Puferske otopine pripremljene ultrazvukom

Puferi za lizu mogu se učinkovito i brzo pripremiti ultrazvučnim homogenizatorima tkiva. Budući da su ultrazvučni uređaji idealan alat za miješanje, otapanje i dispergiranje, omogućuju pouzdanu pripremu pufera za lizu jednostavnu za korisnika.

Ultrazvučna priprema pufera za lizu

Ultrazvučni homogenizatori tkiva uobičajen su alat za razaranje stanica, lizu i ekstrakciju te su stoga dostupni u većini laboratorija. Dodatna primjena ultrazvučnih uređaja sa sondom jest priprema pufera za lizu.

Pufer za lizu otopina je koja služi za razaranje (lizu) stanica i oslobađanje njihova sadržaja za daljnju analizu. Specifičan sastav pufera za lizu može se razlikovati ovisno o vrsti stanica koje se liziraju i daljnjoj primjeni. Međutim, tipičan pufer za lizu sadržava komponente poput detergenata, soli i inhibitora proteaza. Puferske soli (npr. Tris-HCl) i ionske soli (npr. NaCl) obično se upotrebljavaju za regulaciju pH i osmolarnosti lizata.
Za pripremu pufera za lizu komponente se pomiješaju u odgovarajućim koncentracijama i pri odgovarajućem pH. Smjesa se obično miješa ili protresa dok se komponente ne otope i otopina ne postane homogena.
Ultrazvučna homogenizacija metoda je koja može pomoći u pripremi dobrog pufera za lizu poboljšanjem miješanja i otapanja komponenata. Pri toj se metodi na smjesu primjenjuju ultrazvučni valovi – obično u rasponu od 20 do 30 kHz – koji stvaraju kavitacijske mjehuriće koji kolabiraju i stvaraju intenzivnu lokalnu energiju, što dovodi do mehaničkog smicanja i miješanja komponenata.
Postupak ultrazvučne homogenizacije može pomoći u razbijanju svih nakupina ili agregata komponenata i osigurati ravnomjerno miješanje otopine. Posljedično, tako poboljšan pufer za lizu može omogućiti učinkovitije razaranje stanica i veće prinose ekstrahiranog materijala. Osim toga, ultrazvučna homogenizacija može skratiti vrijeme potrebno za pripremu pufera za lizu u usporedbi s tradicionalnim metodama miješanja ili protresanja.
Općenito, ultrazvučna homogenizacija moćan je alat za poboljšanje kvalitete i učinkovitosti pripreme pufera za lizu.

Protokol za ultrazvučnu pripremu pufera za lizu

Ovo je opći protokol za pripremu pufera za lizu ultrazvučnim uređajem sa sondom:
 
Materijali:

• Jedan ili više detergenata po izboru (npr. Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Jedna ili više soli po izboru (npr. NaCl, KCl)
• Inhibitori proteaza (npr. PMSF, aprotinin, leupeptin)
• Ultrazvučni uređaj
• Miješalica
• Deionizirana voda
• pH-metar ili pH-trakice

 
 
Upute korak po korak:

1. Odredite sastav pufera za lizu na temelju stanica ili tkiva koje ćete lizirati te daljnjih primjena za koje ćete upotrebljavati lizat. Pripremite matične otopine detergenata, soli i inhibitora proteaza u željenim koncentracijama.
2. Dodajte matične otopine detergenata, soli i inhibitora proteaza u laboratorijsku čašu ili tikvicu.
3. Dodajte deioniziranu vodu kako biste volumen dopunili do željene količine pufera.
4. Pomiješajte komponente miješalicom kako biste dobili prethodno izmiješanu otopinu.
5. Izmjerite pH pufera pH-metrom ili pH-trakicama te prema potrebi prilagodite pH malim količinama kiseline ili baze.
6. Ultrazvučnim uređajem sa sondom homogenizirajte prethodno izmiješanu otopinu kako biste dobili vrlo homogenu otopinu. U tu svrhu sonicirajte otopinu nekoliko sekundi dok se temeljito ne izmiješa i sve nakupine ili agregati ne razbiju. Trajanje i snaga sonikacije mogu se optimizirati ovisno o konkretnom puferu za lizu i upotrijebljenom ultrazvučnom uređaju.
7. Nakon ultrazvučne obrade ponovno izmjerite pH pufera i prilagodite ga prema potrebi.
8. Filtrirajte pufer kroz filtar od 0,2 mikrona kako biste uklonili sve ostatke ili agregate koji su mogli nastati tijekom sonikacije.
9. Pufer za lizu sada je spreman za upotrebu.

 
Napomena: Točan sastav i pH pufera za lizu mogu se razlikovati ovisno o stanicama ili tkivu koje se lizira te daljnjim primjenama. Navedeni protokol služi kao opća smjernica i možda će ga trebati optimizirati za pojedine primjene.
 
Ultrazvučni homogenizatori obično se upotrebljavaju za razaranje stanica i ekstrakciju unutarstaničnih molekula. Stoga se u mnogim primjenama lize sonikacija sondom upotrebljava ne samo za pripremu pufera za lizu nego i za mehaničko razaranje stanica i ekstrakciju.
Zbog toga su ultrazvučni homogenizatori tkiva svestran alat za laboratorije, što objašnjava široku upotrebu ultrazvučnih uređaja u mikrobiologiji, biotehnologiji i znanostima o životu.

Ultrazvučni laboratorijski homogenizatori

Hielscher Ultrasonics proizvodi i isporučuje ultrazvučne homogenizatore i sonde (sonotrode) različitih nazivnih snaga i za različite volumene uzoraka. To nam omogućuje da vam ponudimo najprikladniji ultrazvučni uređaj za razaranje stanica za pripremu vaših uzoraka. Usredotočeni smo na najvišu kvalitetu, iznimnu udobnost pri upotrebi i pouzdane rezultate sonikacije. Svi digitalni ultrazvučni uređaji imaju pametan softver, mogućnost programiranja i prethodnog postavljanja protokola sonikacije, daljinsko upravljanje putem preglednika, regulaciju temperature, osvjetljenje uzorka te automatsko bilježenje podataka na ugrađenu SD-karticu.

Projektiranje, proizvodnja i savjetovanje – kvaliteta proizvedena u Njemačkoj

Ultrazvučni uređaji Hielscher poznati su po najvišim standardima kvalitete i dizajna. Robusnost i jednostavno rukovanje omogućuju nesmetanu integraciju naših ultrazvučnih uređaja u industrijska postrojenja. Ultrazvučni uređaji Hielscher lako se nose s teškim uvjetima i zahtjevnim okruženjima.

Hielscher Ultrasonics tvrtka je s ISO certifikatom i poseban naglasak stavlja na ultrazvučne uređaje visokih performansi koji se odlikuju najsuvremenijom tehnologijom i jednostavnošću upotrebe. Naravno, ultrazvučni uređaji Hielscher sukladni su sa zahtjevima za oznaku CE i ispunjavaju zahtjeve UL, CSA i RoHs.

Tablica u nastavku daje pregled naših različitih laboratorijskih ultrazvučnih uređaja: