Hielscher Ultrasonics
Bit će nam drago razgovarati o vašem procesu.
Nazovite nas: +49 3328 437-420
Pošaljite nam e-mail: info@hielscher.com

Ultrazvučna priprema uzoraka C. Elegans

C. elegans, crv nematoda, široko je korišten modelni organizam u biologiji. Priprema uzorka prije analize zahtijeva lizu, ekstrakciju proteina i lipida kao i fragmentaciju RNA, što se pouzdano može izvesti sonikacijom. Ultrazvučni disruptori stanica pouzdani su, sofisticirani i jednostavni uređaji za brzu pripremu uzoraka C. elegans.

Ultrazvučna priprema uzoraka C. Elegans

C. elegans su okrugli crvi koji se široko koriste u istraživačkim laboratorijima za istraživanje genomike, razvojne biologije i bolesti. Mnogi geni u genomu C. elegans imaju funkcionalne kopije kod ljudi. Stoga je crv nematoda iznimno koristan model za ljudske bolesti. Druge prednosti za široku upotrebu C. elegans su jednostavno i jeftino uzgajanje na pločama koje sadrže bakterije (npr. E. coli), prozirnost, jednostavno rukovanje, kao i mogućnost zamrzavanja i čuvanja crva na dulje vrijeme.
Analiza proteina i lipida redoviti su postupci u laboratorijima, a ultrazvučna priprema uzorka je utvrđena metoda za lizu C. elegans nematoda u svakoj razvojnoj fazi (tj. embriji, ličinke L1-L4, odrasli). Budući da se C. elegans također koristi kao sustav ekspresije proteina za prekomjernu ekspresiju ciljanih proteina, potrebna je pouzdana, reproducibilna metoda lize i ekstrakcije proteina, koja daje visoke prinose proteina. Ultrazvučni sustavi za razbijanje stanica i ekstrakciju dostupni su kao homogenizatori tipa sonde i kao ultrazvučni uređaji s više uzoraka. S obzirom na praktičnu pripremu uzorka i sve vrste veličina uzoraka, Hielscher Ultrasonics ima idealan ultrazvučni razarač stanica za vaš laboratorijski postupak.
C. elegans široko je korišten modelni organizam u biološkim istraživanjima. Ultrazvučna liza je sofisticirana, pouzdana, ponovljiva i brza tehnika za pripremu visokokvalitetnih proteinskih ekstrakata iz C. elegans.

Ultrazvučna liza C. elegans za

  • Priprema homogenata crva
  • ekstrakcija proteina
  • ekstrakcija lipida
  • Kvantifikacija proteina
  • Imunoprecipitacija
  • Western Blotting
  • Ekstrakcija RNK
  • Enzimski testovi
VialTweeter na ultrazvučnom procesoru UP200ST

VialTweeter jedinica za pripremu više uzoraka za istovremenu sonikaciju 10 epruveta.

Zahtjev za informacije




Imajte na umu naše politika privatnosti.




Ultrazvučni protokoli za poremećaj i lizu C. Elegans

Ultrazvučna homogenizacija i liza C. elegans i kasnija ekstrakcija proteina i lipida mogu se izvesti pomoću različitih postupaka upotrebom različitih pufera za homogenizaciju i lizu itd. Svim protokolima za lizu zajedničko je da se uzorci moraju neprekidno držati na ledu kako bi se spriječila degradacija proteina. U nastavku vam predstavljamo neke pouzdane i brze protokole ultrazvučne lize i ekstrakcije za pripremu visokokvalitetnih uzoraka C. elegans koji sadrže proteine ili lipide.

Prednosti ultrazvučne lize C. elegans

  • Pouzdan
  • ponovljiv
  • precizno kontrolirana temperatura
  • pouzdana kontrola procesa
  • nježna metoda
  • lako se nanosi
  • Sef

Ultrazvučna ekstrakcija proteina iz uzoraka C. elegans

Ultrazvučna liza i ekstrakcija proteina crva C. elegans mogu se izvesti pomoću različitih protokola. U nastavku vam predstavljamo nekoliko pouzdanih i brzih protokola lize za ponovljive rezultate ekstrakcije proteina.

