ალფა-სინუკლეინის ფრაგმენტაცია VialTweeter Sonicator-ის გამოყენებით
α-სინუკლეინის ფიბრილები და ლენტები ფრაგმენტირებულია სამეცნიერო კვლევებში, რათა წარმოქმნან პატარა ფიბრილის ნაწყვეტები ან თუნდაც ცალკეული ცილის მოლეკულები, რომელთა ანალიზი უფრო ადვილად შეიძლება სხვადასხვა ექსპერიმენტული ტექნიკის გამოყენებით. VialTweeter Sonicator არის ერთ-ერთი ყველაზე ხშირად გამოყენებული ულტრაბგერითი ეფექტური და საიმედო ალფა-სინუკლეინის ფრაგმენტაციისთვის.
α-სინუკლეინი კვლევაში
ალფა-სინუკლეინის ფიბრილები არის ცილის აგრეგატები, რომლებიც მტკიცედ არის დაკავშირებული ნეიროდეგენერაციულ დარღვევებთან, როგორიცაა პარკინსონის დაავადება და დემენციის გარკვეული ფორმები, მათ შორის დემენცია ლევის სხეულებით. ალფა-სინუკლეინის ფიბრილებზე ორიენტირებული კვლევა მიზნად ისახავს მათი როლის გააზრებას დაავადების პროგრესირებაში და პოტენციური თერაპიული ჩარევების განვითარებაში. ალფა-სინუკლეინის ფიბრილების მცირე ფრაგმენტებად დაშლით, მკვლევარებს შეუძლიათ გამოიკვლიონ მათი სპეციფიკური სტრუქტურული მახასიათებლები. მაგალითად, ალფა-სინუკლეინის ფიბრილების ფრაგმენტირება მკვლევარებს საშუალებას აძლევს გამოიკვლიონ მათი ურთიერთქმედება სხვა მოლეკულებთან, როგორიცაა ცილები, ლიპიდები ან მცირე მოლეკულები. მცირე ფრაგმენტების წარმოქმნით, ამ ურთიერთდამოკიდებულ პარტნიორებთან დამაკავშირებელი ადგილები და აფინურობა შეიძლება უფრო ეფექტურად გამოიკვლიოს. პატარა α-Syn ფრიბრილები და ლენტები შეიძლება ასევე აჩვენონ შეცვლილი ტოქსიკურობა და ბიოქიმიური ეფექტები. ამიტომ, გადამწყვეტი მნიშვნელობა აქვს ფრაგმენტაციის საიმედო და ეფექტურ ტექნიკას, რომელიც იძლევა განმეორებად შედეგებს სწრაფ და მარტივ ნიმუშზე დამუშავებისას.
ულტრაბგერითი ალფა-სინ ფრაგმენტაცია: VialTweeter sonicator არის დადგენილი ულტრაბგერითი ნიმუშის მოსამზადებელი სისტემა, რომელიც ასხივებს 10-მდე ფლაკონს ერთდროულად ზუსტად იმავე პირობებში. პროგრამირებადი პარამეტრები იძლევა ერთი და იგივე ექსპერიმენტების მარტივ და სწრაფ განმეორებას, რაც იძლევა უაღრესად სანდო და გამეორებად შედეგებს ალფა-სინუკლეინის ფიბრილის ფრაგმენტაციაში.
VialTweeter sonicator მრავალი ალფა-სინუკლეინის ნიმუშის ერთდროული ულტრაბგერითი ფრაგმენტაციისთვის.
α-სინუკლეინის ნიმუშის მომზადება სონიკატორით
ალფა-სინუკლეინის ფიბრილების შესწავლის ერთ-ერთი მიდგომა მოიცავს მათ მოპოვებას და ფრაგმენტაციას ისეთი ტექნიკის გამოყენებით, როგორიცაა სონიკა. Sonication არის პროცესი, რომელიც იყენებს მაღალი ინტენსივობის, დაბალი სიხშირის ულტრაბგერითი ტალღებს ცილის აგრეგატების ჩაშლისა და დაშლის მიზნით, რაც იწვევს უფრო მცირე ფიბრილების ან ცალკეული ცილის მოლეკულების განთავისუფლებას. Sonicator VialTweeter არის საყოველთაოდ გამოყენებული მოწყობილობა α-სინუკლეინთან დაკავშირებულ კვლევებში ამ მიზნით.
მრავალი კვლევითი კვლევა აღწერს ნიმუშის მომზადების ზუსტ პროტოკოლებს ალფა-სინუკლეინის ფიბრილების სონიკაციისთვის, რომელიც იყენებს Hielscher VialTweeter-ს ეფექტური და საიმედო α-სინუკლეინის ფიბრილის ფრაგმენტაციისთვის. ფიბრილების ულტრაბგერითი ფრაგმენტირებით, მკვლევარებს შეუძლიათ გაანალიზონ მიღებული პროდუქტები და გამოიკვლიონ მათი სტრუქტურა, ტოქსიკურობა და სხვა მოლეკულებთან ურთიერთქმედება. ეს კვლევა გვაწვდის მნიშვნელოვან შეხედულებებს ნეიროდეგენერაციის საფუძველში არსებული მექანიზმების შესახებ და პოტენციურად ახალი თერაპიული მიზნების იდენტიფიცირებას. კარგად ჩამოყალიბებული α-სინუკლეინის sonication პროტოკოლები VialTweeter sonicator-ის გამოყენებით იძლევა საიმედო და გამეორებად შედეგებს.
ზედა გამოსახულებები: არაფრაგმენტირებული ალფა-სინუკლეინის ფიბრილები
ქვედა სურათები: ულტრაბგერითი ფრაგმენტული ალფა-სინუკლეინის ფიბრილები VialTweeter sonicator-ით
(კვლევა და სურათები: ©Dieriks et al., 2022)
α-სინუკლეინის ფიბრილების ულტრაბგერითი ფრაგმენტაცია – პროტოკოლები
ვინაიდან მრავალი მკვლევარი იყენებს VialTweeter sonicator-ს, როგორც ფრაგმენტაციის სასურველ ტექნიკას ერთიანი α-სინუკლეინის ფიბრილის ფრაგმენტების წარმოებისთვის, დადგენილი პროტოკოლები ადვილად ხელმისაწვდომია. ქვემოთ შეგიძლიათ იხილოთ ფრაგმენტაციის რამდენიმე სამაგალითო პროტოკოლი.
ClearTau თესლის მომზადება: ClearTau ფიბრილები განზავებული იყო 10 μM-მდე dH2O-ში და გაჟღენთილი იქნა 70% ამპლიტუდაზე 50 წამის განმავლობაში 1 წმ ON 1 s OFF ციკლით ტუბში სონიკატორი UP200St-ით VialTweeter-ით. თესლები ხასიათდებოდა ელექტრონული მიკროსკოპით.
ThS ფლუორესცენციის გაზომვა: ClearTau ფიბრილები განზავებული იყო 2.5 μM-მდე dH2O-ში და გაჟღენთილი იყო 70% ამპლიტუდაზე 50 წამის განმავლობაში 1 წმ ON 1 s OFF ციკლით მილში UP200St-ის გამოყენებით VialTweeter-ით. საკონტროლოდ გამოყენებული იყო 2.5 μM სრულმეტრაჟიანი Tau 4R2N მონომერი. 100 მკლ რეაქციას დაემატა 100 μl ThS (10 μM), რის შედეგადაც ცილის საბოლოო კონცენტრაცია იყო 1.25 μM. ერთჯერადი წერტილის ThS ფლუორესცენცია გაზომილი იყო 96 კარგად გამჭვირვალე ქვედა ფირფიტის გამოყენებით, დაყენებული FLUOstar Omega მიკროფირფიტის წამკითხველში აგზნებით 445 ნმ და ემისია 485 ნმ-ზე დაფიქსირდა.
(შდრ. Limorenko et al., 2023)
ერთიანი α-სინუკლეინის სიგრძე სონიკაციის გამოყენებით: α-სინ ფიბრილებისა და ლენტების სიგრძის ჰეტეროგენურობა შემცირდა 20 წუთის განმავლობაში ყინულზე გაჟღერებით 2-მლ ეპენდორფის მილებში VialTweeter-ში, კომპლექტში 75% ამპლიტუდაზე, 0,5 წამის იმპულსებზე.
(შდრ. Bousset et al., 2013)
განხორციელდა ადამიანის რეკომბინანტული მონომერული WT ან S129A a-Syn და მათ მიერ წარმოქმნილი ფიბრილარული პოლიმორფების ხარისხის კონტროლი, ისევე როგორც a-Syn 1-110. შემდგომში, ფიბრილარული პოლიმორფები ფრაგმენტირებული იქნა 20 წუთის განმავლობაში სონიკით 2 მლ ეპენდორფის მილებში VialTweeter ულტრაბგერითი აპარატში, რათა წარმოქმნან ფიბრილარული ნაწილაკები საშუალო ზომის 42-52 ნმ, რომლებიც შესაფერისია ენდოციტოზისთვის.
(შდრ. შრივასტავა და სხვ., 2020)
ხუთი ფიბრილარული α-Syn პოლიმორფის დახასიათება. (A) ნაჩვენებია ნეგატიურად შეღებილი α-Syn ფიბრილარული პოლიმორფების ფიბრილების, ლენტები, ფიბრილები-91, ფიბრილები-65 და ფიბრილები-110 გადამცემი ელექტრონული მიკროგრაფები VialTweeter-ით (ქვედა ზოლი) ფრაგმენტაციის წინ (ზედა ზოლი). (B) ნაჩვენებია ფრაგმენტული ფიბრილარული პოლიმორფების სიგრძის განაწილება. მითითებულია ფიბრილარული შეკრებების რაოდენობა (n), საიდანაც იქნა მიღებული ჰისტოგრამები.
(შესწავლა და სურათები: შრივასტავა და სხვ., 2020)
α-Syn ფიბრილები ფრაგმენტული იყო 20 წუთის განმავლობაში სონიკირებით 2 მლ ეპენდორფის მილებში VialTweeter-ში ფიბრილარული ნაწილაკების გენერირებისთვის საშუალო ზომის 42-52 ნმ, როგორც შეფასებულია TEM ანალიზით.
(შდრ. Negrini et al., 2022)
ხელახლა სუსპენდირებული ფიბრილები91 (PBS-ში) ფრაგმენტირებული იყო უჯრედულ კულტურებში დამატებამდე სონიკაციით 20 წუთის განმავლობაში 2 მლ ეპენდორფის მილებში Vial Tweeter sonicator-ის გამოყენებით.
(შდრ. Vajhøj et al., 2021)
Sonicator UIP400MTP ალფა-სინუკლეინის ფიბრილის ფრაგმენტაციისთვის მრავალ ჭაბურღილ ფირფიტებში.
VialTweeter და Lab Sonicators α-Syn ფრაგმენტაციისთვის
Hielscher Ultrasonics მსოფლიოში აღიარებულია, როგორც უახლესი ულტრაბგერითი აპარატების წამყვანი მწარმოებელი. ჩვენი ულტრაბგერითი, სანდო და დამკვიდრებული მსოფლიოს მთავარ კვლევით ლაბორატორიებში, გთავაზობთ შეუდარებელ ხარისხს და შესრულებას თქვენი კრიტიკული ექსპერიმენტებისთვის.
Hielscher VialTweeter-ით და ნებისმიერი სხვა Hielscher sonicator-ით, თქვენ ისარგებლებთ მომხმარებლის შეუდარებელი კომფორტით, რადგან ისინი გააზრებულად არის შემუშავებული რეპროდუცირებადი შედეგებისთვის, მარტივად გამოყენებისა და უწყვეტი მუშაობისთვის. მონაცემთა ავტომატური ჩაწერის ფუნქციებით, შეგიძლიათ ფოკუსირება მოახდინოთ თქვენს კვლევაზე, ხოლო ჩვენი ულტრაბგერითი აპარატები ზედმიწევნით აფიქსირებენ მნიშვნელოვან მონაცემებს გამეორებადობისა და სიზუსტისთვის.
