Hielscher ულტრაბგერითი ტექნოლოგია

C. Elegans- ის ნიმუშების ულტრაბგერითი მომზადება

C. elegans, ნემატოდური ჭია, ბიოლოგიაში ფართოდ გამოიყენება მოდელის ორგანიზმი. ანალიზის დაწყებამდე ნიმუშის მომზადება მოითხოვს ლიზისის, ცილისა და ლიპიდების ექსტრაქციას, ასევე რნმ – ის ფრაგმენტაციას, რომლის საიმედოდ შესრულება შესაძლებელია გამათბობლის საშუალებით. ულტრაბგერითი უჯრედების დამშლელები საიმედო, დახვეწილი და ადვილად გამოსაყენებელი მოწყობილობებია C. elegans ნიმუშების სწრაფი მოსამზადებლად.

C. Elegans- ის ნიმუშების ულტრაბგერითი მომზადება

C. elegans არის მრგვალი ჭია, რომელსაც ფართოდ იყენებენ სამეცნიერო ლაბორატორიებში გენომიკის, განვითარების ბიოლოგიისა და დაავადებების გამოსაკვლევად. C. elegans– ის გენომის ბევრ გენს აქვს ადამიანის ფუნქციური ანალოგები. ამრიგად, ნემატოდური ჭია არის უაღრესად სასარგებლო მოდელი ადამიანის დაავადებებისათვის. C. elegans- ის ფართო გამოყენების სხვა უპირატესობებია მისი მარტივი და იაფი დამუშავება ბაქტერიების შემცველ ფირფიტებზე (მაგ. E. coli), მისი გამჭვირვალობა, მოსახერხებელი დამუშავება, აგრეთვე ჭიების გაყინვისა და შენახვის შესაძლებლობა უფრო დიდი ხნის განმავლობაში.
ცილებისა და ლიპიდების ანალიზი ლაბორატორიებში რეგულარული პროცედურაა და ულტრაბგერითი ნიმუშის მომზადება დადგენილი მეთოდია C. elegans ნემატოდების ლიზიზაციისთვის განვითარების ყველა ეტაპზე (მაგ. ემბრიონები, larva L1-L4, მოზრდილები). მას შემდეგ, რაც C. elegans ასევე გამოიყენება ცილების გამოხატვის სისტემად, მიზანმიმართული ცილების ზედმეტად გამოხატვისთვის, საჭიროა საიმედო, განმეორებადი ლიზისის და ცილის მოპოვების მეთოდი, რომელიც იძლევა მაღალ ცილის შემცველობას. ულტრაბგერითი უჯრედების მოშლისა და მოპოვების სისტემები ხელმისაწვდომია გამოკვლევის ტიპის ჰომოგენიზატორების და ულტრასონიკატორების მრავალ ნიმუშად. ემსახურება ნიმუშის მოსახერხებელ მომზადებას და ყველა სახის ნიმუშის ზომებს, Hielscher Ultrasonics- ს აქვს ულტრაბგერითი უჯრედის იდეალური დარღვევა თქვენი ლაბორატორიული პროცედურისთვის.
C. elegans is a widely used model organism in biological research. Ultrasonic lysis is a sophisticated, reliable, reproducible and rapid technique to prepare high-quality protein extracts from C. elegans.

ულტრაბგერითი C. elegans Lysis for

  • ჭიის ჰომოგენატების მომზადება
  • ცილის მოპოვება
  • ლიპიდების ექსტრაქცია
  • ცილების რაოდენობრივი განსაზღვრა
  • იმუნოპროდუქტი
  • დასავლეთის blotting
  • რნმ ექსტრაქცია
  • ფერმენტული ანალიზები
Sonotrode MTP-24-8-96– ს აქვს რვა ულტრაბგერითი ზონდი მიკროტიტერული ფირფიტების ჭაბურღილების სონიფიკაციისთვის.

Sonotrode MTP-24-8-96– ს აქვს რვა ულტრაბგერითი ზონდი მიკროტიტერული ფირფიტების ჭაბურღილების სონიფიკაციისთვის.

ინფორმაციის მოთხოვნა




გაითვალისწინეთ ჩვენი კონფიდენციალურობის პოლიტიკა.


ულტრაბგერითი პროტოკოლები C. Elegans– ის დარღვევისა და ლიზირებისათვის

ულტრაბგერითი ჰომოგენიზაცია და C. elegans– ის ლიზიზი და შემდგომი ცილისა და ლიპიდების ექსტრაქცია შეიძლება ჩატარდეს სხვადასხვა პროცედურების გამოყენებით სხვადასხვა ჰომოგენიზაციისა და ლიზისის ბუფერების გამოყენებით. ლიზისის ყველა პროტოკოლის საერთოა, რომ ნიმუშები მუდმივად უნდა იყოს დაცული ყინულზე, ცილის დეგრადაციის თავიდან ასაცილებლად. ქვემოთ წარმოგიდგენთ ულტრაბგერითი ლიზისის და ექსტრაქციის საიმედო და სწრაფ პროტოკოლებს მაღალი ხარისხის ცილების ან ლიპიდების შემცველი C. elegans ნიმუშების მოსამზადებლად.

ულტრაბგერითი C. elegans ლიზისის უპირატესობები

  • საიმედო
  • რეპროდუცირებადი
  • ზუსტად ტემპერატურის კონტროლირებადი
  • საიმედო პროცესის კონტროლი
  • ნაზი მეთოდი
  • მარტივი გამოყენება
  • უსაფრთხო

ულტრაბგერითი ცილის მოპოვება C. elegans ნიმუშებიდან

C. elegans ჭიების ულტრაბგერითი ლიზი და ცილის მოპოვება შეიძლება განხორციელდეს სხვადასხვა პროტოკოლების გამოყენებით. ქვემოთ წარმოგიდგენთ რამოდენიმე საიმედო და სწრაფი ლიზისის ოქმს პროტეინის განმეორებადი მოპოვების შედეგების მისაღწევად.

ციტოზოლური ექსტრაქტის სწრაფი მომზადება C. elegans Worms– ისგან Sonication– ით

შემდეგი პროტოკოლით შეგიძლიათ მოამზადოთ C. elegans lysates 30 წუთზე ნაკლებ დროში.
C. elegans- ის კოლექცია
აიღეთ სასურველი C. elegans ჭიები 1.5 მლ მილის ფოსფატის ბუფერულ მარილწყალში (PBS) ან გარეცხეთ ისინი ფირფიტისგან 1.5 მლ PBS- ით. ცენტრიფუგა 1 წუთის განმავლობაში 2000rpm საათზე ნალექისთვის. შეინახეთ ნიმუშები ნებისმიერ დროს ყინულზე.
შემდეგ, ორჯერ დაიბანეთ ჭიები PBS– ით.
ამის შემდეგ, ორჯერ დაიბანეთ ჭიები ddH– ით2ო.
განაახლეთ ჭიები მინიმუმ 500 ჰომოგენიზაციის ბუფერში (HB). ჭიის ნიმუშები ახლა მზად არის ულტრაბგერითი ლიზისისთვის.
ცილის ექსტრაქტის უფრო მაღალი ხარისხისთვის დაგვჭირდება ბაქტერიული დაბინძურების შემცირება, 5 წუთის განმავლობაში ჭიების გარეცხვით PBS– ით და სტერილური, ულტრა სუფთა წყლით (ddH)2ო) ან შეასრულოს საქაროზას ათწილადი. მუდმივად შეინახეთ ჭიის ნიმუშები ყინულზე.

ულტრაბგერითი C. elegans ლიზისის პროტოკოლი

  • დარწმუნდით, რომ ულტრაბგერითი გამაგრილებელი წინასწარ მოამზადეთ ისე, რომ ულტრაბგერითი ჰომოგენიზატორი მზად იყოს გამოყენებისთვის (გამოკვლევა დამონტაჟებულია, გამაჯანსაღებელი პროგრამის წინასწარ დაყენება).
  • Ultrasonicator UP200Ht (200 watts, 26kHz) with microtip S26d2 for the preparation of biological samplesთუ თქვენი ულტრაბგერითი დამონტაჟებულია, მოათავსეთ ყინულის აბაზანა თქვენი სინჯის მილებით ულტრაბგერითი ზონდის ქვეშ და ჩადეთ ულტრაბგერითი ზონდი 1.5 მლ მილში.

  • C. elegans– ის UP200St ან UP200Ht– ით ლიზისისთვის ულტრასონიკაცია უნდა ჩატარდეს მიკროტოპის გამოყენებით (მაგ., 2 მმ ზონდი S26d2; იხილეთ სურათი მარცხნივ) 40% ამპლიტუდაზე 1 წმ – სთვის, ხოლო 30 წამიანი პაუზებით. 5 sonication ციკლი თითოეული 1 წამში 30 წამიანი პაუზებით იდეალურია C. elegans- ის ლიზისისთვის. თუ პირველად შეასრულებთ ლიზისს, შეგიძლიათ შეამოწმოთ ლიზისის პროგრესირება ნიმუშის მცირე ნაწილებში თითოეული პულსის შემდეგ, მიკროსკოპის გამოყენებით.
  • ლიზი წარმატებით სრულდება, როდესაც ჭიები იშლება. ზედმეტი გაჟღენთის შედეგად ხდება ბირთვების გატეხვა და ხდება ხილული, როდესაც ნიმუში ბლანტი ხდება ან ხდება ქაფი. ნიმუშის დეგრადაციის თავიდან ასაცილებლად, საჭიროების შემთხვევაში, გამოიყენეთ მეტი პულსი. არ გაზარდოთ ულტრაბგერითი პულსის ციკლის დრო, რომ მიიღოთ მაღალი ხარისხის ცილოვანი ექსტრაქტები.
  • გაასუფთავეთ უჯრედის ლიზატი ულტრაბგერითი ლიზირებული ჭიების ცენტრიფუგით 14,000rpm- ზე 10 წთ-ზე 4ºC ტემპერატურაზე.
  • შემდეგ, ზედმეტი ნივთიერება გადაიტანეთ ახალ მილში და მოამზადეთ იმუნოპროდუქტების ან სხვა ანალიზებისთვის.

შენიშვნა ჰომოგენიზაციის ბუფერისთვის: მოამზადეთ ჰომოგენიზაციის ბუფერი ულტრაბგერითი ლიზისის პროტოკოლისთვის შემდეგნაირად:

  • 15 მმ ჰეპესი pH 7.6 – 15 მლ 0,5 მ
  • 10 მმ KCl – 2,5 მლ 2,5 მლ
  • 1.5 მმ MgCl2 – 0.75 მლ 1 მ
  • 0.1 მმ EDTA – 100 მლ 0.5 მ
  • 0.5 მმ EGTA – 2,5 მლ 0,1 მ
  • 44 მლ საქაროზა – 14,7 მლ 50%
  • გამოყენებამდე დაამატეთ: 1 მმ DTT – 1000 მ 1 მ
  • პლუს პროტეაზას ინჰიბიტორი

C. elegans- ის ულტრაბგერითი ლიზირება რაოდენობრივი ასოცირების გამწმენდის ანალიზებისთვის

C. elegans ემბრიონები (2 მილიონი ∼ განმეორებით) ახლად მოიკრიფა ბიოლოგიურად სამმაგად ახალგაზრდა gravid ჰერმაფროდიტების გაუფერულებით და გაჟღენთილი ყინულზე (ციკლი: 0,5 წმ, ამპლიტუდა: 40–45%, 5 პარალიზი / სესია, 5 სესია, სესიებს შორის ინტერვალი) : 30 წმ; ულტრაბგერითი პროცესორი UP200S მიკრო წვერით S26d2 (Hielscher Ultrasonics GmbH)) ლიზისის ბუფერში (საერთო მოცულობა: ∼600 მკლ; 50 მმ Tris-HCl, pH 7.4, 100 მმ KCl, 1 მმ MgCl2, 1 მმ EGTA, 1 მმ DTT, 10% გლიცერინი , პროტეაზას ინჰიბიტორის ნარევი, 0,1% Nonidet P-40 შემცვლელი). გაჟონვის შემდეგ, Nonidet P-40 შემცვლელი დაემატა 1% -მდე და ლიზატებს ინკუბაციით გადაეყარა კუდის ზევით ბრუნვა 4 ° C ტემპერატურაზე 30 წთ, შემდეგ მოჰყვა ცენტრიფუგაცია 20,000 × გ-ზე 20 წთ 4 ° C ტემპერატურაზე. ამის შემდეგ გაიწმინდა გაწმენდილი ლიზატი ზედა ლიპიდური ფენის მოშლის გარეშე და გაიყო ნახევრად ან GFP- ის შემცველი აგაროზას მძივებში ან დაბლოკილ საკონტროლო მძივებში (40–50 მკლ). თავზე კუდის გარდამტეხი 4 ° C ტემპერატურაზე 60–90 წთ-ის განმავლობაში, მძივები გარეცხილი იქნა ერთხელ ლიზის ბუფერით, რომელიც შეიცავს 0,1% Nonidet P-40 შემცველს, რასაც მოჰყვა ორჯერ გარეცხვა I ბუფერულ I (25 მმ Tris-HCl, pH 7.4, 300 მმ NaCl, 1 მმ MgCl2) ან ბუფერული II (1 მმ Tris-HCl, pH 7.4, 150 მმ NaCl, 1 მმ MgCl2) ან ორივე. GFP- სთვის: MBK-2 ჩამოსაშლელი, ორი ცალკეული ექსპერიმენტი ჩატარდა სარეცხის სხვადასხვა პირობების გამოყენებით. პროტეინები განთავისუფლდა ორბიტალური შერყევით 50 მლ 6 მ შარდოვანაში / 2 მ თიურაში ოთახის ტემპერატურაზე. MBK-1 :: GFP ჩამოსათრელად ჩატარებული ექსპერიმენტებისათვის, ცილები ორჯერ განმუხტეს 50 მლ 8 მ გუანიდინის ქლორიდში 90 ° C ტემპერატურაზე შერყევის შედეგად, რასაც მოჰყვა ეთანოლის ნალექები. შემდეგ გამონაყარი ცილის ნიმუშები მონელდება ხსნარში.
(შდრ. ჩენი და სხვ., 2016)

VialTweeter at the ultrasonic processor UP200ST

VialTweeter 10 სინჯარაში ერთდროულად გამაჯანსაღებელი მრავალ ნიმუშის მოსამზადებელი განყოფილება.

ულტრაბგერითი ჭიის ჰომოგენიზაცია და ლიზისი

C.elegans- ის ლიზისის და ცილის მოპოვების პროცედურისთვის, შერჩეული იქნა შესაბამისი ეტაპის 30,000 ნემოტოდი თითო ნიმუშზე და გარეცხილია ყინულოვან S- ბაზალში, კონცენტრირებული იქნა ცენტრიფუგაციით 1500 rpm- ზე 2 წთ-ით, ექვსჯერ გარეცხილი ცივი S- ბაზალური ნარჩენი ბაქტერიების მოსაშორებლად და შემდეგ ინახება ყინულზე, სანამ არ იქნება მზად გამოსაყენებლად. ცილის მოპოვების მიზნით, gravid- ზრდასრულ ჭიებს მიეცათ საშუალება შექმნან კომპაქტური ნალექი ბოლო S- ბაზალური დაბანის შემდეგ. შემდეგ ჭიის მარცვლები გადაანაწილეს 1 მლ ყინვაგამძლე ექსტრაქციის ბუფერში [20 მმ კალიუმის ფოსფატი, pH 7.4, 2 მმ EDTA, 1% ტრიტონ-X-100, პროტეაზას ინჰიბიტორები (Sigma P2714)] და დაუყოვნებლივ დაამუშავეს.
∼ 30,000 gravid- ზრდასრული მატლი (შეესაბამება ∼ 100 მგ სველ წონას), გაასუფთავეს ყინულზე aa გამოძიების ტიპის ულტრაბგერითი (მაგ. UP50H მიკროტიპით MS2) 40% ამპლიტუდით 3 წმ-ის 10 ციკლისთვის, 30 წმ-ით დაშორებით, 1 მლ ყინულივით ცივი მოპოვების ბუფერი. (შდრ. ბასხარანი და სხვ. 2012)

