لیز مافوق صوت از Drosophila melanogaster نمونه

دروسوفیلا ملانوگاستر به طور گسترده ای در آزمایشگاه ها به عنوان ارگانیسم مدل مورد استفاده قرار می گیرد. بنابراین مراحل آماده سازی قبل از تجزیه و تحلیل مانند لیز، اختلال در سلول، استخراج پروتئین و SHEARING DNA نمونه های Drosophila melanogaster باید به طور مکرر انجام شود. قطعات مافوق صوت قابل اعتماد و کارآمد هستند و می تواند مورد استفاده قرار گیرد برای انجام وظایف مختلف مانند لیز، استخراج پروتئین و یا تکه تکه شدن DNA در سهولت تنها با تنظیم پارامترهای فرایند مافوق صوت. هموژنایزرهای مافوق صوت در نتیجه ابزارهای انعطاف پذیر با طیف گسترده ای از برنامه های کاربردی هستند.

لیز مافوق صوت و استخراج پروتئین

Drosophila melanogaster is widely used as model organism in biological labs. Find here protocols for lysis, protein extracion and DNA shearing of D. melanogaster samples.لیز، محلول سازی سلول، همگن سازی بافت و استخراج پروتئین از وظایف معمولی برای تکه تکه کننده های مافوق صوت در آزمایشگاه های بیولوژیکی است. تکه تکه کننده های مافوق صوت و مختل کننده های سلول به خوبی مناسب برای همگن کردن بافت های حیوانی، حشرات (مانند، Drosophila melanogaster، C. elegans) و یا نمونه های گیاهی است. کاربردهای بعدی امواج فراصوت لیز تعلیق سلول و گلوله و همچنین استخراج پروتئین های داخل سلولی است.
لیز مافوق صوت و استخراج پروتئین فرایندهای بسیار قابل اعتماد و قابل تکثیر، که می تواند بر اساس پروتکل های تاسیس انجام شده است. از آنجا که شدت فرایند مافوق صوت را می توان دقیقا از طریق پارامترهای فراصوت مانند دامنه تنظیم, چرخه / حالت پالس, دما و حجم نمونه, یک بار پروتکل های اثبات شده را می توان با نتیجه مشابه بارها و بارها تکرار.

مزایای استفاده از آماده سازی نمونه مافوق صوت

  • بسیار کارآمد
  • قابل تنظیم به مواد نمونه خاص
  • مناسب برای هر حجم
  • درمان غیر حرارتی
  • نتایج تجدید پذیر
  • ساده و بی خطر

DNA مافوق صوت و تکه تکه شدن RNA

پس از لیز سلولی و استخراج پروتئین، یک گام مورد نیاز رایج در آماده سازی نمونه، شکننده و تکه تکه شدن DNA، RNA، و کروماتین، به عنوان نمونه قبل از ایمن سازی کروماتین (ChIP) است. تکه تکه شدن DNA و RNA را می توان با شکستن پیوندهای کووالی که DNA را توسط نیروهای فیزیکی در کنار هم نگه می دارند، به طور قابل اعتمادی به دست آورد. با استفاده از شکننده فیزیکی مانند فراصوت، در ابتدا رشته های DNA شکسته می شوند، سپس DNA به قطعات کوچکتر تکه تکه می شود.
تکه تکه شدن DNA مافوق صوت قابل اعتماد و کارآمد در شکننده DNA به طول هدفمند، به عنوان نمونه 500bp (جفت پایه) است. مزایای عمده ای از تکه تکه شدن DNA مافوق صوت شامل کنترل دقیق پارامترهای فرایند مافوق صوت و شدت. پارامترهای فرایند مافوق صوت را می توان با تنظیم شدت فراصوت تنظیم, چرخه و زمان دقیقا. این امر باعث می شود که اندازه های DNA مورد نظر ایجاد شود و طول DNA هدفمند می تواند به طور قابل اعتمادی تولید شود و همچنین تکثیر شود. SHEARING DNA مافوق صوت نیز ایده آل برای ایجاد قطعات DNA با وزن مولکولی بالا است.

Ultrasonicator UP200Ht with microtip S26d2 for ultrasonic lysis of Drosophila samples

اولتراسونیکاتور UP200Ht با میکروتیپ 2 میلی متری S26d2 برای فراصوت نمونه های دروسوفیلا

درخواست اطلاعات




توجه داشته باشید ما سیاست حفظ حریم خصوصی.


پروتکل برای لیز مافوق صوت از Drosophila melanogaster

در زیر شما می توانید پروتکل های مختلف برای لیز مافوق صوت کمک پیدا کنید, استخراج پروتئین, و DNA یا تکه تکه شدن کروماتین از نمونه های Drosophila.

لیز مافوق صوت برای متقابل پیوند ایمنی (CLIP) Assay

CLIP assay همان طور که قبلاً با برخی تغییرات گزارش شده بود انجام شد. حدود 20 میلی گرم تخمدان از ماده های 0 تا 1 روزه از نوع وحشی به هم پیوسته UV (3 × 2000 میکروجیل بر سانتی متر مربع) بودند که بر روی یخ در بافر 1 میلی L RCB همگن شدند (50 میلی متر HEPES pH 7.4، 200 میلی متر NaCl, 2.5 میلی متر MgCl2, 0.1% تریتون X-100, 250 میلی متر ساکارز, 1 میلی متر DTT, 1× EDTA بدون مهار کننده پروتئاز کامل, 1 میلی متر PMSF) مکمل با 300 U RNAseOUT و قرار داده شده بر روی یخ به مدت 30 دقیقه. هموژنات بر روی یخ فراصوت شد, در قدرت 80%, پنج بار در 20 پشت سر هم با استراحت 60 در بین با استفاده از پردازنده مافوق صوت Hielscher UP100H (100 W, 30 kHz) و سانتریفیوژ (16000 × گرم به مدت 5 دقیقه در 4 درجه سانتی گراد). عصاره محلول به مدت 20 دقیقه در 4 درجه سانتی گراد با 20 میکرولیتر دی دانه پروتئین-G از پیش بسته شد. پس از حذف نمونه های ايمونوبلاتينگ و کميت ورودی RNA (1 درصد)، HP1 با آنتی بادی ضد HP1 9A9 از عصاره 450 ميکرولیتر از پيش آماده شده توسط انکوباسیون به مدت 4 ساعت با دينابيدهای 50 ميکرولیتر پروتئين-G تثبيت شد. ايمونوپرسپيتات ها 4 بار با RCB شسته شدند. برای فرار از RNAهای ایمونوپرسپیت شده، مهره های گلوله ای در 100 میکرولیتر آب تحت درمان UltraPure DEPC به مدت 5 دقیقه جوشاندند. 900 میکرولیتر قیازول ریجنت به سوپرناتانت بازیابی شده برای آماده سازی RNA اضافه شد. RNA تصفیه شده به عنوان یک الگو برای سنتز cDNA با استفاده از oligo dT، هگزامرها تصادفی و SuperScript معکوس رونوشت III با توجه به پروتکل تولید کننده استفاده شد.
(Cassale et al. 2019)

لیز مافوق صوت برای سنجش ایمنی کروماتین

با توجه به روش توصیف شده توسط منت با تغییرات جزئی، ایمن سازی کروماتین انجام شد. حدود 20 میلی گرم تخمدان از ماده های وحشی از نوع 0 تا 1 روزه در 1 میلی ليتر بافر NEB همگن شدند (10 میلی متر HEPES-Na در pH 8.0، 10 میلی متر NaCl، 0.1 میلی متر EGTA-Na در pH 8، 0.5 میلی متر EDTA-Na در pH 8، 1 میلی متر DTT، 0.5٪ NP-40، 0.5 میلی متر اسپرمیدین، 0.15 میلی متر اسپرمین، 1× EDTA- مهارکننده پروتاز کامل رایگان) با هموژنایزر / غوطه ور پراکنده 1 دقیقه (در 3000 دور در دقیقه). همگن به یک دوش شیشه ای از پیش سرد منتقل شد و ۱۵ ضربه کامل با یکestle تنگ اعمال شد. سپس هسته های آزاد در ۶۰xg به مدت ۱۰ دقیقه در ۴ درجه سانتی گراد سانتریفیوژ شدند. گلوله های حاوی هسته در 1 میلی تال NEB احیا و در سال 20000 × گرم به مدت 20 دقیقه بر روی گرادیان ساکارز (65/0 میلی ال ساکارز 6/1 میلی متر در NEB، 35/0 میلی تال ساکارز 8/0 میلی متر در NEB) سانتی گرادیان شدند. گلوله در 1 میلی ال NEB و فرمالدهید به غلظت نهایی 1 درصد احیا شد. هسته ها به مدت 10 دقیقه در دمای اتاق به هم مرتبط شدند و با اضافه کردن 1/10 جلد گلیسین 375/1 متر کوئنچ شدند. هسته ها با استفاده از سنتریفوژ در 6000 گرم × 5 دقیقه جمع آوری شدند. هسته ها دو بار در 1 میلیلیتر NEB شسته شدند و در 1 میلی لیز بافر (15 میلی متر HEPES-Na در pH 7.6، 140 میلی متر NaCl، 0.5 میلی متر EGTA، 1 میلی متر EDTA در pH 8، 1٪ تریتون ایکس-100، 0.5 میلی متر DTT، 0.1٪ Na Deoxycholate، 0.1٪ SDS، 0.5٪ N-lauroylsarcosine و 1× EDTA بدون مهار کننده پروتئاز کامل). هسته ها با استفاده از یک پردازنده مافوق صوت Hielscher فراصوت شدند UP100H (100 W, 30 kHz) شش بار برای 20 s در و 1 دقیقه بر روی یخ. هسته های فراصوت شده در 13000 گرم × 4 دقیقه در 4 درجه سانتی گراد سانتریفیوژ شدند. اکثریت کروماتین فراصوت شده ۵۰۰ تا ۱۰۰۰ جفت پایه (bp) طول داشت. به ازای هر اثر ایمنی، 15 میکروگرم کروماتین در حضور 10 میکروگرم آنتی بادی مونوکلونال HP1 9A9 (3 ساعت در 4 درجه سانتی گراد در یک چرخ چرخنده) انکوبه شد. سپس 50 میکرولتر پروتئین دی ان ای جی اضافه شد و انکوباسیون یک شبه در 4 درجه سانتی گراد ادامه یافت. ابرناتانت ها دور انداخته شدند و نمونه ها دو بار در بافر لیز (هر شستشو 15 دقیقه در 4 درجه سانتی گراد) و دو بار در بافر TE (1 میلی متر EDTA، 10 میلی متر TrisHCl در pH 8) شسته شدند. کروماتین در دو مرحله از مهره ها فرار کرد؛ اول در 100 میکرولیتر بافر الاسیون 1 (10 میلی متر EDTA، 1٪ SDS، 50 میلی متر TrisHCl در pH 8) در 65 درجه سانتی گراد به مدت 15 دقیقه، و به دنبال آن سانتریفیوژ و بازیابی ابرناتانت. ماده دانه ها در 100 میکرول TE + 0.67% SDS دوباره استخراج شد. الات ترکیبی (200 میکرولیتر) یک شبه در 65 درجه سانتی گراد انکوبه شد تا پیوندهای متقابل معکوس شود و با 50 میکروگرم در میلی لیتر RNaseA به مدت 15 دقیقه در 65 درجه سانتی گراد و با 500 میکروگرم در میلی لیتر Proteinase K به مدت 3 ساعت در 65 درجه سانتی گراد درمان شد. نمونه ها فنل کلروفرم استخراج و اتانول را به بار آورد. DNA در 25 میکرول آب احیا شد. برای به حداکثر رساندن تجزیه و تحلیل های مولکولی با ایمونوپرسپیت شده DNA، ژن های نامزد به صورت جفتی از طریق یک پروتکل بهینه سازی شده دوبلکسی-PCR با استفاده از دو مجموعه مختلف پریمرها که دماهای ذوب مشابهی در یک واکنش واحد دارند، تقویت شدند.
(کاسال و همکاران ۲۰۱۹)

UP200St TD_CupHorn برای فراصوت غیر مستقیم از نمونه

UP200St TD_CupHorn برای فراصوت غیر مستقیم نمونه هایی مانند DNA و shearing کروماتین

