Hielscher ultrazvučna tehnologija

Protokol za inaktivaciju koronavirusa SARS-CoV-2 sonikacijom

Hielscher VialTweeter jedinstvena je ultrazvučna jedinica za pripremu više uzoraka, koja se koristi za inaktiviranje koronavirusa SARS-COV-2. VialTweeter omogućuje istovremeno pripremu do 10 bočica uzorka i time je idealna jedinica za masovnu obradu uzoraka.

Inaktivacija koronavirusa SARS-CoV-2 vialtweeterom

Nakon uklanjanja fiksativa, monolayeri su tri puta oprani fosfatom (PBS) prije struganja stanica u 1mL MEM / 5% FBS i sonicated (3 × 10 sekundi na, 10 sekundi off na 100% snage i amplitude) pomoću Hielschersonic procesora UP200St s VialTweeter Privitak. Supernatanti su razjašnjeni centrifugiranjem na 3000 × g 10 minuta. 

Cijeli protokol pročitajte ovdje za inaktivaciju koronavirusa SARS-CoV-2 od strane Welch et al. (2020) u nastavku:

Stanice i virus

Vero E6 stanice (Vero C1008; ATCC CRL-1586) bili su kulturan u modificiranom Eagleovom minimalnom osnovnom mediju (MEM) dopunjenom s 10% (v/v) serumom fetalnog teleta (FCS). Korišteni virus bio je SARS-CoV-2 soj hCOV-19/England/2/2020, izoliran pheom iz prvog klastera pacijenata u Velikoj Britaniji 29.01.2020. Ovaj virus je dobiven u prolazu 1 i koristi se za inaktivacijske studije u prolazu 2 ili 3.
Za reagense i kemikalije koje se koriste za inaktivaciju SARS-CoV-2 kao i uklanjanje citotoksičnosti reagensa pogledajte znanstveno izvješće tvrtke Welch et al. (2020.).

The ultrasonic sample preparation unit VialTweeter is used for the inactivation of SARS-CoV-2 coronavirus

Inaktivacija virusa deterdžentima – SARS-CoV-2 Protokol za inaktivaciju koronavirusa welch et al. 2020

Inaktivacija SARS-CoV-2

Za komercijalne proizvode, pripravci virusa (tekućina za kulturu tkiva, titeri u rasponu od 1 × 106 do 1 × 108 PFU/ml) liječeni su u triplikatu reagensima u koncentracijama i za vrijeme kontakta preporučeno u uputama proizvođača za uporabu, gdje je to dostupno, ili za koncentracije i vremena koja su posebno zatražili laboratoriji za testiranje. Ako je proizvođač dao niz koncentracija, testiran je najniži omjer proizvoda i uzorka (tj. najniža preporučena koncentracija ispitnog proizvoda). Reagensi transportnih cijevi za uzorke testirani su omjerom jednog volumena tekućine za kulturu tkiva i deset volumena reagensa, osim ako proizvođač ne odredi omjer volumena tekućine uzorka i reagensa. Deterdženti, fiksativi i otapala testirani su u naznačenim koncentracijama za naznačeno vrijeme. Svi koraci inaktivacije izvedeni su na temperaturi okoline (18 – 25 °C). Za testiranje alternativnih vrsta uzoraka, virus je utisnuo u naznačenu matricu uzorka u omjeru 1:9, a zatim tretiran testnim reagensima kao gore. Svi eksperimenti uključivali su uzorke lažno tretirane kontrole triplikata s ekvivalentnim volumenom PBS-a umjesto testnog reagensa. Odmah nakon potrebnog vremena kontakta, 1mL obrađenog uzorka obrađeno je pomoću odgovarajuće odabrane matrice filtracije. Uklanjanje reagensa za inaktivacijsko testiranje provedeno je u većem formatu stupca vrtnje pomoću Pierce 4mL deterdženta za uklanjanje spin stupova (Thermo Fisher), ili punjenjem praznih Pierce 10mL kapaciteta centrifuge stupova (Thermo Fisher) sa SM2 bio-dagnje, Sephacryl S-400HR ili Sephadex LH-20 dati 4mL pakirane perle / smole. Za pročišćavanje pomoću Amicon filtera, 2 uzorka × 500 μl pročišćena su pomoću dva centrifugalna filtra prethodno opisanom metodom, a zatim objedinjena zajedno. Za formaldehid i formaldehid s uklanjanjem glutaraldehida korišten je jedan filtar s volumenom uzorka 1× 500 μl, resuspendiran nakon obrade u 500μl PBS-u i dodan u 400ul MEM/5% FBS. Za inaktivaciju zaraženih VialTweeter at the ultrasonic processor UP200STmonolatori, 12,5 cm2 tikvice Vero E6 stanica (2,5 × 106 stanice/tikvice u 2,5mL MEM/5% FBS) zaražene su MOI 0,001 i inkubiraju se na 37 °C / 5% CO2 24 sata. Supernatant je uklonjen, a stanice fiksne pomoću 5mL formaldehida, ili formaldehida i glutaraldehida na sobnoj temperaturi 15 ili 60 minuta. Fiksacija je uklonjena, a monolayeri su se tri puta prali PBS-om prije struganja stanica u 1mL MEM / 5% FBS i sonicirali (3 × 10 sekundi na, 10 sekundi off na 100% snage i amplitude) koristeći UP200St s VialTweeter nastavkom (Hielscher Ultrazvučna tehnologija). Supernatanti su razjašnjeni centrifugiranjem na 3000 × g 10 minuta.