Brza priprema citosolnog ekstrakta crva C. elegans sonikacijom

Sljedećim protokolom možete pripremiti lizate C. elegans za manje od 30 minuta.
Zbirka C. elegans
Odaberite željene crve C. elegans u epruvetu s fosfatnim puferiranim fiziološkim rastvorom (PBS) od 1,5 ml ili ih isperite s ploče s 1,5 ml PBS-a. Centrifugirajte 1 minutu na 2000 okretaja u minuti da se taloži. Držite uzorke cijelo vrijeme na ledu.
Zatim isperite crve dva puta PBS-om.
Nakon toga crve dva puta isperite ddH2O.
Resuspendirajte crve u najmanje 500 ul pufera za homogenizaciju (HB). Uzorci crva sada su spremni za ultrazvučnu lizu.
Za veću kvalitetu proteinskog ekstrakta, možda biste trebali smanjiti bakterijsku kontaminaciju pranjem crva 5 minuta u PBS-u i sterilnoj, ultra čistoj vodi (ddH2O) ili provesti flotaciju saharoze. Držite uzorke crva neprekidno na ledu.

Ultrazvučni protokol za lizu C. elegans

  • Obavezno pripremite ultrazvučni uređaj unaprijed tako da ultrazvučni homogenizator bude spreman za upotrebu (sonda montirana, program sonikacije unaprijed postavljen).
  • Ultrasonicator UP200Ht (200 watta, 26kHz) s mikrovrhom S26d2 za pripremu bioloških uzorakaAko je vaš ultrazvučni uređaj montiran na postolje, stavite ledenu kupku s epruvetama za uzorke ispod ultrazvučne sonde i umetnite ultrazvučnu sondu u epruvetu od 1,5 ml.

  • Za lizu C. elegans s UP200St ili UP200Ht, ultrazvuk treba izvesti pomoću mikrovrha (npr. sonda od 2 mm S26d2; vidi sliku lijevo) pri 40% amplitude u trajanju od 1 sekunde s pauzama od 30 sekundi između. 5 ciklusa sonikacije za svaku 1 sekundu s pauzama od 30 sekundi idealni su za lizu C. elegans. Ako izvodite lizu prvi put, možete provjeriti progresiju lize u malim alikvotima uzorka nakon svakog pulsa pomoću mikroskopa.
  • Liza je uspješno završena kada su crvi prekinuti. Pretjerana sonifikacija dovodi do lomljenja jezgri i postaje vidljiva kada uzorak postane viskozan ili se zapjeni. Kako biste spriječili degradaciju uzorka, upotrijebite više impulsa ako je potrebno. Nemojte povećavati vrijeme svakog ciklusa ultrazvučnog pulsa kako biste dobili visokokvalitetne proteinske ekstrakte.
  • Očistite stanični lizat centrifugiranjem ultrazvučno liziranih crva pri 14 000 okretaja u minuti tijekom 10 minuta na 4ºC.
  • Zatim prebacite supernatant u novu epruvetu i pripremite ga za imunoprecipitaciju ili druge testove.

Napomena za pufer za homogenizaciju: Pripremite pufer za homogenizaciju za gore navedeni protokol ultrazvučne lize kako slijedi:

  • 15 mM Hepes pH 7,6 – 15 ml 0,5 M
  • 10 mM KCl – 2,5 ml 2 M
  • 1,5 mM MgCl2 – 0.75 ml od 1 M
  • 0.1 mM EDTA – 100 ul od 0,5 M
  • 0.5 mM EGTA – 2,5 ml 0,1 M
  • 44 mM saharoze – 14,7 ml 50 %
  • Dodajte neposredno prije upotrebe: 1 mM DTT – 1000x od 1M
  • plus inhibitor proteaze

 

Ovaj vodič objašnjava koja je vrsta sonikatora najbolja za vaše zadatke pripreme uzorka kao što su liza, razbijanje stanica, izolacija proteina, fragmentacija DNK i RNK u laboratorijima, analiza i istraživanje. Odaberite idealan tip sonikatora za svoju primjenu, volumen uzorka, broj uzorka i protok. Hielscher Ultrasonics ima idealan ultrazvučni homogenizator za vas!