ულტრაბგერითი ლიპიდების ექსტრაქცია C. elegans– დან

ლიპიდომიკაში, მეტაბოლომიკის განშტოებაში, ახასიათებს და აანალიზებს ბიოლოგიური სისტემების ლიპიდურ კომპლემენტს. C. elegans ფართოდ გამოიყენება ლიპიდომიკაში მეტაბოლური ლიპიდების ურთიერთქმედების შესასწავლად და მათი გავლენა ჯანმრთელობაზე და სიცოცხლის ხანგრძლივობაზე.
ულტრაბგერითი ლიზი და ექსტრაქცია გამოიყენება ლიპიდების გასათავისუფლებლად, როგორიცაა სფინგოლიპიდები C. elegans- ის ემბრიონის, ლარვისა და მოზრდილი ჭიებისგან. ულტრასონიკაცია გამოიყენება მატლის ჰომოგენატების მოსამზადებლად და შემდგომ ნიმუშიდან ლიპიდების მოსაპოვებლად.
პროტოკოლი ულტრაბგერითი ლიპიდების მოპოვებისთვის C. elegans– დან
C. elegans- ის ნალექი გაათბეთ ყინულზე და განაახლეთ 0.5 მლ ულტრაწყლით. გაასუფთავეთ C. elegans- ის ნიმუშები 1,5 მლ სინჯარაში, ხოლო ნიმუშები მუდმივად ყინულზე ინახეთ.
Sonication შეიძლება შესრულდეს გამოძიების- ultrasonicstor როგორიცაა Uf200 ः t, ულტრაბგერითი ნიმუშის მოსამზადებელი მოწყობილობა VialTweeter (10 სინჯის ერთდროული სონიფიკაცია) ან UIP400MTP (მრავალ ჭაბურღილის ფირფიტების სონიფიკაციისთვის, მაგალითად, 96 ჭაბურღილის ფირფიტები). ულტრაბგერითი ლიზისისთვის UP200Ht– ით გამოიყენეთ მიკრო წვერი S26d2. წინასწარ დააყენეთ ულტრაბგერითი ციკლის რეჟიმი ციფრულ მენიუში. დააყენეთ ამპლიტუდა 10% -ზე და sonication ციკლის რეჟიმში 2 წმ პულსი 20 ციკლით, პაუზა 30 წმ. ულტრაბგერითი პულსაციის თითოეულ პაკეტს შორის.
ზედმეტი ნივთიერებები გადაიტანეთ მინის მილებში ხრახნიანი თავსახურით. შეასრულეთ ფოლკის მოპოვება თითოეულ მინის მილში 1 მლ ულტრაწყლის დამატებით, შემდეგ თითოეულ მინის მილში დაამატეთ 6 მლ ქლოროფორმი / მეთანოლი (თანაფარდობა = 2: 1) ნარევი.
თითოეული მინის მილის მორევა 30 წმ 4 – ჯერ. ცენტრიფუგა მილები 1,258 xg ტემპერატურაზე 15 წთ-ის განმავლობაში (Eppendorf, 5810 R), ფაზის გამოყოფის კიდევ უფრო გასაძლიერებლად. ქვედა ჰიდროფობიური ფრაქცია გადაიტანეთ სუფთა მინის მილში მინის პასტერ პიპეტით. გააშრეთ ქვედა ჰიდროფობიური წილი აზოტის ნაკადის ქვეშ აზოტის აორთქლარში. გამხმარი ნალექი შეინახეთ -80 ° C საყინულეში გამოყენებამდე.

