التراسونیک لیز باکتری E. coli
- باکتری E.coli باکتری معمول مورد استفاده در میکروبیولوژی و بیوتکنولوژی هستند.
- اخلالگران سلول التراسونیک ارائه نتایج قابل اعتماد و تجدید پذیر برای لیز باکتری E. coli.
- کاویتاسیون و برش نیروهای شدید هنوز به دقت کنترل در اختلال کامل و بازده استخراج بالا (به عنوان مثال پروتئین ها، DNA) منجر شود.
چرا اختلال سلول التراسونیک E. coli روش ترجیحی است؟
اسیاب التراسونیک و یا پروب نوع ultrasonicators ارائه مزایای متعددی برای لیز E. coli به عنوان سونوگرافی شدید موثر دیواره های سلولی و غشاء را مختل می کند. Ultrasonicators پروب نوع به طور گسترده ای برای لیز E. coli به دلایل زیر استفاده می شود:
استخراج پروتئین از سلول های E.coli به طور موثر با کاوشگر مافوق صوت UP200St
پروب نوع ultrasonicator ارائه می دهد مزایای بسیاری برای لیز E. coli. کنترل قابل اعتماد و دقیق بر پارامترهای فرایند اولتراسونیک اجازه می دهد تا بهینه سازی پارامترهای عملیاتی مانند قدرت، مدت زمان و دست زدن به نمونه برای رسیدن به نتایج مورد نظر.
تجزیه و تحلیل الکتروفورتیک DNA ژنومی E. coli EDL933 در معرض امواج فراصوت 0 تا 15 دقیقه قرار دارد. L نردبان DNA را نشان می دهد.
(مطالعه و تصویر: ©Basselet et al. 2008)
اختلال سلولی با استفاده از کاویتاسیون التراسونیک
اسیاب پروب نوع التراسونیک با حدود عمل. 20.000 چرخه در ثانیه (در 20kHz) و باعث کاویتاسیون در مایعات یا تعلیق. حفره صوتی مناطق میکروسکوپی از فشار خلاء مانند و درجه حرارت بالا است که سلول های پاره از هم جدا. اگر چه درجه حرارت ممکن است به چند هزار درجه سانتیگراد برسد، حجم کاویتاسیون انقدر کوچک است که فرایند را به طور قابل توجهی گرم نمی کند. سونوگرافی تولید کاویتاسیون صوتی و نیروهای برشی سوراخ و یا شکستن غشای سلولی سلول های باکتریایی مانند E.coli. ultrasonicators Hielscher اجازه می دهد کنترل دقیق بر پارامترهای فرایند مانند شدت مافوق صوت، دامنه، ورودی انرژی، و درجه حرارت. در نتیجه، فرایند لیز اولتراسونیک را می توان به طور مطلوب به نوع سلول، کشت سلولی و هدف فرایند تنظیم کرد.
- کنترل دقیق لیز کننده (شدت، دامنه، درجه حرارت)
- نتایج قابل اعتماد و قابل تکرار
- انطباق مطلوب به نمونه های خاص
- کنترل دما
- برای نمونه بسیار کوچک تا بسیار بزرگ (میکرولیتر به لیتر)
- درمان کاملا مکانیکی
- کاربر پسند، عملیات امن
- خطی مقیاس بالا از آزمایشگاه تا تولید
VialTweeter(ویال گروهی) جهت لیز مافوق صوت
هموژنایزر التراسونیک در مقابل سایر تکنیک های لیز
در حالی که لیز شیمیایی و انزیمی می تواند مشکل ساز باشد – از لیز شیمیایی می تواند ساختارهای پروتئینی را تغییر داده و معرفی مشکلات تصفیه و لیز آنزیمی نیاز به بار کمون طولانی است و قابل تولید مجدد نبوده – اختلال مافوق صوت یک سلول سریع روش اختلال پیچیده است.