Kako pronaći savršen sonikator za razbijanje stanica i ekstrakciju proteina u znanosti i analizi

Video sličica

 

Visokoučinkovita liza C. elegans u pločama s 96 jažica pomoću sonikatora ploča UIP400MTP

C. elegans Lysis (odrasle nematode)
UIP400MTP 80% amplitude, 20 ciklusa (svaki ciklus sonikacije: 30 sekundi UKLJUČENO, 30 sekundi ISKLJUČENO)
Pufer za lizu:

  • Opcija 1) 4% SDS, 0,1 M Tris/HCl pH 8,0, 1 mM EDTA
  • Opcija 2) za ko-imunoprecipitaciju (co-IP): 10 mM Tris HCl (pH 7,5), 150 mM NaCl, 0,5 mM EDTA, 0,5 % NP-40 (kompletni koktel inhibitora proteinaze)

Fragmentacija DNA visoke propusnosti
C. elegans (odrasle nematode) DNA 200-300 bp: sonikator ploča UIP400MTP – postavite 80% amplitude, 30 impulsa – svakih 30 sekundi uključeno, 30 sekundi isključeno

UIP400MTP sonikator ploča za pripremu uzoraka visoke propusnosti: UIP400MTP ravnomjerno sonicira uzorke u mikrotitarskim pločama s više jažica i pločama s 96 jažica razbijajući stanice, ekstrahirajući proteine, fragmentirajući DNA, RNA i alfa-sinukleinske fibrile.

Sonikator ploča UIP400MTP za pripremu uzoraka visoke propusnosti ravnomjerno sonicira uzorke u pločama s više jažica, mikrotitarskim pločama i pločama s 96 jažica

Ultrazvučna liza C. elegans za kvantitativne testove pročišćavanja afiniteta

Embriji C. elegans (~2 milijuna po ponavljanju) svježe su sakupljeni u biološkim triplikatima izbjeljivanjem mladih gravidnih hermafrodita i sonicirani na ledu (ciklus: 0,5 s, amplituda: 40–45%, 5 udaraca po sesiji, 5 sesija, interval između sesija : 30 s; Ultrazvučni procesor UP200S s mikrovrhom S26d2 (Hielscher Ultrasonics GmbH)) u puferu za lizu (ukupni volumen: ~600 μl; 50 mm Tris-HCl, pH 7,4, 100 mm KCl, 1 mm MgCl2, 1 mm EGTA, 1 mm DTT, 10% glicerol , mješavina inhibitora proteaze, 0,1% Nonidet P-40 zamjena). Nakon sonikacije, dodan je Nonidet P-40 Substitute do 1% i lizati su inkubirani rotacijom glave iznad repa na 4°C tijekom 30 minuta, nakon čega je uslijedilo centrifugiranje na 20 000 × g tijekom 20 minuta na 4°C. Pročišćeni lizat je zatim aspiriran bez ometanja gornjeg lipidnog sloja i podijeljen na pola u anti-GFP agarozne kuglice ili blokirane kontrolne kuglice (40-50 μl). Nakon rotacije glave iznad repa na 4°C tijekom 60-90 minuta, kuglice su isprane jednom puferom za lizu koji je sadržavao 0,1% Nonidet P-40 zamjene, nakon čega su uslijedila dva puta ispiranja u bilo kojem puferu I (25 mm Tris-HCl, pH 7.4, 300 mm NaCl, 1 mm MgCl2) ili pufer II (1 mm Tris-HCl, pH 7.4, 150 mm NaCl, 1 mm MgCl2) ili oboje. Za GFP:MBK-2 pull-down izvedena su dva odvojena eksperimenta u različitim uvjetima pranja. Proteini su eluirani orbitalnim mućkanjem u 50 μl 6 m uree/2 M tiouree na sobnoj temperaturi. Za MBK-1::GFP pull-down eksperimente, proteini su eluirani dva puta mućkanjem u 50 μl 8 m gvanidinijevog klorida na 90°C, nakon čega je uslijedilo taloženje etanolom. Eluirani uzorci proteina zatim su digestirani u otopini.
(usp. Chen i sur., 2016.)

Sonotroda MTP-24-8-96 ima osam ultrazvučnih sondi za sonikaciju jažica mikrotitarskih ploča.

Sonotroda MTP-24-8-96 ima osam ultrazvučnih sondi za sonikaciju jažica mikrotitarskih ploča.

