Fragmentacija alfa-sinukleina pomoću VialTweeter Sonicatora
α-sinukleinske fibrile i vrpce fragmentirane su u znanstvenim istraživanjima kako bi se stvorili manji fibrilni isječci ili čak pojedinačne molekule proteina, koje se mogu lakše analizirati različitim eksperimentalnim tehnikama. VialTweeter Sonicator je jedan od najčešće korištenih ultrasonicators za učinkovitu i pouzdanu alfa-sinukleinsku fragmentaciju.
α-Sinuklein u istraživanju
Alfa-sinukleinske fibrile su proteinski agregati koji su snažno povezani s neurodegenerativnim poremećajima kao što su Parkinsonova bolest i određeni oblici demencije, uključujući demenciju s Lewyjevim tijelima. Istraživanja usmjerena na fibrile alfa-sinukleina imaju za cilj razumjeti njihovu ulogu u napredovanju bolesti i razviti potencijalne terapijske intervencije. Razgradnjom fibrila alfa-sinukleina na manje fragmente, istraživači mogu istražiti njihove specifične strukturne značajke. Na primjer, fragmentiranje alfa-sinukleinskih fibrila omogućuje istraživačima da istraže svoje interakcije s drugim molekulama, kao što su proteini, lipidi ili male molekule. Proizvodnjom manjih fragmenata mogu se učinkovitije ispitati mjesta vezanja i afinitet za te partnere u interakciji. Manje α-Syn fribrile i vrpce također mogu pokazati promijenjenu toksičnost i biokemijske učinke. Stoga je ključna pouzdana i učinkovita tehnika fragmentacije, koja daje ponovljive rezultate brzom i jednostavnom obradom uzoraka.
Ultrazvučna alfa-syn fragmentacija: VialTweeter ultrazvukom je uspostavljen ultrazvučni uzorak prep sustav koji ultrazvukom do 10 bočica istovremeno pod potpuno istim uvjetima. Programabilne postavke omogućuju jednostavno i brzo ponovno izvođenje istih eksperimenata, što daje vrlo pouzdane i ponovljive rezultate u fragmentaciji fibrila alfa-sinukleina.
VialTweeter ultrazvukom za istovremenu ultrazvučnu fragmentaciju više uzoraka alfa-sinukleina.
Priprema uzorka α-sinukleina sa sonikatorom
Jedan pristup proučavanju alfa-sinukleinskih fibrila uključuje njihovu ekstrakciju i fragmentaciju pomoću tehnika kao što je ultrazvukom. Sonikacija je proces koji koristi ultrazvučne valove visokog intenziteta, niske frekvencije za ometanje i razgradnju proteinskih agregata, što dovodi do oslobađanja manjih fibrila ili pojedinačnih molekula proteina. Sonikator VialTweeter je često korišten uređaj u α-synuclein-povezanih istraživanja u tu svrhu.
Brojne istraživačke studije opisuju precizne protokole pripreme uzoraka alfa-sinukleinske fibrile ultrazvukom, koji koriste Hielscher VialTweeter za učinkovitu i pouzdanu fragmentaciju fibrila α-sinukleina. Fragmentiranjem fibrila ultrazvučno, istraživači mogu analizirati dobivene proizvode i ispitati njihovu strukturu, toksičnost i interakcije s drugim molekulama. Ovo istraživanje pruža važan uvid u mehanizme na kojima se temelji neurodegeneracija i potencijalno identificiraju nove terapijske ciljeve. Dobro uspostavljeni α-sinukleinski ultrazvukom protokoli pomoću VialTweeter ultrazvukom omogućuju pouzdane i ponovljive rezultate.
Gornje slike: nefragmentirane alfa-sinukleinske fibrile
Donje slike: Ultrazvučno fragmentirane alfa-sinukleinske fibrile s VialTweeter ultrazvukom
(studija i slike: ©Dieriks i sur., 2022)
Ultrazvučna fragmentacija α-synuclein fibrila – Protokoli
Budući da brojni istraživači koriste VialTweeter sonikator kao preferiranu tehniku fragmentacije za proizvodnju ujednačenih fragmenata fibrila α-sinukleina, uspostavljeni protokoli su lako dostupni. Ispod možete pronaći nekoliko primjernih protokola fragmentacije.
Priprema sjemena ClearTau: ClearTau fibrile su razrijeđene na 10 μM u dH2O i ultrazvukom na 70 % amplituda za 50 s s 1 s 1 s 1 s OFF ciklusom u cijevi pomoću sonicator UP200St s VialTweeter. Sjemenke su karakterizirane elektronskom mikroskopijom.
