Puferske otopine pripremljene ultrazvučnom obradom
Puferi za lizu mogu se učinkovito i brzo pripremiti pomoću ultrazvučnih homogenizatora tkiva. Budući da su ultrasonicators alat iz snova za miješanje, otapanje i disperziju, oni omogućuju pouzdanu i korisniku jednostavnu pripremu pufera za lizu.
Ultrazvučna priprema pufera za lizu
Ultrazvučni homogenizatori tkiva uobičajeni su alat za razbijanje stanica, lizu i ekstrakciju, stoga su dostupni u većini laboratorija. Sekundarna primjena ultrazvučnih uređaja tipa sonde je priprema pufera za lizu.
Pufer za lizu je otopina koja se koristi za razbijanje (lizu) stanica i oslobađanje njihovog sadržaja za daljnju analizu. Specifični sastav pufera za lizu može varirati ovisno o vrsti stanica koje se liziraju i daljnjoj primjeni. Međutim, tipični pufer za lizu sadrži komponente kao što su deterdženti, soli i inhibitori proteaze. Puferske soli (npr. Tris-HCl) i ionske soli (npr. NaCl) obično se koriste za regulaciju pH i osmolarnosti lizata.
Kako bi se napravio pufer za lizu, komponente se miješaju zajedno u odgovarajućim koncentracijama i pH. Smjesa se obično miješa ili mućka dok se komponente ne otope i dok otopina ne postane homogena.
Ultrazvučna homogenizacija je metoda koja se može koristiti za pomoć u izradi dobrog pufera za lizu poboljšanjem miješanja i otapanja komponenti. U ovoj metodi ultrazvučni valovi – normalno u rasponu od 20 do 30 kHz – nanose se na smjesu, što stvara kavitacijske mjehuriće koji kolabiraju i stvaraju intenzivnu lokalnu energiju, što dovodi do mehaničkog smicanja i miješanja komponenti.
Proces ultrazvučne homogenizacije može pomoći u razbijanju grudica ili agregata komponenti i osigurati da je otopina jednolično izmiješana. Posljedično, takav poboljšani pufer za lizu može dovesti do učinkovitijeg razbijanja stanica i većeg prinosa ekstrahiranog materijala. Dodatno, ultrazvučna homogenizacija može smanjiti vrijeme potrebno za izradu pufera za lizu u usporedbi s tradicionalnim metodama miješanja ili mućkanja.
Sve u svemu, ultrazvučna homogenizacija moćan je alat za poboljšanje kvalitete i učinkovitosti pripreme pufera za lizu.

Ultrazvučni laboratorijski homogenizator UP200Ht popularan je u istraživačkim laboratorijima za pripremu uzoraka, lizu, ekstrakciju, fragmentaciju DNK i otapanje.
Protokol za ultrazvučnu pripremu pufera za lizu
Ovo je opći protokol za izradu pufera za lizu pomoću ultrazvučnog uređaja tipa sonde:
Materijali:
- Deterdžent(i) po izboru (npr. Triton X-100, SDS, CHAPS)
- Sol(i) po izboru (npr. NaCl, KCl)
- Inhibitori proteaze (npr. PMSF, aprotinin, leupeptin)
- ultrazvučni uređaj
- Miješalica
- Deionizirana voda
- pH metar ili pH trake
Korak po korak upute:
- Odredite sastav pufera za lizu na temelju stanica ili tkiva koje ćete lizirati i daljnjih aplikacija za koje ćete koristiti lizat. Pripremite osnovne otopine deterdženata, soli i inhibitora proteaze u željenim koncentracijama.
- Dodajte osnovne otopine deterdženata, soli i inhibitora proteaze u čašu ili tikvicu.
- Dodajte deioniziranu vodu da biste doveli volumen do željene količine pufera.
- Pomiješajte komponente pomoću mješalice kako biste dobili otopinu prethodnog miješanja.
- Izmjerite pH pufera pomoću pH metra ili pH trakica i po potrebi prilagodite pH malim količinama kiseline ili baze.
- Upotrijebite ultrazvučni uređaj tipa sonde za homogenizaciju otopine prethodnog miješanja tako da se dobije visoko homogena otopina. Stoga otopinu sonicirate nekoliko sekundi dok se otopina temeljito ne promiješa i sve grudice ili agregati ne razbiju. Trajanje i snaga sonikacije mogu se optimizirati na temelju specifičnog pufera za lizu i ultrazvučnog uređaja koji se koristi.
- Nakon ultrazvučne obrade, ponovno izmjerite pH pufera i prilagodite ga po potrebi.
- Filtrirajte pufer kroz filter od 0,2 mikrona kako biste uklonili sve ostatke ili agregate koji su se mogli formirati tijekom sonikacije.
- Pufer za lizu je sada spreman za upotrebu.
Napomena: Točan sastav i pH pufera za lizu mogu varirati ovisno o stanicama ili tkivima koje se liziraju i daljnjim primjenama. Gore navedeni protokol je opća smjernica i možda će ga trebati optimizirati za određene aplikacije.
Ultrazvučni homogenizatori se obično koriste za razbijanje stanica i ekstrakciju unutarstaničnih molekula. Stoga mnoge aplikacije za lizu koriste ultrazvuk tipa sonde ne samo za pripremu pufera za lizu, već i za mehaničko razbijanje stanica i ekstrakciju.
To čini ultrazvučne homogenizatore tkiva svestranim alatom za laboratorije i objašnjava široku upotrebu ultrazvučnih uređaja u mikrobiologiji, biotehnologiji i znanosti o životu.
Ultrazvučni laboratorijski homogenizatori
Hielscher Ultrasonics proizvodi i isporučuje ultrazvučne homogenizatore i sonde (sonotrode) na različitim snagama i volumenima uzoraka. To nam omogućuje da vam ponudimo najprikladniji ultrazvučni disruptor za pripremu vašeg uzorka. Usredotočeni smo na najvišu kvalitetu, izvanrednu udobnost korisnika i pouzdane rezultate sonikacije. Svi digitalni ultrazvučni uređaji imaju pametni softver, programiranje i prethodno postavljanje protokola sonikacije, daljinsko upravljanje preglednikom, kontrolu temperature, osvjetljenje uzorka kao i automatsko snimanje podataka na ugrađenu SD karticu.
Projektiranje, proizvodnja i savjetovanje – Kvaliteta Proizvedeno u Njemačkoj
Hielscher ultrasonicators su poznati po svojim najvišim standardima kvalitete i dizajna. Robusnost i jednostavan rad omogućuju glatku integraciju naših ultrazvučnih uređaja u industrijske objekte. Teški uvjeti i zahtjevna okruženja lako se nose s Hielscher ultrasonicators.
Hielscher Ultrasonics je ISO certificirana tvrtka i stavlja poseban naglasak na ultrazvučne uređaje visokih performansi koji sadrže najsuvremeniju tehnologiju i jednostavnu su za korištenje. Naravno, Hielscher ultrasonicators sukladni su CE i ispunjavaju zahtjeve UL, CSA i RoHs.
Tablica u nastavku daje vam pregled naših različitih laboratorijskih ultrazvučnih uređaja:
VialTweeter na UP200St | 200 W | 26kHz | ultrazvučna obrada malih bočica, npr. Eppendorf 1,5 ml |
UP50H | 50W | 30kHz | ručni ili samostojeći laboratorijski homogenizator |
UP100H | 100 W | 30kHz | ručni ili samostojeći laboratorijski homogenizator |
UP200Ht | 200 W | 26kHz | ručni ili samostojeći laboratorijski homogenizator |
UP200St | 200 W | 26kHz | stojeći laboratorijski homogenizator |
UP400St | 400 W | 24kHz | stojeći laboratorijski homogenizator |
SonoStep | 200 W | 26kHz | kombiniranje laboratorijskog reaktora, ultrazvuka, pumpe, mješalice i posude |
GDmini2 | 200 W | 26kHz | protočna ćelija bez kontaminacije |
kuphorn | 200 W | 26kHz | intenzivna ultrazvučna kupka za bočice i čaše |
UIP400MTP | 400 W | 24kHz | ultrazvučni sustav za ploče s više jažica? mikrotitarske ploče |