Ultrazvučna homogenizacija i liza crva

Za postupak lize C.elegans i ekstrakcije proteina, 30 000 nemotoda relevantnog stadija sakupljeno je po uzorku i isprano u ledeno hladnom S-bazu, koncentrirano centrifugiranjem na 1500 okretaja u minuti tijekom 2 minute, isprano šest puta s ledeno hladnim S- bazal za uklanjanje zaostalih bakterija, a zatim pohranjen na ledu do upotrebe. Za ekstrakciju proteina, gravidno odraslim crvima je dopušteno da formiraju kompaktnu kuglicu nakon zadnjeg S-bazalnog ispiranja. Kuglice crva zatim su resuspendirane u 1 ml ledeno hladnog pufera za ekstrakciju [20 mM kalijevog fosfata, pH 7,4, 2 mM EDTA, 1% Triton-X-100, inhibitori proteaze (Sigma P2714)] i odmah obrađene.
~30 000 gravidnih odraslih crva (što odgovara ~100 mg mokre težine) sonicirano je na ledu pomoću ultrazvučnog uređaja tipa sonde (npr. UP50H s mikrovrhom MS2) pri 40% amplitude tijekom 10 ciklusa od 3 sekunde uključeno, 30 sekundi isključeno, u 1 ml ledeno hladnog pufera za ekstrakciju. (usp. Baskharan et al. 2012.)

Ultrazvučna ekstrakcija lipida iz C. elegans

U lipidomici, grani metabolomike, karakterizira se i analizira lipidni komplement bioloških sustava. C. elegans naširoko se koristi u lipidomici za istraživanje interakcije metaboličkih lipida i njihovih učinaka na zdravlje i životni vijek.
Ultrazvučna liza i ekstrakcija koristi se za oslobađanje lipida kao što su sfingolipidi iz embrija C. elegans, ličinki i odraslih crva. Ultrazvučna obrada koristi se za pripremu homogenata crva i zatim za ekstrakciju lipida iz uzorka.
Protokol za ultrazvučnu ekstrakciju lipida iz C. elegans
Otopite pelet C. elegans na ledu i resuspendirajte s 0,5 ml ultravode. Sonicirajte uzorke C. elegans u epruvetama od 1,5 mL, držeći uzorke neprekidno na ledu.
Sonikacija se može izvesti pomoću ultrazvučne sonde kao što je UP200Ht, ultrazvučna jedinica za pripremu uzoraka VialTweeter (istovremena sonikacija 10 uzoraka) ili UIP400MTP (za sonikaciju ploča s više jažica kao što su ploče s 96 jažica). Za ultrazvučnu lizu s UP200Ht koristite mikrovrh S26d2. Unaprijed postavite način ultrazvučnog ciklusa u digitalnom izborniku. Postavite amplitudu na 10% i način ciklusa sonikacije od 2 sekunde impulsa od 20 ciklusa s pauzom od 30 sekundi. između svakog praska ultrazvučnih pulsacija.
Prenesite supernatante u staklene epruvete s čepom na navoj. Provedite Folchovu ekstrakciju dodavanjem 1 ml ultravode u svaku staklenu epruvetu, nakon čega slijedi dodavanje 6 ml smjese kloroform/metanol (omjer = 2:1) u svaku staklenu epruvetu.
Miksajte svaku staklenu epruvetu 30 sekundi 4 puta. Centrifugirajte epruvete na 1258 xg 15 minuta (Eppendorf, 5810 R) kako biste dodatno poboljšali odvajanje faza. Prenesite donju hidrofobnu frakciju u čistu staklenu epruvetu pomoću staklene Pasteurove pipete. Osušiti nižu hidrofobnu frakciju pod protokom dušika u isparivaču dušika. Osušeni pelet do upotrebe čuvati u zamrzivaču na -80 °C.

