Η προετοιμασία του δείγματος πριν από την ανάλυση μπορεί να απαιτήσει διάφορες προαναπτυτικές διεργασίες όπως ομογενοποίηση ιστών, λύση, εκχύλιση πρωτεϊνών, DNA, RNA, οργανίδια και άλλες ενδοκυτταρικές ουσίες, διάλυση και εξαέρωση. Το VialTweeter είναι μια μοναδική συσκευή υπερήχων που προετοιμάζει πολλαπλούς σωλήνες δείγματος ταυτόχρονα υπό ακριβώς τις ίδιες συνθήκες. Λόγω της έμμεσης υπερήχησης κλειστών δοκιμαστικών σωλήνων, αποφεύγεται η διασταυρούμενη μόλυνση και η απώλεια δείγματος.

Υπερήχων προετοιμασία δείγματος

Ultrasonication είναι μια κοινή τεχνική της θεραπείας του δείγματος, προκειμένου να πάρει το δείγμα έτοιμο για αναλύσεις όπως πολυμερή αλυσιδωτή αντίδραση (PCR), Δυτική Κηλίδες, δοκιμές, μοριακή αλληλουχία, χρωματογραφία κλπ. Ultrasonication είναι μια τεχνική που χρησιμοποιείται ευρέως στα εργαστήρια για τη θεραπεία των δειγμάτων προ-αναλυτικά. Ένα σημαντικό πλεονέκτημα της υπερήχησης είναι ότι η αρχή λειτουργίας του υπερήχου βασίζεται σε καθαρά μηχανικές δυνάμεις. Η υπερηχητική λύση και η διαταραχή κυττάρων επιτυγχάνονται από τις οινομηχανικές δυνάμεις διάτμησης, οι οποίες δίνουν ultrasonication το πλεονέκτημα ότι οι διαλύτες που χρησιμοποιούνται για την πρωτεϊνική εξαγωγή μπορούν να χρησιμοποιηθούν επίσης κατά τη διάρκεια της λύσης. Οι υπερηχητικοί διαταράκτες κυττάρων όπως το VialTweeter σπάζουν τα κυτταρικά τοιχώματα/μεμβράνες και προωθούν τη μεταφορά μάζας μεταξύ του εσωτερικού κυττάρων και του διαλύτη. Με αυτόν τον τρόπο, το αναλύτη (π.χ. DNA, RNA, πρωτεΐνες, οργανίδια κ.λπ.) μεταφέρονται αποτελεσματικά από τη μήτρα κυττάρων στο διαλύτη. Αυτό σημαίνει ότι τα βήματα της απόσβεσης και εκχύλισης επικαλύπτονται με τη διαδικασία διαταραχής των υπερηχητικών κυττάρων, γεγονός που καθιστά την υπερηχητική λύση πολύ αποτελεσματική. Επιπλέον, η προετοιμασία του δείγματος υπερήχων δεν απαιτεί απορρυπαντικά και άλλα αντιδραστήρια λύσης, τα οποία μπορεί να μεταβάλουν και να καταστρέψουν τη δομή του lysate και είναι γνωστά για τα επακόλουθα προβλήματα με τον καθαρισμό. Μια άλλη μέθοδος λύσης, η ενζυμική διαταραχή απαιτεί μεγάλους χρόνους επώασης και παρέχει συχνά μη αναπαραγώγιμα αποτελέσματα. Η προετοιμασία του υπερηχητικού δείγματος υπερνικά κοινά προβλήματα στην προετοιμασία του δείγματος, όπως ομογενοποίηση ιστού, διαταραχή των κυττάρων, λύση, εκχύλιση πρωτεΐνης και διαλυτική διαλυτοποίηση. Δεδομένου ότι η ένταση της θεραπείας με υπερήχους μπορεί να ελεγχθεί και να προσαρμοστεί ακριβώς στο βιολογικό δείγμα, αποφεύγεται η υποβάθμιση και η απώλεια δείγματος. Η αυτόματη παρακολούθηση και ο έλεγχος της θερμοκρασίας του δείγματος, του τρόπου παλμού και της διάρκειας υπερήχων εξασφαλίζουν βέλτιστα αποτελέσματα.
 

Το VialTweeter είναι ιδιαίτερα βολικό για εργαστηριακές εργασίες που απαιτούν την ταυτόχρονη προετοιμασία πολλαπλών δειγμάτων υπό τις ίδιες συνθήκες. Το VialTweeter είναι ένα υπερηχητικό μπλοκ sonotrode που μπορεί να χωρέσει μέχρι 10 φιαλίδια (π.χ. Eppendorf, centriguge, σωλήνες NUNC, κρυο-φιαλίδια) και τους υπερήχηση έντονα υπό ακριβώς ελεγχόμενες συνθήκες. Δεδομένου ότι η υπερηχητική ενέργεια συνδέεται μέσω των τοιχωμάτων των φιαλιδίων στο μέσο δείγματος, τα φιαλίδια διατηρούνται κλειστά κατά τη διάρκεια της θεραπείας. Με αυτόν τον τρόπο, αποφεύγεται εντελώς η απώλεια του δείγματος και η διασταυρούμενη μόλυνση.

