Προετοιμασία δείγματος υπερήχων για δοκιμασίες ELISA
Δοκιμασίες όπως η ELISA χρησιμοποιούνται ευρέως για διάγνωση in vitro, ανίχνευση πρωτεϊνών που σχετίζονται με ασθένειες και ποιοτικό έλεγχο (π.χ. παρακολούθηση αλλεργιογόνων τροφίμων). Η προετοιμασία του δείγματος υπερήχων είναι μια ταχεία, αξιόπιστη και αναπαραγώγιμη τεχνική για τη λύση των κυττάρων και την απομόνωση ενδοκυτταρικών πρωτεϊνών, DNA, RNA και οργανιδίων. Hielscher Υπέρηχοι προσφέρει διάφορες λύσεις υπερήχων για την κατάλληλη προετοιμασία των μεμονωμένων δειγμάτων, πολλαπλά φιαλίδια, καθώς και για πλάκες μικροτιτλοδότησης και 96-καλά πλάκες.
ΕΛΙΣΑ – Ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία
ELISA σημαίνει ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία και είναι μια ευρέως χρησιμοποιούμενη τεχνική βιοχημικής ανάλυσης της κατηγορίας των δοκιμασιών δέσμευσης συνδέτη. Στην ELISA, ένα υγρό δείγμα προστίθεται σε μια στατική στερεά φάση με ειδικές ιδιότητες σύνδεσης. Κανονικά, η στατική στερεά φάση εφαρμόζεται ως επικάλυψη σε πλάκα φρεατίου ή πλάκα ELISA. Στη συνέχεια, διάφορα υγρά αντιδραστήρια προστίθενται διαδοχικά, επωάζονται και πλένονται, έτσι ώστε τελικά μια οπτική αλλαγή (π.χ. ανάπτυξη χρώματος από το προϊόν μιας ενζυματικής αντίδρασης) συμβαίνει στο τελικό υγρό στο φρεάτιο. Η οπτική αλλαγή επιτρέπει τη μέτρηση της ποσότητας της αναλυτέας ουσίας με τη λεγόμενη ποσοτική “ανάγνωση». Για την ποσοτική ανάγνωση, χρησιμοποιείται φασματοφωτόμετρο, φθορόμετρο ή φωτόμετρο για την ανίχνευση και τη μέτρηση της έντασης του μεταδιδόμενου φωτός. Η ευαισθησία της ανίχνευσης επηρεάζεται από την ενίσχυση του σήματος κατά τη διάρκεια των αναλυτικών αντιδράσεων. Δεδομένου ότι οι ενζυμικές αντιδράσεις είναι καλά διερευνημένες και αξιόπιστες διαδικασίες ενίσχυσης, χρησιμοποιούνται ένζυμα για τη δημιουργία του σήματος. Τα ένζυμα συνδέονται με τα αντιδραστήρια ανίχνευσης σε σταθερές αναλογίες για να επιτρέψουν την ακριβή ποσοτικοποίηση, γεγονός που εξηγεί επίσης το όνομα "ενζυμική" ανοσοπροσροφητική δοκιμασία.
Καθώς οι δοκιμασίες ELISA εκτελούνται σε πλάκες μικροτιτλοδότησης / πλάκες 96 κοιλοτήτων, είναι γνωστή ως τεχνική ανάλυσης με βάση πλάκες και χρησιμοποιείται π.χ. στην κλινική διάγνωση in vitro, στην έρευνα, στην ανάπτυξη φαρμάκων κ.λπ. για την ανίχνευση και ποσοτικοποίηση αντισωμάτων, πεπτιδίων, πρωτεϊνών και ορμονών.
Η τεχνική ELISA χρησιμοποιείται συχνά ως διαγνωστικό εργαλείο στην ιατρική, τη βιοτεχνολογία, την παθολογία των φυτών και είναι επίσης μια σημαντική μέτρηση ποιοτικού ελέγχου σε πολλές βιομηχανίες.