Ultrazvučna priprema lizata crva

Lizat crva: crvi u fazi L4 sakupljeni su i isprani tri puta s M9 puferom (42,26 mM Na2HPO422,04 mM KH2PO485,56 mM NaCl i 0,87 mM MgSO4) kako bi se uklonile sve bakterije. Nakon uklanjanja što je više moguće pufera M9, crvi su resuspendirani u puferu za lizu: 50 mM HEPES, 50 mM KCl, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 5 mM fosfat β-glicerol, 0,1% (v/v) Triton X-100, 50 mM natrijevog fluorida, 1 mM natrijevog ortovanadata, 5 mM natrijevog pirofosfata, 0,2 mM fenilmetansulfonilfluorida i inhibitora proteaze. Crvi su zamrznuti u tekućem dušiku i odmrznuti na 37°C tri puta, zatim su crvi sonicirani na suhom ledu ultrazvučnom jedinicom VialTweeter za istovremenu pripremu 10 epruveta s uzorcima. Sonikacija je provedena pri 50% amplitude u 10 ciklusa od 2 sekunde. s pauzom od 30 sekundi između eksplozija sonikacije. Nakon toga, uzorci su centrifugirani na 12000 okretaja u minuti na 4°C 15 minuta. Supernatant je sakupljen i pohranjen na -70°C. Alikvot je korišten za kvantifikaciju proteina Bradfordovim testom.
Određivanje ukupnog glutationa, GSH i GSSG: Za kvantifikaciju glutationa, lizati i određivanje napravljeni su isti dan. Ličinke hranjene glukozom i kontrolne L4 ličinke su sakupljene i isprane s M9 puferom tri puta. Nakon uklanjanja što je više moguće pufera M9, crvi su resuspendirani u ledeno hladnoj metafosfornoj kiselini (5% w/v), zatim su crvi sonikirani u ledu ultrazvučnim VialTweeterom pri 50% amplitude u deset ciklusa sonikacije od 2 sekunde. sa 30 sek. pauze između svakog ciklusa. Zatim se centrifugira na 12000 okretaja u minuti na 4 ̊C 15 min.
(usp. Alcántar-Fernández et al., 2018.)

C. elegans Priprema uzorka prije imunoprecipitacije i Western blottinga

Ukratko, za embrionalne ekstrakte, ličinke C. elegans L1 uzgajane su u velikim tekućim kulturama S-medija do odrasle dobi. Embriji su sakupljeni standardnom metodom izbjeljivanja i suspendirani u puferu za lizu (50 mM Tris, pH 7,5, 100 mM KCl, 1 mM EDTA, 1 mM MgCl2, 8,7% glicerol, 0,05% NP-40, 1½ koktel inhibitora proteaze i 1㏰ koktel inhibitora fosfataze I i II), brzo zamrznut u tekućem dušiku i liziran ultrazvučnim razbijanjem stanica pomoću ultrazvučnog uređaja s mikrovrhom kao što je UP200Ht sa S26d2 za 10 impulsa tijekom 10 s na 30% amplitude. Ako se mora pripremiti veći broj uzoraka ultrazvučno VialTweeter ili se preporučuje MultiSample-Ultrasonicator UIP400MTP za ploče s jažicama. Nakon sonikacije, ekstrakti su prethodno očišćeni centrifugiranjem na 30 000 g tijekom 20 minuta na 4 °C. Prethodno pročišćeni ekstrakt (300 µg ukupnog proteina) inkubiran je s 40 µ』g anti-CDC-25.1 pročišćenog afinitetom protutijela (ova studija) umreženog s proteinom A-agarozom, ili kao kontrola, sličnom količinom zečjeg imunoglobulina (Ig)G umrežen na protein A-agarozu korišten je u ukupnom volumenu od 200 µl pufera za lizu koji je sadržavao 1% NP-40, čije je uključivanje smanjilo nespecifično vezanje proteina na matriks. Uzorci su rotirani 1 h na 4°C, kuglice su isprane tri puta s puferom za lizu i eluirane s 30 ul glicina/HCl i 200 mM NaCl, pH 2,2. Nakon imunoprecipitacije, eluati su razrijeđeni u 30µ』l SDS uzorka pufera, zagrijani na 95°C tijekom 4 minute, a obično je 3% ukupnog unosa i 30% za eluate naneseno na SDS-PAGE nakon čega je uslijedio Western blotting s anti-precipitacijom. -CDC-25.1 (1:400), anti-LIN-23 (1:750), anti-ubikvitin (1:1000), anti-GSK3台 (1:500) ili anti-台β-aktin (1: 2000) antitijela. Tamo gdje ekstrakti nisu bili podvrgnuti imunoprecipitaciji, ista količina ukupnog proteina dobivenog iz tih ekstrakata resuspendirana je u SDS puferu uzorka, zagrijana na 95°C, a zatim izravno primijenjena na SDS-PAGE i analizirana Western blotom. (usp. Segref et al. 2020.)

Ozvučivač tipa sonde UP200St za lizu

Ultrazvučni disruptor stanica UP200St s mikro vrhom S26d2 za lizu i ekstrakciju proteina

Ultrazvučna liza pod preciznom kontrolom temperature

VialTweeter je MultiSample Ultraonicator koji omogućuje pouzdanu pripremu uzorka pod precizno kontroliranim temperaturnim uvjetima.Precizna i pouzdana kontrola temperature ključna je pri rukovanju biološkim uzorcima. Visoke temperature pokreću toplinski induciranu razgradnju proteina u uzorcima.
Kao i sve mehaničke tehnike pripreme uzoraka, sonikacija stvara toplinu. Međutim, temperatura uzoraka može se dobro kontrolirati korištenjem VialTweetera. Predstavljamo vam različite opcije za praćenje i kontrolu temperature vaših uzoraka dok ih pripremate za analizu pomoću uređaja VialTweeter i VialPress.