Ultrazvučni CupHorn za intenzivnu sonikaciju zatvorenih epruveta i bočica za sterilnu homogenizaciju uzoraka.
Kontaktirajte nas!? Pitajte nas!

Ultrazvučni laboratorijski homogenizator UP400St se obično koristi za pripremu pufera za lizu i naknadno razbijanje stanica.
Literatura? Reference
- Fernandes, Luz; Santos, Hugo; Nunes-Miranda, J.; Lodeiro, Carlos; Capelo, Jose (2011): Ultrasonic Enhanced Applications in Proteomics Workflows: single probe versus multiprobe. Journal of Integrated OMICS 1, 2011.
- Priego-Capote, Feliciano; Castro, María (2004): Analytical uses of ultrasound – I. Sample preparation. TrAC Trends in Analytical Chemistry 23, 2004. 644-653.
- Welna, Maja; Szymczycha-Madeja, Anna; Pohl, Pawel (2011): Quality of the Trace Element Analysis: Sample Preparation Steps. In: Wide Spectra of Quality Control; InTechOpen 2011.
- Nico Böhmer, Andreas Dautel, Thomas Eisele, Lutz Fischer (2012): Recombinant expression, purification and characterisation of the native glutamate racemase from Lactobacillus plantarum NC8. Protein Expr Purif. 2013 Mar;88(1):54-60.
- Brandy Verhalen, Stefan Ernst, Michael Börsch, Stephan Wilkens (2012): Dynamic Ligand-induced Conformational Rearrangements in P-glycoprotein as Probed by Fluorescence Resonance Energy Transfer Spectroscopy. J Biol Chem. 2012 Jan 6;287(2): 1112-27.
- Claudia Lindemann, Nataliya Lupilova, Alexandra Müller, Bettina Warscheid, Helmut E. Meyer, Katja Kuhlmann, Martin Eisenacher, Lars I. Leichert (2013): Redox Proteomics Uncovers Peroxynitrite-Sensitive Proteins that Help Escherichia coli to Overcome Nitrosative Stress. J Biol Chem. 2013 Jul 5; 288(27): 19698–19714.
- Elahe Motevaseli, Mahdieh Shirzad, Seyed Mohammad Akrami, Azam-Sadat Mousavi, Akbar Mirsalehian, Mohammad Hossein Modarressi (2013): Normal and tumour cervical cells respond differently to vaginal lactobacilli, independent of pH and lactate. ed Microbiol. 2013 Jul; 62(Pt 7):1065-1072.

Hielscher Ultrasonics proizvodi ultrazvučne homogenizatore visokih performansi od laboratorija do industrijska veličina.