Η μονάδα προετοιμασίας δείγματος υπερήχων VialTweeter χρησιμοποιείται για κυτταρική λύση και εκχύλιση πρωτεϊνών πριν από δοκιμασίες ELISA
Προετοιμασία δείγματος υπερήχων πριν από την ELISA
Πριν από την εκτέλεση της δοκιμασίας ELISA, τα δείγματα απαιτούν βήματα προετοιμασίας, όπως κυτταρική λύση και εκχύλιση ενδοκυτταρικών πρωτεϊνών, DNA, RNA κ.λπ. Το πλεονέκτημα της λύσης κυττάρων υπερήχων και της απομόνωσης πρωτεϊνών είναι η υψηλή αποτελεσματικότητα, αξιοπιστία και αναπαραγωγιμότητα. Όλοι αυτοί οι παράγοντες είναι σημαντικοί για την απόκτηση διαγνωστικών και ερευνητικών αποτελεσμάτων υψηλής ποιότητας
- Ομοιογενής επεξεργασία δείγματος
- Πλήρης λύση
- Πλήρης εκχύλιση πρωτεΐνης (π.χ. αντισώματα, DNA)
- Βέλτιστη προσαρμογή στον τύπο κυττάρου
- Για οποιοδήποτε μέγεθος δείγματος
- Αναπαραχθούν
- ελεγχόμενη θερμοκρασία
- Αυτόματο πρωτόκολλο δεδομένων σε κάρτα SD
Πρωτόκολλο για Pre-ELISA υπερήχων κυτταρική λύση
- Για κυτταροκαλλιέργειες: Πριν από την υπερηχητική κυτταρική λύση, φυγοκεντρήστε κύτταρα για 5 λεπτά σε 270 x g σε μικροφυγόκεντρο. Απομακρύνεται το υπερκείμενο υγρό με αναρρόφηση και επαναιωρούνται τα κύτταρα σε 30 – 100 μL ρυθμιστικού διαλύματος RIPA. Στη συνέχεια, επωάστε το σφαιρίδιο κυττάρων σε πάγο για 30 λεπτά.
- Τώρα, το δείγμα κυττάρων είναι έτοιμο για υπερηχητική λύση:
Χρησιμοποιήστε έναν υπερηχητικό τύπο καθετήρα (π.χ. UP200Ht με ανιχνευτή S26d2) ή μια συσκευή πολλαπλών δειγμάτων υπερήχων (π.χ. VialTweeter για ταυτόχρονη υπερήχηση έως και 10 φιαλιδίων ή το UIP400MPT για πλάκες μικροτιτλοδότησης / πλάκες 96 φρεατίων) ανάλογα με την ποσότητα των δειγμάτων που πρέπει να προετοιμάσετε.
Για την κατεργασία με υπερήχους τύπου καθετήρα ενός μόνο δείγματος, τοποθετήστε τα κύτταρα σε σωλήνες μικροφυγοκέντρησης 1,5 mL. - Προρυθμίστε τη διάρκεια υπερήχων, τη συνολική εισροή ενέργειας, τη λειτουργία κύκλου ή / και τα όρια θερμοκρασίας στο ψηφιακό μενού του υπερήχων. Αυτό εξασφαλίζει εξαιρετικά αξιόπιστη υπερήχηση και επαναληψιμότητα.
- Τοποθετήστε το sonotrode και ενεργοποιήστε τη συσκευή υπερήχων. Μετακινήστε απαλά το μικρο-άκρο του υπερηχητικού καθετήρα μέσω του δείγματος για να υπερήχων το δείγμα ομοιόμορφα.
Για τα περισσότερα κύτταρα, υπερήχων λύση θα ολοκληρωθεί μετά από 2 -4 κύκλους 10 sec κατεργασία με υπερήχους. - Μετά από υπερήχους, αφαιρέστε το sonotrode από το δείγμα. Τα δείγματα πρέπει να επωάζονται σε πάγο για 5 λεπτά. Στη συνέχεια, φυγοκεντρήστε στα 10.000 x g για 20 λεπτά για να σβήσετε τα συντρίμμια. Μεταφέρετε τα υπερκείμενα σε νέο σωλήνα μικροφυγοκέντρισης. Επισημάνετε τις αναλυτέες ουσίες και φυλάσσετε στους -20°C.
- Το υπερηχητικό sonotrode μπορεί να καθαριστεί σκουπίζοντάς το σωστά με αλκοόλ ή υπερήχους σε ένα ποτήρι γεμάτο με αλκοόλ, π.χ. 70% αιθανόλη. Όλοι οι υπερηχητικοί ανιχνευτές από τιτάνιο είναι αυτόκλειστοι.
Εκχύλιση πρωτεΐνης από κύτταρα E.coli με το υπερηχητικός καθετήρας UP200St
- Ξεπλύνετε τον ιστό με παγωμένο PBS (0,01M, pH=7,4) για να αφαιρέσετε καλά την περίσσεια αίματος αιμόλυσης.
- Ζυγίστε τον ιστό (νεφρό, καρδιά, πνεύμονα, σπλήνα κ.λπ.) και διαβρέξτε τον σε μικρά κομμάτια, τα οποία ομογενοποιούνται σε PBS. Ο απαιτούμενος όγκος PBS σχετίζεται με το βάρος του ιστού. Κατά κανόνα, 1g ιστού απαιτεί περίπου 9mL PBS. Συνιστάται η προσθήκη κάποιου αναστολέα πρωτεάσης στο PBS. (Εναλλακτικά μπορεί να χρησιμοποιηθεί RIPA ή υποτονικό ρυθμιστικό διάλυμα λύσης που περιέχει κοκτέιλ πρωτεάσης και αναστολέα φωσφατάσης.)
- Ανάλογα με το μέγεθος του ιστού, μια σύντομη θεραπεία δίνης (περίπου 1-2 λεπτά σε παλμούς 15 δευτερολέπτων) μπορεί να είναι χρήσιμη για την προεπεξεργασία του ιστού.
- Τοποθετήστε ένα μικρο-άκρο, π.χ. S26d2, στον υπερηχητικό σας. Ο σωλήνας δείγματος με τον ιστό τοποθετείται σε λουτρό πάγου.
- Υπερήχων το δείγμα με τον υπερηχητικό σας, π.χ. UP200St (πλάτος 80%) για 1 λεπτό. σε λειτουργία παλμού (15sec on, 15sec παύση). Κρατήστε το δείγμα στο λουτρό πάγου.
- Τα ομογενοποιημένα στη συνέχεια φυγοκεντρούνται για να ληφθούν ειδικές δεξαμενές (κυτταροσολικές, πυρηνικές, μιτοχονδριακές ή λυσοσωμικές) προκειμένου να εμπλουτιστεί η πρωτεΐνη για ανάλυση. Με φυγοκέντρηση του δείγματος επί 5 λεπτά στα 5000×g, ανακτάται το υπερκείμενο υγρό.
Το sonotrode MTP-24-8-96 διαθέτει οκτώ υπερηχητικούς ανιχνευτές για την υπερήχηση των φρεατίων των πλακών μικροτιτλοδότησης.
Αξιόπιστος έλεγχος θερμοκρασίας κατά τη διάρκεια υπερήχων
Η θερμοκρασία είναι ένας κρίσιμος παράγοντας που επηρεάζει τη διαδικασία και είναι ιδιαίτερα σημαντικός για την επεξεργασία βιολογικών δειγμάτων, π.χ. για την πρόληψη της θερμικής αποικοδόμησης των πρωτεϊνών. Όπως όλες οι μηχανικές τεχνικές προετοιμασίας δειγμάτων, κατεργασία με υπερήχους δημιουργεί θερμότητα. Ωστόσο, η θερμοκρασία των δειγμάτων μπορεί να ελεγχθεί καλά όταν χρησιμοποιείτε τις συσκευές Hielscher Ultrasonics. Σας παρουσιάζουμε διάφορες επιλογές για την παρακολούθηση και τον έλεγχο της θερμοκρασίας των δειγμάτων σας ενώ τα προετοιμάζετε με έναν υπερηχητικό τύπο καθετήρα ή το VialTweeter προ-αναλυτικά.
- Παρακολούθηση της θερμοκρασίας δείγματος: Όλοι οι ψηφιακοί επεξεργαστές υπερήχων Hielscher είναι εξοπλισμένοι με ένα έξυπνο λογισμικό και έναν αισθητήρα θερμοκρασίας με δυνατότητα σύνδεσης. Συνδέστε τον αισθητήρα θερμοκρασίας στη συσκευή υπερήχων (π.χ. UP200Ht, UP200St, VialTweeter, Υπερήχων πλάκας πολλαπλών φρεατίων UIP400MTP) και εισάγεται το άκρο του αισθητήρα θερμοκρασίας σε έναν από τους σωλήνες δείγματος. Μέσω ψηφιακής έγχρωμης οθόνης αφής, μπορείτε να ορίσετε στο μενού του επεξεργαστή υπερήχων ένα συγκεκριμένο εύρος θερμοκρασιών για το δείγμα υπερήχων σας. Ο υπερηχητικός θα σταματήσει αυτόματα όταν επιτευχθεί η μέγιστη θερμοκρασία και θα σταματήσει έως ότου η θερμοκρασία δείγματος μειωθεί στη χαμηλότερη τιμή της ρυθμισμένης θερμοκρασίας ∆. Στη συνέχεια, η υπερήχηση ξεκινά αυτόματα και πάλι. Αυτή η έξυπνη λειτουργία αποτρέπει την υποβάθμιση που προκαλείται από τη θερμότητα.
- Όσον αφορά τη μονάδα πολλαπλών δειγμάτων υπερήχων VialTweeter, το μπλοκ τιτανίου, το οποίο συγκρατεί τους σωλήνες δείγματος, μπορεί να προψυχθεί. Βάλτε το μπλοκ VialTweeter (μόνο το sonotrode χωρίς μορφοτροπέα!) στο ψυγείο ή τον καταψύκτη για να προψύξετε το μπλοκ τιτανίου βοηθά στην αναβολή της αύξησης της θερμοκρασίας στο δείγμα. Εάν είναι δυνατόν, το ίδιο το δείγμα μπορεί επίσης να προψυχθεί.
- Χρησιμοποιήστε ένα λουτρό πάγου ή ξηρό πάγο για να κρυώσει κατά τη διάρκεια της υπερήχων. Τοποθετήστε τους σωλήνες δείγματός σας κατά τη διάρκεια της υπερήχησης σε ένα λουτρό πάγου. Για το VialTweeter, χρησιμοποιήστε ένα ρηχό δίσκο γεμάτο με ξηρό πάγο και τοποθετήστε το VialTweeter στον ξηρό πάγο έτσι ώστε η θερμότητα να μπορεί να διαλυθεί γρήγορα.
Οι πελάτες σε όλο τον κόσμο χρησιμοποιούν τους υπερήχους τύπου καθετήρα Hielscher καθώς και τις μονάδες υπερήχων πολλαπλών δειγμάτων VialTweeter και UIP400MTP για την καθημερινή εργασία προετοιμασίας δειγμάτων σε βιολογικά, βιοχημικά, ιατρικά και κλινικά εργαστήρια. Το έξυπνο λογισμικό και ο έλεγχος θερμοκρασίας των επεξεργαστών Hielscher, η θερμοκρασία ελέγχεται αξιόπιστα και αποφεύγεται η υποβάθμιση του δείγματος που προκαλείται από τη θερμότητα. Υπερήχων προετοιμασία δείγματος με Hielscher υπερήχων διαλύματα προσφέρει εξαιρετικά αξιόπιστα και αναπαραγώγιμα αποτελέσματα!
Διαβάστε περισσότερα σχετικά με την υπερήχηση υψηλής απόδοσης χρησιμοποιώντας το UIP400MTP υπερήχων πλάκας πολλαπλών φρεατίων για δοκιμασίες!
Επικοινωνήστε μαζί μας! / Ρωτήστε μας!
Hielscher Υπέρηχοι κατασκευάζει υψηλής απόδοσης υπερήχων ομογενοποιητές για την ανάμειξη εφαρμογών, διασπορά, γαλακτωματοποίηση και εκχύλιση σε εργαστήριο, πιλοτική και βιομηχανική κλίμακα.
Βιβλιογραφία / Αναφορές
- Brandy Verhalen , Stefan Ernst, Michael Börsch, Stephan Wilkens (2012): Dynamic Ligand-induced Conformational Rearrangements in P-glycoprotein as Probed by Fluorescence Resonance Energy Transfer Spectroscopy. J Biol Chem. 2012 Jan 6;287(2): 1112-27.
- Claudia Lindemann, Nataliya Lupilova, Alexandra Müller, Bettina Warscheid, Helmut E. Meyer, Katja Kuhlmann, Martin Eisenacher, Lars I. Leichert (2013): Redox Proteomics Uncovers Peroxynitrite-Sensitive Proteins that Help Escherichia coli to Overcome Nitrosative Stress. J Biol Chem. 2013 Jul 5; 288(27): 19698–19714.
- Elahe Motevaseli, Mahdieh Shirzad, Seyed Mohammad Akrami, Azam-Sadat Mousavi, Akbar Mirsalehian, Mohammad Hossein Modarressi (2013): Normal and tumour cervical cells respond differently to vaginal lactobacilli, independent of pH and lactate. ed. Microbiol. 2013 Jul; 62(Pt 7):1065-1072.
- Nico Böhmer, Andreas Dautel, Thomas Eisele, Lutz Fischer (2012): Recombinant expression, purification and characterisation of the native glutamate racemase from Lactobacillus plantarum NC8. Protein Expr Purif. 2013 Mar;88(1):54-60.
Γεγονότα που αξίζει να γνωρίζετε
Τι τύποι ELISA υπάρχουν;
Υπάρχουν διάφοροι τύποι ELISA, οι οποίοι διακρίνονται από την αρχή λειτουργίας τους. Είναι γνωστά ως άμεση ELISA, έμμεση ELISA, σάντουιτς ELISA, ανταγωνιστική ELISA και αντίστροφη ELISA. Παρακάτω, σας παρουσιάζουμε μια επισκόπηση των διαφόρων τύπων ELISA και των κύριων χαρακτηριστικών και διαφορών τους.
Η ELISA μπορεί να εκτελείται σε ποιοτική ή ποσοτική μορφή. Τα ποιοτικά αποτελέσματα παρέχουν ένα απλό θετικό ή αρνητικό αποτέλεσμα, ενώ στην ποσοτική ELISA η οπτική πυκνότητα (OD) του δείγματος συγκρίνεται με μια πρότυπη καμπύλη, η οποία είναι συνήθως μια σειριακή αραίωση ενός διαλύματος γνωστής συγκέντρωσης του μορίου στόχου.
Άμεση ELISA
Η άμεση ELISA είναι η πιο απλή μορφή προσδιορισμού της Elisa, όπου χρησιμοποιείται μόνο ένα ενζυμικό επισημασμένο πρωτογενές αντίσωμα και δεν απαιτούνται δευτερογενή αντισώματα. Το ενζυμικό επισημασμένο πρωτογενές αντίσωμα συνδέεται άμεσα με τον στόχο, δηλαδή το αντιγόνο. Το ρυθμιστικό διάλυμα αντιγόνου προστίθεται σε κάθε κοιλότητα μιας πλάκας μικροτιτλοδότησης (συνήθως πλάκες 96 κοιλοτήτων, πλάκες ELISA), όπου προσκολλάται στην πλαστική επιφάνεια μέσω αλληλεπιδράσεων φορτίου. Όταν το ένζυμο που συνδέεται με το πρωτογενές αντίσωμα αντιδρά με το υπόστρωμα του, παράγει ένα ορατό σήμα που μπορεί να μετρηθεί μέσω φασματοφωτόμετρου, φθορόμετρου ή φωτόμετρου.
