Τεχνολογία Υπερήχων Hielscher

Κυτταρική λύση των κυττάρων BL21 από ultrasonication

Bl21 κύτταρα είναι ένα στέλεχος του E. coli που χρησιμοποιείται ευρέως σε ερευνητικά εργαστήρια, βιοτεχνολογία και βιομηχανική παραγωγή λόγω της ικανότητάς τους να εκφράζουν πρωτεΐνες εξαιρετικά αποτελεσματική. Υπερήχων διαταραχή των κυττάρων, λύση και εκχύλιση πρωτεΐνης είναι η κοινή μέθοδος για την απομόνωση και τη συλλογή των στοχοθετημένων πρωτεϊνών από το κυτταρικό εσωτερικό των κυττάρων BL21. Ultrasonication διαταράσσει το κύτταρο εντελώς και απελευθερώνει όλες τις παγιδευμένες πρωτεΐνες, καθιστώντας το 100% της πρωτεΐνης διαθέσιμη.

BL21 Κύτταρα για την πρωτεϊνική έκφραση

E. coli bacteria such as BL21 cells are commonly lysed by ultrasonication in order to release expressed proteins, such as recombinant proteinsBl21 κύτταρο είναι ένα χημικά αρμόδιο βακτηριακό στέλεχος E. coli κατάλληλο για μετασχηματισμό και υψηλού επιπέδου έκφραση πρωτεΐνης χρησιμοποιώντας ένα σύστημα επαγωγής T7 RNA πολυμεράσης-IPTG. Τα κύτταρα BL21 επιτρέπουν την έκφραση πρωτεΐνης υψηλής απόδοσης οποιουδήποτε γονιδίου που βρίσκεται υπό τον έλεγχο ενός υποστηρικτή Τ7. Το στέλεχος E. coli BL21 (DE3) είναι ένα στέλεχος παραγωγής πρωτεΐνης με βάση την πολυμεράση T7 σε συνδυασμό με φορείς έκφρασης που βασίζονται σε αυξητικούς παράγοντες T7 και εφαρμόζεται ευρέως στα εργαστήρια και τη βιομηχανία για την παραγωγή ανασυνδυασμένες πρωτεΐνες. Στο BL21(DE3), η έκφραση της κωδικοποίησης γονιδίων η ανασυνδυασμένη πρωτεΐνη μεταγράφεται από το χρωμοσωμικά κωδικοποιημένο T7 RNA πολυμεράση (T7 RNAP), το οποίο μεταγράφει οκτώ φορές γρηγορότερα από το συμβατικό E. coli RNAP. Αυτό καθιστά το στέλεχος BL21 (DE3) εξαιρετικά αποτελεσματικό και μετατρέπει του σε ένα από τα πιο προτιμώμενα συστήματα κυττάρων έκφρασης πρωτεΐνης.

Πρωτόκολλο για την υπερηχητική λύση και την πρωτεϊνική εξαγωγή από τα κύτταρα BL21

Η κυτταρική λύση των κυττάρων BL21 εκτελείται ως επί το πλείστον με υπερήχους σε συνδυασμό με σαρκοσινικό νάτριο (επίσης γνωστή ως σαρκοσύλιο) ως ρυθμιστικό διάλυμα λύσης. Τα πλεονεκτήματα της υπερηχητικής διαταραχής των κυττάρων και της εκχύλισης πρωτεΐνης βρίσκονται στην αξιοπιστία, την αναπαραγωγιμότητα καθώς και την απλή, ασφαλή και ταχεία λειτουργία των υπερήχων. Το παρακάτω πρωτόκολλο δίνει μια κατεύθυνση βήμα προς βήμα για υπερήχων BL21 λύση κυττάρων:

Probe-τύπου insonifier UP200St για λύση

Υπερηχητικός διαταράκτης κυττάρων UP200St με μικρο-άκρη S26d2 για τη λύση και την εξαγωγή πρωτεΐνης

Αίτηση για πληροφορίες




Σημειώστε τις Πολιτική Απορρήτου.