Φιαλίδια και σωλήνες που ενομείνουν το VialTweeter

Το VialTweeter είναι κατάλληλο για να κρατήσει 10 κοινούς κωνικούς ή στρογγυλούς σωλήνες, όπως eppendorf, φυγοκέντρηση, κρυο-φιαλίδια και διάφορους τύπους φιαλιδίων NUNC, αλλά οι τρύπες μπορούν να προσαρμοστούν σε άλλα μεγέθη φιαλιδίων και σωλήνων κατόπιν αιτήματος. Παρακαλούμε ενημερώστε μας για το είδος των δοκιμαστικών σωλήνων που θέλετε να χρησιμοποιήσετε, ώστε να μπορέσουμε να τροποποιήσουμε το VialTweeter ανάλογα. Για μεγαλύτερους δοκιμαστικούς σωλήνες, όπως σωλήνες Falcon και άλλα δοχεία δοκιμής, ποτήρια και δοχεία, το VialPress είναι μια βολική λύση.

Το φιαλίδιο με vialPress

Ενώ το ίδιο το VialTweeter με τις 10 τρύπες σωλήνων του είναι ήδη μια μοναδική και εξαιρετικά λειτουργική συσκευή υπερήχων, το πρόσθετο VialPress κάνει το VialTweeter ακόμα πιο ευέλικτο και ευέλικτο για λειτουργία. Το VialPress είναι ένα εξάρτημα για το VialTweeter που αποτελείται από μια ράβδο σύσφιξης που επιτρέπει τη στερέωση μεγαλύτερων σωλήνων δείγματος, όπως σωλήνες Falcon ή άλλα μικρά έως μεσαίου μεγέθους ποτήρια δοκιμής στο μέτωπο vialTweeter. Η εικόνα στα αριστερά δείχνει το VialTweeter κρατώντας 10 φιαλίδια Eppendorf στο μπλοκ, ενώ το VialPress στερεώνει ένα μεγαλύτερο δοκιμαστικό σωλήνα στο μπροστινό μέρος για υπερήχηση. Το VialPress είναι ικανό να χωρέσει έως και 5 μεγαλύτερους δοκιμαστικούς σωλήνες για έντονη υπερήχηση.

Πρωτόκολλα προετοιμασίας δείγματος vialTweeter

Το VialTweeter χρησιμοποιείται ευρέως για να υπερήχηση βιολογικών δειγμάτων. Πριν από την ανάλυση, τα δείγματα πρέπει να παρασκευάζονται για βιοχημικές ή βιοφυσικές αναλύσεις και δοκιμασίες, π.χ. με λύση, ομογενοποίηση ιστών, εκχύλιση πρωτεϊνών, διάτμηση DNA/ RNA, εξαέρωση κ.λπ. Το VialTweeter εκπληρώνει αυτές τις υπερηχητικές διεργασίες αξιόπιστα και παρέχει αναπαραγώγιμα αποτελέσματα. Μια κοινή εφαρμογή του VialTweeter είναι η διαταραχή της λύσης/κυττάρων των ιστών θηλαστικών (ανθρώπων και ζώων), καθώς και των κυττάρων βακτηρίων και των ιογενών σωματιδίων. Τα βιολογικά δείγματα που υποβλήθηκαν επιτυχώς σε θεραπεία με VialTweeter περιλαμβάνουν ανθρώπινα επιθηλιακά κύτταρα πνευμόνων, αιμοποιητικά βλαστοκύτταρα, κύτταρα μυελογενούς λευχαιμίας, Εστσεριχία κολί, Ο βακτίλος, Βάκιλος ανθρακής, Φράνσιςλανέλα τουλάρενση, Yersinia pestis, Στρεπτόκοκκος πυογενές, Caulobacter crescentus, Μυκοπλάσμα πνευμονία, μυκοβακτηρίδια / Σύμπλεγμα μυκοβακτηρίων φυματίωσης (MTBC) και πολλά άλλα βακτηριακά, βοτανικά και μικροβιακά κύτταρα.
Παρακάτω, μπορείτε να βρείτε μερικά επιλεγμένα πρωτόκολλα που χαρακτηρίζει το VialTweeter.