Έμμεση ELISA
Για την έμμεση δοκιμασία ELISA, απαιτούνται τόσο ένα πρωτογενές όσο και ένα δευτερεύον αντίσωμα. Ωστόσο, σε αντίθεση με την άμεση ELISA, όχι το πρωτεύον αντίσωμα, αλλά το δευτερεύον αντίσωμα επισημαίνεται με ένα ένζυμο. Το αντιγόνο ακινητοποιείται στην πλάκα του φρεατίου και δεσμεύεται από το πρωτογενές αντίσωμα. Στη συνέχεια, το ενζυμικό επισημασμένο δευτερογενές αντίσωμα συνδέεται με το πρωτογενές αντίσωμα. Τέλος, το ένζυμο που συνδέεται με το δευτερεύον αντίσωμα αντιδρά με το υπόστρωμα του για να παράγει ένα ορατό σήμα που μπορεί να ανιχνευθεί.
Σάντουιτς ELISA
Ενώ στις άμεσες και έμμεσες δοκιμές ELISA, το αντιγόνο ακινητοποιείται και επικαλύπτεται στην επιφάνεια της πλάκας φρεατίου, στο σάντουιτς ELISA το αντίσωμα ακινητοποιείται στην πλαστική επιφάνεια της πλάκας ELISA. Τα ακινητοποιημένα αντισώματα στο σάντουιτς ELISA είναι γνωστά ως αντισώματα σύλληψης. Εκτός από τα αντισώματα σύλληψης, στο σάντουιτς ELISA απαιτούνται επίσης τα λεγόμενα αντισώματα ανίχνευσης. Τα αντισώματα ανίχνευσης περιλαμβάνουν ένα μη επισημασμένο πρωτογενές αντίσωμα ανίχνευσης και ένα ενζυμικό επισημασμένο δευτερογενές αντίσωμα ανίχνευσης.
Σταδιακά, το αντιγόνο ενδιαφέροντος συνδέεται με το αντίσωμα σύλληψης που ακινητοποιείται στην πλάκα. Στη συνέχεια, το πρωτογενές αντίσωμα ανίχνευσης συνδέεται με το αντιγόνο. Στη συνέχεια, το δευτερογενές αντίσωμα ανίχνευσης συνδέεται με το πρωτογενές αντίσωμα ανίχνευσης. Στο τελικό στάδιο αντίδρασης, το ένζυμο αντιδρά με το υπόστρωμα του για να παράγει ένα ορατό σήμα που μπορεί να ανιχνευθεί οπτικά.
Ανταγωνιστική ELISA
Η ανταγωνιστική ELISA, επίσης γνωστή ως αναστολή ELISA, είναι ο πιο περίπλοκος τύπος ELISA επειδή περιλαμβάνει τη χρήση ενός ανασταλτικού αντιγόνου. Κάθε μία από τις τρεις μορφές, άμεση, έμμεση και σάντουιτς ELISA, μπορεί να προσαρμοστεί στην ανταγωνιστική μορφή ELISA. Στην ανταγωνιστική ELISA, το ανασταλτικό αντιγόνο και το αντιγόνο ενδιαφέροντος ανταγωνίζονται για τη σύνδεση με το πρωτεύον αντίσωμα.
Για την ανταγωνιστική ELISA, το μη επισημασμένο αντίσωμα επωάζεται παρουσία του αντιγόνου του, δηλαδή δείγματος. Αυτά τα δεσμευμένα σύμπλοκα αντισώματος/αντιγόνου προστίθενται στη συνέχεια σε ένα φρεάτιο επικαλυμμένο με αντιγόνο.