Mjerenje fluorescencije ThS: ClearTau fibrile su razrijeđene na 2,5 μM u dH2O i ultrazvukom na 70 % amplituda za 50 s s 1 s 1 s 1 s OFF ciklusom u cijevi pomoću UP200St s VialTweeter. Kao kontrola korišten je 2,5 μM cjelovečernji tau 4R2N monomer. Reakciji od 100 μl dodano je 100 μl ThS (10 μM), što daje konačnu koncentraciju proteina od 1,25 μM. Jednokratna ThS fluorescencija izmjerena je pomoću 96 dobro jasnih donjih ploča postavljenih u ČITAČU mikroploča FLUOstar Omega s pobudom od 445 nm i zabilježenom je emisijom na 485 nm.
Limorenko i dr., 2023.)
Ujednačena duljina α-sinukleina pomoću ultrazvukom: Duljina heterogenost α-syn fibrila i vrpci smanjena je ultrazvukom za 20 minuta na ledu u 2-ml Eppendorf cijevi u VialTweeter postavljen na 75% amplituda, 0.5 s impulsi.
Bousset et al., 2013)
Provedena je kontrola kvalitete ljudskog rekombinantnog monomernog WT ili S129A a-Syn i fibrilarnih polimorfa koje generiraju, kao i a-Syn 1–110. Nakon toga, fibrilarni polimorfi su fragmentirani ultrazvukom za 20 min u 2-mL Eppendorf cijevi u VialTweeter ultrasonicator generirati fibrilarne čestice prosječne veličine 42-52 nm koje su pogodne za endocitozu.
(usp. Shrivastava i sur., 2020.)
Karakterizacija pet fibrilarnih α-Syn polimorfa. (A) Prikazani su elektronski mikrografi prijenosa negativno obojenih α-Syn fibrilarnih polimorfnih fibrila, vrpci, fibrila-91, fibrila-65 i fibrila-110 prije (gornja traka) i nakon fragmentacije VialTweeterom (donja traka). (B) Prikazana je raspodjela duljine fragmentiranih fibrilarnih polimorfa. Naznačen je broj (n) fibrilarnih sklopova iz kojih su izvedeni histogrami.
(studija i slike: Shrivastava i sur., 2020)
α-Syn fibrile su fragmentirane ultrazvukom za 20 min u 2 ml Eppendorf cijevi u VialTweeter generirati fibrilarne čestice prosječne veličine 42–52 nm kako je procijenjeno TEM analizom.
(usp. Negrini i sur., 2022.)
Resuspended fibrils91 (u PBS) su fragmentirani prije dodavanja stanične kulture ultrazvukom za 20 mL Eppendorf cijevi pomoću Vial Tweeter sonicator, alicitiran, bljesak zamrznut u tekućem dušiku i pohranjen do uporabe na -80 ̊C.
(usp. Vajhøj i sur., 2021.)
Sonicator UIP400MTP za fragmentaciju fibrila alfa-sinukleina u pločama s više bušotina.
VialTweeter i laboratorijski sonicatori za fragmentaciju α-Syn
Hielscher Ultrasonics je u svijetu prepoznat kao vodeći proizvođač najsuvremenijih ultrasonicators. Pouzdani i uspostavljeni u glavnim istraživačkim laboratorijima širom svijeta, naši ultrasonicators nude neusporedivu kvalitetu i performanse za vaše kritične eksperimente.
Uz Hielscher VialTweeter i bilo koji drugi Hielscher sonicator, doživjet ćete neusporedivu udobnost korisnika, jer su promišljeno dizajnirani za ponovljive rezultate, jednostavnost korištenja i besprijekoran rad. Uz značajke automatskog snimanja podataka, možete se usredotočiti na svoje istraživanje dok naši ultrasonicators pedantno bilježe ključne podatke za ponovljivost i preciznost.
Postignite dosljedne i ponovljive rezultate s povjerenjem!
Naši ultrasonicators su projektirani i proizvedeni u Njemačkoj. Njemačka preciznost i najviša inženjerska kvaliteta kako bi se osigurala pouzdana i točna priprema uzorka poput fragmentacije fibrila alfa-sinukleina svaki put. Nema više brige o nedosljednim ishodima - naša ultrazvučna tehnologija osigurava da vaše istraživanje ostane na čelu znanstvenog napretka.
Ali to nije sve! Naša predanost izvrsnosti nadilazi naše proizvode. Ponosni smo na našu iznimnu korisničku uslugu, pružajući stručnu podršku za rješavanje svih vaših upita ili nedoumica. Naš predani tim je tu da vam pomogne na svakom koraku vašeg istraživačkog putovanja, osiguravajući vam da maksimalno iskoristite naše ultrasonicators.
Odaberite inovaciju, pouzdanost i iznimno korisničko iskustvo - odaberite naše laboratorijske sonicatore kao što je VialTweeter za fragmentaciju fibrila alfa-sinukleina. Iskoristite već uspostavljene protokole i pridružite se redovima vodećih istraživača koji vjeruju našoj tehnologiji za svoje kritičke studije. Podignite svoja istraživanja i istražite nove granice u istraživanju demencije i neurodegenerativnih bolesti s našim najsuvremenijim ultrasonicators.
