Préparation ultrasonique du sérum riche en plaquettes
- Le plasma riche en plaquettes (PRP) est un plasma sanguin enrichi en plaquettes, utilisé pour des traitements médicaux et esthétiques.
- La lyse et le conditionnement par ultrasons sont des méthodes très efficaces pour préparer le plasma riche en plaquettes.
- Hielscher Ultrasonics propose différents systèmes à ultrasons adaptés aux exigences du traitement du sang (par exemple pour la préparation intérieure et extérieure d'une salle blanche).
Sérum riche en plaquettes
La sonication est une méthode fiable et facile pour lyser les plaquettes dans le sérum sanguin autologue afin de libérer les facteurs de croissance. Les fractions dérivées des plaquettes – également connu sous le nom de sérum conditionné autologue (SCA) – sont utilisés pour la réparation des tissus ou les traitements esthétiques. Pour obtenir des résultats optimaux, le PRP est enrichi avant l'injection.
Pour préparer le plasma enrichi en facteurs de croissance cellulaire, la sonication est une méthode très efficace pour lyser les membranes cellulaires et libérer la quasi-totalité des facteurs de croissance cellulaire des plaquettes. La lyse et le conditionnement par ultrasons permettent même d'utiliser du sang anticoagulé.
Le conditionnement du PRP par sonication est un moyen pratique et rentable d'obtenir des facteurs de croissance concentrés.
Lyse ultrasonique du plasma riche en plaquettes (PRP)
Effets de lyse ultrasonique
Le traitement ultrasonique du sérum sanguin entraîne une lyse homogène des plaquettes afin de libérer les facteurs de croissance piégés (facteur de croissance AB (PDGF-AB), facteur de croissance AA (PDGF-AA), facteur de croissance BB (PDGF-BB), facteur de croissance de l'endothélium vasculaire (VEGF), facteur de croissance transformant β (TGF-β), facteur de croissance épidermique (EGF), insuline, etc, facteur de croissance endothélial vasculaire (VEGF), facteur de croissance transformant β (TGF-β), facteur de croissance épidermique (EGF), facteur de croissance analogue à l'insuline (IGF), facteur de croissance des cellules épithéliales ECGF et facteur de croissance fibroblastique (FGF)). Les plaquettes et leurs granules alpha sont désagrégés par sonication, en utilisant le phénomène de cavitation acoustique. L'utilisation de la cavitation ultrasonique pour la lyse des plaquettes diminue l'impact négatif possible de la méthode de congélation-décongélation répétée sur l'activité du facteur de croissance.
Protocole de préparation du PRP par ultrasons
Environ 16 ml d'échantillon de sang autologue fraîchement prélevé sont délicatement retournés 8 à 10 fois dans un tube afin que le sang et les anticoagulants soient bien mélangés. L'échantillon est ensuite centrifugé à 1800 g pendant 20 minutes à température ambiante. Après la centrifugation, les plaquettes et les cellules mononucléaires forment une couche blanchâtre au fond de la couche de plasma, appelée plasma riche en plaquettes (PRP). La couche supérieure est appelée plasma pauvre en plaquettes (PPP). Les cellules mononucléaires peuvent être éliminées ou rester dans l'échantillon. Souvent, les cellules mononucléaires restent dans l'échantillon de PRP afin d'éviter des étapes supplémentaires, qui comportent un risque de contamination.
Remarque : le traitement ultrasonique du PRP autologue doit être effectué dans des conditions stériles.
Le PRP et le PPP sont séparés et collectés. Au PPP, on ajoute 1,5 ml de solution de chlorure de calcium à 10 % et au PRP, 0,5 ml d'éthanol à 5 %. Les deux suspensions sont agitées doucement et laissées au repos pendant 5 minutes à température ambiante. Enfin, on ajoute 1 ml de PPP à la suspension de PRP et on laisse reposer jusqu'à ce qu'un caillot de fibrine se forme.
Traitement par ultrasons : Comme le gel plaquettaire formé agit comme un réservoir pour les facteurs de croissance libérés, le gel de fibrine doit être rompu afin de libérer les facteurs de croissance disponibles. Les paramètres pour la lyse ultrasonique et la libération des facteurs de croissance sont les suivants : Sonication avec une puissance de UP200Ht ou UP200St (200W, 26kHz) avec la sonotrode S26d2 l'échantillon dans le tube. Pour éviter la surchauffe de l'échantillon de sang, la sonication peut être effectuée par cycles pulsés (par exemple 10 sec. on, 30 sec. off). L'échantillon doit être placé sur de la glace pour être refroidi de manière à ce que la température soit maintenue de manière optimale entre 2 – 5°C. Après sonication, l'échantillon est centrifugé à 16000 g pendant 5 minutes à température ambiante. Le surnageant est recueilli et peut être conservé à -70°C.
La concentration de plaquettes dans la fraction PRP a été enrichie de 1,7 – 4,5 fois dans la méthode sonique par rapport à la numération plaquettaire moyenne de la littérature dans le sang total.
La PRP a été associée à la thérapie par cellules souches dérivées de l'adipeuse (cellules souches autologues libérées par ultrasons à partir du tissu adipeux(un mélange de PRP et une injection dans les tissus du patient pour les réparer).
Équipement ultrasonique
Hielscher Ultrasonics est expert en technologie ultrasonique sophistiquée et fiable. Nos appareils à ultrasons sont utilisés dans le monde entier pour la lyse, l'extraction et la préparation d'échantillons. – directes et indirectes. Autoclavable ainsi que jetable les accessoires garantissent une sans contamination le traitement d'échantillons de sang autologue. La plupart de nos systèmes peuvent être utilisés pour la lyse ultrasonique de cellules souches et PRP, ce qui rend nos appareils à ultrasons encore plus efficaces d'un point de vue économique.
Le tableau ci-dessous répertorie nos appareils à ultrasons, qui conviennent à la préparation du plasma riche en plaquettes, et leur volume d'échantillon recommandé, respectivement. Des ultrasons de plus grande taille et des systèmes personnalisés sont également disponibles.
| Dispositif | Puissance [W] | Fréq. [kHz] | Type | Volume [mL] | ||
|---|---|---|---|---|---|---|
| VialTweeter | 200 | 26 | autonome | 0.5 | – | 1.5 |
| UP50H | 50 | 30 | à main ou sur pied | 0.01 | – | 250 |
| UP100H | 100 | 30 | à main ou sur pied | 0.01 | – | 500 |
| UP200Ht | 200 | 26 | à main ou sur pied | 0.1 | – | 1000 |
| UP200St | 200 | 26 | Monté sur pied | 0.1 | – | 1000 |
| UP400St | 400 | 24 | Monté sur pied | 5.0 | – | 2000 |
| UP200St-SonoStep | 200 | 26 | autonome | 30 | – | 500 |
| GDmini2 | 200 | 26 | cellule d'écoulement sans contamination | |||
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GDmini2 avec UP200St-TD transducteur (200 watts)
Littérature/références
- Fortunato, T. M. ; Beltrami, Ch. ; Emanueli, C. ; De Bank, P.A: ; Pula, G. (2016) : Le gel de lysat plaquettaire et les progéniteurs endothéliaux stimulent la formation de réseaux microvasculaires in vitro : implications pour l'ingénierie tissulaire. Sci. Rep. 6, 2016.
- Hamid, M.S.A. ; Yusof, Ashril ; Ali, Mohamed Razif Mohamed (2014) : Platelet-Rich Plasma (PRP) for Acute Muscle Injury : A Systematic Review. PLOS ONE Volume 9, Issue 2, 2014.
Qu'il faut savoir
Plasma riche en plaquettes
Le plasma riche en plaquettes contient le facteur de croissance AB (PDGF-AB), le facteur de croissance dérivé des plaquettes AA (PDGF-AA), le facteur de croissance dérivé des plaquettes BB (PDGF-BB), le facteur de croissance endothéliale vasculaire (VEGF), le facteur de croissance transformant β (TGF-β), le facteur de croissance épidermique (EGF), le facteur de croissance analogue à l'insuline (IGF), le facteur de croissance des cellules épithéliales ECGF et le facteur de croissance fibroblastique (FGF), qui sont d'importants stimulants de la croissance et du renouvellement cellulaires.
Sérum conditionné autologue (SCA)
Le plasma conditionné autologue (ACP) est un plasma riche en plaquettes qui est extrait du sang autologue et qui est utilisé pour soutenir la régénération dans une variété d'affections orthopédiques et d'interventions chirurgicales. Le sérum conditionné est préparé en séparant le plasma des autres composants sanguins (tels que les érythrocytes) et en le concentrant. L'ACP est un plasma riche en plaquettes (PRP). Le PRP est un terme général désignant un type de plasma qui contient une concentration significativement plus élevée de thrombocytes que le sang total. Il est extrait du sang total. Les principaux composants du PRP sont les thrombocytes (plaquettes) et plusieurs facteurs de croissance qui jouent un rôle important dans le processus de cicatrisation. Contrairement à d'autres préparations de plasma riche en plaquettes, l'ACP se distingue par une faible concentration de globules blancs, tels que les granulocytes neutrophiles, qui peuvent nuire au processus de cicatrisation lorsqu'ils sont présents en concentrations élevées.
les injections de plasma riche en plaquettes
Le plasma riche en plaquettes est utilisé comme injection dans la médecine régénérative ainsi que dans les procédures cosmétiques. L'application du PRP promet une accélération significative de la cicatrisation et de la récupération musculaire. En outre, il est utilisé avec succès pour traiter l'inflammation, l'arthrite, la douleur, les plaies, les plaies ouvertes à cicatrisation lente et les brûlures cutanées graves. Le PRP contient un niveau élevé de facteurs de croissance, qui stimulent et protègent les cellules de guérison afin que le tissu endommagé soit réparé.
Pour les traitements cosmétiques, le PRP s'est avéré efficace pour stimuler la croissance des cheveux et le renouvellement de la peau (également connu sous le nom de traitement vampire).
Facteurs de croissance dérivés des plaquettes (PDGF)
Le terme facteur de croissance dérivé des plaquettes (PDGF) désigne les facteurs PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C et PDGF-D. Il s'agit d'un réseau de signalisation composé de quatre ligands (PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C et PDGF-D) et de deux récepteurs, PDGFR-alpha et PDGFR-beta.
Les facteurs de croissance, ou protéines, régulent la croissance et la division des cellules. En tant que principal mitogène présent dans le sérum des mammifères, qui est libéré par les plaquettes lors de la formation du caillot, il joue un rôle important dans la formation des vaisseaux sanguins (angiogenèse), c'est-à-dire la croissance des vaisseaux sanguins à partir d'un tissu vasculaire déjà existant.