Το Hielscher VialTweeter είναι μια μοναδική μονάδα προετοιμασίας πολλαπλών δειγμάτων υπερήχων, η οποία χρησιμοποιείται για την αδρανοποίηση του coronavirus SARS-COV-2. Το VialTweeter επιτρέπει την ταυτόχρονη προετοιμασία έως και 10 φιαλιδίων δείγματος και, ως εκ τούτου, είναι η ιδανική μονάδα για την επεξεργασία μαζικού δείγματος.

Αδρανοποίηση του coronavirus SARS-CoV-2 με το VialTweeter

Μετά την αφαίρεση του στερεωτικού, μονοστρώματα πλύθηκαν τρεις φορές με φωσφορικό ρυθμιστικό ορό (PBS) πριν από την ξύσιμο των κυττάρων σε 1mL MEM/5% FBS και sonicated (3 × 10 δευτερόλεπτα, 10 δευτερόλεπτα μακριά σε 100% δύναμη και πλάτος) χρησιμοποιώντας τον επεξεργαστή υπερήχων Hielscher Με VialTweeter Συνημμένο. Τα υπερκείμενοι αποσαφηνίστηκαν με φυγοκέντρηση στα 3000 × g για 10 λεπτά. 

Διαβάστε το πλήρες πρωτόκολλο εδώ για την αδρανοποίηση του coronavirus SARS-CoV-2 από την Welch et al. (2020) παρακάτω:

Κύτταρα και ιός

Κύτταρα Vero E6 (Vero C1008· ATCC CRL-1586) καλλιεργήθηκαν στο ελάχιστο βασικό μέσο (MEM) του τροποποιημένου Eagle, το οποίο συμπληρώθηκε με 10% (v/v) ορό εμβρυϊκής γάμπας (FCS). Ο ιός που χρησιμοποιήθηκε ήταν το στέλεχος του SARS-CoV-2 hCOV-19/England/2/2020, απομονωμένο από την PHE από το πρώτο σύμπλεγμα ασθενών στο Ηνωμένο Βασίλειο στις 29/01/2020. Ο ιός αυτός αποκτήθηκε κατά τη διέλευση 1 και χρησιμοποιήθηκε για μελέτες αδρανοποίησης στο πέρασμα 2 ή 3.
Για τα αντιδραστήρια και τις χημικές ουσίες που χρησιμοποιούνται για την αδρανοποίηση SARS-CoV-2 καθώς και για την απομάκρυνση της κυτταροτοξικότητας του αντιδραστηρίου, ανατρέξτε στην επιστημονική έκθεση του Welch et al. (2020).

Αδρανοποίηση του ιού από απορρυπαντικά – Πρωτόκολλο αδρανοποίησης coronavirus SARS-CoV-2 από την Welch et al. 2020