- visoka efikasnost
- Najmodamoksna tehnologija
- pouzdanost & robusnost
- obnovljivost
- podesiva, precizna kontrola procesa
- za bilo koji volumen
- inteligentni softver
- pametne značajke (npr. programabilne, protokoliranje podataka, daljinsko upravljanje)
- Jednostavan i siguran za rad
- Slabo održavanje
- CIP (čist na mjestu)
Dizajn, proizvodnja i savjetovanje – Kvaliteta proizvedena u Njemačkoj
Hielscher ultrasonicators su poznati po svojim najvišim standardima kvalitete i dizajna. Robusnost i jednostavan rad omogućuju glatku integraciju naših ultrasonicators u industrijske objekte. Grubim uvjetima i zahtjevnim okruženjima lako se bave Hielscher ultrasonicators.
Hielscher Ultrasonics je tvrtka s ISO certifikatom i stavlja poseban naglasak na ultrasonicators visokih performansi s najsuvremenijom tehnologijom i prilagođenošću korisniku. Naravno, Hielscher sonicators su CE usklađeni i zadovoljavaju zahtjeve UL, CSA i RoHs.
Tablica u nastavku daje vam naznaku približnog kapaciteta obrade naših ultrasonicators laboratorijske veličine:
| Preporučeni uređaji | Batch Volumen | Protok |
|---|---|---|
| UIP400MTP | multi-well / mikrotiter ploče | N.a. |
| Ultrazvučno cuphorn | CupHorn za bočice ili čaše | N.a. |
| GDmini2 | Ultrazvučni reaktor mikro-protoka | N.a. |
| VialTweeter | 00,5 do 1,5 ml | N.a. |
| UP100H | 1 do 500 mL | 10 do 200 mL / min |
| Uf200 ः t, UP400St | 10 do 2000 ml | 20 do 400 mL / min |
Kontaktirajte nas! / Pitajte nas!
The VialTweeter obično se koristi za fragmentiranje alfa-sinukleinske fibrile kao korak predanalitičke pripreme uzorka
Književnost / Reference
- Emil Dandanell Agerschou, Marie P. Schützmann, Nikolas Reppert, Michael M. Wördehoff, Hamed Shaykhalishahi, Alexander K. Buell, Wolfgang Hoyer (2021): β-Turn exchanges in the α-synuclein segment 44-TKEG-47 reveal high sequence fidelity requirements of amyloid fibril elongation. Biophysical Chemistry, Volume 269, 2021.
- Bousset, L., Pieri, L., Ruiz-Arlandis, G. et al. (2013): Structural and functional characterization of two alpha-synuclein strains. Nature Communications 4, 2575 (2013).
- Vajhøj, Charlott; Schmid, Benjamin; Alik, Ania; Melki, Ronald; Fog, Karina; Holst, Bjørn; Stummann, Tina (2021): Establishment of a human induced pluripotent stem cell neuronal model for identification of modulators of A53T α-synuclein levels and aggregation. PLOS ONE 16, 2021.
- Dieriks B.V.; Highet B.; Alik A.; Bellande T.; Stevenson T.J.; Low V.; Park T.I.; Correia J.; Schweder P.; Faull R.L.M.; Melki R.; Curtis M.A.; Dragunow M. (2022): Human pericytes degrade diverse α-synuclein aggregates. PLoS One, Nov 18;17(11), 2022.
- Amulya Nidhi Shrivastava, Luc Bousset, Marianne Renner, Virginie Redeker, Jimmy Savistchenko, Antoine Triller, Ronald Melki (2020): Differential Membrane Binding and Seeding of Distinct α-Synuclein Fibrillar Polymorphs. Biophysical Journal, Volume 118, Issue 6, 2020. 1301-1320.
- Negrini M, Tomasello G, Davidsson M, Fenyi A, Adant C, Hauser S, Espa E, Gubinelli F, Manfredsson FP, Melki R, Heuer A. (2022): Sequential or Simultaneous Injection of Preformed Fibrils and AAV Overexpression of Alpha-Synuclein Are Equipotent in Producing Relevant Pathology and Behavioral Deficits. Journal of Parkinsons Disease 12(4), 2022. 1133-1153.
- Limorenko G, Tatli M, Kolla R, Nazarov S, Weil MT, Schöndorf DC, Geist D, Reinhardt P, Ehrnhoefer DE, Stahlberg H, Gasparini L, Lashuel HA (2023): Fully co-factor-free ClearTau platform produces seeding-competent Tau fibrils for reconstructing pathological Tau aggregates. Nature Communications 4;14(1), July 2023.
Hielscher Ultrasonics proizvodi ultrazvučne homogenizatore visokih performansi Laboratorija do industrijske veličine.