  • Για την απομάκρυνση των πρωτεϊνών chaperone, τα βακτηριακά σφαιρίδια BL21 αναιωρούνται σε 50 ml παγωμένου ρυθμιστικού διαλύματος Νάτριο Tris-EDTA (STE) (που αποτελείται από 10 mM Tris-HCL, pH 8.0, 1 mM EDTA, 150 mM NaCl συμπληρωμένο με 100 mM PMSF).
  • Τα 500 ul του lysozyme (10 mg/ ml) προστίθενται και τα κύτταρα επωάζονται στον πάγο για 15 λεπτά.
  • Στη συνέχεια, προστίθενται 500 ul DTT και 7 ml σαρκοσύλ (10% (w/v) που αποτελείται από ρυθμιστικό διάλυμα STE).
  • Είναι σημαντικό να διατηρούνται όλα τα ρυθμιστικά διαλύματα καθαρισμού παγωμένα και να διατηρούνται τα δείγματα στον πάγο όλη την ώρα. Όλα τα βήματα καθαρισμού πρέπει να πραγματοποιηθούν στο κρύο δωμάτιο εάν είναι δυνατόν.
  • VialTweeter at the ultrasonic processor UP200ST

  • Για την υπερηχητική λύση και την εκχύλιση πρωτεΐνης, τα δείγματα VialTweeter πολυσυμμετοχικό υπερηχητικό για 4 x 30 sec σε πλάτος 100% με διάστημα 2 λεπτών μεταξύ κάθε υπερήχηση. Εναλλακτικά, ένας ομογενοποιητής υπερήχων τύπου καθετήρα με μικρο-άκρο π.χ., Uf200 ः t με S26d2 (3 x 30 sec, 2 λεπτά παύση μεταξύ υπερήχων κύκλους, 80% πλάτος) μπορεί να χρησιμοποιηθεί.
  • Για περαιτέρω βήματα καθαρισμού, τα δείγματα πρέπει να διατηρούνται σε πάγο ή εναλλακτικά να αποθηκεύονται στους -80°C μέχρι την περαιτέρω επεξεργασία.

Υπερηχητική λύση κάτω από τον έλεγχο θερμοκρασίας prescise

Ο ακριβής και αξιόπιστος έλεγχος θερμοκρασίας είναι ζωτικής σημασίας κατά το χειρισμό βιολογικών δειγμάτων. Οι υψηλές θερμοκρασίες ξεκινούν την θερμικά προκληθείσα πρωτεϊνική υποβάθμιση στα δείγματα.
Καθώς όλες οι μηχανικές τεχνικές προετοιμασίας του δείγματος, η υπερήχηση δημιουργεί θερμότητα. Ωστόσο, η θερμοκρασία των δειγμάτων μπορεί να ελεγχθεί καλά όταν χρησιμοποιείτε το VialTweeter. Σας παρουσιάζουμε διάφορες επιλογές για την παρακολούθηση και τον έλεγχο της θερμοκρασίας των δειγμάτων σας κατά την προετοιμασία τους με το VialTweeter και VialPress για ανάλυση.

  1. Παρακολούθηση της θερμοκρασίας του δείγματος: Ο υπερηχητικός επεξεργαστής UP200St, ο οποίος οδηγεί το VialTweeter, είναι εξοπλισμένος με ένα έξυπνο λογισμικό και έναν αισθητήρα θερμοκρασίας με δυνατότητα σύνδεσης. Συνδέστε τον αισθητήρα θερμοκρασίας στο UP200St και τοποθετήστε το άκρο του αισθητήρα θερμοκρασίας σε έναν από τους σωλήνες δείγματος. Μέσω ψηφιακής έγχρωμης οθόνης αφής, μπορείτε να ορίσετε στο μενού του UP200St ένα συγκεκριμένο εύρος θερμοκρασίας για το δείγμα υπερήχων σας. Ο υπερηχητικός παράγοντας θα σταματήσει αυτόματα όταν επιτευχθεί η μέγιστη θερμοκρασία και θα σταματήσει μέχρι να μειωθεί η θερμοκρασία του δείγματος στη χαμηλότερη τιμή της καθορισμένης θερμοκρασίας ∆. Στη συνέχεια, η υπερήχηση ξεκινά αυτόματα και πάλι. Αυτή η έξυπνη λειτουργία αποτρέπει την υποβάθμιση που προκαλείται από τη θερμότητα.
  2. Το μπλοκ VialTweeter μπορεί να προψυχωθεί. Τοποθετήστε το μπλοκ VialTweeter (μόνο το sonotrode χωρίς μετατροπέα!) στο ψυγείο ή τον καταψύκτη για να προψύξετε το μπλοκ τιτανίου βοηθά στην αναβολή της αύξησης της θερμοκρασίας του δείγματος. Εάν είναι δυνατόν, το ίδιο το δείγμα μπορεί να προψυκτιστεί πάρα πολύ.
  3. Χρησιμοποιήστε ξηρό πάγο για να κρυώσει κατά τη διάρκεια υπερήχηση. Χρησιμοποιήστε ένα ρηχό δίσκο γεμάτο με ξηρό πάγο και τοποθετήστε το VialTweeter στον πάγο, έτσι ώστε η θερμότητα μπορεί να διαλύσει γρήγορα.

Οι πελάτες σε όλο τον κόσμο χρησιμοποιούν το VialTweeter και το VialPress για την καθημερινή τους εργασία παρασκευής δείγματος σε βιολογικά, βιοχημικά, ιατρικά και κλινικά εργαστήρια. Το ευφυές λογισμικό και ο έλεγχος θερμοκρασίας του επεξεργαστή UP200St, η θερμοκρασία ελέγχεται αξιόπιστα και η θερμότητα-προκληθείσα υποβάθμιση δειγμάτων αποφεύχθηκε. Υπερήχων προετοιμασία δείγματος με το VialTweeter και VialPress παρέχει εξαιρετικά αξιόπιστα και αναπαραγώγιμα αποτελέσματα!

Βρείτε το βέλτιστο υπερηχητικό διαταράκτη για την εφαρμογή λύσης σας

Hielscher's industrial processors of the hdT series can be comfortable and user-friendly operated via browser remote control.Hielscher Ultrasonics είναι μακροπρόθεσμος έμπειρος κατασκευαστής υψηλής απόδοσης υπερήχων διαταράκτες κυττάρων και ομογενοποιητές για εργαστήρια, πάγκο-top και βιομηχανικά συστήματα κλίμακας. Το μέγεθος της βακτηριακής κυτταρικής καλλιέργειας, ο στόχος της έρευνας ή της παραγωγής σας και ο όγκος των κυττάρων που πρέπει να επεξεργάζονται ανά ώρα ή ημέρα είναι βασικοί παράγοντες για να βρείτε το σωστό υπερηχητικό διαταραχή των κυττάρων για την εφαρμογή σας.
Hielscher Υπερήχων προσφέρει διάφορες λύσεις για την ταυτόχρονη υπερήχηση των πολλαπλών δειγμάτων (μέχρι 10 φιαλίδια με το VialTweeter) και δείγματα μάζας (δηλαδή, πλάκες μικροτιτήρα / πλάκες ELISA με το UIP400MTP), καθώς και το κλασικό καθετήρα τύπου εργαστήριο ultrasonicator με διαφορετικά επίπεδα ισχύος από 50 έως 400 watt σε πλήρως βιομηχανική υπερήχων επεξεργαστές με έως και 16.000watts ανά μονάδα για εμπορική διαταραχή των κυττάρων και εξαγωγή πρωτεΐνης σε μεγάλη παραγωγή. Όλοι οι υπερηχητικοί hielscher κατασκευάζονται για τη λειτουργία 24 ώρες το 24ωρο, 7 ημέρες την εβδομάδα/365 κάτω από το πλήρες φορτίο. Η ευρωστία και η αξιοπιστία είναι βασικά χαρακτηριστικά των υπερηχητικών συσκευών μας.
Όλοι οι ψηφιακοί υπερηχητικοί ομογενοποιητές είναι εξοπλισμένοι με το έξυπνο λογισμικό, την χρωματισμένη επίδειξη αφής και την αυτόματη protocolling στοιχείων, τα οποία κάνουν τη υπερηχητική συσκευή σε ένα κατάλληλο εργαλείο εργασίας στις εγκαταστάσεις εργαστηρίων και παραγωγής.
Ενημερώστε μας, τι είδους κύτταρα, τι όγκο, με ποια συχνότητα και με ποιο στόχο έχετε να επεξεργαστείτε τα βιολογικά δείγματα σας. Θα σας προτείνουμε το πιο κατάλληλο υπερηχητικό ς διαταράκτης κυττάρων για τις απαιτήσεις της διαδικασίας σας.

Ο παρακάτω πίνακας σας δίνει μια ένδειξη της κατά προσέγγιση ικανότητας επεξεργασίας των υπερηχητικών συστημάτων μας από συμπαγείς χειρός ομογενοποιητές και MultiSample Ultrasonicators σε βιομηχανικούς επεξεργαστές υπερήχων για εμπορικές εφαρμογές:

Μαζική Όγκος Ρυθμός ροής Προτεινόμενες συσκευές
Πλάκες 96 φρεατίων / μικροτιετών μ.δ. UIP400MTP
10 φιαλίδια à 0,5 έως 1,5mL μ.δ. VialTweeter σε UP200St
0.01 έως 250mL 5 έως 100mL/min UP50H
0.01 έως 500mL 10 έως 200 ml / λεπτό UP100H
10 έως 2000mL 20 έως 400mL / λεπτό Uf200 ः t, UP400St
0.1 έως 20 λίτρα 0.2 έως 4 λίτρα / λεπτό UIP2000hdT
10 έως 100L 2 έως 10 λίτρα / λεπτό UIP4000hdT
μ.δ. 10 έως 100 λίτρα / λεπτό UIP16000
μ.δ. μεγαλύτερος σύμπλεγμα UIP16000

Επικοινωνήστε μαζί μας! / Ρωτήστε μας!

Ζητήστε περισσότερες πληροφορίες

Παρακαλούμε χρησιμοποιήστε την παρακάτω φόρμα για να ζητήσετε πρόσθετες πληροφορίες σχετικά με υπερήχους επεξεργαστές, εφαρμογές και τιμή. Θα χαρούμε να συζητήσουμε τη διαδικασία σας μαζί σας και να σας προσφέρουμε ένα υπερηχητικό σύστημα που πληροί τις απαιτήσεις σας!









Παρακαλείστε να σημειώσετε ότι η Πολιτική Απορρήτου.


Ultrasonicator UP200Ht with microtip S26d2 for ultrasonic lysis of biological samples

Υπερήχων Uf200 ः t με 2mm microtip S26d2 για την υπερήχηση των μικρών δειγμάτων

Λογοτεχνία / Αναφορές



Γεγονότα που αξίζει να γνωρίζουμε

Βακτήρια Escherichia Coli

Escherichia coli είναι ένας τύπος βακτηρίων, που είναι μη-σπόρια-διαμόρφωση, Gram-αρνητικό και χαρακτηρίζεται από τη μορφή μιας ευθείας ράβδου. E.coli βακτήρια είναι παρόντες στο περιβάλλον, τα τρόφιμα, και τα έντερα των ανθρώπων και των ζώων. E. coli είναι συνήθως motile με τη χρήση peritrichous flagella, αλλά υπάρχουν μη μυρμηγκοβύθους τύπους, πάρα πολύ. Το E.coli είναι οι λεγόμενοι ευαερωτευτικά αναερόβιοι οργανισμοί χημειοοργανοτροφίας, πράγμα που σημαίνει ότι είναι ικανοί τόσο για αναπνευστικό όσο και για ζυμωτικό μεταβολισμό. Οι περισσότεροι τύποι E.coli είναι καλοήθεις και πληρούν χρήσιμες λειτουργίες στο σώμα, π.χ. καταστέλλοντας την ανάπτυξη επιβλαβών βακτηριακών ειδών, συνθεκώνοντας βιταμίνες κ.λπ.
Το κύτταρο βακτηριδίων Escherichia coli του αποκαλούμενου τύπου Β είναι μια ειδική κατηγορία στελεχών E.coli, τα οποία χρησιμοποιούνται ευρέως στην έρευνα για τη διερεύνηση μηχανισμών όπως η ευαισθησία βακτηριοφάγων ή τα συστήματα τροποποίησης περιορισμού. Επιπλέον, τα βακτήρια E.coli αποτιμώνται ως αξιόπιστα άλογο εργασίας για την έκφραση πρωτεϊνών στα εργαστήρια βιοτεχνολογίας και βιοεπιστημών. Για παράδειγμα, το E.coli χρησιμοποιείται για τη σύνθεση ενώσεων όπως πρωτεΐνες και ολιγοσακχαρίτες σε βιομηχανική κλίμακα. Λόγω των ειδικών χαρακτηριστικών, όπως η ανεπάρκεια πρωτεάσης, χαμηλή παραγωγή οξικού σε υψηλό επίπεδο γλυκόζης, και αυξημένη διαπερατότητα, E. coli Β κύτταρα είναι αυτός πιο συχνά χρησιμοποιούνται κύτταρα ξενιστών για την παραγωγή γενετικά τροποποιημένων πρωτεϊνών.

Ανασυνδυασμένη πρωτεΐνη

Οι ανασυνδυασμένες πρωτεΐνες (rProt) αποκτούν σημαντική σημασία στους πολλαπλούς κλάδους, συμπεριλαμβανομένης της χημικής παραγωγής, της φαρμακευτικής, της αισθητικής, της ιατρικής του ανθρώπου και των ζώων, της γεωργίας, των τροφίμων καθώς και των βιομηχανιών επεξεργασίας αποβλήτων.
Η παραγωγή ανασυνδυασμένης πρωτεΐνης απαιτεί τη χρήση ενός συστήματος έκφρασης. Ως εκφράζοντας τα συστήματα κυττάρων για την παραγωγή του ανασυνδυασμένου DNA, και τα προκαρυωτικά και ευκαρυωτικά κύτταρα μπορούν να χρησιμοποιηθούν. Ενώ τα βακτηριακά κύτταρα χρησιμοποιούνται ευρύτερα για την πρωτεϊνική έκφραση λόγω των παραγόντων όπως το χαμηλό κόστος, η εύκολη επεκτασιμότητα και οι απλές συνθήκες μέσων, τα θηλαστικά, η μαγιά, τα άλγη, τα έντομα και τα κύτταρα-ελεύθερα συστήματα είναι καθιερωμένες εναλλακτικές λύσεις. Ο τύπος πρωτεΐνης, η λειτουργική δραστηριότητα, καθώς και η απαιτούμενη απόδοση της εκφρασμένης πρωτεΐνης επηρεάζουν την επιλογή του κυτταρικού συστήματος που χρησιμοποιείται για την έκφραση των πρωτεϊνών.
Για να εκφραστεί ανασυνδυασμένη πρωτεΐνη, ένα συγκεκριμένο κύτταρο πρέπει να μεταμφιεζθεί με ένα διάνυσμα DNA που περιέχει το πρότυπο του ανασυνδυασμένου DNA. Στη συνέχεια, τα κελιά που έχουν μεταμθιστεί με το πρότυπο είναι καλλιεργημένα. Ως συνέπεια του κυτταρικού μηχανισμού, τα κύτταρα μεταγράφουν και μεταφράζουν την πρωτεΐνη ενδιαφέροντος, παράγοντας έτσι τη στοχευμένη πρωτεΐνη.
Καθώς οι εκφρασμένες πρωτεΐνες παγιδεύονται στην κυτταρική μήτρα, το κύτταρο πρέπει να διασπαστούν (διαταραγμένες και σπασμένες) για να απελευθερώσουν τις πρωτεΐνες. Σε ένα επόμενο βήμα καθαρισμού, η πρωτεΐνη χωρίζεται και καθαρίζεται.
Η πρώτη ανασυνδυασμένη πρωτεΐνη που χρησιμοποιήθηκε στη θεραπεία ήταν η ανασυνδυασμένη ανθρώπινη ινσουλίνη το 1982. Σήμερα, περισσότεροι από 170 τύποι ανασυνδυασμένης πρωτεΐνης παράγονται παγκοσμίως για ιατρικές θεραπείες. Οι συνήθως χρησιμοποιούμενες ανασυνδυασμένες πρωτεΐνες που χρησιμοποιούνται στην ιατρική είναι για παράδειγμα ανασυνδυασμένες ορμόνες, ιντερφερόνες, ιντερφερίνες, αυξητικοί παράγοντες, παράγοντες νέκρωσης όγκων, παράγοντες πήξης του αίματος, θρομβολυτικά φάρμακα και ένζυμα για τη θεραπεία σημαντικών ασθενειών όπως ο διαβήτης, ο νανισμός, το έμφραγμα του μυοκαρδίου, η συμφορητική καρδιακή ανεπάρκεια, η εγκεφαλική αποπληξία, η σκλήρυνση κατά πλάκας, η ουδετεροπενία, η θρομβοπενία, η αναιμία, η ηπατίτιδα, η ρευματοειδής αρθρίτιδα, το άσθμα, η νόσος του Crohn, και οι θεραπείες καρκίνου. (βλ. Phuc V. Pham, στην Omics Technologies and Bio-Engineering, 2018)


Hielscher Ultrasonics supplies high-performance ultrasonic homogenizers from lab to industrial size.

Υπερήχων υψηλής απόδοσης! Σειρά προϊόντων Hielscher καλύπτει το πλήρες φάσμα από το συμπαγές εργαστήριο ultrasonicator πάνω από πάγκο-top μονάδες σε πλήρη βιομηχανική υπερήχων συστήματα.