Τεχνολογία Υπερήχων Hielscher

Πρωτόκολλο για αδρανοποίηση του sars-cov-2 coronavirus με υπερήχηση

Το Hielscher VialTweeter είναι μια μοναδική μονάδα προετοιμασίας πολλαπλών δειγμάτων υπερήχων, η οποία χρησιμοποιείται για την αδρανοποίηση του coronavirus SARS-COV-2. Το VialTweeter επιτρέπει την ταυτόχρονη προετοιμασία έως και 10 φιαλιδίων δείγματος και, ως εκ τούτου, είναι η ιδανική μονάδα για την επεξεργασία μαζικού δείγματος.

Αδρανοποίηση του coronavirus SARS-CoV-2 με το VialTweeter

Μετά την αφαίρεση του στερεωτικού, μονοστρώματα πλύθηκαν τρεις φορές με φωσφορικό ρυθμιστικό ορό (PBS) πριν από την ξύσιμο των κυττάρων σε 1mL MEM/5% FBS και sonicated (3 × 10 δευτερόλεπτα, 10 δευτερόλεπτα μακριά σε 100% δύναμη και πλάτος) χρησιμοποιώντας τον επεξεργαστή υπερήχων Hielscher Με VialTweeter Συνημμένο. Τα υπερκείμενοι αποσαφηνίστηκαν με φυγοκέντρηση στα 3000 × g για 10 λεπτά. 

Διαβάστε το πλήρες πρωτόκολλο εδώ για την αδρανοποίηση του coronavirus SARS-CoV-2 από την Welch et al. (2020) παρακάτω:

Κύτταρα και ιός

Κύτταρα Vero E6 (Vero C1008· ATCC CRL-1586) καλλιεργήθηκαν στο ελάχιστο βασικό μέσο (MEM) του τροποποιημένου Eagle, το οποίο συμπληρώθηκε με 10% (v/v) ορό εμβρυϊκής γάμπας (FCS). Ο ιός που χρησιμοποιήθηκε ήταν το στέλεχος του SARS-CoV-2 hCOV-19/England/2/2020, απομονωμένο από την PHE από το πρώτο σύμπλεγμα ασθενών στο Ηνωμένο Βασίλειο στις 29/01/2020. Ο ιός αυτός αποκτήθηκε κατά τη διέλευση 1 και χρησιμοποιήθηκε για μελέτες αδρανοποίησης στο πέρασμα 2 ή 3.
Για τα αντιδραστήρια και τις χημικές ουσίες που χρησιμοποιούνται για την αδρανοποίηση SARS-CoV-2 καθώς και για την απομάκρυνση της κυτταροτοξικότητας του αντιδραστηρίου, ανατρέξτε στην επιστημονική έκθεση του Welch et al. (2020).

The ultrasonic sample preparation unit VialTweeter is used for the inactivation of SARS-CoV-2 coronavirus

Αδρανοποίηση του ιού από απορρυπαντικά – Πρωτόκολλο αδρανοποίησης coronavirus SARS-CoV-2 από την Welch et al. 2020