მიაღწიეთ თანმიმდევრულ და განმეორებად შედეგებს თავდაჯერებულად!
ჩვენი ულტრაბგერითი აპარატები დამზადებულია და დამზადებულია გერმანიაში. გერმანული სიზუსტე და უმაღლესი საინჟინრო ხარისხი, რათა უზრუნველყოს სანდო და ზუსტი ნიმუშის მომზადება ასეთი ალფა-სინუკლეინის ფიბრილის ფრაგმენტაცია ყოველ ჯერზე. აღარ ინერვიულოთ არათანმიმდევრული შედეგების შესახებ – ჩვენი ულტრაბგერითი ტექნოლოგია უზრუნველყოფს, რომ თქვენი კვლევა დარჩეს მეცნიერული წინსვლის წინა პლანზე.
მაგრამ ეს ყველაფერი არ არის! ჩვენი ერთგულება სრულყოფილებისადმი ვრცელდება ჩვენი პროდუქტების მიღმა. ჩვენ ვამაყობთ ჩვენი განსაკუთრებული მომხმარებელთა მომსახურებით, უზრუნველვყოფთ საექსპერტო მხარდაჭერას ნებისმიერი შეკითხვის ან შეშფოთების მოსაგვარებლად. ჩვენი თავდადებული გუნდი აქ არის, რათა დაგეხმაროთ თქვენი კვლევითი მოგზაურობის ყოველ ნაბიჯზე, რაც უზრუნველყოფს მაქსიმალურ სარგებელს ჩვენი ულტრაბგერითი აპარატებიდან.
აირჩიეთ ინოვაცია, საიმედოობა და მომხმარებლის განსაკუთრებული გამოცდილება – აირჩიეთ ჩვენი ლაბორატორიული სონნიკატორები, როგორიცაა VialTweeter ალფა-სინუკლეინის ფიბრილის ფრაგმენტაციისთვის. ისარგებლეთ უკვე დადგენილი პროტოკოლებით და შეუერთდით წამყვანი მკვლევართა რიგებს, რომლებიც ენდობიან ჩვენს ტექნოლოგიას თავიანთი კრიტიკული კვლევებისთვის. აამაღლეთ თქვენი კვლევა და გამოიკვლიეთ ახალი საზღვრები დემენციისა და ნეიროდეგენერაციული დაავადებების კვლევაში ჩვენი უახლესი ულტრაბგერითი აპარატებით.
- მაღალი ეფექტურობის
- უახლესი ტექნოლოგია
- საიმედოობა & სიმტკიცე
- განმეორებადობა
- რეგულირებადი, ზუსტი პროცესის კონტროლი
- ნებისმიერი მოცულობისთვის
- ინტელექტუალური პროგრამული უზრუნველყოფა
- ჭკვიანი ფუნქციები (მაგ., პროგრამირებადი, მონაცემთა პროტოკოლირება, დისტანციური მართვა)
- მარტივი და უსაფრთხო ფუნქციონირება
- დაბალი მოვლა
- CIP (სუფთა ადგილზე)
დიზაინი, წარმოება და კონსულტაცია – ხარისხი დამზადებულია გერმანიაში
Hielscher ულტრაბგერითები ცნობილია მათი უმაღლესი ხარისხისა და დიზაინის სტანდარტებით. გამძლეობა და მარტივი მუშაობა საშუალებას იძლევა ჩვენი ულტრაბგერითი აპარატების გლუვი ინტეგრაცია სამრეწველო ობიექტებში. უხეში პირობები და მომთხოვნი გარემო ადვილად უმკლავდება Hielscher ულტრაბგერითებს.
Hielscher Ultrasonics არის ISO სერთიფიცირებული კომპანია და განსაკუთრებული აქცენტი კეთდება მაღალი ხარისხის ულტრაბგერაზე, რომელიც აღჭურვილია უახლესი ტექნოლოგიით და მომხმარებლის კეთილგანწყობით. რა თქმა უნდა, Hielscher sonicators შეესაბამება CE და აკმაყოფილებს UL, CSA და RoHs მოთხოვნებს.