لیز التراسونیک تنها بر اساس نیروهای مکانیکی است. هیچ مواد شیمیایی اضافه نمی شود، فراصوت دیواره سلولی را با نیروهای برشی می شکند. لیز شیمیایی می تواند ساختار پروتئین را تغییر دهد و مشکلات تصفیه را معرفی کند. اختلال انزیمی نیاز به زمان انکوباسیون طولانی دارد و قابل تکرار نیست. اختلال سلول التراسونیک سلول های باکتری E.coli سریع، ساده، قابل اعتماد و تجدید پذیر است. به همین دلیل است ultrasonicators Hielscher در ازمایشگاه های بیولوژیکی و بیوشیمیایی در سراسر جهان برای اماده سازی نمونه، قبل از ananlytics، مورب ازمایشگاهی و سنجش چند برابر استفاده می شود.
توصیه های عمومی برای لیز التراسونیک
روش فراصوت روش محبوب ترین برای lysing مقادیر بسیار کم، متوسط و بزرگ از سوسپانسیون های سلولی است – از پیکو لیتر تا 100L / ساعت (با استفاده از یک سلول جریان مافوق صوت). سلول ها توسط برشی مایع و کاویتاسیون لیز. DNA نیز در طول فراصوت چیده، پس از آن لازم است به اضافه از DNase به سوسپانسیون سلولی.
کنترل دما در حین لیز E.coli اولتراسونیک
با پیش خنک کننده نمونه و نگه داشتن نمونه در طول فراصوت روی یخ، نمونه تخریب حرارتی از نمونه می توان به راحتی جلوگیری کرد.
در حالت ایده ال، نمونه ها باید در طول لیز سرد نگه داشته شوند، اما برای اکثر نمونه ها کافی است اگر درجه حرارت بالاتر از دمای کشت یا منبع بافت افزایش نمی یابد. بنابراین توصیه می شود، برای حفظ تعلیق بر روی یخ و به sonicate با چند پالس فرا صوت کوتاه از 5-10 ثانیه و مکث 10-30 ثانیه. در طول مکث، گرما می تواند به منظور ایجاد مجدد دمای پایین از بین برود. برای نمونه های سلولی بزرگتر، راکتورهای مختلف سلول جریان با ژاکت خنک کننده در دسترس هستند.
پروتکل برای اماده سازی التراسونیک از E. Coli Lysates
محققان استفاده اسیاب اولتراسونیک Hielscher برای اختلال سلول E.coli. در زیر شما می توانید پروتکل های مختلف ازمایش شده و اثبات شده برای لیز E.coli با استفاده از اسیاب اولتراسونیک Hielscher برای برنامه های مختلف E. coli مربوط به پیدا کنید.
رشد سلولی، اتصال متقابل و اماده سازی عصاره سلولی E. coli با استفاده از فرا صوت
برای SeqA و RNA پلیمراز تراشه تراشه های E. coli MG1655 یا MG1655 ΔseqA در 37 ° C به OD رشد کرده بود۶۰۰ از حدود 0.15 در 50 میلی لیتر LB (+ 0.2٪ گلوکز) قبل از 27 میلی لیتر فرمالدئید (37٪) در هر میلی لیتر محیط اضافه شد (غلظت نهایی 1٪). Crosslinking با تکان دادن آرام (100 دور در دقیقه) در دمای اتاق به مدت 20 دقیقه انجام شد و سپس با 10 میلی لیتر 2.5 میلی گرم گلیسین (غلظت نهایی 0.5 M) خنک شد. برای آزمایش های شوک حرارتی، E.coli MG1655 در محیط 65 میلی لیتر LB در دمای 30 درجه سانتی گراد به OD۶۰۰ حدود 0.3. پس از ان 30 میلی لیتر کشت به یک فلاسک از قبل گرم شده در 43 °C منتقل شد و باقی مانده در 30 °C نگهداری شد. Crosslinking و quenching همانطور که در بالا توضیح داده شد، به جز اینکه سلول ها در 30 یا 43 °C برای 5 دقیقه قبل از لرزش اهسته بیشتر در دمای اتاق نگهداری می شوند. سلول ها با استفاده از سانتریفاگ جمع اوری و دو بار با TBS سرد (pH7.5) شسته شدند. پس از گسترش مجدد در 1 میلی لیتر بافر لیز (10 میلی متر تریس (pH 8.0)، 20٪ ساکارز، 50 میلی مولار NaCl، 10 میلی متر EDTA، 10 میلی گرم / میلی لیتر لیزوزیم) و انکوباسیون در 37 °C برای 30 دقیقه به دنبال علاوه بر این از 4 میلی لیتر بافر IP، سلول ها بر روی یخ با 12 بار 30 ثانیه و 30 ثانیه استراحت با استفاده از پردازنده مافوق صوت Hielscher UP400St در تنظیم قدرت 100٪ فراصوت داده شد. پس از سانتریفوژ به مدت 10 دقیقه در 9000 گرم، 800 میکرو لیتر aliquotes از supernatant در -20 °C ذخیره شد. (والدمینگهاوس 2010)