Απενεργοποίηση SARS-CoV-2

Για τα εμπορικά προϊόντα, παρασκευάσματα ιών (υγρό καλλιέργειας ιστών, τίτλοι που κυμαίνονται από 1 × 106 έως 1 × 108 PFU/ml) υποβλήθηκαν σε θεραπεία εις τριπλούν με αντιδραστήρια σε συγκεντρώσεις και για τους χρόνους επαφής που συνιστώνται στις οδηγίες χρήσης του κατασκευαστή, όπου υπάρχουν, ή για συγκεντρώσεις και χρόνους που ζητήθηκαν ειδικά από τα εργαστήρια δοκιμών. Όταν ο κατασκευαστής έδωσε μια σειρά συγκεντρώσεων, δοκιμάστηκε η χαμηλότερη αναλογία προϊόντος προς δείγμα (δηλαδή η χαμηλότερη συνιστώμενη συγκέντρωση του προϊόντος δοκιμής). Τα αντιδραστήρια του σωλήνα μεταφοράς δείγματος ελέγχθηκαν με τη χρήση αναλογίας ενός όγκου υγρού καλλιέργειας ιστών σε δέκα όγκους αντιδραστηρίου, εκτός εάν ο κατασκευαστής έχει καθορίσει λόγο όγκου υγρού δείγματος προς αντιδραστήριο. Τα απορρυπαντικά, τα στερεωτικά και οι διαλύτες ελέγχθηκαν στις αναφερόμενες συγκεντρώσεις για τους υποδεικνυόμενους χρόνους. Όλα τα βήματα αδρανοποίησης πραγματοποιήθηκαν σε θερμοκρασία δωματίου περιβάλλοντος (18 – 25°C). Για τη δοκιμή εναλλακτικών τύπων δειγμάτων, ο ιός καρφώθηκε στον υποδεικνυόμενο πίνακα δείγματος σε αναλογία 1:9 και στη συνέχεια υποβλήθηκε σε επεξεργασία με αντιδραστήρια δοκιμής όπως ανωτέρω. Όλα τα πειράματα περιελάμβαναν δείγματα εικονικής επεξεργασίας ελέγχου εις τριπλούν με ισοδύναμο όγκο PBS στη θέση του αντιδραστήριου δοκιμής. Αμέσως μετά τον απαιτούμενο χρόνο επαφής, η επεξεργασία 1mL δείγματος που υποβλήθηκε σε επεξεργασία με τη χρήση της κατάλληλα επιλεγμένης μήτρας διήθησης. Η αφαίρεση αντιδραστηρίου για τη δοκιμή αδρανοποίησης πραγματοποιήθηκε σε μια μεγαλύτερη μορφή στήλης περιστροφής χρησιμοποιώντας pierce 4mL απορρυπαντικό αφαίρεσης spin στήλες (Thermo Fisher), ή με την πλήρωση άδειο Pierce 10mL στήλες φυγοκέντρησης ικανότητας (Thermo Fisher) με SM2 Bio-Χάντρες, Sephacryl S-400HR ή Sephadex LH-20 για να δώσει 4mL συσκευασμένα χάντρες / ρητίνη. Για τον καθαρισμό με τη χρήση φίλτρων Amicon, 2 δείγματα 500μl 2 × 500μl καθαρίστηκαν χρησιμοποιώντας δύο φυγοκεντρικά φίλτρα με τη μέθοδο που περιγράφηκε προηγουμένως και στη συνέχεια συγκεντρώθηκαν. Για φορμαλδεΰδη και φορμαλδεΰδη με αφαίρεση γλουταραλδεΰδης, χρησιμοποιήθηκε ένα φίλτρο με όγκο δείγματος 1× 500μl, επαναιωρήθηκε μετά την επεξεργασία σε 500μl PBS και προστέθηκε σε 400ul MEM/5% FBS. Για αδρανοποίηση μολυσμένων VialTweeter at the ultrasonic processor UP200STμονοστρωτικά, 12,5 εκ.2 φιάλες κυττάρων Vero E6 (2,5 × 106 κύτταρα/φιάλη σε 2,5mL MEM/5% FBS) μολύνθηκαν στο MOI 0,001 και επωάστηκαν στους 37°C/5% CO2 για 24 ώρες. Το υπερκείμενο αφαιρέθηκε και τα κύτταρα σταθερά με 5mL φορμαλδεΰδης, ή φορμαλδεΰδης και γλουταραλδεΰδης σε θερμοκρασία δωματίου για 15 ή 60 λεπτά. Το στερεωτικό αφαιρέθηκε, και τα μονοστρώματα πλύθηκαν τρεις φορές με PBS πριν από την ξύσιμο των κυττάρων σε 1mL MEM/5% FBS και sonicated (3 × 10 δευτερόλεπτα επάνω, 10 δευτερόλεπτα μακριά σε 100% δύναμη και πλάτος) χρησιμοποιώντας ένα UP200St με το εξάρτημα VialTweeter (τεχνολογία υπερήχων Hielscher). Τα υπερκείμενοι αποσαφηνίστηκαν με φυγοκέντρηση στα 3000 × g για 10 λεπτά.

VialTweeter για την έντονη κατεργασία με υπερήχους των κλειστών φιαλιδίων

VialTweeter για την έντονη υπερήχηση των κλειστών φιαλιδίων

Αίτηση για πληροφορίες




Σημειώστε τις Πολιτική Απορρήτου.


Various reagents have been tested for the inactivation of the SARS-CoV-2 coronavirus using the ultrasonic sample prep unit VialTweeter.

Λεπτομέρειες του αντιδραστηρίου που χρησιμοποιείται για την αδρανοποίηση του coronavirus SARS-CoV-2 με τον υπερηχητικό VialTweeter σύμφωνα με το πρωτόκολλο του Welch et al. 2020

Το πλήρες πρωτόκολλο, συμπεριλαμβανομένης της χρήσης του Hielscher VialTweeter μπορεί να βρεθεί εδώ:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

The multi-sample ultrasonicator VialTweeter allows for simultaneous sample preparation of up to 10 vials under same process conditions. The VialTweeter is an established ultrasonic device used for the inactivation of corona virus SARS-CoV-2 (Click to enlarge!)

VialTweeter για την υπερηχητική αδρανοποίηση ιών

Πλεονεκτήματα του VialTweeter με μια ματιά

  • Υπερήχηση έως και 10 φιαλιδίων ταυτόχρονα
  • Καμία διασταυρούμενη μόλυνση
  • Καμία απώλεια δείγματος
  • Αυτόματη καταγραφή δεδομένων
  • Εύκολος και ασφαλής να λειτουργήσει
Το VialTweeter χρησιμοποιείται επίσης για

  • Κυτταρική λύση
  • Διαταραχή ιικών σωματιδίων
  • Εκχύλιση νουκλεϊνικού οξέος: Απομόνωση DNA/RNA
  • Κατακερματισμός DNA/RNA
  • Διαλυτοποίηση
  • Εξελιγμένοι υπερηχητικοί διασπαστές και διαταράκτες κυττάρων

    Το πολυ-δείγμα ultrasonicator VialTweeter είναι μόνο ένα από τα πολλά υπερηχητικά διαλύματα για την προετοιμασία του δείγματος σε βιολογικά, βιοχημικά και κλινικά εργαστήρια. Hielscher Ultrasonics προσφέρει το ιδανικό υπερηχητικό dissembrator για την εφαρμογή σας, π.χ. λύση κυττάρων, εκχύλιση κυττάρων, ομογενοποίηση ιστού, lysate solubilization, διάλυση, δείγμα εξαέρωση κλπ.
    Ενημερώστε μας πόσα δείγματα πρέπει να επεξεργαστείτε ανά ώρα και ημέρα, αν προτιμάτε άμεση ή έμμεση υπερήχηση και ποιος είναι ο στόχος της θεραπείας με υπερήχους δείγμα είναι. Θα σας προτείνουμε την πιο κατάλληλη μονάδα υπερήχων για την καθημερινή ρουτίνα εργασίας σας!
    Οι ψηφιακοί υπερηχητικοί επεξεργαστές Hielscher Ultrasonics είναι εξοπλισμένοι με το έξυπνο λογισμικό, την αυτόματη καταγραφή στοιχείων, τις εύκολες επιλογές προ-ρύθμισης για τον έλεγχο θερμοκρασίας, τη διάρκεια υπερήχων, τον τρόπο κύκλων/σφυγμού καθώς επίσης και το φωτισμό δειγμάτων και τον τηλεχειρισμό μηχανών αναζήτησης. Προσπαθούμε να κάνουμε τις συσκευές υπερήχων μας όσο το δυνατόν πιο έξυπνες, έτσι ώστε η έρευνα και η ρουτίνα εργασίας σας να γίνονται όσο το δυνατόν πιο βολικές και επιτυχημένες.
    Κάντε κλικ εδώ, για να βρείτε περισσότερες εφαρμογές, συμπεριλαμβανομένων των πρωτοκόλλων της προετοιμασίας υπερήχων δείγμα με το VialTweeter!

    Επικοινωνήστε μαζί μας! / Ρωτήστε μας!

    Ζητήστε περισσότερες πληροφορίες

    Παρακαλούμε χρησιμοποιήστε την παρακάτω φόρμα για να ζητήσετε πρόσθετες πληροφορίες σχετικά με υπερήχους επεξεργαστές, εφαρμογές και τιμή. Θα χαρούμε να συζητήσουμε τη διαδικασία σας μαζί σας και να σας προσφέρουμε ένα υπερηχητικό σύστημα που πληροί τις απαιτήσεις σας!









    Παρακαλείστε να σημειώσετε ότι η Πολιτική Απορρήτου.


    Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

    Hielscher Υπερήχων κατασκευάζει υψηλής απόδοσης υπερήχων ομογενοποιητές για την ανάμειξη εφαρμογών, διασποράς, γαλακτωματοποίηση και εκχύλιση σε εργαστήριο, πιλοτική και βιομηχανική κλίμακα.

    Λογοτεχνία / Αναφορές



    Γεγονότα που αξίζει να γνωρίζουμε

    Τι είναι τα κύτταρα Vero;

    Vero E6, επίσης γνωστή ως Vero C1008 (ATCC Αριθ. CRL-1586) είναι κυτταρική σειρά κλώνων από vero 76 και χρησιμοποιείται στην έρευνα των κορωνιών SARS-CoV και SARS-CoV-2. Vero κύτταρα είναι μια γενεαλογία των κυττάρων που χρησιμοποιούνται σε καλλιέργειες κυττάρων. Το «Vero’ η γενεαλογία απομονώθηκε από τα επιθηλιακά κύτταρα νεφρών που εξάγονται από έναν αφρικανικό πράσινο πίθηκο (Chlorocebus sp.).
    Vero E6 κύτταρα δείχνουν κάποια αναστολή της επαφής, έτσι είναι κατάλληλα για τη διάδοση των ιών που αναπαράγονται αργά. Οι κυτταρικές σειρές Vero E6 χρησιμοποιούνται συνήθως για τη διερεύνηση της κυτταροπαθολογίας των κορονιών SARS-CoV και SARS-CoV-2, καθώς τα κύτταρα Vero (αφρικανικά πράσινα κύτταρα νεφρών πιθήκων) παρουσιάζουν άφθονη έκφραση των υποδοχέων ενζύμου μετατροπής αγγειοτενσίνης 2 (ACE2). Οι υποδοχείς ACE2 είναι ένα σημαντικό σημείο σύνδεσης για τον coronavirus SARS-CoV-2.
    Για παράδειγμα, η Ogando et al. (2020) διαπίστωσε ότι το SARS-CoV-2 – σε σύγκριση με το SARS-CoV – παράγονται υψηλότερα επίπεδα ενδοκυτταρικού ιικού RNA, αλλά εντυπωσιακά περίπου 50 φορές λιγότερο μολυσματική ιογενή απογόνους ανακτήθηκε από το μέσο καλλιέργειας. Επιπλέον, διαπίστωσαν ότι η ευαισθησία των δύο ιών σε τρεις καθιερωμένους αναστολείς της αναπαραγωγής του coronavior (Remdesivir, Aliporivir και χλωροκίνη) είναι πολύ παρόμοια, αλλά ότι η λοίμωξη SARS-CoV-2 ήταν σημαντικά πιο ευαίσθητη στην προθερμαινομεία των κυττάρων με πεγκυλιωμένη ιντερφερόνη άλφα. Μια σημαντική διαφορά μεταξύ των δύο ιών είναι το γεγονός ότι – κατά τη διαβίβαση σε κύτταρα Vero E6 – SARS-CoV-2 προφανώς είναι υπό ισχυρή πίεση επιλογής για να αποκτήσουν προσαρμοστικές μεταλλάξεις στο γονίδιο πρωτεΐνη ακίδα του. Αυτές οι μεταλλάξεις αλλάζουν ή διαγράφουν μια υποτιθέμενη «θέση διάσπασης που μοιάζει με φουρίνη» στην περιοχή που συνδέει τους τομείς S1 και S2 και οδηγούν σε μια πολύ εμφανή φαινοτυπική αλλαγή στις δοκιμασίες πλάκας.