Uzorak Priprema s ultrazvučnim VialTweeter

Priprema uzorka prije analize može zahtijevati različite pred-analitičke procese kao što su homogenizacija tkiva, liza, ekstrakcija proteina, DNK, RNK, organele i druge unutarstanične tvari, otapanje i odmaštanje. VialTweeter je jedinstven ultrazvučni uređaj koji priprema više uzorak cijevi istovremeno pod potpuno istim uvjetima. Zbog neizravne sonikacije zatvorenih ispitnih cijevi izbjegava se unakrsna kontaminacija i gubitak uzorka.

Ultrazvučni priprema uzorka

Ultrasonikacija je uobičajena tehnika liječenja uzoraka kako bi uzorak bio spreman za analize kao što su lančana reakcija polimera (PCR), zapadne mrlje, test, molekularno sekvenciranje, kromatografija itd. Ultrasonikacija je tehnika koja se naširoko koristi u laboratorijima za liječenje uzoraka predanalitički. Glavna prednost sonikacije je u tome što se radni princip ultrazvuka temelji na čisto mehaničkim silama. Ultrazvučnaliza i poremećaj stanica postiže se sonomehaničkim silama smicanja, što ultrazvuku daje prednost da se otapala koja se koriste za ekstrakciju proteina mogu koristiti i tijekom lize. Ultrazvučni stanični disruptori kao što je VialTweeter razbijaju stanične zidove / membrane i potiču masovni prijenos između unutrašnjosti stanica i otapala. Time se analit (npr. DNK, RNK, proteini, organeli itd.) učinkovito prenosi iz stanične matrice u otapalo. To znači da se koraci utaživanja i ekstrakcije preklapaju s procesom ultrazvučnog poremećaja stanica, što čini ultrazvučnu lizu vrlo učinkovitom. Nadalje, ultrazvučni pripravak uzorka ne zahtijeva deterdžente i druge reagense lize, koji mogu promijeniti i uništiti strukturu lisata i poznati su po kasnijim problemima s pročišćavanjem. Druga metodalize, enzimski poremećaj zahtijeva dugo vrijeme inkubacije i daje često ne-ponovljive rezultate. Ultrazvučni pripravak uzorka nadilazi uobičajene probleme u pripremi uzoraka kao što su homogenizacija tkiva, poremećaj stanica, liza, ekstrakcija proteina i solubilizacija lizata. Budući da se intenzitet ultrazvučnog liječenja može točno kontrolirati i prilagoditi biološkom uzorku, izbjegava se degradacija i gubitak uzorka. Automatski praćena i kontrolirana temperatura uzorka, način pulsa i trajanje sonikacije osiguravaju optimalne ishode.

VialTweeter je posebno zgodan za laboratorijski rad koji zahtijeva istovremenu pripremu više uzoraka pod istim uvjetima. VialTweeter je ultrazvučni blok sonotrode koji može držati do 10 bočica (npr. Eppendorf, centriguge, NUNC cijevi, krio-bočice) i sonicates ih intenzivno u točno kontroliranim uvjetima. Budući da se ultrazvučna energija upari kroz zidove bočica u uzorak medij, bočice održavaju zatvorene tijekom liječenja. Time se u potpunosti izbjegava gubitak uzorka i unakrsna kontaminacija.

Bočice i cijevi koje odgovaraju VialTweeteru

VialTweeter je pogodno za držanje 10 zajedničkih konusnih ili okruglo-donjih cijevi kao što su Eppendorf, centrifuga, krio-bočice i razne NUNC bočice vrste, ali rupe se mogu prilagoditi drugim veličinama bočice i cijevi na zahtjev. Molimo vas da nam javite koju vrstu testnih cijevi želite koristiti tako da možemo u skladu s tim izmijeniti vaš VialTweeter. Za veće ispitne cijevi kao što su Sokolove cijevi i drugi spremnici za ispitivanje, hrastovi i posude, VialPress je povoljno rješenje.

VialTweeter s VialPress

Dok sam VialTweeter sa svojih 10 cijevi rupa je već jedinstven i vrlo funkcionalan ultrazvučni uređaj, VialPress dodatak čini VialTweeter još svestran i fleksibilniji za rad. VialPress je dodatak za VialTweeter koji se sastoji u stezaljku-na traci koja omogućuje fiksiranje većih uzorak cijevi kao što su Falcon cijevi ili druge male do srednje veličine testnih pahulja na VialTweeter front. Slika na lijevoj strani prikazuje VialTweeter koji drži 10 bočica Eppendorf u bloku, dok VialPress fiksira jednu veću epruvetu sprijeda za sonication. VialPress je sposoban držati do 5 većih ispitnih cijevi za intenzivno sonication.

VialTweeter Protokoli pripreme uzoraka

VialTweeter se naširoko koristi za sonicirati biološke uzorke. Prije analize uzorci se moraju pripremiti za biokemijske ili biofizičke analize i testove, npr. VialTweeter pouzdano ispunjava te ultrazvučne procese i daje ponovljive rezultate. Uobičajena primjena VialTweetera je liza/stanični poremećaj tkiva sisavaca (ljudskih i životinjskih) kao i stanica bakterija i virusnih čestica. Uspješno biološki uzorci liječeni vialTweeterom uključuju epitelijske stanice ljudskih pluća, hematopoetske matične stanice, mijeloične stanice leukemije, Escherichia coli, Bacillus subtilis, Bacillus anthracis, Francisella tularensis, Yersinia pestis, Streptococcus pyogenes, Caulobacter crescentus, Upala pluća mikoplazme, mycobacteria / Mycobacterium tuberculosis kompleks (MTBC) i mnoge druge bakterijske, botaničke, i mikrobne stanice.
U nastavku možete pronaći nekoliko odabranih protokola koji sadrže VialTweeter.

E.Coli Lysis S VialTweeter za In-Vivo Glutathione određivanje

Bakterije Escherichia coli soja MG1655 uzgajane su u MOPS minimalnom mediju u ukupnom volumenu od 200ml sve dok nije postignut A600 od 0,5. Kultura je podijeljena na 50-ml kulture za tretman stresa. Nakon 15 min inkubacije s 0,79 mM allicina, 1 mM diamida, ili dimetil sulfoksida (kontrola), stanice su pobrane na 4.000g na 4°C tijekom 10 min. Stanice su dva puta oprane s KPE puferom prije resuspenzije kuglica u 700μl KPE pufera. Za deproteination, 300μl od 10% (w/v) sulfosalicilna kiselina su dodani prije poremećaja stanica ultrasonication (3 x 1 min; VialTweeter ultrasonicator). Natprirodni su prikupljeni nakon centrifugacije (30 min, 13.000g, 4°C). Koncentracije sulfosalicilne kiseline smanjene su na 1% dodavanjem 3 volumena KPE pufera. Mjerenja ukupnog glutiona i GSSG-a provedena su kako je gore opisano. Stanične koncentracije glutiona izračunate su na temelju volumena stanica E. coli od 6,7×10-15 litara i gustoće stanica od A600 0,5 (što odgovara 1×108 stanica ml-1 kulture). Koncentracije GSH-a izračunane su oduzimanjem 2[GSSG] od ukupnog glutiona. (Müller i dr. 2016.)

Liza stanica s VialTweeterom prije atomske apsorpcione spektrometrije grafitne peći

Bacillus subtilis 168 (trpC2) bili su izloženi 15 min antibiotičkog stresa, Zatim su se ćelije berle na 3.320 x g, 5 puta oprane sa 100 mM Tris/1 mM EDTA, pH 7,5, ponovno ubarene u 10 mM Tris, pH 7,5 i poremećene ultrasonikacijom u Hielscher VialTweeter instrumentu. (Wenzel et al. 2014.)

VialTweeter Uzorak Priprema prije masene spektrometrije

Liofilizirane stanične kuglice ljudskog CD34􏰀 hematopoetskih matičnih/progenitornih stanica ponovno su unaprijeđene u 10μ􏰇l (200μl za rasuti HEK293 pripravak za seriju peptidnog razrjeđivanja) od 8 M ureje u 100 mM amonijevog hidrogenkarbonat karbonat i lysed potamni sonication with the Hielscher VialTweeter na amplitudi od 60%, ciklus od 60% i trajanje 20-ih tri puta s srednjim hlađenjem na ledu. (Amon et al. 2019)

Protokoli pripreme uzoraka pomoću VialPress

Svježa salata (Lactuca sativa) homogenizirana je u 0,5 M HEPES pufera (pH 8, KOH prilagođena) u omjeru od 1 g biljke (svježa težina) do 200, 100, 50 ili 20 mL tampon otopine. Omjer biljne mase i volumena otopine tampona bio je raznolik kako bi se zadržala ukupna homogena zapremina između 3,5 i 12 mL. Omjer biljne mase i volumena otopine tampona bio je raznolik kako bi se zadržala ukupna homogena zapremina između 3,5 i 12 mL, što je omogućilo homogenizaciju sonde. Homogenati zatim podvrgao neizravni ultrasonication koristeći UP200St s VialTweeter opremljen s 200xt VialPress (Hielscher Ultrasonics GmbH, Njemačka) za 3 min (80% puls i 100% snage). Korištenjem ovog uređaja izbjegnuta je kontaminacija. (Laughton i dr. 2019.)

Pouzdana kontrola temperature tijekom Sonication s VialTweeter

Temperatura je presudan faktor koji utiče na proces koji je posebno važan za liječenje bioloških uzoraka. Kao i sve mehaničke tehnike pripreme uzoraka, sonication stvara toplinu. Međutim, temperatura uzoraka može se dobro kontrolirati kada koristite VialTweeter. Predstavljamo vam razne opcije za praćenje i kontrolu temperature vaših uzoraka uz njihovu pripremu uz VialTweeter i VialPress za analizu.

1. Praćenje temperature uzorka: Ultrazvučni procesor UP200St, koji vozi VialTweeter, opremljen je inteligentnim softverom i senzorom za plugable temperature. Senzor temperature priključite u UP200St i umetnite vrh senzora temperature u jednu od cijevi uzorka. Putem digitalnog obojenog dodirnog prikaza možete postaviti u izborniku UP200St određenog temperaturnog raspona za sonication uzorka. Ultrasonicator će se automatski zaustaviti kada se dosegne maksimalna temperatura i pauzirati dok temperatura uzorka ne padne na nižu vrijednost postavljene temperature ∆. Onda sonication počinje automatski ponovno. Ova pametna značajka sprječava degradaciju izazvanu toplinom.
2. Blok VialTweeter se može unaprijed ohladiti. Stavite blok VialTweeter (samo sonotrode bez sonovoda!) u hladnjak ili zamrzivač kako biste unaprijed ohladili blok titana pomaže u odgodi porasta temperature u uzorku. Ako je moguće, i sam uzorak može biti prethodno hlađen.
3. Koristite suhi led za hlađenje tijekom sonication. Koristite plitki pladanj ispunjen suhim ledom i stavite VialTweeter na suhi led tako da se toplina može brzo rasipati.

Kupci diljem svijeta koriste VialTweeter i VialPress za svakodnevni rad na pripremi uzoraka u biološkim, biokemijskim, medicinskim i kliničkim laboratorijima. Inteligentni softver i kontrola temperature procesora UP200St, temperatura se pouzdano kontrolira i izbjegava se degradacija uzorka izazvana toplinom. Ultrazvučna priprema uzorka s VialTweeterom i VialPressom daje vrlo pouzdane i ponovljive rezultate!

Tehnički detalji VialTweetera

VialTweeter je blok sonotrode izrađen od titana koji može držati do 10 bočica u rupama unutar bloka. Uz to, do 5 većih ispitnih cijevi može se steći na VialTweeter front pomoću VialPress. VialTweeter je tako dizajniran da se energija ultrazvuka distribuira jednoliko u svaku umetnutu bočicu kako bi se osigurali pouzdani i ujednačeni rezultati sonication. Mali zaokret podešava sonotrode VialTweetera na neusklađano tlo i vertikalno poravnava ispitne cijevi.

Prednosti VialTweeter na prvi pogled

• Intenzivan sonikaciju do 10 ampule istovremeno
• Indirektni sonication pri visokom ultrazvučnom intenzitetu kroz zid plovila u uzorku
• Neizravno ultrazvukom izbjegava unakrsne kontaminacije i uzorak gubitka
• Ponovljivi rezultati zbog podesivi i kontrolirani sonication amplituda
• VialPress vam omogućuje da sonificira veće cijevi
• Podesiva amplituda od 20 do 100%
• Podesiv način puls od 0 do 100%
• autoklav

VialTweeter se napaja pomoću UP200St, 200 vata snažan ultrazvučni procesor. UP200St je opremljen inteligentnim softverom koji omogućuje preciznu kontrolu nad svim važnim parametrima ultrazvučnog procesa kao što su amplitude, vrijeme sonikacije, pulsacija i temperatura. To čini VialTweeter pouzdan alat za uspješan reproduktivni proces rezultira biološkim i biokemijskim laboratorijima.
Amplitude se može podesiti između 20 i 100% i time omogućuje prilagodbu ultrazvučnog intenziteta vašem uzorku. Na primjer, smicanje i fragmentacija DNK i RNK zahtijeva blažu amplitude kako bi se spriječila proizvodnja premalih fragmenata DNK, homogenizacija tkiva mišjeg mozga treba sonikaciju visokog intenziteta. Odaberite idealnu amplitude, intenzitet sonikacije i trajanje putem pametnog i intuitivnog izbornika na UP200St procesoru. Izborniku i postavkama može se lako pristupiti i njima se može upravljati putem zaslona osjetljivog na dodir u boji. U postavkama možete unaprijed postaviti parametre sonikacije kao što su amplitude, pulsacija / način ciklusa, trajanje sonikacije, ukupni unos energije i ograničenja temperature. U istraživanju i proizvodnji ključna je ponovljivost ispitivanja i rezultata testiranja. To znači da je precizno bilježenje uvjeta procesa i protokola sonikacije krajnje važno. Automatsko protokoliranje podataka piše sve podatke o sonikaciji u CSV datoteku na integriranoj SD-kartici tako da možete jednostavno provjeriti i usporediti različite sonikacije. Svim ultrazvučnim podacima o procesu može se lako pristupiti i dijeliti ih kao CSV datoteku.
Hielscher Ultrasonics nastoji vam pružiti naprednu tehnologiju kako biste olakšali i poboljšali svoj istraživački rad!