ქვემოთ მოყვანილი ცხრილი გაძლევთ მითითებას ჩვენი ლაბორატორიის ზომის ულტრაბგერითი აპარატების სავარაუდო დამუშავების შესაძლებლობის შესახებ:
| რეკომენდებული მოწყობილობები | სურათების მოცულობა | Დინების სიჩქარე |
|---|---|---|
| UIP400MTP | მრავალ ჭაბურღილის / მიკროტიტრული ფირფიტები | na |
| ულტრაბგერითი CupHorn | ჭიქა ფლაკონისთვის ან ჭიქისთვის | na |
| GDmini2 | ულტრაბგერითი მიკრო ნაკადის რეაქტორი | na |
| VialTweeter | 0.5-დან 1.5მლ-მდე | na |
| UP100H | 1-დან 500 მლ-მდე | 10-დან 200 მლ/წთ-მდე |
| UP200Ht, UP400 ქ | 10-დან 2000 მლ-მდე | 20-დან 400 მლ/წთ-მდე |
Დაგვიკავშირდით! / Გვკითხე ჩვენ!
VialTweeter ჩვეულებრივ გამოიყენება ალფა-სინუკლეინის ფიბრილის ფრაგმენტაციისთვის, როგორც ნიმუშის წინასწარი ანალიტიკური მომზადების ეტაპი
ლიტერატურა / ლიტერატურა
- Emil Dandanell Agerschou, Marie P. Schützmann, Nikolas Reppert, Michael M. Wördehoff, Hamed Shaykhalishahi, Alexander K. Buell, Wolfgang Hoyer (2021): β-Turn exchanges in the α-synuclein segment 44-TKEG-47 reveal high sequence fidelity requirements of amyloid fibril elongation. Biophysical Chemistry, Volume 269, 2021.
- Bousset, L., Pieri, L., Ruiz-Arlandis, G. et al. (2013): Structural and functional characterization of two alpha-synuclein strains. Nature Communications 4, 2575 (2013).
- Vajhøj, Charlott; Schmid, Benjamin; Alik, Ania; Melki, Ronald; Fog, Karina; Holst, Bjørn; Stummann, Tina (2021): Establishment of a human induced pluripotent stem cell neuronal model for identification of modulators of A53T α-synuclein levels and aggregation. PLOS ONE 16, 2021.
- Dieriks B.V.; Highet B.; Alik A.; Bellande T.; Stevenson T.J.; Low V.; Park T.I.; Correia J.; Schweder P.; Faull R.L.M.; Melki R.; Curtis M.A.; Dragunow M. (2022): Human pericytes degrade diverse α-synuclein aggregates. PLoS One, Nov 18;17(11), 2022.
- Amulya Nidhi Shrivastava, Luc Bousset, Marianne Renner, Virginie Redeker, Jimmy Savistchenko, Antoine Triller, Ronald Melki (2020): Differential Membrane Binding and Seeding of Distinct α-Synuclein Fibrillar Polymorphs. Biophysical Journal, Volume 118, Issue 6, 2020. 1301-1320.
- Negrini M, Tomasello G, Davidsson M, Fenyi A, Adant C, Hauser S, Espa E, Gubinelli F, Manfredsson FP, Melki R, Heuer A. (2022): Sequential or Simultaneous Injection of Preformed Fibrils and AAV Overexpression of Alpha-Synuclein Are Equipotent in Producing Relevant Pathology and Behavioral Deficits. Journal of Parkinsons Disease 12(4), 2022. 1133-1153.
- Limorenko G, Tatli M, Kolla R, Nazarov S, Weil MT, Schöndorf DC, Geist D, Reinhardt P, Ehrnhoefer DE, Stahlberg H, Gasparini L, Lashuel HA (2023): Fully co-factor-free ClearTau platform produces seeding-competent Tau fibrils for reconstructing pathological Tau aggregates. Nature Communications 4;14(1), July 2023.
Hielscher Ultrasonics აწარმოებს მაღალი ხარისხის ულტრაბგერითი ჰომოგენიზატორებისგან ლაბორატორია რომ სამრეწველო ზომა.