بالا عملکرد مختل کننده سلول مافوق صوت برای نمونه های بیولوژیکی

Hielscher Ultrasonics شریک طولانی تجربه خود را هنگامی که آن را به سونوگرافی با عملکرد بالا برای اختلال در سلول می آید, لیز, استخراج پروتئین, DNA, RNA, و تکه تکه شدن کروماتین و همچنین دیگر مراحل آماده سازی نمونه قبل از تجزیه و تحلیل. ارائه نمونه کارها جامع از هموژنیزر آزمایشگاه مافوق صوت و نمونه واحد آماده سازی، Hielscher تا به دستگاه مافوق صوت ایده آل برای برنامه بیولوژیکی و مورد نیاز خود را.
پروب نوع insonifier UP200St جهت لیزکلاسیک پروب نوع مافوق صوت با نوک میکرو مانند UP200St (200W; نگاه کنید به تصویر سمت چپ) و یا یکی از واحدهای آماده سازی نمونه مافوق صوت VialTweeter(ویال گروهی) یا UP200St_TD_CupHorn با VialHolder مدل های مورد علاقه در آزمایشگاه های تحقیقاتی و تحلیلی هستند. کاوشگر مافوق صوت کلاسیک ایده آل است، هنگامی که آماده نمونه های کمتر باید lysed، استخراج و یا تکه تکه. واحدهای آماده سازی نمونه VialTweeter و UP200St_TD_CupHorn به ترتیب اجازه فراصوت همزمان تا 10 یا 5 ویال را می دهند.
اگر اعداد نمونه بالا (مانند صفحات ۹۶ چاه، صفحات میکروتیتر و غیره) باید پردازش شوند، UIP400MTP راه اندازی فراصوت ایده آل است. UIP400MTP مانند یک شاخ فنجانی بزرگتر عمل می کند که پر از آب است و فضای کافی برای نگه داشتن صفحات ریز چاه دارد. UIP400MTP که توسط یک پردازنده مافوق صوت قدرتمند 400 وات تغذیه می شود، فراصوت بسیار یکنواخت و شدید صفحات چند چاهی را به منظور برهم زدن سلول ها، نمونه های لیز، محلول سازی گلوله ها، استخراج پروتئین ها یا DNA براری ارائه می دهد.

کنترل دقیق از طریق نرم افزار هوشمند

پردازنده های صنعتی Hielscher از سری HDT می توانید راحت و کاربر پسند از طریق مرورگر کنترل از راه دور اداره می شود.تمام راه حل های فراصوت Hielscher از 200 وات به سمت بالا با رنگ دیجیتال لمسی صفحه نمایش و یک نرم افزار هوشمند مجهز شده است. از طریق پروتکل داده های هوشمند تمام پارامترهای فرایند مافوق صوت به طور خودکار به عنوان فایل CSV بر روی ساخته شده در SD کارت به محض اولتراسونیک آغاز شده ذخیره می شود. این باعث می شود تحقیقات و پروتکل بسیار راحت تر است. پس از آزمایش های فراصوت و یا آماده سازی نمونه، شما به سادگی می توانید پارامترهای فراصوت از هر اجرا فراصوت را بررسی و مقایسه آنها.
از طریق منوی شهودی، پارامتر متعدد را می توان قبل از فراصوت از پیش تعیین کرد: به عنوان مثال، برای کنترل دما در نمونه و برای جلوگیری از تخریب حرارتی آن، می توان حد بالایی از دمای نمونه را تعیین کرد. سنسور دمای قابل وصل, که همراه با واحد مافوق صوت, می دهد بازخورد پردازنده مافوق صوت در دمای فراصوت واقعی. هنگامی که حد دمای بالا رسیده است, دستگاه مافوق صوت مکث تا حد پایین تر از مجموعه ∆T رسیده است و شروع می شود و سپس به طور خودکار فراصوت دوباره.
اگر فراصوت با یک ورودی انرژی خاص مورد نیاز است, شما می توانید از پیش شروع انرژی مافوق صوت نهایی از اجرای فراصوت. البته، ضربان مافوق صوت و حالت چرخه را می توان به صورت جداگانه تنظیم، بیش از حد.
برای استفاده مجدد از موفق ترین پارامترهای فراصوت خود، می توانید حالت های مختلف فراصوت (مانند زمان فراصوت، شدت، حالت چرخه و غیره) را به عنوان حالت های از پیش تنظیم شده ذخیره کنید، به طوری که آنها می توانند آسان و به سرعت دوباره آغاز شده است.
برای راحتی عملیاتی تر، تمام واحدهای مافوق صوت دیجیتال را می توان از طریق کنترل از راه دور مرورگر در هر مرورگر مشترک (به عنوان مانند، InternetExplorer، صفری، کروم و غیره) اداره می شود. اتصال LAN یک راه اندازی ساده پلاگین n بازی است و نیاز به هیچ نصب نرم افزار اضافی.
ما در Hielscher می دانیم که فراصوت موفق از نمونه های بیولوژیکی نیاز به دقت و تکرار پذیری. بنابراین، ما مافوق صوت ما به عنوان دستگاه های هوشمند با تمام ویژگی های که قادر می سازد کارآمد، قابل اعتماد، قابل تکثیر و آماده سازی نمونه مناسب طراحی شده است.

در حال حاضر با ما تماس بگیرید و در مورد نمونه های بیولوژیکی خود و مراحل آماده سازی مورد نیاز به ما بگویید. ما به شما پیشنهاد مناسب ترین دستگاه آماده سازی نمونه مافوق صوت و کمک به شما با اطلاعات اضافی مانند پروتکل ها و توصیه ها.

جدول زیر به شما می دهد نشانه ای از ظرفیت پردازش تقریبی از سیستم های مافوق صوت ما از میکرو راهنمایی مافوق صوت و هموژنیزرهای مافوق صوت کلاسیک به سونوگرافی چند نمونه برای آماده سازی مناسب، قابل اعتماد از نمونه های متعدد:

دسته ای دوره نرخ جریان دستگاه های توصیه شده
96 چاه / صفحات میکروتیتر خب UIP400MTP
10 ویال à 0.5 به 1.5mL خب VialTweeter در UP200St
CupHorn برای فراصوت غیر مستقیم، به عنوان مانند تا 5 ویال خب UP200St_TD_CupHorn
0.01 تا 250mL 5 تا 100mL/min UP50H
0.01 تا 500mL 10 تا پوست 200ml / دقیقه UP100H
0.02 تا 1L 20 تا 400ML / دقیقه UP200Ht / UP200St
10 به 2000mL 20 تا 400ML / دقیقه UP200Ht، UP400St
0.25 به 5L 0.05 تا 1L/min UIP500hdT

تماس با ما! / از ما بپرسید!

برای اطلاعات بیشتر بپرسید

لطفا فرم زیر را برای درخواست اطلاعات اضافی در مورد پردازنده مافوق صوت ، برنامه های کاربردی و قیمت استفاده کنید. ما خوشحال خواهد شد که به بحث در مورد روند خود را با شما و به شما ارائه سیستم اولتراسونیک جلسه مورد نیاز خود را!









لطفا توجه داشته باشید ما سیاست حفظ حریم خصوصی.


The VialTweeter is a MultiSample Ultraonicator that allows for reliable sample preparation under precisely controlled temperature conditions.

واحد آماده سازی چند نمونه مافوق صوت VialTweeter(ویال گروهی) اجازه می دهد تا برای فراصوت همزمان تا 10 ویال. با گیره در دستگاه VialPress، تا 4 لوله های اضافی را می توان به جلو برای فراصوت شدید فشرده شده است.

ادبیات/منابع



Hielscher Ultrasonics supplies high-performance ultrasonic homogenizers from lab to industrial size.

مافوق صوت با کارایی بالا! محدوده محصول Hielscher را پوشش می دهد طیف کامل از سونوگرافی آزمایشگاه جمع و جور بیش از نیمکت بالا واحد به سیستم های مافوق صوت تمام صنعتی.


آمار ارزشمند دانستن

متابولومیک

متابولومیک مطالعه مولکول های کوچک است که به متاپولیت ها معروف است، در داخل سلول ها، بیوفلوئیدها، بافت ها یا موجودات وجود دارد. این مولکول های کوچک و برهم کنش های آن ها در درون یک سیستم زیستی تحت اصطلاح چتری «متابولوم» خلاصه می شوند و میدان تحقیقاتی متابولومیک نامیده می شود. تحقیقات متابولوم ارتباط نزدیکی با زمینه پزشکی دقیق به سرعت در حال ظهور دارد. درک متابولوم و ارتباط آن با بیماری های مختلف به توسعه پیشگیری از بیماری ها و استراتژی های مراقبت بالینی کمک می کند در حالی که تغییر پذیری فردی در محیط زیست، سبک زندگی، ژنتیک، و فنوتیپ مولکولی. به منظور آزاد سازی مولکول های متابولیت از سلول ها، فراصوت به طور مکرر در آزمایشگاه های زیستی برای آماده سازی نمونه قبل از تجزیه و تحلیل مانند اختلال سلول، لیز و استخراج پروتئین ها، چربی ها و مولکول های دیگر استفاده می شود.