تولید بیش از حد و تصفیه انزیم ها با یک پروب التراسونیک
برای تولید بیش از حد پروتئین های برچسب دار دهاهیستیدین (His10)، E. coli BL21 (DE3) با ساختارهای pET19b تبدیل شد. یک پیش کشت شبانه توسط سانتریفاگ برداشت شد و 1٪ برای ایمن سازی یک فرهنگ بیان استفاده شد. سلول های حامل pET19mgtB در 22 °C رشد کردند تا چگالی نوری در 600 نانومتر (OD600) از 0.7. کشت به 17 °C منتقل شد و توسط 100 میکرومولار IPTG القا شد. پس از 16 ساعت، کشت توسط سانتریفوگاسیون در 7500 × گرم در 4 °C برداشت شد. سلول ها در 50 میلی مول فسفات بافر سالین (PBS) با 0.3 M NaCl در pH 7.4 و توسط امواج فراصوت با sonotrode میکرو نوک S2 در ultrasonicator Hielscher UP200St در یک چرخه از 0.5 و دامنه 75٪ مختل شد.
تولید بیش از حد decahistidine برچسب گذاشته شده توسط GTFC در 37 ° C در OD القا شد۶۰۰ 0.6 با 100 میکرومولار IPTG صورت گرفت. سلول های پس از آن به مدت 4 ساعت انکوبه شدند، برداشت، و لیز همانطور که در بالا برای MgtB بیان شده است.
عصاره سلول های خام در 15000 × گرم و 4 °C سانتریفیوژ شد تا بقایای سلولی رسوب کند. عصاره های روشن شده بر روی ستون های 1 میلی لیتری HisTrap FF Crude با استفاده از سیستم ÄKTAprime Plus بارگذاری شده است. انزیم ها با توجه به پروتکل تولید کننده برای حذف گرادیان پروتئین های برچسب زده شده توسط His خالص شدند. محلول های پروتئینی الوت شده دو بار در برابر 1000 حجم 50 میلی مول PBS، pH 7.4 با 0.3 M NaCl در 4 °C دیالیز شدند. خالص سازی با استفاده از 12٪ SDS-PAGE مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. غلظت پروتئین با استفاده از روش برادفورد با استفاده از Roti-Quant تعیین شد. (Rabausch et al. 2013)
استخراج التراسونیک پروتئین از باکتری E. coli
پروتئین طعمه مورد نظر (در این مورد، MTV1 از thaliana Arabidopsis دارد) به یک تگ GST ذوب شده و بیان شده در BL21 اشریشیا کلی (E. coli با) سلول.
- یک گلوله GST-MTV1 و GST (مربوط به کشت باکتریایی 50 میلی لیتر) را بردارید و هر کدام را در بافر استخراج یخ سرد 2.5 میلی لیتر دوباره باز کنید.
- استفاده از یک ultrasonicator UP100H (مجهز به MS3 microtip-sonotrode برای حجم کمی از حدود 2-5mL) برای مختل کردن سلول های باکتریایی تا زمانی که انها lysed، که با کاهش کدورت و افزایش ویسکوزیته نشان داد. این باید بر روی یخ انجام شود و توصیه می شود در فواصل زمانی (به عنوان مثال 10 ثانیه sonicating و به دنبال ان 10 ثانیه مکث بر روی یخ و غیره). مراقبت باید گرفته شود به sonicate با شدت بیش از حد بالا نیست. اگر کف یا تشکیل رسوب سفید تشخیص داده شود، شدت باید کاهش یابد.
- محلول باکتری های لجن شده را به لوله های میکروسنتریفوژ 1.5 میلی لیتر و سانتریفیوژ در 4 °C، 16000 x g به مدت 20 دقیقه منتقل کنید.
ultrasonicators پروب نوع مانند UP400St استفاده از اصل کار کاویتاسیون صوتی برای لیز کارامد E.coli.
تجزیه و تحلیل بیان و تصفیه پروتئین نوترکیب با استفاده از روش فراصوت
پلت E. coli با Hielscher ultrasonicator UP100H فراصوت داده شد. برای این منظور، پلت سلولی در بافر لیز سرد (50 میلی متر Tris-HCl pH = 7.5، 100 میلی مولار NaCl، 5 میلی متر DTT، 1 میلی متر PMSF) دوباره بازپید و به مدت 10 دقیقه بر روی یخ سرد شد. سپس سیون سلولی با 10 انفجار کوتاه 10 درجه و به دنبال ان فاصله 30 درجه برای خنک کننده فراصوت داده شد. در نهایت، بقایای سلولی توسط ultracentrifugation در 4 °C به مدت 15 دقیقه در 14000 دور در دقیقه حذف شد. برای تایید بیان rPR، روی روی ژل پلی اکریل امید 12٪ اجرا شد و توسط SDS-PAGE و وسترن بلات تجزیه و تحلیل شد. تصفیه rPR با استفاده از رزین Ni2 +-NTA (Invitrogen، ایالات متحده امریکا) با توجه به راهنمای تولید کننده انجام شد. در این مرحله از روش تصفیه بومی استفاده شد. خلوص پروتئین خالص شده با استفاده از الکتروفورز بر روی ژل پلی اکریل امید 12 درصد و رنگ امیزی ابی کوماسی ارزیابی شد. غلظت پروتئین خالص شده با کیت سنجش پروتئین Micro BCA (PIERCE، ایالات متحده امریکا) اندازه گیری شد. (اذرنژاد و همکاران. 2016)
اسیاب التراسونیک برای E. کولی لیز
Hielscher فرا صوت طراحی، تولید و تامین هموژنایزر اولتراسونیک با کارایی بالا برای لیز قابل اعتماد و کارامد باکتری E. coli و دیگر انواع سلول، بافت ها و کشت سلولی.
نمونه کارها گسترده ای از پروب مافوق صوت و همچنین سیستم های فراصوت غیر مستقیم اجازه می دهد تا ما را به شما هموژنایزر بافت اولتراسونیک ایده ال برای اختلال سلول و برنامه استخراج خود را ارائه دهد.
طراحی، ساخت و مشاوره – کیفیت ساخته شده در آلمان
Ultrasonicators Hielscher به خوبی برای بالاترین کیفیت و استانداردهای طراحی خود شناخته شده است. نرم افزار هوشمند، منوی بصری، تنظیمات قابل برنامه ریزی و پروتکل داده های خودکار تنها چند ویژگی از ultrasonicators Hielscher است. استحکام و عملیات اسان اجازه می دهد ادغام صاف ultrasonicators ما را به امکانات تحقیقاتی و بیوتکنولوژی. حتی شرایط خشن و محیط های خواستار به راحتی توسط Ultrasonicators Hielscher به کار گرفته.
Hielscher Ultrasonics یک شرکت گواهی ایزو و تاکید ویژه ای بر مافوق صوت با عملکرد بالا شامل دولت از هنر فن آوری و کاربر دوستی است. البته، سونوگرافی Hielscher سازگار CE و دیدار با الزامات UL، CSA و RoHs.
جدول زیر به شما می دهد که نشانه ای از ظرفیت پردازش تقریبی ultrasonicators ما:
| دسته ای دوره | نرخ جریان | دستگاه های توصیه شده |
|---|---|---|
| چند چاه / صفحات میکروتیتر | خب | UIP400MTP |
| CupHorn برای ویال یا فنجان | خب | cuphorn التراسونیک |
| راکتور میکرو جریان اولتراسونیک | خب | GDmini2 |
| تا 10 ویال با 0.5 تا 1.5 میلی لیتر | خب | VialTweeter(ویال گروهی) |
| 00.5 به 1.5mL | خب | VialTweeter(ویال گروهی) |
| 1 تا 500ML | 10 تا پوست 200ml / دقیقه | UP100H |
| 10 به 2000mL | 20 تا 400ML / دقیقه | UP200Ht، UP400St |
| 00.1 به 20L | 00.2 به 4L / دقیقه | UIP2000hdT |
| 10 تا 100L | 2 تا 10L / دقیقه | UIP4000 |
| خب | 10 تا 100L / min و | UIP16000 |
| خب | بزرگتر | خوشه UIP16000 |
تماس با ما! / از ما بپرسید!
پروتکل های اضافی برای التراسونیک E. coli لیز
پروتئین های اصلاح شده الیسین در E. coli با استفاده از VialTweeter التراسونیک
تعیین مطالب سولفیدریل توسط 5،5'-Dithiobis (اسید 2-nitrobenzoic) (بنزی) روش
باکتری E. coli MG1655 یک شبه کشت برای ایمن سازی حداقل محیط MOPS (1:100) استفاده شد. کشت به صورت هوازی رشد کرد تا زمانی که A600 از 0.4 به دست امد. کشت به سه کشت 15 میلی لیتری برای درمان استرس تقسیم شد. یک فرهنگ درمان نشده به عنوان یک کنترل منفی عمل می کند. 0.79 میلی مول الیسین (128 میکروگرم میلی لیتر- 1) یا 1 میلی مول دی امید به یکی از دو کشت باقی مانده اضافه شد. کشت ها به مدت 15 دقیقه انکوبه شدند. 5 میلی لیتر از هر کشت توسط سانتریفوژ (8،525 × گرم، 4 °C، 10 دقیقه) برداشت شد. سلول ها دو بار با 1 میلی لیتر PBS (137 میلی متر NaCl، 2.7 میلی مولار KCl، 10 میلی مولار Na2HPO4، 2 میلی مولار KH2PO4، pH 7.4، ذخیره شده بی هوازی قبل از استفاده) و سانتریفیوژ (13000 × گرم، 4 °C، 10 دقیقه) شسته شدند. سلول ها در بافر لیز (PBS با 6 میلی متر guanidinium HCl، pH 7.4) قبل از اختلال در 4 °C توسط امواج فراصوت (VialTweeter(ویال گروهی) ultrasonicator، Hielscher GmbH، المان) (3 × 1 دقیقه). بقایای سلولی توسط سانتریفوگاسیون (13000 × گرم، 4 °C، 15 دقیقه) گلوله شد. ماده رویی به یک کواوت 3.5 میلی لیتری QS-macro (10 میلی متر) با نوار هم بزنید مغناطیسی منتقل شد و با 1 میلی لیتر بافر لیز مخلوط شد. انقراض نمونه ها در 412 نانومتر با یک اسپکتروفتومتر Jasco V-650 مجهز به نگهدارنده سلول کنترل شده با درجه حرارت PSC-718 در دمای اتاق نظارت شد. 100μl از 3 میلی متر dithiobis (2-نیتروبنوزوئیک اسید) محلول اضافه شد. تا زمانی که به اشباع رسید، انقراض تحت نظارت قرار گرفت. محاسبه غلظت تیول با استفاده از ضریب انقراض ε۴۱۲ = 13700 M-1 سانتی متر-1 برای thio-2-nitrobenzoic اسید (TNB). غلظت تیول همراه محاسبه شده بر اساس حجم سلول های E.coli از 6.7 × 10 شد-15 لیتر و تراکم سلول A600 = 0.5 (معادل 1 × 108 میلی لیتر سلول-1 فرهنگ) است. (مولر و همکاران 2016).
