Hielscher ultrazvučna tehnologija

Ultrazvučni uzorak prep za ELISA Assays

Testovi kao što je ELISA naširoko se koriste za in vitro dijagnostiku, otkrivanje proteina povezanih s bolešću i kontrolu kvalitete (npr. praćenje alergena hrane). Ultrazvučna priprema uzoraka je brza, pouzdana i ponovljiva tehnika za lizijsku stanicu i izoliranje unutarstaničnih proteina, DNK, RNK i organela. Hielscher Ultrasonics nudi razna ultrazvučna rješenja za praktičnu pripremu pojedinačnih uzoraka, više bočica kao i za mikrotiter ploče i 96-well ploče.

Elisa – Enzimski povezani imunosorbeni assay

ELISA je kratica za imunosorbentni napad povezan s enzimom i široko je korištena tehnika biokemijske analize kategorije napada koji vežu ligand. U ELISA-i se tekući uzorak dodaje u stacionarnu čvrstu fazu s posebnim svojstvima vezanja. Obično se stacionarna čvrsta faza nanosi kao premaz na ploču bunara ili ELISA ploču. Zatim se sekvencijalno dodaju, inkubiraju i isperu razni tekući reagensi, tako da se konačno u završnoj tekućini u bunaru događa optička promjena (npr. razvoj boje proizvodom enzimske reakcije). Optička promjena omogućuje mjerenje količine analita takozvanim kvantitativnim “čitanje". Za kvantitativno očitanje koristi se spektrofotometar, fluometar ili luminometar za otkrivanje i mjerenje intenziteta prenesenog svjetla. Na osjetljivost detekcije utječe pojačavanje signala tijekom analitičkih reakcija. Budući da su reakcije enzima dobro istražene i pouzdani procesi pojačavanja, enzimi se koriste za stvaranje signala. Enzimi su povezani s reagensima za otkrivanje u fiksnim omjerima kako bi se omogućila točna kvantifikacija, što objašnjava i naziv "enzimom povezan" imunosorbeni napad.
Kako se ELISA testovi izvode u mikrotitra pločama / 96-bunarskim pločama, poznat je kao tehnika testa na bazi ploča i koristi se npr.
ELISA tehnika često se koristi kao dijagnostički alat u medicini, biotehnologiji, biljnoj patologiji, a također je važno mjerenje kontrole kvalitete u više industrija.

Kompletna postava VialTweeter: VialTweeter sonoroda na ultrazvučnu obradu UP200St

Ultrazvučna pripremna jedinica za uzorke VialTweeter koristi se za staničnu lizu i ekstrakciju proteina prije ELISA-e

Zahtjev za informacijama




Primijetite naše pravila o privatnosti,


Ultrazvučni uzorak prep prije ELISA

Prije nego što se elisa test može izvesti, uzorci zahtijevaju korake pripreme takve stanične lize i ekstrakcije unutarstaničnih proteina, DNK, RNK itd. Prednost ultrazvučne stanične lize i izolacije proteina je njegova visoka učinkovitost, pouzdanost i ponovljivost. Svi ovi čimbenici važni su kako bi se dobila visokokvalitetna dijagnostika i rezultati istraživanja

Prednosti ultrazvučne lize prije ELISA-e

  • Homogeno liječenje uzorkom
  • Potpuna liza
  • Potpuna ekstrakcija proteina (npr. protutijela, DNK)
  • Optimalna prilagodba vrsti ćelije
  • Za bilo koju veličinu uzorka
  • izvodljiv
  • Kontrolirana temperatura
  • Automatsko protokoliranje podataka na SD-kartici

Protokol za pre-ELISA ultrazvučnu staničnu lizu

Sonda tipa insonifier UP200St za lizu

  • Za stanične kulture: Prije lize ultrazvučnih stanica, centrifuge stanice za 5 minuta na 270 x g u mikrocentrifuge. Uklonite supernatant aspiracijom i ponovnom potrošnjom stanica u 30 – 100 μL RIPA pufera. Zatim inkubijte staničnu kuglicu na ledu 30 minuta.
  • Sada, uzorak stanica je spreman za ultrazvučnu lizu:
    Koristite ultrazvuk tipa sonde (npr. Uf200 ः t sa sondom S26d2) ili ultrazvučnim uređajem s više uzoraka (npr. VialTweeter za istovremenu sonikaciju do 10 bočica ili UIP400MPT za mikrotiterske ploče / 96-bunarske ploče) ovisno o količini uzoraka koje trebate pripremiti.
    Za sonikaciju sonikacije tipa sonikiranja jednog uzorka, stavite stanice u mikrocentrirajuće cijevi od 1,5 mL.
  • Unaprijed postavite svoje ultrazvučno trajanje, ukupni unos energije, način ciklusa i/ili ograničenja temperature u digitalnom izborniku ultrazvuka. To osigurava vrlo pouzdanu sonikaciju i ponovljivost.
  • Uključite sonotrode i uključite ultrazvučni uređaj. Nježno pomičite mikro-vrh ultrazvučne sonde kroz uzorak kako biste ravnomjerno sonicirali uzorak.
    Za većinu stanica, ultrazvučna liza će biti završena nakon 2 -4 ciklusa 10 sec sonikacije.
  • Nakon sonikacije izvadite sonotrode iz uzorka. Uzorke treba inkubirati na ledu 5 min. Zatim, centrifuga na 10.000 x g za 20 min pellet krhotine. Prebacite supernatenata u novu mikrocentruge cijev. Označite analite i pohranite na -20°C.
  • Ultrazvučni sonotrode može se očistiti pravilnim brisanjem alkohola ili sonicati u dabru napunjenom alkoholom, npr. Sve ultrazvučne sonde napravljene od titana su autoklave.

Za tkiva homogenates:

  • Isperite tkivo ledeno hladnim PBS-om (0,01M, pH=7,4) kako biste temeljito uklonili višak krvi hemolize.
  • Izvagajte tkivo (bubreg, srce, pluća, slezenu itd.) i macerirajte ga na male komadiće, koji su homogenizirani u PBS-u. Potreban volumen PBS-a povezan je s težinom tkiva. U pravilu, 1g tkiva zahtijeva cca. Preporuča se dodati neki inhibitor proteaze u PBS. (RIPA ili hipotonični međuspremnik lize koji sadrži koktel inhibitora proteaze i fosfataze može se koristiti alternativno.)
  • Ovisno o veličini tkiva, kratki tretman vrtloga (cca 1-2 min. u 15 sek. impulsa) može biti od pomoći za prethodno liječenje tkiva.
  • Montirajte mikro-vrh, npr. Stavite cijev uzorka s tkivom u ledenu kupku.
  • Sonicirati uzorak sa svojim ultrazvukom, npr UP200St (80% amplitude) za 1 min. u pulsnom načinu rada (15sec na, 15sec pauza). Držite uzorak u ledenoj kupki.
  • Homogenati se zatim centrifugiraju kako bi se dobili određeni bazeni (citosolični, nuklearni, mitohondrijski ili lisosomalni) kako bi se protein obogatio za analizu. Centrifugiranjem uzorka na 5 minuta na 5000×, supernatant se dohvaća.
Sonotrode MTP-24-8-96 ima osam ultrazvučnih sondi za sonikaciju bunara mikrotitarskih ploča.

Sonotrode MTP-24-8-96 ima osam ultrazvučnih sondi za sonikaciju bunara mikrotitarskih ploča.

Pouzdana kontrola temperature tijekom sonikacije

Temperatura je ključan čimbenik koji utječe na procese i koji je posebno važan za liječenje bioloških uzoraka, npr. Kao i sve mehaničke tehnike pripreme uzoraka, sonikacija stvara toplinu. Međutim, temperatura uzoraka može se dobro kontrolirati pri korištenju Hielscher Ultrasonics uređaja. Predstavljamo vam različite mogućnosti praćenja i kontrole temperature vaših uzoraka dok ih pripremate s ultrazvukom tipa sonde ili VialTweeterom unaprijed analitikom.

  1. Praćenje temperature uzorka: Svi Hielscherovi digitalni ultrazvučni procesori opremljeni su inteligentnim softverom i senzorom temperature koji se može priključiti. Priključite senzor temperature u ultrazvučni uređaj (npr. Uf200 ः t, UP200St, VialTweeter, UIP400MTP) i umetnite vrh temperaturnog senzora u jednu od oglednih cijevi. Putem digitalnog zaslona osjetljivog na dodir u boji možete postaviti u izbornik ultrazvučnog procesora određeni temperaturni raspon za sonikaciju uzorka. Ultrasonikator će se automatski zaustaviti kada se dosegne maksimalna temperatura i pauzirati dok se temperatura uzorka ne spusti na nižu vrijednost postavljene temperature ∆. Tada sonikacija počinje automatski opet. Ova pametna značajka sprječava degradaciju izazvanu toplinom.
  2. Što se tiče ultrazvučne jedinice s više uzoraka VialTweeter, titanski blok, koji drži cijevi uzorka, može se prethodno ohladiti. Stavite blok VialTweeter (samo sonotrode bez soducera!) u hladnjak ili zamrzivač kako biste prethodno ohladili titanski blok pomaže odgoditi porast temperature u uzorku. Ako je moguće, i sam uzorak se može prethodno ohladiti.
  3. Koristite ledenu kupku ili suhi led da se ohladi tijekom sonikacije. Stavite svoje ogledne cijevi tijekom sonikacije u ledenu kupku. Za VialTweeter koristite plitki pladanj ispunjen suhim ledom i stavite VialTweeter na suhi led tako da se toplina može brzo raspršiti.

Kupci diljem svijeta koriste Hielscher sondu-ultrasonikatore, kao i jedinice za sonikaciju s više uzoraka VialTweeter i UIP400MTP za svakodnevni rad na pripremi uzoraka u biološkim, biokemijskim, medicinskim i kliničkim laboratorijima. Inteligentni softver i kontrola temperature Hielscher procesora, temperatura se pouzdano kontrolira i izbjegava se degradacija uzorka izazvana toplinom. Ultrazvučna priprema uzoraka s Hielscherovim ultrazvučnim rješenjima daje vrlo pouzdane i ponovljive rezultate!

Kontaktirajte nas! / Pitajte nas!

Zatražite dodatne informacije

Molimo koristite obrazac u nastavku kako biste zatražili dodatne informacije o ultrazvučnim procesorima, aplikacijama i cijeni. Rado ćemo razgovarati o vašem procesu s vama i ponuditi vam ultrazvučni sustav koji zadovoljava vaše zahtjeve!









Molimo, imajte na umu da je pravila o privatnosti,


Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

Hielscher Ultrasonics proizvodi ultrazvučne homogenizatore visokih performansi za miješanje aplikacija, disperziju, emulzifikaciju i ekstrakciju na laboratorijskim, pilotskim i industrijskim razmjerima.

Književnost / Reference



Činjenice koje vrijedi znati

Vrste ELISA-e

Postoji nekoliko vrsta ELISA-e, koje se odlikuju svojim principom funkcioniranja. Poznati su kao izravna ELISA, indirektna ELISA, sendvič ELISA, konkurentna ELISA i obrnuta ELISA. U nastavku vam predstavljamo pregled različitih elisa tipova i njihovih glavnih karakteristika i razlika.
ELISA se može pokrenuti u kvalitativnom ili kvantitativnom formatu. Kvalitativni rezultati daju jednostavan pozitivan ili negativan rezultat, dok se kod kvantitativne ELISA-e optička gustoća (OD) uzorka uspoređuje sa standardnom krivuljom, što je obično serijsko razrjeđivanje poznate koncentracijske otopine ciljne molekule.

Izravna ELISA

Izravna ELISA najjednostavniji je oblik testa Elise, gdje se koristi samo primarno protutijelo s oznakom enzima i sekundarna protutijela. Primarno protutijelo s oznakom enzima veže se izravno za metu, odnosno antigen. Tamponed antigenska otopina dodaje se svakom bunaru mikrotiter ploče (obično 96-bunarskih ploča, ELISA-ploče), gdje prianja na plastičnu površinu kroz interakcije naboja. Kada enzim povezan s primarnim protutijelom reagira sa svojim supstratom, proizvodi vidljiv signal koji se može mjeriti putem spektrofotometra, fluorometra ili luminometra.