ულტრაბგერითი ჭიის ლიზატების მომზადება

ჭიის ლიზატი: L4 სტადიის ჭიები მოიკრიფა და სამჯერ გარეცხა M9 ბუფერულით (42.26 მმ Na2HPO4, 22.04 მმ KH2PO4, 85.56 მმ NaCl და 0.87 მმ MgSO4) ყველა ბაქტერიის მოსაცილებლად. M9 ბუფერის მაქსიმალურად ამოღების შემდეგ, ჭიები გადაიტანეს ლიზის ბუფერში: 50 მმ HEPES, 50 მმ KCl, 1 მმ EDTA, 1 მგ EGTA, 5 მმ ფოსფატი β- გლიცეროლი, 0,1% (ც / ვ) Triton X-100, 50 მმ ნატრიუმის ფტორს, 1 მმ ნატრიუმის ორთოვანადატს, 5 მმ ნატრიუმის პიროფოსფატს, 0,2 მმ ფენილმეთანესულფონილფლორის და პროტეაზას ინჰიბიტორს. ჭიები თხევად აზოტში გაყინეს და 37 ° C ტემპერატურაზე სამჯერ გალღვეს, შემდეგ კი ჭიები გაუშვეს მშრალ ყინულზე ულტრაბგერითი VialTweeter აპარატით 10 სინჯის მილის ერთდროულად მომზადებისთვის. Sonication ჩატარდა 50% ამპლიტუდაზე, 2 წამის 10 ციკლში. 30 წამიანი პაუზაა სონიკაციის ამოფრქვევებს შორის. ამის შემდეგ, ნიმუშები ცენტრიფუგირებული იქნა 12000 rpm- ზე 4 ° C ტემპერატურაზე 15 წთ-ის განმავლობაში. ზედმეტი ნივთიერება შეგროვდა და ინახებოდა -70 ° C ტემპერატურაზე. ბრედფორდის ტესტის საშუალებით ცილების რაოდენობის დასადგენად გამოიყენეს მცირედი.
ტოტალური გლუტათიონის, GSH და GSSG განსაზღვრა: გლუტათიონის რაოდენობრივი შეფასებისთვის ლიზატები და განსაზღვრა იმავე დღეს გაკეთდა. გლუკოზით გამოკვებილი და საკონტროლო L4 ლარვა მოსავალს და სამჯერ გარეცხეს M9 ბუფერულით. M9 ბუფერული მაქსიმალურად ამოღების შემდეგ, ჭიები გადაანაწილეს ყინულის ცივ მეტაფოსფორმჟავაში (5% w / v), შემდეგ კი ჭიები გაასუფთავეს ყინულში ულტრაბგერითი VialTweeter- ით 50% ამპლიტუდით 2 წამის ათი სიონიკის ციკლში. 30 წმ-ით. პაუზა თითოეულ ციკლს შორის. ამის შემდეგ, ცენტრიფუგირება მოხდა 12000 rpm- ზე 4 ̊C ტემპერატურაზე 15 წუთის განმავლობაში.
(შდრ. ალკანტარ – ფერნანდესი და სხვ., 2018)

C. elegans Sample Prep იმუნოპროდუქტების და Western Blotting- მდე

მოკლედ, ემბრიონის ექსტრაქტებისთვის, C. elegans L1- ის ლარვები მოზრდილ ასაკამდე გაიზარდა ფართომასშტაბიანი თხევადი S- საშუალო კულტურებით. ემბრიონები შეაგროვეს მათეთრებელი სტანდარტული მეთოდის გამოყენებით და შეაჩერეს ლიზის ბუფერში (50 mM Tris, pH 7.5, 100 mM KCl, 1 mM EDTA, 1 mM MgCl2, 8.7% glycerol, 0.05% NP-40, 1􏰅 Protease Inhibitor Cocktail, and 1􏰅 ფოსფატაზას ინჰიბიტორი კოქტეილი I და II), სწრაფად გაიყინა თხევად აზოტში და ლიზირდება ულტრაბგერითი უჯრედების მოშლით ულტრაბგერითი გამაყუჩებლის გამოყენებით, მაგალითად, Uf200 ः t S26d2– ით 10 პულსისთვის 10 წმ – ზე მეტი 30% ამპლიტუდაზე. თუ ნიმუშების უფრო მეტი რაოდენობა უნდა მომზადდეს ულტრაბგერითი VialTweeter ან რეკომენდებულია MultiSample-Ultrasonicator UIP400MTP კარგად ფირფიტებისთვის. გაჟღენთის შემდეგ, ექსტრაქტები წინასწარ გაიწმინდა ცენტრიფუგაციით 30 000 გრ-ზე 20 წუთის განმავლობაში 4 ° C ტემპერატურაზე. წინასწარ გაწმენდილი ექსტრაქტი (300 მკგ საერთო ცილა) ინკუბაციას ახორციელებს 40 მკგ ანტი- CDC-25.1 აფინულობით გაწმენდილი ანტისხეულების (ამ კვლევის) ჯვარედინი კავშირი პროტეინ A- აგაროზასთან, ან როგორც კონტროლი, კურდღლის იმუნოგლობულინის მსგავსი რაოდენობა (Ig) G პროტეინ A- აგაროზასთან ჯვარედინი კავშირი გამოიყენეს 200 მლ ლიზისის ბუფერულ მოცულობაში, რომელიც შეიცავს 1% NP-40, რომლის ჩათვლით ამცირებს ცილების არასპეციფიკურ შეკავშირებას მატრიქსთან. ნიმუშები გადატრიალდა 1 საათის განმავლობაში 4 ° C ტემპერატურაზე, მძივები სამჯერ გარეცხილი იყო ლიზისური ბუფერული საშუალებით და განთავისუფლდა 30 მლ გლიცინით / HCl და 200 მლ NaCl, pH 2.2. იმუნოპროდუქტების შემდეგ, ელატები განზავდნენ 30 მკლ SDS ნიმუშის ბუფერში, გათბეს 95 ° C- ზე 4 წთ და, ჩვეულებრივ, შეყვანისთვის მთლიანი 3% და ელუატებისთვის 30% გამოიყენება SDS-PAGE- ზე, რასაც მოჰყვა Western blotting ანტი -CDC-25.1 (1: 400), ანტი-LIN-23 (1: 750), ანტი-უბიკვიტინი (1: 1000), ანტი-GSK3􏰁 (1: 500) ან ანტი-􏰁β-აქტინი (1: 2000) ანტისხეულები. იმ შემთხვევაში, როდესაც ექსტრაქტებს არ დაექვემდებარა იმუნოციტირება, ამ ექსტრაქტებისგან მიღებული მთლიანი ცილის იგივე რაოდენობა გადაიტანეს SDS ნიმუშის ბუფერში, გაათბეს 95 ° C- ზე და შემდეგ პირდაპირ წაისვეს SDS-PAGE- ზე და გაანალიზეს ვესტერნ ბლოტით. (იხ. Segref და სხვ. 2020)