  1. Praćenje temperature uzorka: Ultrazvučni procesor UP200St, koji pokreće VialTweeter, opremljen je inteligentnim softverom i senzorom temperature koji se može priključiti. Priključite senzor temperature u UP200St i umetnite vrh senzora temperature u jednu od epruveta za uzorke. Putem digitalnog zaslona u boji osjetljivog na dodir, u izborniku uređaja UP200St možete postaviti određeni temperaturni raspon za sonikaciju uzorka. Ultrasonicator će se automatski zaustaviti kada se postigne maksimalna temperatura i pauzirati dok se temperatura uzorka ne spusti na nižu vrijednost postavljene temperature ∆. Zatim sonikacija ponovno automatski počinje. Ova pametna značajka sprječava degradaciju izazvanu toplinom.
  2. VialTweeter blok se može prethodno ohladiti. Stavite VialTweeter blok (samo sonotrodu bez sonde!) u hladnjak ili zamrzivač kako biste prethodno ohladili titanski blok koji pomaže odgoditi porast temperature u uzorku. Ako je moguće, sam se uzorak također može prethodno ohladiti.
  3. Koristite suhi led za hlađenje tijekom sonikacije. Upotrijebite plitku ladicu napunjenu suhim ledom i stavite VialTweeter na suhi led tako da se toplina može brzo raspršiti.

Pronađite optimalni ultrazvučni disruptor stanica za svoju aplikaciju za lizu

Hielscher Ultrasonics je dugogodišnji iskusni proizvođač visokoučinkovitih ultrazvučnih razarača stanica i homogenizatora za laboratorije, stolne i industrijske sustave. Veličina vaše bakterijske stanične kulture, vaš istraživački ili proizvodni cilj i volumen stanica za obradu po satu ili danu ključni su čimbenici za pronalaženje pravog ultrazvučnog disruptora stanica za vašu primjenu.
Hielscher Ultrasonics nudi različita rješenja za istovremenu sonikaciju više uzoraka (do 10 bočica) kao i masovnih uzoraka (tj. mikrotitarske ploče / ploče s 96 jažica), klasični laboratorijski ultrazvučni uređaj tipa sonde s različitim razinama snage od 50 do 400 W do potpuno industrijskih ultrazvučnih procesora s do 16.000 W po jedinici za komercijalno ometanje stanica i ekstrakciju proteina u velikoj proizvodnji. Svi Hielscher ultrasonicators su izgrađeni za rad 24/7/365 pod punim opterećenjem. Robusnost i pouzdanost temeljne su značajke naših ultrazvučnih uređaja.
Svi digitalni ultrazvučni homogenizatori opremljeni su pametnim softverom, zaslonom osjetljivim na dodir u boji i automatskim protokoliranjem podataka, što ultrazvučni uređaj čini praktičnim radnim alatom u laboratoriju i proizvodnim pogonima.
Javite nam koje vrste stanica, koji volumen, s kojom učestalošću i s kojim ciljem morate obraditi svoje biološke uzorke. Preporučit ćemo vam najprikladniji ultrazvučni disruptor stanica za vaše zahtjeve procesa.

Donja tablica daje vam naznaku približnog kapaciteta obrade naših ultrazvučnih sustava od kompaktnih ručnih homogenizatora i MultiSample Ultrasonicators do industrijskih ultrazvučnih procesora za komercijalne primjene:

Volumen serije Protok Preporučeni uređaji
96-jažica / mikrotitarske ploče na UIP400MTP
10 bočica od 0,5 do 1,5 ml na VialTweeter na UP200St
0.01 do 250 ml 5 do 100 ml/min UP50H
0.01 do 500 ml 10 do 200 ml/min UP100H
10 do 2000 ml 20 do 400 ml/min UP200Ht, UP400St
0.1 do 20L 0.2 do 4L/min UIP2000hdT
10 do 100l 2 do 10L/min UIP4000hdT
na 10 do 100L/min UIP16000
na veći klaster od UIP16000

Kontaktirajte nas! / Pitajte nas!