Neizravna ELISA

Za indirektni ELISA test potrebni su i primarno protutijelo i sekundarno protutijelo. Međutim, suprotno izravnoj ELISA-i, ne primarnom protutijelu, već je sekundarno protutijelo označeno enzimom. Antigen je imobiliziran na ploču bunara i vezan primarnim antitijelom. Nakon toga, sekundarno protutijelo s oznakom enzima veže se za primarno protutijelo. Konačno, enzim povezan sa sekundarnim antitijelom reagira sa svojim supstratom kako bi proizveo vidljiv signal koji se može otkriti.

Sendvič ELISA

Dok je u izravnim i neizravnim ELISA testovima, antigen je imobiliziran i obložen na površinu ploče bunara, u sendviču ELISA antitijelo je imobilizirano na plastičnu površinu ELISA-ploče. Imobilizirana antitijela u sendvič elisi poznata su kao pomoćna protutijela. Osim za hvatanje antitijela, u sendvič ELISA također tzv otkrivanje antitijela su potrebni. Protutijela za detekciju uključuju neoznačavano protutijelo primarne detekcije i protutijelo sekundarne detekcije označeno enzimom.
Stepwise, antigen interesa veže se za hvatanje antitijela imobiliziranog na ploču. Zatim se primarno detekcijacijsko protutijelo veže za antigen. Nakon toga, sekundarno detekcijacijsko protutijelo veže se za primarno detekcijo antitijelo. U završnom koraku reakcije, enzim reagira sa svojim supstratom kako bi proizveo vidljiv signal koji se može otkriti optički.

Konkurentna ELISA

Konkurentna ELISA, također poznat kao inhibicija ELISA, je najsloženiji ELISA tip jer uključuje korištenje inhibitora antigena. Svaki od tri formata, direktan, indirektan i sendvič ELISA, može se prilagoditi natjecateljskom ELISA formatu. U konkurentnoj ELISA, inhibitor antigen i antigen interesa natječu se za vezanje na primarno antitijelo.
Za konkurentnu ELISA-u, neotkrivanje protutijela inkubira se u prisutnosti antigena, odnosno uzorka. Ovi vezani kompleksi antitijela/antigena zatim se dodaju u bunar obložen antigenom.
Ploča se pere, tako da se uklanjaju nevezana antitijela. Konkurentna ELISA ima svoje ime zbog činjenice da što je više antigena u uzorku, to se više antigen-antitijela formiraju. To znači da postoji manje nevezanih antitijela koja se vežu za antigen u bunaru i antigeni se moraju natjecati za dostupno antitijelo. Dodaje se sekundarno protutijelo, koje odgovara primarnom protutijelu. Ovo drugo antitijelo povezano je s enzimom. Kada se doda supstrat, preostali enzimi proizvode kromogeni ili fluorescentni signal.
U ovom trenutku, reakcija se zaustavlja kako bi se izbjeglo eventualno zasićenje signala.
Neki konkurentni ELISA setovi uključuju antigen povezan s enzimom umjesto antitijela povezanog s enzimom. Označeni antigen natječe se za primarna mjesta vezanja protutijela s uzorkom antigena (bez oznake). Što je manje antigena u uzorku, to je antigen s oznakom više zadržan u bunaru i jači je signal.

Obrnuta ELISA

Reverse ELISA ne koristi dobro ploče, ali ostavlja antigene suspendirane u testnoj tekućini. Obrnuti ELISA test mjeri količinu vezanog protutijela putem antigena. Razvijen je posebno za otkrivanje i istraživanje proteina omotnice virusa Zapadnog Nila i kako je u stanju pronaći antitijela specifična za virus.

Enzimski marker koji se koristi za ELISA-u

Popis u nastavku daje najčešće enzimske markere koji se koriste u ELISA testovima, koji omogućuju da se rezultati testova mjere po završetku.

  • OPD (o-fenilendijamin dihidroklorid) pretvara jantar za otkrivanje HRP (Hren Peroksidaze), koji se često koristi kao konjugirani protein.
  • TMB (3,3′,5,5′-tetrametilbenzidin) postaje plav pri otkrivanju HRP-a i postaje žut nakon dodavanja sumporne ili fosforne kiseline.
  • ABTS (2,2′-Azinobis [3-etilbenzotiazolin-6-sulfonska kiselina]-dijamonijeva sol) postaje zelen pri otkrivanju HRP-a.
  • PNPP (p-Nitrophenyl Phosphate, Disodium Salt) postaje žut pri otkrivanju alkalne fosfaze.