Hielscher ultrazvučna tehnologija

Stanični liza BL21 stanica ultrazvukom

BL21 stanice su soj E. coli koji se naširoko koristi u istraživačkim laboratorijima, biotehnologiji i industrijskoj proizvodnji zbog svoje sposobnosti da izraze proteine vrlo učinkovite. Ultrazvučni poremećaj stanica, liza i ekstrakcija proteina uobičajena je metoda za izoliranje i prikupljanje ciljanih proteina iz stanične unutrašnjosti BL21 stanica. Ultrazvuka potpuno poremeti stanicu i oslobađa sve zarobljene proteine, čineći 100% proteina dostupnim.

BL21 stanice za ekspresiju proteina

E. coli bacteria such as BL21 cells are commonly lysed by ultrasonication in order to release expressed proteins, such as recombinant proteinsBL21 stanica je kemijski kompetentan bakterijski soj E. coli pogodan za transformaciju i ekspresiju proteina visoke razine pomoću T7 RNK polimeraze-IPTG indukcijskog sustava. BL21 stanice omogućuju visokoučinkovitu ekspresiju proteina bilo kojeg gena koji je pod kontrolom T7 promotora. E. coli soj BL21(DE3) je T7 RNA polimelazna proizvodnja proteina u kombinaciji s T7 promotor-based izraz vektora i široko se primjenjuje u laboratorijima i industriji za proizvodnju rekombinantnih proteina. U BL21(DE3) ekspresija gena koji kodira rekombinantni protein transkribira kromosomski kodiranu polimeralnu T7 RNK (T7 RNKP), koja transkribira osam puta brže od konvencionalnog E. coli RNAP. To čini soj BL21(DE3) vrlo učinkovitim i pretvara ga u jedan od najpoželjnijih staničnih sustava ekspresije proteina.

Protokol za ultrazvučnu lizu i ekstrakciju proteina iz BL21 stanica

Stanične lize BL21 stanica uglavnom se izvode ultrazvukom u kombinaciji s natrijevim lauroil sarkosinatom (također poznatim kao sarkosil) kao međuspremnik lize. Prednosti ultrazvučnog poremećaja stanica i ekstrakcije proteina leže u pouzdanosti, ponovljivosti, kao i jednostavnom, sigurnom i brzom radu ultrazvukatora. Protokol u nastavku daje korak-po-korak smjer za ultrazvučnu BL21 staničnu lizu:

Sonda tipa insonifier UP200St za lizu

Ultrazvučni disruptor stanica UP200St s mikro-vrhom S26d2 za lizu i ekstrakciju proteina

Zahtjev za informacijama




Primijetite naše pravila o privatnosti,


  • Kako bi se uklonili proteini pratitelja, BL21 bakterijske pelete su resuspended u 50 ml leda hladno Natrij Tris-EDTA (STE) tampon (koji se sastoji od 10 mM Tris-HCL, pH 8.0, 1 mM EDTA, 150 mM NaCl dopunjen sa 100 mM PMSF).
  • Dodaje se 500 ul lisozima (10 mg/ ml) i stanice se inkubiraju na ledu 15 minuta.
  • Nakon toga dodaje se 500 ul DTT-a i 7 ml sarkosila (10% (w/v) sastavljenog u STE međuspremniku).
  • Bitno je da svi puferi za pročišćavanje ostanu ledeno hladni i da se uzorci cijelo vrijeme održavaju na ledu. Sve korake pročišćavanja treba provesti u hladnoj prostoriji ako je moguće.
  • VialTweeter at the ultrasonic processor UP200ST

  • Za ultrazvučnu lizu i ekstrakciju proteina uzorci se sonicirali u VialTweeter MultiSample Ultrasonicator za 4 x 30 sek pri 100% amplitude s intervalom od 2 min između svakog sonikacije. Alternativno, ultrazvučni homogenizator tipa sonde s mikro-vrhom npr. Uf200 ः t sa S26d2 (3 x 30 sek, 2 min. pauza između ultrazvučnih ciklusa, 80% amplitude) može se koristiti.
  • Za daljnje korake pročišćavanja uzorci se moraju čuvati na ledu ili se mogu pohraniti na -80 °C do daljnje obrade.

Ultrazvučna liza pod kontrolom temperature prije nego što

Precizna i pouzdana kontrola temperature ključna je pri rukovanju biološkim uzorcima. Visoke temperature pokreću toplinski induciranu razgradnju proteina u uzorcima.
Kao i sve mehaničke tehnike pripreme uzoraka, sonikacija stvara toplinu. Međutim, temperatura uzoraka može se dobro kontrolirati pri korištenju VialTweetera. Predstavljamo vam različite mogućnosti praćenja i kontrole temperature vaših uzoraka dok ih pripremate s VialTweeterom i VialPressom za analizu.

