Fragmentacija alfa-sinukleina sonikatorom VialTweeter

Fibrile i vrpce α-sinukleina fragmentiraju se u znanstvenim istraživanjima kako bi se dobili manji fragmenti fibrila ili čak pojedinačne proteinske molekule koje se mogu lakše analizirati različitim eksperimentalnim tehnikama. Sonikator VialTweeter jedan je od najčešće korištenih ultrazvučnih uređaja za učinkovitu i pouzdanu fragmentaciju alfa-sinukleina.

α-sinuklein u istraživanjima

Fibrile alfa-sinukleina proteinski su agregati snažno povezani s neurodegenerativnim poremećajima kao što su Parkinsonova bolest i određeni oblici demencije, uključujući demenciju s Lewyjevim tjelešcima. Istraživanja usmjerena na fibrile alfa-sinukleina nastoje razjasniti njihovu ulogu u napredovanju bolesti i razviti potencijalne terapijske intervencije. Razgradnjom fibrila alfa-sinukleina na manje fragmente istraživači mogu ispitati njihova specifična strukturna obilježja. Primjerice, fragmentacija fibrila alfa-sinukleina omogućuje istraživačima ispitivanje njihovih interakcija s drugim molekulama, kao što su proteini, lipidi ili male molekule. Dobivanjem manjih fragmenata mogu se učinkovitije ispitati vezna mjesta i afinitet prema tim interakcijskim partnerima. Manje fibrile i vrpce α-Syn također mogu pokazivati promijenjenu toksičnost i biokemijske učinke. Stoga je ključna pouzdana i učinkovita tehnika fragmentacije koja brzom i jednostavnom obradom uzoraka daje ponovljive rezultate.
Ultrazvučna fragmentacija Alpha-Syn: Sonikator VialTweeter etablirani je sustav za ultrazvučnu pripremu uzoraka koji istodobno sonicira do 10 bočica u potpuno jednakim uvjetima. Programabilne postavke omogućuju jednostavno i brzo ponavljanje istih eksperimenata, čime se postižu vrlo pouzdani i ponovljivi rezultati fragmentacije fibrila alfa-sinukleina.

Priprema uzoraka α-sinukleina sonikatorom

Jedan pristup proučavanju fibrila alfa-sinukleina uključuje njihovu ekstrakciju i fragmentaciju tehnikama kao što je sonikacija. Sonikacija je postupak u kojem se ultrazvučni valovi visokog intenziteta i niske frekvencije upotrebljavaju za narušavanje i razgradnju proteinskih agregata, što dovodi do oslobađanja manjih fibrila ili pojedinačnih proteinskih molekula. Sonikator VialTweeter uređaj je koji se u tu svrhu često upotrebljava u istraživanjima povezanima s α-sinukleinom.

Brojna istraživanja opisuju precizne protokole pripreme uzoraka sonikacijom fibrila alfa-sinukleina, u kojima se Hielscher VialTweeter upotrebljava za učinkovitu i pouzdanu fragmentaciju fibrila α-sinukleina. Ultrazvučnom fragmentacijom fibrila istraživači mogu analizirati dobivene produkte te ispitati njihovu strukturu, toksičnost i interakcije s drugim molekulama. Ta istraživanja pružaju važne uvide u mehanizme neurodegeneracije i mogu omogućiti prepoznavanje novih terapijskih ciljeva. Dobro uhodani protokoli sonikacije α-sinukleina sonikatorom VialTweeter omogućuju pouzdane i ponovljive rezultate.

Gornje slike: nefragmentirane fibrile alfa-sinukleina
Donje slike: fibrile alfa-sinukleina ultrazvučno fragmentirane sonikatorom VialTweeter
(istraživanje i slike: ©Dieriks et al., 2022)

Ultrazvučna fragmentacija fibrila α-sinukleina – protokoli

Budući da brojni istraživači upotrebljavaju sonikator VialTweeter kao preferiranu tehniku fragmentacije za dobivanje ujednačenih fragmenata fibrila α-sinukleina, uhodani protokoli lako su dostupni. U nastavku možete pronaći nekoliko primjera protokola fragmentacije.
 

 
Priprema agregacijskih jezgri ClearTau: Fibrile ClearTau razrijeđene su na 10 μM u dH2O i sonicirane izravno u epruveti pri amplitudi od 70 % tijekom 50 s, s ciklusom od 1 s uključeno i 1 s isključeno, sonikatorom UP200St s uređajem VialTweeter. Jezgre su karakterizirane elektronskom mikroskopijom.
Mjerenje fluorescencije ThS: Fibrili ClearTau razrijeđeni su do 2,5 μM u dH2O i sonicirani pri amplitudi od 70 % tijekom 50 s u ciklusima od 1 s uključeno i 1 s isključeno, unutar epruvete, uređajem UP200St s uređajem VialTweeter. Kao kontrola upotrijebljen je monomer Tau 4R2N pune duljine u koncentraciji od 2,5 μM. Reakcijskoj smjesi volumena 100 μl dodano je 100 μl ThS-a (10 μM), čime su dobivene konačne koncentracije proteina od 1,25 μM. Fluorescencija ThS-a u jednoj vremenskoj točki mjerena je na pločicama s 96 jažica i prozirnim dnom postavljenima u čitač mikropločica FLUOstar Omega, uz pobudu pri 445 nm, a emisija je zabilježena pri 485 nm.
(usp. Limorenko et al., 2023)
 