Pitajte za više informacija

Molimo upotrijebite donji obrazac kako biste zatražili dodatne informacije o ultrazvučnim procesorima, primjeni i cijeni. Bit će nam drago razgovarati s vama o vašem procesu i ponuditi vam ultrazvučni sustav koji odgovara vašim zahtjevima!









Imajte na umu naše politika privatnosti.




Ultrazvučni homogenizatori visokog smicanja koriste se u laboratorijskoj, stolnoj, pilotskoj i industrijskoj obradi.

Hielscher Ultrasonics proizvodi visokoučinkovite ultrazvučne homogenizatore za aplikacije miješanja, disperziju, emulzifikaciju i ekstrakciju u laboratorijskim, pilotskim i industrijskim razmjerima.

Literatura / Reference



Činjenice koje vrijedi znati

Caenorhabditis elegans

C. elegans je slobodnoživuća prozirna nematoda (valjkast crv) duljine oko 1 mm, hrani se bakterijama (npr. E. coli) i ima relativno kratak životni ciklus. Na 20 °C, laboratorijski soj C. elegans (N2) ima prosječni životni vijek oko 2-3 tjedna i vrijeme stvaranja od 3 do 4 dana. Kada se C. elegans uzgaja u velikom broju, što se lako može učiniti u precizno kontroliranim laboratorijskim uvjetima, može se lako ispitati na princip rada novih lijekova kao i na njihove učinke i interakcije unutar složenih molekularnih procesa u ljudskim bolestima. Kratak genom, kratak životni ciklus i jednostavno rukovanje u laboratorijskim uvjetima čine C. elegans idealnim modelom organizma za istraživanja poput genomike, proteomike, razvojne biologije, istraživanja bolesti, razvoja lijekova itd.
Crvi Caenorhabditis elegans mogu biti mužjaci ili hermafroditi. Hermafroditi imaju i muške i ženske reproduktivne organe. Međutim, ženke crva ne postoje. Hermafroditi se mogu samooploditi ili se mogu razmnožavati s muškim crvima. C. elegans može proizvesti više od 1000 jaja svaki dan.
Budući da je C. elegans jedan od najjednostavnijih organizama sa živčanim sustavom, crv nematoda se od 1963. godine koristi kao modelni organizam za istraživanja. Neuroni ne ispaljuju akcijske potencijale i ne izražavaju naponske natrijeve kanale. Kod hermafrodita, ovaj sustav se sastoji od 302 neurona čiji je uzorak sveobuhvatno mapiran, u ono što je poznato kao konektom.
Mnogi geni u genomu C. elegans imaju funkcionalne kopije kod ljudi, što ga čini izuzetno korisnim modelom za ljudske bolesti i koristi se, primjerice, za proučavanje razvojne biologije, starenja i čimbenika koji utječu na dugovječnost. Nadalje, mutanti C. elegans daju modele za mnoge ljudske bolesti uključujući neurološke poremećaje (npr. Alzheimerovu bolest), kongenitalne bolesti srca i bolesti bubrega.
Ovi su čimbenici učinili C. elegans vrlo vrijednim modelom za mnoga područja istraživanja. Posljedično, C. elegans je bio prvi višestanični organizam kojemu je cijeli genom sekvenciran. Procjenjuje se da genom sadrži 20 470 gena koji kodiraju proteine. Oko 35% gena C. elegans ima ljudske homologe. Nevjerojatno je da se opetovano pokazalo da ljudski geni zamjenjuju svoje homologe C. elegans kada se unesu u C. elegans. Nasuprot tome, mnogi geni C. elegans mogu funkcionirati slično genima sisavaca.

Životni vijek C. elegans je cca. 3 tjedna i sastoji se od šest životnih faza: embriogeneza (stadij jajašca), četiri stadija ličinke (L1 do L4) i stadij odrasle osobe. Nematode se izlegu iz jaja kao ličinke L1 koje se sastoje od 560 stanica. Rast tijekom svakog stadija ličinke odvija se diobom stanica i hipertrofijom stanica. Kutikularno linjanje ističe svaki stadij ličinke. Ako surovi okolišni uvjeti signaliziraju crvu u razvoju da uvjeti vjerojatno neće podržati plodnost odrasle osobe, C. elegans može promijeniti njegov razvoj i formirati alternativni stadij ličinke L3, gdje ličinke prelaze u stadij dauer. U tom stanju životinje su izvanredno otporne na stres i dugovječne te mogu preživjeti tri do devet mjeseci. Dauer ličinke se izoliraju od nedaća brtvljenjem svojih bukalnih i analnih šupljina, skupljanjem crijeva i uključivanjem genetskog programa ovisnog o daf-16/FOXO koji, između ostalog, dovodi do ekspresije kutikule specifične za dauer. (usp. Henderson i sur., 2006.)