  1. Praćenje temperature uzorka: Ultrazvučni procesor UP200St, koji vozi VialTweeter, opremljen je inteligentnim softverom i senzorom za plugable temperature. Senzor temperature priključite u UP200St i umetnite vrh senzora temperature u jednu od cijevi uzorka. Putem digitalnog obojenog dodirnog prikaza možete postaviti u izborniku UP200St određenog temperaturnog raspona za sonication uzorka. Ultrasonicator će se automatski zaustaviti kada se dosegne maksimalna temperatura i pauzirati dok temperatura uzorka ne padne na nižu vrijednost postavljene temperature ∆. Onda sonication počinje automatski ponovno. Ova pametna značajka sprječava degradaciju izazvanu toplinom.
  2. Blok VialTweeter se može unaprijed ohladiti. Stavite blok VialTweeter (samo sonotrode bez sonovoda!) u hladnjak ili zamrzivač kako biste unaprijed ohladili blok titana pomaže u odgodi porasta temperature u uzorku. Ako je moguće, i sam uzorak može biti prethodno hlađen.
  3. Koristite suhi led da se ohladi tijekom sonikacije. Koristite plitki pladanj ispunjen suhim ledom i stavite VialTweeter na led tako da se toplina može brzo raspršiti.

Kupci diljem svijeta koriste VialTweeter i VialPress za svoj svakodnevni rad pripreme uzoraka u biološkim, biokemijskim, medicinskim i kliničkim laboratorijima. Inteligentni softver i kontrola temperature procesora UP200St, temperatura se pouzdano kontrolira i izbjegava se degradacija uzorka izazvana toplinom. Ultrazvučni uzorak priprema s VialTweeter i VialPress donosi vrlo pouzdane i reproduktivne rezultate!

Pronađite optimalan ultrazvučni disruptor za aplikaciju zalizu

Hielscher's industrial processors of the hdT series can be comfortable and user-friendly operated via browser remote control.Hielscher Ultrasonics je dugogodišnji iskusni proizvođač ultrazvučnih staničnih disruptora visokih performansi i homogenizatora za laboratorije, bench-top i industrijske sustave. Veličina bakterijskih stanica, vaš cilj istraživanja ili proizvodnje i volumen stanica za obradu po satu ili danu bitni su čimbenici za pronalaženje pravog ultrazvučnog disruptora stanica za vašu primjenu.
Hielscher Ultrasonics nudi razna rješenja za istovremenu sonikaciju više uzoraka (do 10 bočica s VialTweeterom) i uzoraka mase (. mikrotiter ploče / ELISA ploče s UIP400MTP), kao i klasični ultrazvuk laboratorija tipa sonde s različitim razinama snage od 50 do 400 W do potpuno industrijskih ultrazvučnih procesora s do 16.000vat po jedinici za komercijalni poremećaj stanica i ekstrakciju proteina u velikoj proizvodnji. Svi Hielscherovi ultrazvučci izrađeni su za rad 24/7/365 pod punim opterećenjem. Robusnost i pouzdanost temeljne su značajke naših ultrazvučnih uređaja.
Svi digitalni ultrazvučni homogenizatori opremljeni su pametnim softverom, zaslonom osjetljivim na dodir u boji i automatskim protokoliranjem podataka, što ultrazvučni uređaj pretvara u prikladan radni alat u laboratorijima i proizvodnim pogonima.
Javite nam, kakve stanice, koji volumen, s kojom frekvencijom i s kojim ciljem morate obraditi svoje biološke uzorke. Preporučit ćemo vam najprikladniji ultrazvučni disruptor stanica za vaše potrebe u procesu.

Tablica u nastavku daje vam naznaku približne procesorske sposobnosti naših ultrazvučnih sustava od kompaktnih ručnih homogenizatora i MultiSample Ultrasonicatorsa do industrijskih ultrazvučnih procesora za komercijalne primjene:

Batch Volumen Protok Preporučeni uređaji
96-bunar / mikrotiter ploče N.a. UIP400MTP
10 bočica à 0,5 do 1,5mL N.a. VialTweeter na UP200St
0.01 do 250mL 5 do 100mL/min UP50H
0.01 do 500mL 10 do 200 mL / min UP100H
10 do 2000 ml 20 do 400 mL / min Uf200 ः t, UP400St
0.1 do 20L 0.2 do 4L / min UIP2000hdT
10 do 100L 2 do 10 l / min UIP4000hdT
N.a. 10 do 100 l / min UIP16000
N.a. veći grozd UIP16000

Kontaktirajte nas! / Pitajte nas!