Ujednačena duljina α-sinukleina primjenom sonikacije: Heterogenost duljine fibrila i vrpci α-syn smanjena je sonikacijom tijekom 20 min na ledu u epruvetama Eppendorf od 2-ml u uređaju VialTweeter postavljenom na amplitudu od 75%, uz impulse od 0,5 s.
(usp. Bousset et al., 2013)
 
Provedena je kontrola kvalitete ljudskog rekombinantnog monomernog proteina a-Syn tipa WT ili S129A i fibrilarnih polimorfa koje stvara, kao i proteina a-Syn 1–110. Zatim su fibrilarni polimorfi fragmentirani sonikacijom tijekom 20 min u epruvetama Eppendorf od 2-mL u ultrazvučnom uređaju VialTweeter kako bi se dobile fibrilarne čestice prosječne veličine 42–52 nm prikladne za endocitozu.
(usp. Shrivastava et al., 2020)
 

Karakterizacija pet fibrilarnih polimorfa α-Syn. (A) Prikazane su transmisijske elektronske mikrografije negativno obojenih fibrilarnih polimorfa α-Syn označenih kao fibrils, ribbons, fibrils-91, fibrils-65 i fibrils-110 prije fragmentacije (gornji red) i nakon fragmentacije uređajem VialTweeter (donji red). (B) Prikazana je raspodjela duljina fragmentiranih fibrilarnih polimorfa. Naveden je broj (n) fibrilarnih nakupina na temelju kojih su izrađeni histogrami.
(istraživanje i slike: Shrivastava et al., 2020)

 
Fibrili α-Syn fragmentirani su sonikacijom tijekom 20 min u epruvetama Eppendorf od 2 ml u uređaju VialTweeter kako bi se dobile fibrilarne čestice prosječne veličine 42–52 nm, utvrđene TEM analizom.
(usp. Negrini et al., 2022)
 
Resuspendirani fibrils91 (u PBS-u) fragmentirani su prije dodavanja staničnim kulturama sonikacijom tijekom 20 min u epruvetama Eppendorf od 2 mL pomoću sonikatora Vial Tweeter, podijeljeni u alikvote, brzo zamrznuti u tekućem dušiku i pohranjeni do uporabe pri -80 ̊C.
(usp. Vajhøj et al., 2021)
 

VialTweeter i laboratorijski sonikatori za fragmentaciju α-Syn

Hielscher Ultrasonics širom je svijeta prepoznat kao vodeći proizvođač najsuvremenijih ultrazvučnih uređaja. Naši ultrazvučni uređaji, koji su stekli povjerenje i ustaljenu primjenu u vodećim istraživačkim laboratorijima diljem svijeta, pružaju nenadmašnu kvalitetu i učinkovitost za vaše ključne eksperimente.
Uz Hielscher VialTweeter i bilo koji drugi sonikator Hielscher iskusit ćete nenadmašnu udobnost pri uporabi jer su pomno projektirani za ponovljive rezultate, jednostavnu uporabu i nesmetan rad. Zahvaljujući funkcijama automatskog bilježenja podataka možete se usredotočiti na svoje istraživanje dok naši ultrazvučni uređaji pomno bilježe ključne podatke za ponovljivost i preciznost.
S pouzdanjem postižete dosljedne i ponovljive rezultate!
Naši ultrazvučni uređaji projektirani su i proizvedeni u Njemačkoj. Njemačka preciznost i najviša kvaliteta inženjerske izvedbe osiguravaju pouzdanu i točnu pripremu uzoraka, poput fragmentacije fibrila alfa-sinukleina, svaki put. Nema više brige zbog nedosljednih rezultata – naša ultrazvučna tehnologija osigurava da vaše istraživanje ostane na čelu znanstvenog napretka.
Ali to nije sve! Naša predanost izvrsnosti nadilazi naše proizvode. Ponosimo se iznimnom korisničkom podrškom i pružamo stručnu pomoć za sva vaša pitanja ili nedoumice. Naš predani tim tu je da vam pomogne u svakom koraku vašeg istraživačkog rada i osigura da u potpunosti iskoristite naše ultrazvučne uređaje.
Odaberite inovativnost, pouzdanost i iznimno korisničko iskustvo – odaberite naše laboratorijske sonikatore poput uređaja VialTweeter za fragmentaciju fibrila alfa-sinukleina. Iskoristite već uspostavljene protokole i pridružite se vodećim istraživačima koji se u svojim ključnim istraživanjima pouzdaju u našu tehnologiju. Unaprijedite svoje istraživanje i istražite nove granice u istraživanju demencije i neurodegenerativnih bolesti uz naše najsuvremenije ultrazvučne uređaje.

Projektiranje, proizvodnja i savjetovanje – kvaliteta proizvedena u Njemačkoj

Ultrazvučni uređaji Hielscher poznati su po najvišim standardima kvalitete i dizajna. Robusnost i jednostavno rukovanje omogućuju nesmetanu integraciju naših ultrazvučnih uređaja u industrijska postrojenja. Ultrazvučni uređaji Hielscher lako se nose s teškim uvjetima i zahtjevnim okruženjima.

Hielscher Ultrasonics tvrtka je s ISO certifikatom koja poseban naglasak stavlja na ultrazvučne uređaje visokih performansi s najsuvremenijom tehnologijom i jednostavnom uporabom. Naravno, sonikatori Hielscher sukladni su s CE zahtjevima te ispunjavaju zahtjeve UL, CSA i RoHs.
 
Tablica u nastavku daje pregled približnog kapaciteta obrade naših laboratorijskih ultrazvučnih uređaja: