპოვებისათვის

ზუსტი კონტროლი ულტრაბგერითი მკურნალობა (დააჭირეთ გასადიდებლად!)

ბრონირებული კონტროლი ზუსტი ოპერაციისთვის და sonication პროცესის მონიტორინგი

ულტრაბგერითი მოწყობილობა პროტეინის ექსტრაქცია

Hielscher Ultrasonics გთავაზობთ ფართო სპექტრი ულტრაბგერითი homogenizers დაშლის უჯრედების, ქსოვილების, ბაქტერიების, მიკროორგანიზმების, საფუარი და სპორები.
Hielscher ლაბორატორია ultrasonicators არის ძლიერი და მარტივი მუშაობას. აშენდა 24/7 ოპერაცია, ისინი განკუთვნილია როგორც ძლიერი და ეფექტური ლაბორატორიული და სკამზე დაბრუნება მოწყობილობები. ყველა მოწყობილობისთვის, ენერგიის გამომუშავება და ამპლიტუდა შეიძლება ზუსტად კონტროლდება. ფართო სპექტრს აქსესუარები ხსნის შემდგომი პარამეტრები. ციფრული მოწყობილობები, როგორიცაა VialTweeter, Uf200 ः t, UP200St, და UP400St აქვს ინტეგრირებული ტემპერატურის კონტროლი და ჩაშენებული SD ბარათი ავტომატური მონაცემების ჩაწერისათვის.
მრავალრიცხოვანი ნიმუშების არაპირდაპირი, ჯვარედინი დაბინძურების თავისუფალი და ერთდროული გამოსხივებისთვის ვთავაზობთ VialTweeter ან ულტრაბგერითი cuphorn.
თქვენი აპლიკაციის, მასალისა და ნიმუშის მოცულობის მიხედვით, ჩვენ გირჩევთ თქვენი ნიმუშის მოსამზადებლად გამოსაყენებლად შესაფერისი შედგენა. დაგვიკავშირდით დღეს!

დაგვიკავშირდით! / გვკითხე ჩვენ!

გთხოვთ გამოიყენოთ ქვემოთ მოცემული ფორმა, სურვილის შემთხვევაში მოითხოვოს დამატებითი ინფორმაცია ულტრაბგერითი ჰომოგენიზაციის. ჩვენ მოხარული ვიქნებით შემოგთავაზოთ დოპლერით შეხვედრა თქვენს მოთხოვნებს.









გთხოვთ გაითვალისწინოთ ჩვენი კონფიდენციალურობის პოლიტიკა.


ლიტერატურა / ლიტერატურა

  • Chittapalo T, Noomhorm A (2009): ულტრაბგერითი დახმარებით ტუტე მოპოვების პროტეინის საწყისი defatted ბრინჯი ქატო და თვისებები ცილის კონცენტრატები. Int J კვების Sci Technol 44: 1843-1849.
  • Simões, André ES:; პერეირა, დაიან მ .; ამარალი, ჯოანა დ .; ნუნესი, ანა ფ .; გომესი, სოფია ე .; როდრიგუზი, პედრო მ .; ლო, ადრიანე კ .; დ’ჰუჟი, რუდი; სტიერი, კლიფორდ ჯ .; ტიბოდოუ, სტეფანე ნ .; ბორალიო, პედრო მ .; Rodrigues, Cecília MP (2013): ცილების ეფექტური აღდგენა მრავალი წყაროს ნიმუშებიდან ტრიზოლის ან ტრიზოლის LS RNA მოპოვებისა და გრძელვადიანი შენახვის შემდეგ. BMC Genomics 2013, 14: 181.


ფაქტები Worth Knowing

პროტეომიკა

პროტეომიკა არის კვლევითი სფერო, რომელიც იძიებს ცილებს და პროტეინს. პროტეინები ავსებენ სასიცოცხლო ფუნქციების ფართო სპექტრს ორგანიზმში. პროტომია არის მთელი რიგი ცილების გამოხატული გენომი, საკანში, ქსოვილის ან ორგანიზმის გარკვეული დროის განმავლობაში. პროტომი მერყეობს დროსა და განსხვავებულ მოთხოვნებთან, ან ხაზს უსვამს, რომ საკანში ან ორგანიზმში გადიან. უფრო კონკრეტულად, ეს არის განსაზღვრული პირობების გათვალისწინებით მოცემულ დროს, მოცემული ტიპის საკანში ან ორგანიზმში გამოხატული პროტეინების კომპლექტი. ტერმინი ცილებისა და გენომის ნაზავია. Proteomics არის შესწავლა proteome.

პროტეინი

ცილები დიდი ბიომელეკულებია, ე.წ. მაკრომოლეკულები – რომლებიც შედგება ამინომჟავის ნარჩენების ერთი ან მეტი ხანგრძლივი ქსელისაგან. პროტეინები წარმოდგენილია როგორც მცენარეული, ისე ცხოველური წარმოშობის ყველა ორგანიზმში და ისინი მნიშვნელოვანია ბიოლოგიური ფუნქციების უმრავლესობისთვის. პროტეინები შეიცავს ბიოლოგიურ ინფორმაციას, მათ ამოიღეს ანალიტიკური მიზნისთვის, მაგ. პროტეინების მიერ ჩატარებული ყველაზე მნიშვნელოვანი ფუნქცია მოიცავს მეტაბოლური რეაქციების, დნმ-ის რეპლიკაციის, სტიმულირებისა და მოლეკულების ტრანსპორტირებას ერთი ადგილიდან მეორეზე. პროტეინები ერთმანეთისაგან განსხვავდებიან, ძირითადად, ამინომჟავების თანმიმდევრობით, რომლებიც გვირგვინდება მათი გენების ნუკლეოტიდის თანმიმდევრობით და, რაც, ჩვეულებრივ, იწვევს ცილის დასაკეციში კონკრეტული სამგანზომილებიანი სტრუქტურას, რომელიც განსაზღვრავს მის საქმიანობას. ცილები არიან – გარდა პეპტიდები – ერთი ძირითადი კომპონენტი საკვები. აქედან გამომდინარე, პროტეომიკა არის ძლიერი იარაღია სურსათის მეცნიერებაში ოპტიმიზაციის პროცესი, სურსათის უვნებლობა და კვების შეფასება.

ლარი ელექტროფორეზი

ლარი ელექტროფორეზი არის მაკრომოლეკულების, როგორიცაა დნმ-ის, რნმ-ის და ცილების გამოყოფისა და ანალიზის ძირითადი მეთოდი, აგრეთვე მათი ფრაგმენტები, მათი ზომისა და ბრალდებით. იგი გამოიყენება კლინიკურ ქიმიაში, რომელიც ბიტუმიის, მოლეკულური ბიოლოგიისა და პროტომომენტების, დნმ-ისა და რნმ-ს ფრაგმენტების სიგრძის გამოყოფის მიზნით, პროტეინების დაპროგრამების და / ან ზომის პროტეინების გამოყოფა (IEF აგარაზი, არსებითად დამოუკიდებელი) და დნმ-ის ზომა და RNA ფრაგმენტები ან პროტეინების გამოყოფა.

უჯრედის კულტურა

უჯრედის კულტურა არის კონტროლირებადი მზარდი პროცესი, რომლის საშუალებითაც უჯრედები გაყვანილია კონტროლირებადი პირობებით. უჯრედის კულტურის პირობები განსხვავდება თითოეული უჯრედის ტიპისთვის. ზოგადად, უჯრედის კულტურის გარემოს შედგება სათანადო გემოს (მაგ. პეტრიური კერძი), რომელიც შეიცავს სუბსტრატს ან ნიადაგს, რომელიც აწვდის მნიშვნელოვან საკვებ ნივთიერებებს (ამინომჟავები, ნახშირწყლები, ვიტამინები, მინერალები), ზრდის ფაქტორები, ჰორმონები და გაზები2, ო2), და არეგულირებს ფიზიო-ქიმიური გარემოს (pH ბუფერი, ოსმოტური ზეწოლა, ტემპერატურა). უჯრედთა უმრავლესობა სჭირდება ზედაპირულ ან ხელოვნურ სუბსტრატს, ხოლო სხვა უჯრედების კულტურა შეიძლება კულტივირებული იყოს კულტურული მემკვიდრეობის პირობებში (შეჩერების კულტურა, საკანში შეჩერება).
ცხოველური უჯრედების ხაზების მასობრივი კულტურა გამოიყენება ვირუსული ვაქცინების სამრეწველო წარმოებასა და სხვა ბიოტექნოლოგიურად წარმოებულ პროდუქტებში. ადამიანის ღეროვანი უჯრედები კულტივირებული არიან უჯრედების რაოდენობის გაზრდაზე და უჯრედების დიფერენცირება სხვადასხვა სომატური უჯრედების ტიპებში ტრანსპლანტაციის მიზნით.