გამოკვლევის ტიპის ინსონენტი UP200St for lysis

ულტრაბგერითი უჯრედის დამშლელი UP200St მიკრო წვერით S26d2- ით ლიზისისა და ცილის მოპოვებისთვის

ულტრაბგერითი ლიზი ზუსტი ტემპერატურის კონტროლის ქვეშ

The VialTweeter is a MultiSample Ultraonicator that allows for reliable sample preparation under precisely controlled temperature conditions.ბიოლოგიური ნიმუშების დამუშავებისას გადამწყვეტი მნიშვნელობა აქვს ტემპერატურის ზუსტ და საიმედო კონტროლს. მაღალი ტემპერატურა იწვევს თერმულად გამოწვეულ ცილის დეგრადაციას ნიმუშებში.
როგორც ნიმუშის მომზადების ყველა მექანიკური ტექნიკა, სონიფიკაცია ქმნის სითბოს. ამასთან, VialTweeter– ის გამოყენებისას ნიმუშების ტემპერატურის კარგად კონტროლი შეიძლება. ჩვენ წარმოგიდგენთ სხვადასხვა ვარიანტებს თქვენი ნიმუშების ტემპერატურის მონიტორინგისა და კონტროლისთვის, ხოლო ამზადებთ მათ VialTweeter და VialPress ანალიზისთვის.

  1. ნიმუშის ტემპერატურის მონიტორინგი: ულტრაბგერითი პროცესორი UP200St, რომელიც მართავს VialTweeter- ს, აღჭურვილია ინტელექტუალური პროგრამითა და დანამატიანი ტემპერატურის სენსორით. შეაერთეთ ტემპერატურის სენსორი UP200St– ში და ჩადეთ ტემპერატურის სენსორის წვერი ერთ – ერთ ნიმუშში. ციფრული ფერადი სენსორული ეკრანის საშუალებით, UP200St- ის მენიუში შეგიძლიათ დააყენოთ ტემპერატურის სპეციფიკური დიაპაზონი თქვენი სინჯის გაჟონვისთვის. ულტრაბგერითი ავტომატურად შეჩერდება მაქსიმალური ტემპერატურის მიღწევისას და შეჩერდება მანამ, სანამ ნიმუშის ტემპერატურა დაყენებული ტემპერატურის ქვედა მნიშვნელობამდე არ შევა. შემდეგ სონიკაცია ავტომატურად იწყება. ეს ჭკვიანი თვისება ხელს უშლის სითბოს გამოწვეულ დეგრადაციას.
  2. VialTweeter ბლოკის წინასწარ გაგრილება შესაძლებელია. დააყენეთ VialTweeter ბლოკი (მხოლოდ სონოტროდი ტრანსდუქტორის გარეშე!) მაცივარში ან საყინულეში, რათა ტიტანის ბლოკი წინასწარ გააციოთ, ნიმუშში ტემპერატურის მომატების გადადება ხდება. თუ შესაძლებელია, ნიმუში შეიძლება წინასწარ გაცივდეს.
  3. გამოიყენეთ მშრალი ყინული გამაგრილებლად გაჟღენთილობის დროს. გამოიყენეთ არაღრმა უჯრა, რომელიც სავსეა მშრალი ყინულით და განათავსეთ VialTweeter მშრალ ყინულზე, რათა სითბო სწრაფად გაფანტოს.

იპოვნეთ ულტრაბგერითი უჯრედის ოპტიმალური გამშლელი თქვენი Lysis აპლიკაციისთვის

Hielscher Ultrasonics არის დიდი ხნის განმავლობაში გამოცდილი მწარმოებლის მაღალი ხარისხის ულტრაბგერითი უჯრედის დამშლელებისა და ჰომოგენიზატორების ლაბორატორიებისთვის, სკამებისა და სამრეწველო მასშტაბის სისტემებისთვის. თქვენი ბაქტერიული უჯრედების კულტურის ზომა, თქვენი კვლევის ან წარმოების მიზანი და უჯრედის დამუშავება საათში ან დღეში არის მნიშვნელოვანი ფაქტორები, რომ იპოვოთ ულტრაბგერითი უჯრედის სწორი დარღვევა თქვენი გამოყენებისათვის.
Hielscher Ultrasonics გთავაზობთ სხვადასხვა გადაწყვეტილებებს მრავალ ნიმუშების ერთდროულად გამაჯანსაღებლად (10-მდე ფლაკონი), ასევე მასობრივი ნიმუშებისთვის (მაგ., მიკროტიტერის ფირფიტები / 96 ჭაბურღილის ფირფიტები), კლასიკური ზონდის ტიპის ლაბორატორიული ულტრაბგერითი, სხვადასხვა დონის 50-დან 400 ვატი სრულად ინდუსტრიული ულტრაბგერითი პროცესორებისთვის, 16000 ვატამდე ერთეულზე კომერციული უჯრედების მოშლისა და ცილების მოპოვებისთვის დიდ წარმოებაში. ყველა Hielscher ულტრაბგერითი აგებულია 24/7/365 ოპერაციისთვის სრული დატვირთვით. სიმტკიცე და საიმედოობა ჩვენი ულტრაბგერითი მოწყობილობების ძირითადი მახასიათებლებია.
ყველა ციფრული ულტრაბგერითი ჰომოგენიზატორი აღჭურვილია ჭკვიანი პროგრამით, ფერადი სენსორული დისპლეით და მონაცემთა ავტომატური პროტოკოლირებით, რომლებიც ულტრაბგერითი მოწყობილობას ლაბორატორიულ და საწარმოო საშუალებებში მოსახერხებელ სამუშაო იარაღად აქცევს.
გვაცნობეთ, რა სახის უჯრედები, რა მოცულობით, რა სიხშირით და რა სამიზნე გაქვთ თქვენი ბიოლოგიური ნიმუშების დამუშავება. ჩვენ გირჩევთ ულტრაბგერითი უჯრედის ყველაზე ხელსაყრელ პროცესს თქვენი მოთხოვნების შესაბამისად.