VialTweeter za intenzivan sonication zatvorenih bočica

VialTweeter za intenzivnu sonikaciju zatvorenih bočica

Zahtjev za informacijama




Primijetite naše pravila o privatnosti,


Various reagents have been tested for the inactivation of the SARS-CoV-2 coronavirus using the ultrasonic sample prep unit VialTweeter.

Detalji reagensa koji se koristi za inaktivaciju koronavirusa SARS-CoV-2 s ultrazvučnim VialTweeterom prema protokolu Welcha i sur.

Cijeli protokol, uključujući korištenje Hielscher VialTweetera, možete pronaći ovdje:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

The multi-sample ultrasonicator VialTweeter allows for simultaneous sample preparation of up to 10 vials under same process conditions. The VialTweeter is an established ultrasonic device used for the inactivation of corona virus SARS-CoV-2 (Click to enlarge!)

VialTweeter za ultrazvučnu inaktivaciju virusa

Prednosti VialTweeter na prvi pogled

  • Sonikacija do 10 bočica istovremeno
  • Nema unakrsne kontaminacije
  • Nema gubitka uzorka
  • Automatsko bilježenje podataka
  • Jednostavan i siguran za rad
VialTweeter se također koristi za

  • Lysis stanica
  • Poremećaj virusnih čestica
  • Ekstrakcija nukleinske kiseline: IZOLACIJA DNA/RNK
  • Fragmentacija DNA/RNK
  • Solubilizacija lysata
  • Sofisticirani ultrazvučni dismembratori i disruptori stanica

    Multi-ogledni ultrazvuk VialTweeter samo je jedno od mnogih ultrazvučnih rješenja za pripremu uzoraka u biološkim, biokemijskim i kliničkim laboratorijima. Hielscher Ultrasonics nudi idealan ultrazvučni dismembrator za vašu primjenu, npr.
    Javite nam koliko uzoraka morate obraditi na sat i dan, ako preferirate izravnu ili neizravnu sonikaciju i koja je meta ultrazvučnog tretmana uzorka. Preporučit ćemo vam najprikladniju ultrazvučnu jedinicu za vašu svakodnevnu radnu rutinu!
    Digitalni ultrazvučni procesori Hielscher Ultrasonics opremljeni su pametnim softverom, automatskim snimanjem podataka, jednostavnim opcijama prije postavljanja za kontrolu temperature, trajanjem sonikacije, ciklusom /pulsnim načinom rada, kao i osvjetljenjem uzoraka i daljinskim upravljačem preglednika. Nastojimo naše ultrazvučne uređaje učiniti što pametnijama kako bi vaša istraživačka i radna rutina postala što praktičnija i uspješnija.
    Kliknite ovdje, kako biste pronašli više aplikacija, uključujući protokole ultrazvučne pripreme uzoraka s VialTweeterom!

    Kontaktirajte nas! / Pitajte nas!

    Zatražite dodatne informacije

    Molimo koristite obrazac u nastavku kako biste zatražili dodatne informacije o ultrazvučnim procesorima, aplikacijama i cijeni. Rado ćemo razgovarati o vašem procesu s vama i ponuditi vam ultrazvučni sustav koji zadovoljava vaše zahtjeve!









    Molimo, imajte na umu da je pravila o privatnosti,


    Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

    Hielscher Ultrasonics proizvodi ultrazvučne homogenizatore visokih performansi za miješanje aplikacija, disperziju, emulzifikaciju i ekstrakciju na laboratorijskim, pilotskim i industrijskim razmjerima.

    Književnost / Reference



    Činjenice koje vrijedi znati

    Što su Vero Cells?

    Vero E6, također poznat kao Vero C1008 (ATCC br. CRL-1586) je linija klonnih stanica s Vero 76 i koristi se u istraživanju SARS-CoV i SARS-CoV-2 koronavirusa. Vero stanice su loze stanica koje se koriste u stanične kulture. 'Vero’ loza je izolirana iz bubrežnih epitelijskih stanica izvađenih iz afričkog zelenog majmuna (Chlorocebus sp.).
    Vero E6 stanice pokazuju neku inhibiciju kontakata, pa su pogodne za razmnožavanje virusa koji se polako repliciraju. Vero E6 stanične linije obično se koriste za istraživanje citopatologije koronavirusa SARS-CoV i SARS-CoV-2 jer Vero stanice (afričke stanice bubrega zelenog majmuna) pokazuju obilnu ekspresiju receptora enzima 2 (ACE2) koji pretvara angiotenzin. ACE2 receptori su glavno mjesto pristajanja za koronavirus SARS-CoV-2.
    Na primjer, Ogando et al. (2020) utvrdio je da SARS-CoV-2 – u usporedbi sa SARS-CoV – generirao više razine unutarstanične virusne RNK, ali upečatljivo oko 50 puta manje zarazno virusno potomstvo je oporavio od kulture medija. Nadalje, utvrdili su da je osjetljivost dvaju virusa na tri utvrđena inhibitora replikacije koronavirusa (Remdesivir, Alisporivir i klorokin) vrlo slična, ali da je infekcija SARS-CoV-2 bila znatno osjetljivija na pred-liječenje stanica pegiliranim interferonom alfa. Važna razlika između dva virusa je činjenica da – nakon passaginga u Vero E6 stanicama – SARS-CoV-2 je očito pod jakim selekcijskim pritiskom da stekne adaptivne mutacije u svom proteinskom genu šiljka. Te mutacije mijenjaju ili brišu putativno "furin-like cleavage site" u regiji koja povezuje S1 i S2 domene i rezultira vrlo istaknutom fenotinskoj promjenom u testovima plaka.