ქსოვილის ნიმუშები

ტერმინი ქსოვილი აღწერს უჯრედულ შუალედს, სადაც უჯრედის მასალაა საკნების და ორგანოს შორის ორგანიზაციული დონე. ქსოვილში, ანალოგიური უჯრედები, ერთი და იგივე წარმოშობისგან, რომლებიც ერთად ატარებენ კონკრეტულ ფუნქციას, შეიკრიბებიან. მრავლობითი ქსოვილების ფუნქციური დაჯგუფებით იქმნება ორგანოების კომპლექსური სტრუქტურები.
ქსოვილის შერჩევა ხდება ბიოლოგიის, ჰისტოლოგიის / ჰისტოპათოლოგიის, პარაზიტოლოგიის, ბიოქიმიის, იმუნოჰისტოქიმიის, აგრეთვე დნმ-ის დასამუშავებლად და მოპოვებისთვის. იგი შეიძლება განვასხვავოთ ცხოველთაგან (ქვედანაყოფი: ძუძუმწოვარი ქსოვილი) და მცენარის ქსოვილებს შორის. ცხოველური ქსოვილები გაერთიანებულია შემაერთებელი, კუნთოვანი, ნერვული და ეპითელური ქსოვილის ოთხი ძირითადი ტიპით. მცენარეთა ქსოვილი იყოფა შემდეგ სამ ქსოვილოვან სისტემაში: ეპიდერმისის, გრუნტის ქსოვილის და სისხლძარღვთა ქსოვილის.
ქსოვილის ნიმუშები შეიძლება მომზადდეს ცხოველთა ან მცენარეული ნაწილებისგან, მაგ. ძვლების, კუნთების, ფოთლების და ა.შ.

სხეულის სითხეები

სისხლი, შრატი, პლაზმა, ცერებროსპინალური სითხე, ნერწყვისა და სინოვიალური სითხე არის სხეულის სითხეები, რომლებიც დიაგნოსტიკურად მნიშვნელოვანი ინფორმაციის წყაროს წარმოადგენს. აქედან გამომდინარე, მნიშვნელოვანია ანალიზისთვის სხეულის სითხის ნიმუშების დახვეწა. პირველი სირთულე უკავშირდება სხეულის სითხეში არსებულ კომპონენტთა ფართო დინამიურ სპექტრს.

ცილების კონცენტრაციის განსაზღვრა

ბრედფორდის აზვიადება, დაბალია ავადმყოფი და ბიჩინქოლინის მჟავა (BCA) assay საერთო პროექტები, რათა დადგინდეს ცილების კონცენტრაცია. Bovine შრატის ალბუმინი (BSA) არის ერთ ერთი ყველაზე ხშირად გამოყენებული ცილის სტანდარტი.

ლიზის ბუფერი

ლოსიონი უნდა აირჩიოთ საკანში ან ქსოვილის შესაბამისად (ქსოვილის კულტურა, მცენარეები, ბაქტერიები, სოკოები და სხვ.) და თუ საკნები სტრუქტურასა და სტრუქტურაშია. ცილების, მემბრანისა და ორგანიზმების მოპოვებისათვის ლიზონური ბუფერის ფართო სპექტრს ჩამოყალიბებულია ერთი ან მეტი სარეცხი საშუალებით. სარეცხი საშუალება ჩვეულებრივ შეირჩევა საცდელი და შეცდომების მეშვეობით – თუ არის შესაძლებელი – არსებული ცილის მოპოვების პროტოკოლის შესაბამისად. სარეცხი უნდა იყოს შეესაბამება ქსოვილის წყაროს და ცილებს. ზოგადად, რბილი ხსნარი, რომელიც მუშაობს კონკრეტული ქსოვილის / ცილისთვის, აირჩევა ექსტრაქტის მაქსიმალური ფუნქციონირების შესანარჩუნებლად. გარდა ამისა, მემბრანისა და ორგანიზმების მოპოვების შემთხვევაში, რბილი სარეცხი ფარავს მემბრანის ინტრაქტს. ხშირად გამოიყენება სარეზერვო ლიფტების ბუფერში, ძირითადად, არაობიური ან ზვირიონიონი, მაგალითად, CHAPS, დეოქსიოქოლტატი, Triton ™ X-100, NP40 და Tween 20.
მაგალითად, ქსოვილები, როგორიცაა ტვინი, ღვიძლის, ნაწლავის, თირკმლის, ელენთა და ა.შ. შეიძლება უბრალოდ buffered ერთად RIPA – თუმცა პროტეაზას ინჰიბიტორები და DTT (მაგალითად, ელექტროფორეზისთვის) უნდა მოიცავდეს.
ლიმფური ბუფერი ჩონჩხის კუნთოვანი ქსოვილისთვის (ცივი ცივი): 20 მმ ტუზი (pH 7.8), 137 მმ ნაკლს, 2.7 მმ KCl, 1 მმ MgCl2, 1% Triton X-100, 10% (w / v) გლიცეროლი, 1 მმ EDTA 1 მმ დითიოტრიტოლი დაემატა პროტეაზას და ფოსფატაზას ინჰიბიტორ კოქტეილს
საერთო ბუფერისა და მათი pH დიაპაზონის ცხრილი. ზოგადად, ეს ბუფერები ჩვეულებრივ იყენებენ 20-50 მმ კონცენტრაციას.

ბუფერი pH სპექტრი
Ლიმონმჟავა – NaOH 2.2 – 6.5
ნატრიუმის ციტრატი – Ლიმონმჟავა 3.0 – 6.2
Ნატრიუმის აცეტატი – ძმარმჟავა 3.6 – 5.6
კაკადილის მჟავა ნატრიუმის მარილი – HCl 5.0 – 7.4
განათლებისა და მეცნიერების სამინისტრო – NaOH 5.6 – 6.8
ნატრიუმის დიჰიდროგენი ფოსფატი – დისდოდიუმის წყალბადის ფოსფატი 5.8 – 8.0
იმედიზოლი – HCl 6.2 – 7.8
MOPS – KOH 6.6 – 7.8
ტრიეტანოლამინის ჰიდროქლორიდი – NaOH 6.8 – 8.8
Tris – HCl 7.0 – 9.0
HEPES – NaOH 7.2 – 8.2
ტრიკინი – NaOH 7.6 – 8.6
ნატრიუმის tetraborate – ბორის მჟავა 7.6 – 9.2
Bicine – NaOH 7.7 – 8.9
გლიცინი – NaOH 8.6 – 10.6

ყველაზე ბუფერულები აჩვენებენ pH- დამოკიდებულებას ტემპერატურაზე. ეს განსაკუთრებით ეხება Tris ბუფერით. PKa იცვლება 8.06-დან 25 ° C- დან 8.85-მდე 0 ° C -მდე.
(pH და pKa of ბუფერი: pH ზომავს წყალბადის იონების კონცენტრაციას წყალხსნარში pKa (= მჟავა დისოციაციის მუდმივი) არის დაკავშირებული, მაგრამ უფრო კონკრეტული ღონისძიება, რომელიც ეხმარება პროგნოზირება, თუ როგორ მოლეკულა იმოქმედებს კონკრეტულ pH მნიშვნელობა.)

ტრიზოლი

TRIZOL არის ქიმიური ხსნარი, რომელიც გამოიყენება გრანინიუმის თიოციანაზა-ფენოლ-ქლოროფრაფის მოპოვებისას RNA / DNA / ცილის ამონაწერი. გამოყენების ულტრაბგერითი დახმარებით TRIzol მოპოვების შედეგების მაღალი დნმ, RNA და ცილის შემოსავალი იგივე ნიმუში და excels ამით სხვა მოპოვების მეთოდები.