فن آوری اولتراسوند Hielscher

پروتکل فعال سازی کروناویروس SARS-CoV-2 با فراصوت

Hielscher VialTweeter یک واحد آماده سازی چند نمونه مافوق صوت منحصر به فرد است، که برای غیر فعال کردن کروناویروس SARS-COV-2 استفاده می شود. VialTweeter اجازه می دهد تا 10 ویال نمونه به طور همزمان آماده و در نتیجه واحد ایده آل برای پردازش نمونه جرم است.

غیر فعال شدن کروناویروس SARS-CoV-2 با VialTweeter

پس از از بین بردن ثابت, monolayers سه بار با فسفات بافر سالین (PBS) شسته شد قبل از خراش سلول ها را به 1mL MEM/5% FBS و فراصوت (3 × 10 ثانیه در, 10 ثانیه خاموش در قدرت 100% و دامنه) با استفاده از پردازنده مافوق صوت Hielscher UP200St با VialTweeter پیوست. سوپرناتانت ها با سنتریفیوژ در ۳۰۰۰ گرم × به مدت ۱۰ دقیقه روشن شدند. 

پروتکل کامل را در اینجا برای غیر فعال سازی کروناویروس SARS-CoV-2 توسط ولش و همکاران (2020) در زیر بخوانید:

سلول ها و ویروس

سلول های Vero E6 (Vero C1008; ATCC CRL-1586) در حداقل محیط ضروری عقاب اصلاح شده (MEM) به همراه 10 درصد (v/v) سرم گوساله جنین (FCS) کشت داده شد. ویروس مورد استفاده SARS-CoV-2 کرنش hCOV-19/England/2/2020 بود که توسط PHE از اولین خوشه بیمار در بریتانیا در تاریخ 29/01/2020 جدا شد. این ویروس در پاساژ ۱ به دست آمده و برای مطالعات غیر فعال سازی در پاساژ ۲ یا ۳ مورد استفاده قرار می گیرد.
برای واکنشگرها و مواد شیمیایی مورد استفاده برای غیر فعال سازی SARS-CoV-2 و همچنین حذف سیتو سمی واکنشگر لطفا به گزارش علمی ولش و همکاران (2020) نگاه کنید.

The ultrasonic sample preparation unit VialTweeter is used for the inactivation of SARS-CoV-2 coronavirus

غیر فعال سازی ویروس توسط شوینده ها – SARS-CoV-2 Coronavirus Inactivation protocol by Welch et al. 2020

غیر فعال سازی SARS-CoV-2

برای محصولات تجاری، آماده سازی ویروس (مایع کشت بافت، تیتر از 1 × 106 به 1 × 108 PFU / میلی لیتر) در سه برابر با نایب السلطنه در غلظت و برای زمان تماس توصیه می شود در دستورالعمل تولید کنندگان برای استفاده، که در آن در دسترس، و یا برای غلظت و زمان به طور خاص با آزمایش آزمایشگاه درخواست درمان شد. در جایی که طیف وسیعی از غلظت ها توسط تولیدکننده داده شد، کمترین نسبت محصول به نمونه مورد آزمایش قرار گرفت (به عنوان یکی از کمترین غلظت توصیه شده محصول آزمون). نمونه ها با استفاده از نسبت یک حجم مایع کشت بافت به ده حجم ریجنت مورد آزمایش قرار گرفتند، مگر اینکه نسبت حجمی مایع نمونه به نایب السلطنه توسط تولیدکننده مشخص شود. مواد شوینده، تثبیت کننده ها و حلال ها در غلظت های نشان داده شده برای زمان های نشان داده شده مورد آزمایش قرار گرفتند. تمام مراحل غیر فعال سازی در دمای اتاق محیط (18 تا 25 درجه سانتی گراد) انجام شد. برای آزمایش انواع نمونه های جایگزین، ویروس به ماتریس نمونه نشان داده شده با نسبت 1:9 خوشه شد، سپس با نایب السلطنه های آزمایش به عنوان بالا درمان شد. تمام آزمایش ها شامل نمونه های درمان شده با مسخره کنترل سه ظریف با حجم معادل PBS به جای نایب السلطنه آزمایش بودند. بلافاصله پس از زمان تماس مورد نیاز، 1mL نمونه تصفیه شده با استفاده از ماتریس تصفیه مناسب انتخاب شده پردازش شد. حذف واکنشگر برای تست غیر فعال سازی در قالب ستون اسپین بزرگتر با استفاده از پیرس 4mL شوینده حذف ستون اسپین (ترمو فیشر) انجام شد، و یا با پر کردن خالی پیرس 10mL ظرفیت ستون های سنتریفیوژ (ترمو فیشر) با SM2 بیو مهره، Sephacryl S-400HR یا Sephadex LH-20 به مهره های بسته بندی شده 4mL / resin. برای تصفیه با استفاده از فیلترهای ×، 2 نمونه 500 میکرول با استفاده از دو فیلتر سانتیریفوژ با روشی که قبلاً توصیف شده بود تصفیه شد و سپس با هم جمع شدند. برای فرمالدهید و فرمالدهید با حذف گلوتارالدهید، از یک فیلتر با حجم نمونه 1× 500 میکرول استفاده شد، پس از پردازش در PBS 500μl دوباره صرف شد و به 400ul MEM/5٪ FBS اضافه شد. برای غیر فعال شدن آلوده VialTweeter at the ultrasonic processor UP200STتک رنگ، 12.5 سانتی مترH2S فلاسک سلول های Vero E6 (2.5 × 106 سلول ها/فلاسک در 5/2mL MEM/5% FBS) در MOI 0.001 آلوده شدند و در CO 37 درجه سانتی گراد/5 درصد انکوبه شدندH2S به مدت 24 ساعت . سوپرناتانت حذف شد، و سلول های ثابت با استفاده از 5mL فرمالدهید، یا فرمالدهید و گلوتارالدهید در دمای اتاق به مدت 15 یا 60 دقیقه. تثبیت کننده حذف شد، و monolayers شسته شده سه بار با PBS قبل از خراش سلول ها را به 1mL MEM/5٪ FBS و فراصوت (3 × 10 ثانیه در، 10 ثانیه خاموش در 100٪ قدرت و دامنه) با استفاده از UP200St با دلبستگی VialTweeter (Hielscher سونوگرافی فن آوری). سوپرناتانت ها با سنتریفیوژ در ۳۰۰۰ گرم × به مدت ۱۰ دقیقه روشن شدند.

VialTweeter (ویال گروهی) برای فراصوت شدید از ویال بسته

VialTweeter برای فراصوت شدید ویال بسته

درخواست اطلاعات




توجه داشته باشید ما سیاست حفظ حریم خصوصی.


Various reagents have been tested for the inactivation of the SARS-CoV-2 coronavirus using the ultrasonic sample prep unit VialTweeter.

جزئیات واکنشگر مورد استفاده برای SARS-CoV-2 غیر فعال سازی کروناویروس با ویال توئتر مافوق صوت با توجه به پروتکل توسط ولش و همکاران 2020

پروتکل کامل از جمله استفاده از Hielscher VialTweeter را می توان در اینجا یافت:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

The multi-sample ultrasonicator VialTweeter allows for simultaneous sample preparation of up to 10 vials under same process conditions. The VialTweeter is an established ultrasonic device used for the inactivation of corona virus SARS-CoV-2 (Click to enlarge!)

VialTweeter برای غیر فعال سازی ویروس مافوق صوت

مزایای استفاده از این VialTweeter در یک نگاه

  • فراصوت تا 10 ویال به طور همزمان
  • بدون آلودگی متقابل
  • بدون از دست دادن نمونه
  • ضبط خودکار داده ها
  • آسان و ایمن برای کارکردن
VialTweeter نیز برای استفاده می شود

  • سلول لیز
  • اختلال ذرات ویروسی
  • استخراج اسید هسته ای: جداسازی DNA/RNA
  • تکه تکه شدن DNA/RNA
  • محلول سازی Lysate
  • تکه تکه کننده های مافوق صوت پیچیده و مختل کننده سلول

    چند نمونه مافوق صوت VialTweeter تنها یکی از بسیاری از راه حل های مافوق صوت برای آماده سازی نمونه در آزمایشگاه های بیولوژیکی، بیوشیمیایی و بالینی است. Hielscher Ultrasonics ارائه می دهد تجزیه کننده مافوق صوت ایده آل برای برنامه شما, به عنوان نمونه لیز سلول, استخراج سلول, همگن سازی بافت, محلول سازی لایزات, حل, گاز زدایی نمونه و غیره.
    به ما اطلاع دهید که چگونه بسیاری از نمونه های شما باید به پردازش در هر ساعت و روز، اگر شما ترجیح می دهند فراصوت مستقیم یا غیر مستقیم و چه هدف از درمان نمونه مافوق صوت است. ما به شما مناسب ترین واحد مافوق صوت برای روال کار روزانه خود را توصیه!
    Hielscher مافوق صوت 'پردازنده های مافوق صوت دیجیتال با نرم افزار هوشمند مجهز, ضبط خودکار داده ها, گزینه های آسان قبل از تنظیم برای کنترل دما, مدت زمان فراصوت, چرخه / حالت پالس و همچنین روشنایی نمونه و مرورگر کنترل از راه دور. ما تلاش می کنیم تا دستگاه های مافوق صوت ما را به عنوان هوشمند که ممکن است به طوری که تحقیقات و روال کار خود را می شود به عنوان راحت و موفق که ممکن است.
    اینجا را کلیک کنید، برای پیدا کردن برنامه های کاربردی بیشتر از جمله پروتکل های آماده سازی نمونه مافوق صوت با VialTweeter!

    تماس با ما! / از ما بپرسید!

    برای اطلاعات بیشتر بپرسید

    لطفا فرم زیر را برای درخواست اطلاعات اضافی در مورد پردازنده مافوق صوت ، برنامه های کاربردی و قیمت استفاده کنید. ما خوشحال خواهد شد که به بحث در مورد روند خود را با شما و به شما ارائه سیستم اولتراسونیک جلسه مورد نیاز خود را!









    لطفا توجه داشته باشید ما سیاست حفظ حریم خصوصی.


    Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

    Hielscher مافوق صوت تولید هموژنایزر مافوق صوت با عملکرد بالا برای مخلوط کردن برنامه های کاربردی، پراکنده، تقلید و استخراج در آزمایشگاه، خلبان و مقیاس صنعتی است.

    ادبیات/منابع



    آمار ارزشمند دانستن

    سلول های Vero چه هستند؟

    Vero E6 که با نام Vero C1008 (ATCC No نیز شناخته می شود. CRL-1586) سلول کلون از Vero 76 است و در تحقیقات SARS-CoV و SARS-CoV-2 کروناویروس استفاده می شود. سلول های Vero یک اندود از سلول های مورد استفاده در کشت سلول ها هستند. 'Vero’ سن و سال از سلول های اپی تيليال کليه استخراج شده از يک ميمون سبز آفريقائی (Chlorocebus sp.) جدا شد.
    سلول های Vero E6 برخی از مهار تماس را نشان می دهند، بنابراین برای انتشار ویروس هایی که به آرامی تکثیر می شوند مناسب هستند. سلول های Vero E6 معمولاً برای بررسی سیتوپاتولوژی کروناویروس های SARS-CoV و SARS-CoV-2 استفاده می شوند چرا که سلول های Vero (سلول های کلیه میمون سبز آفریقایی) بیان فراوان گیرنده های آنزیم تبدیل کننده آنژیوتنسین ۲ (ACE2) را نشان می دهند. گیرنده های ACE2 یک محل لنگر انداختن عمده برای کروناویروس SARS-CoV-2 هستند.
    به عنوان مثال، اوگاندو و همکارانش (۲۰۲۰) دریافتند که SARS-CoV-2 – در مقایسه با SARS-CoV – تولید سطوح بالاتری از RNA ویروسی داخل سلولی, اما قابل توجه در حدود 50 برابر کمتر تولید ویروسی عفونی از محیط کشت بازیابی شد. علاوه بر این، آنها مشخص کردند که حساسیت دو ویروس به سه مهارکننده تثبیت شده تکثیر کروناویروس (Remdesivir، Alisporivir و کلروکین) بسیار مشابه است، اما عفونت SARS-CoV-2 به طور قابل ملاحظه ای نسبت به پیش درمان سلول های با آلفای اینترفرون پگیلاته حساس تر بود. یک تفاوت مهم بین دو ویروس این واقعیت است که – پس از عبور در سلول های Vero E6 – SARS-CoV-2 ظاهراً تحت فشار انتخاب قوی برای به دست آوردن جهش های تطبیقی در ژن پروتئین سنبله ای خود قرار دارد. این جهش ها یک «سایت کلافگی فورین مانند» را در منطقه ای که دامنه های S1 و S2 را به هم متصل می کند تغییر می دهند یا حذف می کنند و منجر به تغییر فنوتپیک بسیار برجسته ای در بررسی پلاک ها می شوند.