ქვემოთ მოყვანილ ცხრილში მოცემულია ჩვენი ულტრაბგერითი სისტემების სავარაუდო დამუშავების მოცულობა კომპაქტური ხელის ჰომოგენიზატორებიდან და MultiSample ულტრაბგერითიდან დამთავრებული ულტრაბგერითი პროცესორებით კომერციული პროგრამებით:

Batch მოცულობა დინების სიჩქარე რეკომენდირებული მოწყობილობები
96 ჭაბურღილი / მიკროტიტერის ფირფიტები na UIP400MTP
10 ფლაკონი 0.5-დან 1.5 მლ-მდე na VialTweeter ზე UP200St
0.01-დან 250 მლ-მდე 5-დან 100 მლ / წთ UP50H
0.01-დან 500 მლ-მდე 10 დან 200 მლ / წთ UP100H
10 დან 2000 მლ 20 დან 400 მლ / წთ Uf200 ः t, UP400St
01-დან 20 ლ-მდე 02-დან 4 ლ / წთ UIP2000hdT
10-დან 100 ლ 2-დან 10 ლ / წთ UIP4000hdT
na 10-დან 100 ლ / წთ UIP16000
na უფრო დიდი კასეტური UIP16000

დაგვიკავშირდით! / გვკითხე ჩვენ!

სთხოვეთ დამატებითი ინფორმაციის მისაღებად

გთხოვთ, გამოიყენოთ ქვემოთ მოცემული ფორმა, რომ მოითხოვოთ დამატებითი ინფორმაცია ულტრაბგერითი პროცესორების, აპლიკაციების და ფასის შესახებ. მოხარული ვიქნებით, რომ ჩვენთან ერთად ვიმსჯელოთ თქვენს პროცესზე და შემოგთავაზოთ ულტრაბგერითი სისტემა, რომელიც აკმაყოფილებს თქვენს მოთხოვნებს!









გთხოვთ გაითვალისწინოთ ჩვენი კონფიდენციალურობის პოლიტიკა.


Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

Hielscher Ultrasonics აწარმოებს მაღალი ხარისხის ულტრაბგერით ჰომოგენიზატორებს ლაბორატორიული, საპილოტე და სამრეწველო მასშტაბის პროგრამების, დისპერსიის, ემულგირებისა და მოპოვების შერევისთვის.

ლიტერატურა / ცნობები



ფაქტები Worth Knowing

Caenorhabditis elegans

C. elegans არის თავისუფალი მდგრადი გამჭვირვალე ნემატოდა (მრგვალი ჭია) დაახლოებით 1 მმ სიგრძით, რომელიც იკვებება ბაქტერიებით (მაგ. E. coli) და აქვს შედარებით ხანმოკლე სიცოცხლის ციკლი. 20 ° C ტემპერატურაზე, C. elegans- ის ლაბორატორიული შტამი (N2) სიცოცხლის საშუალო ხანგრძლივობა დაახლოებით 2-3 კვირაა და თაობის დრო 3-დან 4 დღეა. როდესაც C. elegans გაიზარდა დიდი რაოდენობით, რაც შეიძლება მარტივად გაკეთდეს ზუსტად კონტროლირებადი ლაბორატორიის პირობებში, მათ ადვილად დაათვალიერებენ ახალი მედიკამენტების მუშაობის პრინციპს, აგრეთვე მათ ეფექტებს და ურთიერთქმედებას ადამიანის დაავადების რთულ მოლეკულურ პროცესებში. მოკლე გენომი, ხანმოკლე სასიცოცხლო ციკლი და ლაბორატორიულ პირობებში მარტივი დამუშავება ქმნის C. elegans- ს იდეალურ ორგანიზმად ორგანიზმში ისეთი კვლევებისთვის, როგორიცაა გენომიკა, პროტეომიკა, განვითარების ბიოლოგია, დაავადებების კვლევა, წამლის განვითარება და ა.შ.
Caenorhabditis elegans ჭიები შეიძლება იყოს კაცი ან ჰერმაფროდიტი. ჰერმაფროდიტებს აქვთ როგორც მამაკაცის, ასევე ქალის რეპროდუქციული ორგანოები. ამასთან, მდედრობითი ჭიები არ არსებობს. ჰერმაფროდიტებს შეუძლიათ თვითნაყოფიერება მოახდინონ ან ასევე შეუძლიათ მამრობით მატლებთან გამრავლება. C. elegans– ს შეუძლია 1000 – ზე მეტი კვერცხის წარმოება ყოველდღე.
მას შემდეგ, რაც C. elegans არის ნერვული სისტემის ერთ-ერთი უმარტივესი ორგანიზმი, ნემატოდური ჭია გამოიყენება 1963 წლიდან, როგორც კვლევითი ორგანიზაციის მოდელი. ნეირონები არ ათავისუფლებენ მოქმედების პოტენციალებს და არ გამოხატავენ ძაბვისგან დაცულ ნატრიუმის არხებს. ჰერმაფროდიტში ეს სისტემა მოიცავს 302 ნეირონს, რომლის ნიმუშიც ყოვლისმომცველად არის აღწერილი, რაც კონექტომის სახელითაა ცნობილი.
C. elegans– ის გენომის ბევრ გენს აქვს ადამიანის ფუნქციური ანალოგი, რაც მას ადამიანის დაავადებების უკიდურესად სასარგებლო მოდელს ხდის და, მაგალითად, გამოიყენება განვითარების ბიოლოგიის, დაბერების და ხანგრძლივობაზე ზემოქმედების ფაქტორების შესასწავლად. გარდა ამისა, C. elegans მუტანტები გთავაზობთ მრავალი ადამიანის დაავადებების მოდელებს, მათ შორის ნევროლოგიური აშლილობების (მაგ. ალცჰეიმერის), გულის თანდაყოლილი დაავადებების და თირკმელების დაავადებების შესახებ.
ამ ფაქტორებმა C. elegans- ი ძალზე ღირებული მოდელი გახადა მრავალი კვლევითი დარგისთვის. შესაბამისად, C. elegans იყო პირველი მრავალუჯრედიანი ორგანიზმი, რომლის მთლიანი გენომის თანმიმდევრობა მოხდა. გენომი შეიცავს სავარაუდოდ 20470 ცილის კოდირების გენებს. C. elegans- ის გენების დაახლოებით 35% -ს აქვს ადამიანის ჰომოლოგი. საგულისხმოა, რომ ადამიანის გენები არაერთხელ ნაჩვენებია C. elegans– ში მათი C. elegans– ში შეყვანისას. და პირიქით, C. elegans- ის ბევრ გენას შეუძლია ფუნქციონირება ძუძუმწოვრების გენების მსგავსად.