Η πλάκα πλένεται, έτσι ώστε να αφαιρεθούν τα μη δεσμευμένα αντισώματα. Η ανταγωνιστική ELISA έχει το όνομά της λόγω του γεγονότος ότι όσο περισσότερο αντιγόνο υπάρχει στο δείγμα, τόσο περισσότερα σύμπλοκα αντιγόνου-αντισώματος σχηματίζονται. Αυτό σημαίνει ότι υπάρχουν λιγότερα μη δεσμευμένα αντισώματα διαθέσιμα για να συνδεθούν με το αντιγόνο στο πηγάδι και τα αντιγόνα πρέπει να ανταγωνιστούν για ένα διαθέσιμο αντίσωμα. Προστίθεται ένα δευτερεύον αντίσωμα, που ταιριάζει με το πρωτογενές αντίσωμα. Αυτό το δεύτερο αντίσωμα συνδέεται με το ένζυμο. Όταν προστίθεται το υπόστρωμα, τα υπόλοιπα ένζυμα παράγουν ένα χρωμογενές ή φθορίζον σήμα.
Σε αυτό το σημείο, η αντίδραση σταματά για να αποφευχθεί ο τελικός κορεσμός του σήματος.
Ορισμένα ανταγωνιστικά κιτ ELISA περιλαμβάνουν ένα ενζυμικό αντιγόνο αντί για ένα ενζυμικό αντίσωμα. Το επισημασμένο αντιγόνο ανταγωνίζεται για πρωτογενείς θέσεις δέσμευσης αντισωμάτων με το δείγμα αντιγόνου (μη επισημασμένο). Όσο λιγότερο αντιγόνο στο δείγμα, τόσο περισσότερο επισημασμένο αντιγόνο διατηρείται στην κοιλότητα και τόσο ισχυρότερο είναι το σήμα.
Αντίστροφη ELISA
Η αντίστροφη ELISA δεν χρησιμοποιεί τρυβλία φρεατίων, αλλά αφήνει τα αντιγόνα αιωρούμενα στο υγρό δοκιμής. Η αντίστροφη δοκιμή ELISA μετρά την ποσότητα δεσμευμένου αντισώματος μέσω αντιγόνου. Αναπτύχθηκε ειδικά για την ανίχνευση και τη διερεύνηση της πρωτεΐνης φακέλου του ιού του Δυτικού Νείλου και πώς είναι σε θέση να βρει ειδικά αντισώματα για τον ιό.
Ποιοι ενζυματικοί δείκτες χρησιμοποιούνται για την ELISA;
Ο παρακάτω κατάλογος δίνει τους πιο συνηθισμένους ενζυματικούς δείκτες που χρησιμοποιούνται στις δοκιμασίες ELISA, οι οποίοι επιτρέπουν τη μέτρηση των αποτελεσμάτων της δοκιμασίας μετά την ολοκλήρωση.
- OPD (o-φαινυλενοδιαμίνη διυδροχλωρική) μετατρέπει κεχριμπάρι για την ανίχνευση HRP (χρένο υπεροξειδάση), η οποία χρησιμοποιείται συχνά ως συζευγμένη πρωτεΐνη.
- ΤΜΒ (3,3′,5,5′-τετραμεθυλοβενζιδίνη) γίνεται μπλε κατά την ανίχνευση HRP και γίνεται κίτρινο μετά την προσθήκη θειικού ή φωσφορικού οξέος.
- ABTS (2,2′-Azinobis [άλας 3-αιθυλοβενζοθειαζολίνης-6-σουλφονικού οξέος]-διαμμωνίου) γίνεται πράσινο κατά την ανίχνευση HRP.
- Το PNPP (p-νιτροφαινυλοφωσφορικό, άλας δινατρίου) γίνεται κίτρινο όταν ανιχνεύεται αλκαλική φωσφατάση.