Zatražite dodatne informacije

Molimo koristite obrazac u nastavku kako biste zatražili dodatne informacije o ultrazvučnim procesorima, aplikacijama i cijeni. Rado ćemo razgovarati o vašem procesu s vama i ponuditi vam ultrazvučni sustav koji zadovoljava vaše zahtjeve!









Molimo, imajte na umu da je pravila o privatnosti,


Ultrasonicator UP200Ht with microtip S26d2 for ultrasonic lysis of biological samples

ultrasonicator Uf200 ः t s 2mm mikrotipom S26d2 za sonikaciju malih uzoraka

Književnost / Reference



Činjenice koje vrijedi znati

Bakterije Escherichia Coli

Escherichia coli je tip bakterija, koji ne-spore-formiranje, Gram-negativan i karakterizira ga oblik ravne šipke. Bakterije E.coli prisutne su u okolišu, hrani i crijevima ljudi i životinja. E. coli je obično pokretljiv pomoću peritrichous flagella, ali postoje i nemotile vrste, previše. E.coli su takozvani fakultetski anaerobni kemoorganotropni organizmi, što znači da su sposobni i za respiratorni i za fermentativni metabolizam. Većina tipova E.coli je benigna i ispunjava korisne funkcije u tijelu, npr.
Escherichia coli bakterije stanica takozvanog B tipa su posebna kategorija E.coli sojeva, koji su naširoko koristi u istraživanjima za istraživanje mehanizama kao što su osjetljivost bakteriofaga ili ograničenja-modifikacija sustava. Nadalje, bakterije E.coli cijenjene su kao pouzdan radni konj za ekspresiju proteina u biotehnologiji i laboratorijima za znanost o životu. Na primjer, E.coli se koriste za sintezu spojeva kao što su proteini i oligosaharidi u industrijskim razmjerima. Zbog specifičnih značajki kao što su nedostatak proteaze, niska proizvodnja acetata na visokoj razini glukoze i poboljšana prožimanje, E. coli B stanice su on najčešće koristi stanice domaćina za proizvodnju genetski modificiranih proteina.

Rekombinantni protein

Rekombinantni proteini (rProt) dobivaju značajnu važnost u mnogostrukim granama, uključujući kemijsku proizvodnju, farmaceutsku, kozmetičku, humanu i životinjsku medicinu, poljoprivredu, hranu, kao i industriju obrade otpada.
Proizvodnja rekombinantnih proteina zahtijeva korištenje ekspresijskog sustava. Kao ekspresni stanični sustavi za proizvodnju rekombinantne DNK, mogu se koristiti i prokariotske i eukariotske stanice. Dok se bakterijske stanice najčešće koriste za ekspresiju proteina zbog čimbenika kao što su niska cijena, jednostavna skalabilnost i jednostavni medijski uvjeti, sisavci, kvasac, alge, insekti i sustavi bez stanica uspostavljene su alternative. Vrsta proteina, funkcionalna aktivnost, kao i potreban prinos izraženih proteina utječu na odabir staničnog sustava koji se koristi za ekspresiju proteina.
Kako bi se izrazio rekombinantni protein, određena stanica mora biti transficijenta DNK vektorom koji sadrži predložak rekombinantne DNK. Stanice transfected s predloškom su tada kulturan. Kao posljedica staničnog mehanizma, stanice transkribiraju i prevode protein od interesa, čime se proizvodi ciljani protein.
Budući da su izraženi proteini urezani u staničnu matricu, stanica se mora lisiti (poremetiti i slomiti) kako bi se oslobodili proteini. U naknadnom koraku pročišćavanja, protein se odvaja i pročišćava.
Prvi rekombinantni protein korišten u liječenju bio je rekombinantni ljudski inzulin 1982. Danas se diljem svijeta proizvodi više od 170 vrsta rekombinantnih proteina za medicinske tretmane. Najčešće korišteni rekombinantni proteini koji se koriste u medicini su na primjer rekombinantni hormoni, interferoni, interleukini, faktori rasta, čimbenici nekroze tumora, faktori zgrušavanja krvi, trombolitički lijekovi i enzimi za liječenje velikih bolesti kao što su dijabetes, patuljastost, infarkt miokarda, kongestivno zatajenje srca, cerebralna apolopleksija, multipla skleroza, neutropenija, trombocitopenija, anemija, hepatitis, reumatoidni artritis, astma, Crohnova bolest i terapije raka. (cf. Phuc V. Pham, u Omics Technologies and Bio-Engineering, 2018.)


Hielscher Ultrasonics supplies high-performance ultrasonic homogenizers from lab to industrial size.

Ultrazvuk visokih performansi! Hielscherov asortiman pokriva cijeli spektar od kompaktnog laboratorijskog ultrasonikatora preko bench-top jedinica do potpuno industrijskih ultrazvučnih sustava.