C. elegans Dauer Ličinke

Dauer ličinke su naziv za ličinke nematoda koje su ušle u alternativni razvojni stadij. drugi izraz "Dauer ličinke" posebno se koristi za crve iz obitelji rhabditids uključujući Caenorhabditis elegans. Riječ “Dauer” je njemačkog porijekla i znači “trajanje”.” u značenju “vremenski period". Dauer ličinke ulaze u neku vrstu staze i mogu preživjeti teške uvjete. Hoće li i kada ličinka ući u stadij dauer ovisi o uvjetima okoline. Ličinke Dauer opsežno se proučavaju u biologiji jer larave pokazuju izvanrednu sposobnost preživljavanja u teškim uvjetima i dugog života. Na primjer, ličinke C. elegans dauer mogu preživjeti do četiri mjeseca, mnogo duže od njihova prosječnog životnog vijeka od oko tri tjedna tijekom normalnog reproduktivnog razvoja.

Pregled životnog ciklusa C. elegans

C. elegans Razvoj u povoljnim uvjetima:
Caenorhabditis elegans (C. elegans) pokazuje različitu razvojnu progresiju u povoljnim i nepovoljnim uvjetima okoliša.
 
C. elegans Odaziv na povoljne uvjete:
U povoljnim uvjetima, mikroskopski okrugli crv Caenorhabditis elegans (C. elegans) slijedi točno definiran razvojni put. Nematoda obično prolazi kroz svoj životni ciklus prilično brzo kada su uvjeti okoline optimalni, obično na temperaturama između 15°C i 20°C.

  1. Reproduktivni razvoj: C. elegans započinje svoj životni ciklus kao embrij. Zatim napreduje kroz četiri različita stadija ličinke, skraćeno od L1 do L4.
  2. Stadij odrasle osobe: Nakon što završi četiri stadija ličinke, C. elegans doseže stadij odrasle osobe za samo 3 do 5 dana. U ovoj fazi sposobni su za reprodukciju i nastavljaju živjeti još 2 do 3 tjedna, ovisno o čimbenicima okoliša.

 
C. elegans Odgovor na nepovoljne uvjete:

Međutim, C. elegans je otporan organizam i može se prilagoditi nepovoljnim uvjetima kroz proces koji se naziva formiranje dauera.

  1. Dauer formacija: Kada uvjeti okoliša postanu nepovoljni, poput prenapučenosti, ograničene opskrbe hranom ili visokih temperatura, C. elegans može ući u izvanredni treći stadij ličinke tzv. “dauer,” skraćeno L3d.
  2. Dauer preživljavanje: Dauer ličinke posebno su prilagođene za preživljavanje u teškim uvjetima. U ovoj fazi mogu živjeti nekoliko mjeseci, štedeći energiju i podnoseći izazovna okruženja.

 

Oporavak u povoljnim okruženjima:
Izvanredan aspekt C. elegans je njegova sposobnost da se vrati u normalan životni ciklus kada se uvjeti poboljšaju.

  1. Povratak na povoljne uvjete: Kada ličinke C. elegans dauer ponovo naiđu na povoljne uvjete, kao što su obilje hrane, manja gustoća populacije i odgovarajuće temperature, one osjete promjenu u okolišu.
  2. Oporavak i reprodukcija: Kao odgovor na ove poboljšane uvjete, dauer ličinke prolaze kroz proces tzv “oporavak.” Tijekom oporavka prelaze natrag u stadije ličinke i naposljetku postaju reproduktivne odrasle jedinke s normalnim životnim vijekom.

 
Ova sposobnost prebacivanja između razvojnih faza kao odgovor na uvjete okoliša poseban je aspekt biologije C. elegans. Omogućuje im preživljavanje i učinkovitu reprodukciju u širokom rasponu uvjeta, što ih čini vrijednim modelnim organizmom za znanstvena istraživanja, posebno u proučavanju razvoja, genetike i starenja.

Bit će nam drago razgovarati o vašem procesu.

Let's get in contact.