C. elegans– ის სიცოცხლე დაახლოებით. 3 კვირა და შედგება ექვსი სიცოცხლის ეტაპისგან: ემბრიოგენეზი (კვერცხუჯრედის ეტაპი), ოთხი ლარვის ეტაპი (L1- დან L4) და მოზრდილების ეტაპი. ნემატოდები გამოდიან კვერცხებიდან, როგორც L1 larva, რომელიც შედგება 560 უჯრედისგან. თითოეული ლარვის ეტაპზე ზრდა ხდება უჯრედების დაყოფით და უჯრედების ჰიპერტროფიით. კუტიკულური მოლინგი წყვეტს ლარვის თითოეულ სტადიას. თუ მკაცრი გარემო პირობები მიანიშნებს განვითარებად ჭიაზე, რომ პირობები საეჭვოა ხელი შეუწყოს მოზრდილთა ნაყოფიერებას, C. elegans- ს შეუძლია შეცვალოს მისი განვითარება და შექმნას ალტერნატიული L3 ლარვის ეტაპი, სადაც ლარვები გადადის უფრო რთულ ეტაპზე. ამ მდგომარეობაში ცხოველები არაჩვეულებრივად იტანენ სტრესს და დიდხანს ცოცხლობენ და მათ შეუძლიათ გადარჩონ სამიდან ცხრა თვემდე. დაუერის ლარვები იზოლირებულნი არიან უბედურებისაგან, დალუქონ თავიანთი ნაწლავისა და ანალური ღრუსები, შეამცირონ ნაწლავები და ჩართონ daf-16 / FOXO– ზე დამოკიდებული გენეტიკური პროგრამა, რომელიც სხვათა შორის იწვევს დაურ-სპეციფიკური კუტიკულის გამოხატვას. (შდრ. ჰენდერსონი და სხვები, 2006)

C. elegans Dauer Larvae

დაუერის larvae არის ტერმინი ნემატოდული larvae, რომელიც შევიდა ალტერნატიული განვითარების ეტაპზე. ტერმინი "დაუერის ლარვა" განსაკუთრებით გამოიყენება რაბდიტიდების ოჯახის ჭიებისათვის, მათ შორის კაენორჰაბდიტის ელეგანტები. სიტყვა "დაუერი" გერმანული წარმოშობისაა და ნიშნავს "ხანგრძლივობას” მნიშვნელობით “დროის მონაკვეთი ”. Dauer larvae გადადის ტიპის stasis და შეუძლია გადარჩეს მკაცრი პირობები. თუ როდის და როდის ხდება ლარვა დაერის სტადიაში, ეს დამოკიდებულია გარემო პირობებზე. დაუერის ლარვები ინტენსიურად არის შესწავლილი ბიოლოგიაში, რადგან ლარავებს აქვთ განსაკუთრებული გარემო გადარჩენისა და ხანგრძლივი პერიოდის განმავლობაში ცხოვრების არაჩვეულებრივ შესაძლებლობებს. მაგალითად, C. elegans dauer- ის ლარვას შეუძლია გადარჩეს ოთხ თვემდე, გაცილებით მეტხანს ვიდრე მათი საშუალო სიცოცხლე დაახლოებით სამი კვირაა ნორმალური რეპროდუქციული განვითარების დროს.