Puferske otopine pripremljene ultrazvučnom obradom

Puferi za lizu mogu se učinkovito i brzo pripremiti pomoću ultrazvučnih homogenizatora tkiva. Budući da su ultrasonicators alat iz snova za miješanje, otapanje i disperziju, oni omogućuju pouzdanu i korisniku jednostavnu pripremu pufera za lizu.

Ultrazvučna priprema pufera za lizu

Ultrazvučni homogenizatori tkiva uobičajeni su alat za razbijanje stanica, lizu i ekstrakciju, stoga su dostupni u većini laboratorija. Sekundarna primjena ultrazvučnih uređaja tipa sonde je priprema pufera za lizu.

Pufer za lizu je otopina koja se koristi za razbijanje (lizu) stanica i oslobađanje njihovog sadržaja za daljnju analizu. Specifični sastav pufera za lizu može varirati ovisno o vrsti stanica koje se liziraju i daljnjoj primjeni. Međutim, tipični pufer za lizu sadrži komponente kao što su deterdženti, soli i inhibitori proteaze. Puferske soli (npr. Tris-HCl) i ionske soli (npr. NaCl) obično se koriste za regulaciju pH i osmolarnosti lizata.
Kako bi se napravio pufer za lizu, komponente se miješaju zajedno u odgovarajućim koncentracijama i pH. Smjesa se obično miješa ili mućka dok se komponente ne otope i dok otopina ne postane homogena.
Ultrazvučna homogenizacija je metoda koja se može koristiti za pomoć u izradi dobrog pufera za lizu poboljšanjem miješanja i otapanja komponenti. U ovoj metodi ultrazvučni valovi – normalno u rasponu od 20 do 30 kHz – nanose se na smjesu, što stvara kavitacijske mjehuriće koji kolabiraju i stvaraju intenzivnu lokalnu energiju, što dovodi do mehaničkog smicanja i miješanja komponenti.
Proces ultrazvučne homogenizacije može pomoći u razbijanju grudica ili agregata komponenti i osigurati da je otopina jednolično izmiješana. Posljedično, takav poboljšani pufer za lizu može dovesti do učinkovitijeg razbijanja stanica i većeg prinosa ekstrahiranog materijala. Dodatno, ultrazvučna homogenizacija može smanjiti vrijeme potrebno za izradu pufera za lizu u usporedbi s tradicionalnim metodama miješanja ili mućkanja.
Sve u svemu, ultrazvučna homogenizacija moćan je alat za poboljšanje kvalitete i učinkovitosti pripreme pufera za lizu.

Protokol za ultrazvučnu pripremu pufera za lizu

Ovo je opći protokol za izradu pufera za lizu pomoću ultrazvučnog uređaja tipa sonde:
 
Materijali:

• Deterdžent(i) po izboru (npr. Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Sol(i) po izboru (npr. NaCl, KCl)
• Inhibitori proteaze (npr. PMSF, aprotinin, leupeptin)
• ultrazvučni uređaj
• Miješalica
• Deionizirana voda
• pH metar ili pH trake

 
 
Korak po korak upute:

1. Odredite sastav pufera za lizu na temelju stanica ili tkiva koje ćete lizirati i daljnjih aplikacija za koje ćete koristiti lizat. Pripremite osnovne otopine deterdženata, soli i inhibitora proteaze u željenim koncentracijama.
2. Dodajte osnovne otopine deterdženata, soli i inhibitora proteaze u čašu ili tikvicu.
3. Dodajte deioniziranu vodu da biste doveli volumen do željene količine pufera.
4. Pomiješajte komponente pomoću mješalice kako biste dobili otopinu prethodnog miješanja.
5. Izmjerite pH pufera pomoću pH metra ili pH trakica i po potrebi prilagodite pH malim količinama kiseline ili baze.
6. Upotrijebite ultrazvučni uređaj tipa sonde za homogenizaciju otopine prethodnog miješanja tako da se dobije visoko homogena otopina. Stoga otopinu sonicirate nekoliko sekundi dok se otopina temeljito ne promiješa i sve grudice ili agregati ne razbiju. Trajanje i snaga sonikacije mogu se optimizirati na temelju specifičnog pufera za lizu i ultrazvučnog uređaja koji se koristi.
7. Nakon ultrazvučne obrade, ponovno izmjerite pH pufera i prilagodite ga po potrebi.
8. Filtrirajte pufer kroz filter od 0,2 mikrona kako biste uklonili sve ostatke ili agregate koji su se mogli formirati tijekom sonikacije.
9. Pufer za lizu je sada spreman za upotrebu.

 
Napomena: Točan sastav i pH pufera za lizu mogu varirati ovisno o stanicama ili tkivima koje se liziraju i daljnjim primjenama. Gore navedeni protokol je opća smjernica i možda će ga trebati optimizirati za određene aplikacije.
 
Ultrazvučni homogenizatori se obično koriste za razbijanje stanica i ekstrakciju unutarstaničnih molekula. Stoga mnoge aplikacije za lizu koriste ultrazvuk tipa sonde ne samo za pripremu pufera za lizu, već i za mehaničko razbijanje stanica i ekstrakciju.
To čini ultrazvučne homogenizatore tkiva svestranim alatom za laboratorije i objašnjava široku upotrebu ultrazvučnih uređaja u mikrobiologiji, biotehnologiji i znanosti o životu.

Ultrazvučni laboratorijski homogenizatori

Hielscher Ultrasonics proizvodi i isporučuje ultrazvučne homogenizatore i sonde (sonotrode) na različitim snagama i volumenima uzoraka. To nam omogućuje da vam ponudimo najprikladniji ultrazvučni disruptor za pripremu vašeg uzorka. Usredotočeni smo na najvišu kvalitetu, izvanrednu udobnost korisnika i pouzdane rezultate sonikacije. Svi digitalni ultrazvučni uređaji imaju pametni softver, programiranje i prethodno postavljanje protokola sonikacije, daljinsko upravljanje preglednikom, kontrolu temperature, osvjetljenje uzorka kao i automatsko snimanje podataka na ugrađenu SD karticu.

Projektiranje, proizvodnja i savjetovanje – Kvaliteta Proizvedeno u Njemačkoj

Hielscher ultrasonicators su poznati po svojim najvišim standardima kvalitete i dizajna. Robusnost i jednostavan rad omogućuju glatku integraciju naših ultrazvučnih uređaja u industrijske objekte. Teški uvjeti i zahtjevna okruženja lako se nose s Hielscher ultrasonicators.

Hielscher Ultrasonics je ISO certificirana tvrtka i stavlja poseban naglasak na ultrazvučne uređaje visokih performansi koji sadrže najsuvremeniju tehnologiju i jednostavnu su za korištenje. Naravno, Hielscher ultrasonicators sukladni su CE i ispunjavaju zahtjeve UL, CSA i RoHs.

Tablica u nastavku daje vam pregled naših različitih laboratorijskih ultrazvučnih uređaja: