آماده سازی نمونه با ویال توییتر اولتراسونیک

آماده سازی نمونه قبل از تجزیه و تحلیل می تواند به فرآیندهای مختلف پیش تحلیلی مانند همگن سازی بافت، لیز، استخراج پروتئین ها، DNA، RNA، اندامک ها و سایر مواد داخل سلولی، انحلال و گاز زدایی نیاز داشته باشد. VialTweeter یک دستگاه اولتراسونیک منحصر به فرد است که چندین لوله نمونه را به طور همزمان تحت شرایط دقیقا یکسان آماده می کند. با توجه به فراصوت غیر مستقیم لوله های test بسته، آلودگی متقابل و از دست دادن نمونه جلوگیری می شود.

آماده سازی نمونه اولتراسونیک

امواج فراصوت یک روش رایج از درمان نمونه به منظور آماده کردن نمونه برای تجزیه و تحلیل مانند واکنش زنجیره ای پلیمر (PCR)، وسترن بلاتس، سنجش، توالی مولکولی، کروماتوگرافی و غیره است. اولتراسونیک یک تکنیک است که به طور گسترده ای در آزمایشگاه ها برای درمان نمونه ها قبل از تجزیه و تحلیل استفاده می شود. مزیت عمده فراصوت این است که اصل کار سونوگرافی است که بر اساس نیروهای صرفا مکانیکی. لیز اولتراسونیک و اختلال سلول توسط نیروهای برشی سونومکانیکی به دست آمده است، که به سونوگرافی این مزیت را می دهد که حلال های مورد استفاده برای استخراج پروتئین نیز می تواند در طول لیز استفاده می شود. مختل کننده های سلول اولتراسونیک مانند VialTweeter دیواره های سلولی / غشاها را می شکنند و انتقال جرم بین داخل سلول و حلال را تقویت می کنند. در نتیجه، آنالیت (به عنوان مثال DNA، RNA، پروتئین ها، اندامک ها و غیره) به طور موثر از ماتریس سلول به حلال منتقل می شود. این بدان معنی است که مراحل خاموش کردن و استخراج همپوشانی با فرایند اختلال سلول مافوق صوت، که باعث می شود لیز مافوق صوت بسیار موثر. علاوه بر این، آماده سازی نمونه اولتراسونیک مواد شوینده و سایر معرف های لیز نیاز ندارد، که ممکن است ساختار لیزات را تغییر دهد و تخریب کند و برای مشکلات بعدی با تصفیه شناخته شده است. یکی دیگر از روش های لیز ، اختلال آنزیمی به زمان های انکوباسیون طولانی نیاز دارد و نتایج اغلب غیر قابل تکرار را ارائه می دهد. آماده سازی نمونه اولتراسونیک غلبه بر مشکلات رایج در آماده سازی نمونه مانند همگن سازی بافت، اختلال سلولی، لیز، استخراج پروتئین و حلالیت لیزات. از آنجا که شدت درمان اولتراسونیک را می توان دقیقا کنترل و تنظیم به نمونه بیولوژیکی، تخریب و از دست دادن نمونه جلوگیری می شود. دمای نمونه به طور خودکار نظارت و کنترل شده، حالت پالس و مدت زمان فراصوت نتایج مطلوب را تضمین می کند.
 

VialTweeter به ویژه برای کارهای آزمایشگاهی که نیاز به آماده سازی همزمان چندین نمونه در شرایط یکسان دارد، مناسب است. VialTweeter یک سونوترود بلوک اولتراسونیک است که می تواند تا 10 ویال (به عنوان مثال Eppendorf، سانتریگوج، لوله های NUNC، cryo-vials) را نگه دارد و آنها را به شدت تحت شرایط دقیق کنترل شده فراصوت می کند. از آنجا که انرژی اولتراسونیک از طریق دیواره ویال ها به محیط نمونه متصل می شود ، ویال ها در طول درمان بسته نگه می دارند. بدین ترتیب، از دست دادن نمونه و آلودگی متقابل به طور کامل جلوگیری می شود.

ویال ها و لوله های متناسب با VialTweeter

VialTweeter برای نگه داشتن 10 لوله مخروطی یا کف گرد مانند Eppendorf ، سانتریفیوژ ، ویال های کرایو و انواع مختلف ویال NUNC مناسب است ، اما در صورت درخواست می توان سوراخ ها را به سایر اندازه های ویال و لوله سفارشی کرد. لطفا به ما اطلاع دهید که می خواهید از کدام نوع لوله test استفاده کنید تا بتوانیم VialTweeter شما را بر اساس آن تغییر دهیم. برای لوله های test بزرگتر مانند لوله های فالکون و سایر ظروف test، لیوان ها و عروق، VialPress یک راه حل مناسب است.

VialTweeter با VialPress

در حالی که خود VialTweeter با 10 سوراخ لوله در حال حاضر یک دستگاه اولتراسونیک منحصر به فرد و بسیار کاربردی است، افزونه VialPress VialTweeter را برای کار بسیار متنوع تر و انعطاف پذیرتر می کند. VialPress لوازم جانبی VialTweeter است که در یک میله گیره دار تشکیل شده است که به شما امکان می دهد لوله های نمونه بزرگتر مانند لوله های فالکون یا سایر لیوان های test کوچک تا متوسط را به جلوی VialTweeter ثابت کنید. تصویر سمت چپ VialTweeter را نشان می دهد که 10 ویال Eppendorf را در بلوک نگه می دارد، در حالی که VialPress یک لوله test بزرگتر را برای فراصوت ثابت می کند. VialPress قادر به نگه داشتن تا 5 لوله test بزرگتر برای فراصوت شدید است.

پروتکل های آماده سازی نمونه VialTweeter

VialTweeter به طور گسترده ای برای فراصوت نمونه های بیولوژیکی استفاده می شود. قبل از تجزیه و تحلیل، نمونه ها باید برای تجزیه و تحلیل ها و سنجش های بیوشیمیایی یا بیوفیزیکی آماده شوند، به عنوان مثال با لیز ، همگن سازی بافت ، استخراج پروتئین ، برش DNA / RNA ، گاز زدایی و غیره. VialTweeter این فرآیندهای اولتراسونیک را به طور قابل اعتماد انجام می دهد و نتایج قابل تکرار را ارائه می دهد. یکی از کاربردهای رایج VialTweeter لیز / اختلال سلولی بافت های پستانداران (انسانی و حیوانی) و همچنین سلول های باکتریایی و ذرات ویروسی است. نمونه های بیولوژیکی تحت درمان با VialTweeter با موفقیت شامل سلول های اپیتلیال ریه انسان، سلول های بنیادی خونساز، سلول های لوسمی میلوئید، اشریشیا کلی، باسیلوس سوبتیلیس، باسیلوس آنتراسیس، Francisella tularensis، یرسینیا پستیس، استرپتوکوک پیوژنز، Caulobacter crescentus، مایکوپلاسما پنومونیه، مایکوباکتریوم / مایکوباکتریوم توبرکلوزیس کمپلکس (MTBC) و بسیاری دیگر از سلول های باکتریایی، گیاهی و میکروبی.
در زیر، می توانید چند پروتکل انتخاب شده با VialTweeter را بیابید.

لیز E.coli با VialTweeter برای تعیین گلوتاتیون در داخل بدن

باکتری اشریشیا کلی سویه MG1655 در محیط کشت مینیمال MOPS در حجم کل 200 میلی لیتر رشد کرد تا اینکه به A600 برابر با 5/0 رسید. کشت برای درمان استرس به کشت های 50 میلی لیتری تقسیم شد. پس از 15 دقیقه انکوباسیون با 0.79 میلی مولار آلیسین, 1 میلی مولار دیامید, یا دی متیل سولفوکساید (شاهد), سلول ها در 4,000 گرم در دمای 4 درجه سانتی گراد به مدت 10 دقیقه برداشت شدند. سلول ها قبل از سوسپانسیون، پلت ها در 700 میکرولیتر بافر KPE دو بار با بافر KPE شستشو داده شدند. برای پروتئین زدایی، 300μl از 10٪ (وزنی/حجمی) اسید سولفوسالیسیلیک قبل از اختلال سلول ها توسط امواج فراصوت اضافه شد (3 x 1 دقیقه; مافوق صوت VialTweeter). مایع رویی پس از سانتریفیوژ (30 دقیقه، 13000 گرم، 4 درجه سانتی گراد) جمع آوری شد. غلظت اسید سولفوسالیسلیک با افزودن 3 حجم بافر KPE به 1 درصد کاهش یافت. اندازه گیری گلوتاتیون کل و GSSG همانطور که در بالا توضیح داده شد انجام شد. غلظت گلوتاتیون سلولی بر اساس حجم سلول های E. coli 15-10×7/6 لیتر و تراکم سلولی A600 0.5 (معادل کشت 1×108 سلول در میلی لیتر) محاسبه شد. غلظت GSH با تفریق 2[GSSG] از گلوتاتیون کل محاسبه شد. (مولر و همکاران 2016)

تکه تکه شدن فیبر آلفا سینوکلئین با VialTweeter

فراصوت VialTweeter به طور گسترده ای برای تکه تکه شدن قابل اعتماد و کارآمد فیبریل ها و روبان های آلفا سینوکلئین استفاده می شود. برای یافتن توضیحات دقیق، پروتکل ها و مراجع برای تکه تکه شدن آلفا-سینوکلئین با VialTweeter اینجا را کلیک کنید!

لیز سلولی با VialTweeter قبل از طیف سنجی جذب اتمی کوره گرافیت

باسیلوس سوبتیلیس 168 (trpC2) در معرض قرار گرفتند 15 دقیقه استرس آنتی بیوتیکی, پس از آن سلول ها در برداشت 3,320 X گرم, پنج بار با شسته 100 میلی مولار تریس / 1 میلی مولار EDTA, pH 7.5, معلق در 10 میلی مولار Tris, pH 7.5 و مختل شده توسط سونوگرافی در یک ابزار Hielscher VialTweeter. (ونزل و همکاران 2014)

آماده سازی نمونه VialTweeter قبل از طیف سنجی جرمی

گلوله های سلولی لیوفیلیزه سلول های بنیادی / پیش ساز خونساز CD34 انسانی در 10μ􏰇l (200μl برای آماده سازی HEK293 فله برای سری رقت پپتیدی) از اوره 8 M در 100 میلی مولار کربنات هیدروژن آمونیوم و لیز با کمک فراصوت با Hielscher VialTweeter در دامنه 60٪، یک چرخه 60٪ و مدت زمان 20s برای سه بار با خنک کننده متوسط بر روی یخ لیز شد. (آمون و همکاران 2019)

پروتکل های آماده سازی نمونه با استفاده از VialPress

کاهو تازه (Lactuca sativa) در بافر HEPES 5/0 مولار (pH 8 و KOH تعدیل شده) به نسبت 1 گرم بوته (وزن تر) به محلول بافر 200، 100، 50 و 20 میلی لیتر همگن شد. نسبت توده بوته به حجم محلول بافر برای حفظ حجم همگن کل بین 5/3 تا 12 میلی لیتر متفاوت بود. نسبت توده گیاه به حجم محلول بافر برای حفظ حجم همگن کل بین 5/3 تا 12 میلی لیتر متفاوت بود و امکان همگن سازی با پروب فراهم شد. همگن ها سپس تحت سونوگرافی غیر مستقیم با استفاده از UP200St با VialTweeter مجهز به 200xt VialPress (Hielscher Ultrasonics GmbH، آلمان) به مدت 3 دقیقه (80٪ پالس و 100٪ قدرت). استفاده از این دستگاه از آلودگی جلوگیری می کند. (لاتون و همکاران 2019)

کنترل دما قابل اعتماد در هنگام فراصوت با VialTweeter

دما یک عامل تأثیرگذار بر فرآیند است که به ویژه برای درمان نمونه های بیولوژیکی مهم است. به عنوان تمام تکنیک های آماده سازی نمونه مکانیکی، فراصوت ایجاد گرما. با این حال، دمای نمونه ها را می توان هنگام استفاده از VialTweeter به خوبی کنترل کرد. ما گزینه های مختلفی را برای نظارت و کنترل دمای نمونه های شما در حین آماده سازی آنها با VialTweeter و VialPress برای تجزیه و تحلیل به شما ارائه می دهیم.

1. نظارت بر دمای نمونه: پردازنده اولتراسونیک UP200St که VialTweeter را هدایت می کند، مجهز به نرم افزار هوشمند و سنسور دما قابل اتصال است. سنسور دما را به UP200St وصل کنید و نوک سنسور دما را در یکی از لوله های نمونه قرار دهید. از طریق صفحه نمایش لمسی رنگی دیجیتال، می توانید در منوی UP200St یک محدوده دما خاص برای فراصوت نمونه خود را تنظیم کنید. اولتراسونیک به طور خودکار متوقف می شود زمانی که حداکثر دما رسیده است و مکث می کند تا زمانی که دمای نمونه به مقدار پایین تر از دمای تنظیم شده ∆. سپس فراصوت دوباره به طور خودکار شروع می شود. این ویژگی هوشمند از تخریب ناشی از گرما جلوگیری می کند.
2. بلوک VialTweeter را می توان از قبل خنک کرد. بلوک VialTweeter (فقط سونوترود بدون مبدل!) را در یخچال یا فریزر قرار دهید تا بلوک تیتانیوم از قبل خنک شود و به تعویق انداختن افزایش دما در نمونه کمک می کند. در صورت امکان، خود نمونه را می توان از قبل خنک کرد.
3. استفاده از یخ خشک برای خنک شدن در طول فراصوت. از یک سینی کم عمق پر از یخ خشک استفاده کنید و VialTweeter را روی یخ خشک قرار دهید تا گرما به سرعت از بین برود.

مشتریان در سراسر جهان از VialTweeter و VialPress برای کارهای آماده سازی نمونه روزانه خود در آزمایشگاه های بیولوژیکی، بیوشیمیایی، پزشکی و بالینی استفاده می کنند. نرم افزار هوشمند و کنترل دما پردازنده UP200St، دما به طور قابل اعتماد کنترل می شود و از تخریب نمونه ناشی از گرما جلوگیری می شود. آماده سازی نمونه اولتراسونیک با VialTweeter و VialPress نتایج بسیار قابل اعتماد و قابل تکرار را ارائه می دهد!

جزئیات فنی VialTweeter

VialTweeter یک سونوترود بلوک ساخته شده از تیتانیوم است که می تواند تا 10 ویال را در سوراخ های داخل بلوک نگه دارد. علاوه بر این، حداکثر 5 لوله test بزرگتر را می توان با استفاده از VialPress به جلوی VialTweeter متصل کرد. VialTweeter به گونه ای طراحی شده است که انرژی ultrasonication به طور یکنواخت به هر ویال درج شده توزیع شده برای اطمینان از نتایج فراصوت قابل اعتماد و یکنواخت. یک محور کوچک تنظیم سونوترود VialTweeter به زمین ناهموار و تراز لوله های test به صورت عمودی.

مزایای VialTweeter در یک نگاه

• فراصوت شدید تا 10 ویال به طور همزمان
• فراصوت غیر مستقیم در شدت اولتراسونیک بالا از طریق دیواره رگ به نمونه
• فراصوت غیر مستقیم از آلودگی متقابل و از دست دادن نمونه جلوگیری می کند
• نتایج تکرارپذیر با توجه به دامنه فراصوت قابل تنظیم و کنترل
• VialPress شما را قادر می سازد تا لوله های بزرگتر را فراصوت کنید
• دامنه قابل تنظیم از 20 تا 100٪
• حالت پالس قابل تنظیم از 0 تا 100٪
• اتوکلاو

VialTweeter توسط 200 خیابان، یک پردازنده اولتراسونیک قدرتمند 200 وات. UP200St مجهز به یک نرم افزار هوشمند است که امکان کنترل دقیق بر تمام پارامترهای مهم فرآیند اولتراسونیک مانند دامنه، زمان فراصوت، ضربان و دما را فراهم می کند. این امر VialTweeter را به ابزاری قابل اعتماد برای نتایج موفقیت آمیز فرآیند تکرارپذیر در آزمایشگاه های بیولوژیکی و بیوشیمیایی تبدیل می کند.
دامنه را می توان بین 20 تا 100٪ تنظیم کرد و در نتیجه اجازه می دهد تا شدت اولتراسونیک را با نمونه شما تطبیق دهید. به عنوان مثال، برش و تکه تکه شدن DNA و RNA نیاز به دامنه خفیف تری دارد تا از تولید قطعات DNA بیش از حد کوچک جلوگیری شود، همگن سازی بافت مغز موش نیاز به فراصوت با شدت بالا دارد. دامنه ایده آل ، شدت فراصوت و مدت زمان را از طریق منوی هوشمند و بصری در پردازنده UP200St انتخاب کنید. منو و تنظیمات را می توان به راحتی از طریق صفحه نمایش لمسی رنگی در دسترس قرار داد و کار کرد. در تنظیمات شما می توانید پارامترهای فراصوت مانند دامنه ، حالت ضربان / چرخه ، مدت زمان فراصوت ، ورودی انرژی کل و محدودیت دما از پیش تنظیم کنید. در تحقیق و تولید، تکرارپذیری آزمایش ها و نتایج test بسیار مهم است. این بدان معناست که ضبط دقیق شرایط فرآیند و پروتکل های فراصوت کاملا مهم است. پروتکل داده های خودکار می نویسد تمام داده های فراصوت را به یک فایل CSV بر روی یک کارت SD یکپارچه به طوری که شما به راحتی می توانید بررسی و مقایسه اجرای فراصوت های مختلف. تمام داده های فرآیند اولتراسونیک را می توان به راحتی به عنوان فایل CSV به اشتراک گذاشت.
Hielscher مافوق صوت تلاش می کند تا شما را با فن آوری پیشرفته برای تسهیل و بهبود کار تحقیقاتی خود را ارائه!