Απενεργοποίηση SARS-CoV-2

Για τα εμπορικά προϊόντα, παρασκευάσματα ιών (υγρό καλλιέργειας ιστών, τίτλοι που κυμαίνονται από 1 × 10⁶ έως 1 × 10⁸ PFU/ml) υποβλήθηκαν σε θεραπεία εις τριπλούν με αντιδραστήρια σε συγκεντρώσεις και για τους χρόνους επαφής που συνιστώνται στις οδηγίες χρήσης του κατασκευαστή, όπου υπάρχουν, ή για συγκεντρώσεις και χρόνους που ζητήθηκαν ειδικά από τα εργαστήρια δοκιμών. Όταν ο κατασκευαστής έδωσε μια σειρά συγκεντρώσεων, δοκιμάστηκε η χαμηλότερη αναλογία προϊόντος προς δείγμα (δηλαδή η χαμηλότερη συνιστώμενη συγκέντρωση του προϊόντος δοκιμής). Τα αντιδραστήρια του σωλήνα μεταφοράς δείγματος ελέγχθηκαν με τη χρήση αναλογίας ενός όγκου υγρού καλλιέργειας ιστών σε δέκα όγκους αντιδραστηρίου, εκτός εάν ο κατασκευαστής έχει καθορίσει λόγο όγκου υγρού δείγματος προς αντιδραστήριο. Τα απορρυπαντικά, τα στερεωτικά και οι διαλύτες ελέγχθηκαν στις αναφερόμενες συγκεντρώσεις για τους υποδεικνυόμενους χρόνους. Όλα τα βήματα αδρανοποίησης πραγματοποιήθηκαν σε θερμοκρασία δωματίου περιβάλλοντος (18 – 25°C). Για τη δοκιμή εναλλακτικών τύπων δειγμάτων, ο ιός καρφώθηκε στον υποδεικνυόμενο πίνακα δείγματος σε αναλογία 1:9 και στη συνέχεια υποβλήθηκε σε επεξεργασία με αντιδραστήρια δοκιμής όπως ανωτέρω. Όλα τα πειράματα περιελάμβαναν δείγματα εικονικής επεξεργασίας ελέγχου εις τριπλούν με ισοδύναμο όγκο PBS στη θέση του αντιδραστήριου δοκιμής. Αμέσως μετά τον απαιτούμενο χρόνο επαφής, η επεξεργασία 1mL δείγματος που υποβλήθηκε σε επεξεργασία με τη χρήση της κατάλληλα επιλεγμένης μήτρας διήθησης. Η αφαίρεση αντιδραστηρίου για τη δοκιμή αδρανοποίησης πραγματοποιήθηκε σε μια μεγαλύτερη μορφή στήλης περιστροφής χρησιμοποιώντας pierce 4mL απορρυπαντικό αφαίρεσης spin στήλες (Thermo Fisher), ή με την πλήρωση άδειο Pierce 10mL στήλες φυγοκέντρησης ικανότητας (Thermo Fisher) με SM2 Bio-Χάντρες, Sephacryl S-400HR ή Sephadex LH-20 για να δώσει 4mL συσκευασμένα χάντρες / ρητίνη. Για τον καθαρισμό με τη χρήση φίλτρων Amicon, 2 δείγματα 500μl 2 × 500μl καθαρίστηκαν χρησιμοποιώντας δύο φυγοκεντρικά φίλτρα με τη μέθοδο που περιγράφηκε προηγουμένως και στη συνέχεια συγκεντρώθηκαν. Για φορμαλδεΰδη και φορμαλδεΰδη με αφαίρεση γλουταραλδεΰδης, χρησιμοποιήθηκε ένα φίλτρο με όγκο δείγματος 1× 500μl, επαναιωρήθηκε μετά την επεξεργασία σε 500μl PBS και προστέθηκε σε 400ul MEM/5% FBS. Για αδρανοποίηση μολυσμένων μονοστρωτικά, 12,5 εκ.² φιάλες κυττάρων Vero E6 (2,5 × 10⁶ κύτταρα/φιάλη σε 2,5mL MEM/5% FBS) μολύνθηκαν στο MOI 0,001 και επωάστηκαν στους 37°C/5% CO₂ για 24 ώρες. Το υπερκείμενο αφαιρέθηκε και τα κύτταρα σταθερά με 5mL φορμαλδεΰδης, ή φορμαλδεΰδης και γλουταραλδεΰδης σε θερμοκρασία δωματίου για 15 ή 60 λεπτά. Το στερεωτικό αφαιρέθηκε, και τα μονοστρώματα πλύθηκαν τρεις φορές με PBS πριν από την ξύσιμο των κυττάρων σε 1mL MEM/5% FBS και sonicated (3 × 10 δευτερόλεπτα επάνω, 10 δευτερόλεπτα μακριά σε 100% δύναμη και πλάτος) χρησιμοποιώντας ένα UP200St με το εξάρτημα VialTweeter (τεχνολογία υπερήχων Hielscher). Τα υπερκείμενοι αποσαφηνίστηκαν με φυγοκέντρηση στα 3000 × g για 10 λεπτά.

Λεπτομέρειες του αντιδραστηρίου που χρησιμοποιείται για την αδρανοποίηση του coronavirus SARS-CoV-2 με τον υπερηχητικό VialTweeter σύμφωνα με το πρωτόκολλο του Welch et al. 2020

Το πλήρες πρωτόκολλο, συμπεριλαμβανομένης της χρήσης του Hielscher VialTweeter μπορεί να βρεθεί εδώ:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

Εξελιγμένοι υπερηχητικοί διασπαστές και διαταράκτες κυττάρων

Το πολυ-δείγμα ultrasonicator VialTweeter είναι μόνο ένα από τα πολλά υπερηχητικά διαλύματα για την προετοιμασία του δείγματος σε βιολογικά, βιοχημικά και κλινικά εργαστήρια. Hielscher Ultrasonics προσφέρει το ιδανικό υπερηχητικό dissembrator για την εφαρμογή σας, π.χ. λύση κυττάρων, εκχύλιση κυττάρων, ομογενοποίηση ιστού, lysate solubilization, διάλυση, δείγμα εξαέρωση κλπ.
Ενημερώστε μας πόσα δείγματα πρέπει να επεξεργαστείτε ανά ώρα και ημέρα, αν προτιμάτε άμεση ή έμμεση υπερήχηση και ποιος είναι ο στόχος της θεραπείας με υπερήχους δείγμα είναι. Θα σας προτείνουμε την πιο κατάλληλη μονάδα υπερήχων για την καθημερινή ρουτίνα εργασίας σας!
Οι ψηφιακοί υπερηχητικοί επεξεργαστές Hielscher Ultrasonics είναι εξοπλισμένοι με το έξυπνο λογισμικό, την αυτόματη καταγραφή στοιχείων, τις εύκολες επιλογές προ-ρύθμισης για τον έλεγχο θερμοκρασίας, τη διάρκεια υπερήχων, τον τρόπο κύκλων/σφυγμού καθώς επίσης και το φωτισμό δειγμάτων και τον τηλεχειρισμό μηχανών αναζήτησης. Προσπαθούμε να κάνουμε τις συσκευές υπερήχων μας όσο το δυνατόν πιο έξυπνες, έτσι ώστε η έρευνα και η ρουτίνα εργασίας σας να γίνονται όσο το δυνατόν πιο βολικές και επιτυχημένες.
Κάντε κλικ εδώ, για να βρείτε περισσότερες εφαρμογές, συμπεριλαμβανομένων των πρωτοκόλλων της προετοιμασίας υπερήχων δείγμα με το VialTweeter!