تعیین گلوتاتیون In Vivo با استفاده از سنگ شکن سلولی التراسونیک
E.coli MG1655 در محیط حداقل MOPS در حجم کل 200 میلی لیتر رشد کرد تا زمانی که A600 از 0.5 به دست امد. این فرهنگ برای درمان استرس به کشت های 50 میلی لیتری تقسیم شد. پس از 15 دقیقه انکوباسیون با 0.79 میلی مولار الیسین، 1 میلی مولار دی امید یا دی متیل سولفوکسید (کنترل)، سلول ها در 4000 گرم در 4 °C به مدت 10 دقیقه برداشت شدند. سلول ها دو بار با بافر KPE قبل از باز شدن گلوله ها در 700μl بافر KPE شسته شدند. برای deproteination، 300l از 10٪ (W / V) اسید سولفوسالیلیک قبل از اختلال سلول های امواج فراصوت (3 × 1 دقیقه) اضافه شد؛ VialTweeter(ویال گروهی) ultrasonicator). رویی پس از سانتریفوژ (30 دقیقه، 13،000g، 4 درجه سانتی گراد) جمع آوری شد. غلظت اسید Sulfosalicylic علاوه بر این از 3 جلد از بافر KPE به 1٪ کاهش یافته است. اندازه گیری از گلوتاتیون کل و GSSG که در بالا توضیح انجام شد. غلظت گلوتاتیون همراه محاسبه شده بر اساس حجم E. شد کولی سلول های 6.7×10-15 لیتر و تراکم سلولی A600 0.5 (معادل 1)×108 میلی لیتر سلول-1 فرهنگ). غلظت GSH توسط تفریق از 2 [GSSG] از گلوتاتیون کل محاسبه شد. (مولر و همکاران 2016).
بیان mAspAT انسانی در اشریشیاکلی با استفاده از هموژنایزر التراسونیک
مستعمره تنها از E. coli BL21 (DE3) پناه دادن به وکتور بیانی در 30 میلی لیتر از لوریا برتانی-(LB) محیط کشت حاوی 100μg / میلی لیتر آمپی سیلین، و سپس در دمای Cº37 تا چگالی نوری کشت (OD۶۰۰) رسیده 0.6. سلول توسط سانتریفوژ در 4000 × g به مدت 10 دقیقه برداشت شد، و مجددا در محیط LB تازه 3L حاوی 100μg / میلی لیتر آمپی سیلین.
پس از ان، بیان پروتئین با 1 میلی مول ایزوپروپیل β-1-1-thiogalactopyranoside (IPTG) به مدت 20 ساعت در 16 درجه سانتیگراد القا شد. سلول ها توسط سانتریک در 8000 × گرم به مدت 15 دقیقه برداشت و با بافر A (20 میلی مولار NaH2PO4، 0.5 M NaCl، pH 7.4) شسته شدند. سلول های تقریبا 45g (وزن مرطوب) از کشت 3 L به دست امده است. پس از سانتریفوژ، گلوله های سلولی در 40 میلی لیتر (برای فرهنگ 1 L) بافر استخراج یخ سرد A، و توسط امواج فراصوت در دمای یخ سرد با استفاده از سنگ شکن سلول اولتراسونیک Hielscher UP400St لیز شد. لیز سلولی در 12000 دور در دقیقه به مدت 15 دقیقه سانتریفیوژ شد تا کسر محلول (فوق العاده) و رسوب (پلت) را جدا کند. (جیانگ و همکاران 2015)
آمار ارزشمند دانستن
اشریشیا کلی
Escherichia coli (E.coli) یک باکتری گرم منفی، فاکتوریل بی هوازی، میله ای شکل و کولتیفیک از جنس Escherichia است که معمولا در روده های پایینی از ارگانیسم های گرم خون (Endotherms) یافت می شود. تعداد زیادی از گونه های E. coli (یا زیرمجموعه ها) با ویژگی های متنوع وجود دارد. بیشتر سوسیس E. coli برای انسان ها بی ضرر هستند، مثلا سوسپانسیون های B و K-12 که معمولا برای کاربرد های تحقیقاتی در آزمایشگاه ها استفاده می شود. با این حال، برخی از گونه ها مضر هستند و می توانند باعث بیماری جدی شوند.
باکتری E. coli نقش مهمی در مهندسی زیستی مدرن و میکروبیولوژی صنعتی بازی میکند، چون باکتری آسان به دستکاری است. برنامه های کاربردی آزمایشگاه مشترک که شامل اغلب استفاده از باکتری E. coli، به عنوان مثال، ایجاد اسید دئوکسی ریبونوکلئیک نوترکیب (DNA) و یا به عنوان یک ارگانیسم مدل عمل می کنند.
باکتری E. coli یک میزبان بسیار متنوع برای تولید پروتئین های هترولوگ است، و سیستم های بیان پروتئین چند برابر در دسترس برای تولید پروتئین های نوترکیب در باکتری E. coli هستند. با استفاده از پلاسمیدها که اجازه بیان سطح بالایی از پروتئین، ژن را می توان به باکتری ها، که قادر به تولید این پروتئین ها در مقادیر بالا در فرآیندهای تخمیر صنعتی معرفی شده است.
E.coli به عنوان کارخانه های سلول برای تولید انسولین استفاده می شود. کاربردهای بیشتر شامل استفاده از سلول های E. coli اصلاح شده برای توسعه و تولید واکسن و انزیم های بی حرکت، تولید سوخت های زیستی و همچنین برای اصلاح زیستی است.
فشار K-12 یک فرم جهش یافته از E. coli که بیش از حد بیان آنزیم آلکالین فسفاتاز (ALP). این جهش به دلیل نقص در ژن که به طور مداوم کدهای برای آنزیم رخ می دهد. اگر یک ژن یک محصول را تولید و بدون هر گونه مهار این است که به عنوان فعالیت ساختاری شناخته شده است. این شکل جهش یافته خاص برای جداسازی و آنزیم ALP استفاده می شود.
باکتری های ای کلی نیز به طور گسترده ای به عنوان کارخانه های سلولی مورد استفاده قرار می گیرند. میکروب های مهندسی شده (مانند، باکتری ها) و سلول های گیاهی می توانند به عنوان به اصطلاح کارخانه های سلولی مورد استفاده قرار گیرند. این سلول های اصلاح شده ژنتیکی مولکول ها، مواد شیمیایی، پلیمرها، پروتئین ها، و مواد دیگر تولید می کنند، که به عنوان مثال در صنعت دارویی، غذایی، و شیمیایی مورد استفاده قرار می گیرند. به منظور آزاد کردن مولکول های تولید شده در فضای داخلی چنین سلول های مهندسی زیستی، لیز مافوق صوت یک روش رایج برای برهم زدن دیواره های سلولی و انتقال مواد هدف به مایع اطراف است. اطلاعات بیشتر در مورد لیز سلول های مهندسی زیستی!
DNA برش التراسونیک
نیروهای برشی التراسونیک یک روش معمول برای ازاد کردن مولکول ها، اندامک ها و پروتئین ها از داخل سلول و همچنین شکستن رشته های DNA به قطعات است. کاویتاسیون اکوستیک دیواره های سلولی و غشاها را برای استخراج DNA از سلول ها و تولید قطعات حدود 600 – 800 جفت در طول، ایده آل است که برای تجزیه و تحلیل.
اینجا را کلیک کنید برای کسب اطلاعات بیشتر در مورد اسیاب سونوگرافی، قطعه قطعه شدن DNA!
ادبیات/منابع
- Azarnezhad A., Sharifi Z., Seyedabadi R., Hosseini A., Johari B., Sobhani Fard M. (2016): Cloning and Expression of Soluble Recombinant HIV-1 CRF35 Protease-HP Thioredoxin Fusion Protein. Avicenna J Med Biotechnol. 8(4), 2016. 175–181.
- Jiang X., Wang J., Chang H.; Zhou Y. (2016): Recombinant expression, purification and crystallographic studies of the mature form of human mitochondrial aspartate aminotransferase. BioScience Trends 2016.
- Müller A., Eller J., Albrecht F., Prochnow P., Kuhlmann K., Bandow J.E., Slusarenko A.J., Leichert L.I.O. (2016): Allicin Induces Thiol Stress in Bacteria through S-Allylmercapto Modification of Protein Cysteines. Journal of Biological Chemistry Vol. 291, No. 22, 2016. 11477–11490.
- Rabausch U., Juergensen J., Ilmberger N., Böhnke S., Fischer S., Schubach B., Schulte M., Streit W. R. (2013): Functional Screening of Metagenome and Genome Libraries for Detection of Novel Flavonoid-Modifying Enzymes. Applied and Environmental Microbiology 79(15), 2013. 4551–4563.
- Sauer M. (2014): MTV1 Pull-down Assay in Arabidopsis. bio-protocol Vol 4, Iss 12, Jun 20, 2014.
- Waldminghaus T., Skarstad K. (2010): ChIP on Chip: surprising results are often artifacts. BMC Genomics 11, 2010. 414.
Hielscher Ultrasonics تولید هموژنیزرهای مافوق صوت با کارایی بالا از ازمایشگاه ها تا اندازه صنعتی.