E.Coli Λύση με VialTweeter για in-vivo προσδιορισμό γλουταθειόνης

Τα βακτήρια Escherichia coli του στελέχους MG1655 καλλιεργούνταν σε MOPS ελάχιστο μέσο σε συνολικό όγκο 200ml έως ότου επιτευχθεί A600 του 0,5. Η καλλιέργεια χωρίστηκε σε καλλιέργειες 50 ml για θεραπεία του στρες. Μετά από 15 λεπτά επώασης με 0,79 mM allicin, 1 mM διαμίδιο, ή διμεθυλοσουλφοξείδιο (έλεγχος), τα κύτταρα συγκομίστηκαν σε 4.000g στους 4°C για 10 λεπτά. Τα κύτταρα πλύθηκαν δύο φορές με ρυθμιστικό διάλυμα KPE πριν από την επαναιώρηση των σφαιριδίων σε 700μl του ρυθμιστικού διαλύματος KPE. Για την αποπρωτεινοποίηση, 300μl του 10% (w/v) σουλφοσαλικυλικού οξέος προστέθηκαν πριν από τη διακοπή των κυττάρων με υπερήχους (3 x 1 λεπτά; Φιαλοαχοστοχωτής). Τα υπερκείμενοι συλλέχθηκαν μετά από φυγοκέντρηση (30 λεπτά, 13.000g, 4°C). Οι συγκεντρώσεις σουλφοσαλικυλικού οξέος μειώθηκαν σε 1% με την προσθήκη 3 όγκων ρυθμιστικού διαλύματος KPE. Οι μετρήσεις της ολικής γλουταθειόνης και της GSSG πραγματοποιήθηκαν όπως περιγράφεται παραπάνω. Οι συγκεντρώσεις κυτταρικής γλουταθειόνης υπολογίστηκαν με βάση έναν όγκο κυττάρων E. coli 6,7×10-15 λίτρων και μια κυτταρική πυκνότητα A600 0,5 (ισοδύναμη με 1×108 κύτταρα ml-1 καλλιέργεια). Οι συγκεντρώσεις GSH υπολογίστηκαν με αφαίρεση 2[GSSG] από τη συνολική γλουταθειόνη. (Müller et al. 2016)

Κατακερματισμός ινιδίου άλφα-συνουκλεΐνης με το VialTweeter

Ο υπερήχων VialTweeter χρησιμοποιείται ευρέως για τον αξιόπιστο και αποτελεσματικό κατακερματισμό των ινιδίων άλφα-συνουκλεΐνης και των κορδελών. Κάντε κλικ εδώ για να βρείτε λεπτομερείς περιγραφές, πρωτόκολλα και αναφορές για τον κατακερματισμό της άλφα-συνουκλεΐνης με το VialTweeter!

Λύση κυττάρων με VialTweeter πριν από τη φασματομετρία ατομικής απορρόφησης φούρνων γραφίτη

Το Bacillus subtilis 168 (trpC2) εκτέθηκαν σε 15 λεπτά αντιβιοτικού στρες, τότε τα κύτταρα συγκομίστηκαν σε 3.320 x g, πλύθηκαν πέντε φορές με 100 mM Tris/1 mM EDTA, pH 7.5, επαναιωρούνται σε 10 mM Tris, pH 7,5 και διαταράσσεται με υπερήχους σε ένα hielscher VialTweeter όργανο. (Wenzel et al. 2014)

Προετοιμασία δείγματος vialTweeter πριν από τη φασματομετρία μάζας

Τα λυοφιλοποιημένα σφαιρίδια κυττάρων των ανθρώπινων CD34􏰀 αιμοποιητικών βλαστοκυττάρων/προγονικών κυττάρων επαναιωρούνται σε 10μ􏰇l (200μl για το χύμα hek293 προετοιμασία για τη σειρά αραίωσης πεπτιδίων) 8 M ουρία σε ανθρακικό υδρογόνο αμμωνίου 100 mM και με τη βοήθεια υπερήχων με το Hielscher VialTweeter σε πλάτος 60%, έναν κύκλο 60% και διάρκεια 20s για τρεις φορές με ενδιάμεση ψύξη στον πάγο. (Amon et al. 2019)

Πρωτόκολλα προετοιμασίας δείγματος με χρήση του VialPress

Το φρέσκο μαρούλι (Lctuca sativa) ομογενοποιήθηκε σε ρυθμιστικό διάλυμα HEPES 0,5 M (pH 8, KOH ρυθμισμένο) σε αναλογία 1 g φυτού (νωπό βάρος) έως 200, 100, 50 ή 20 mL ρυθμιστικό διάλυμα. Ο λόγος μάζας μονάδας προς τον όγκο του ρυθμιστικού διαλύματος ποικίλλει για να διατηρηθεί ο συνολικός ομογενοποιημένος όγκος μεταξύ 3,5 και 12 mL. Ο λόγος της μάζας του φυτού προς τον όγκο του ρυθμιστικού διαλύματος ποικίλλει ώστε να διατηρείται ο συνολικός ομογενοποιημένος όγκος μεταξύ 3,5 και 12 mL, επιτρέποντας την ομογενοποίηση με τον καθετήρα. Ομογενοποιεί στη συνέχεια υποβλήθηκε σε έμμεση υπερήχων χρησιμοποιώντας ένα UP200St με VialTweeter εξοπλισμένο με 200xt VialPress (Hielscher Ultrasonics GmbH, Γερμανία) για 3 λεπτά (80% παλμό και 100% δύναμη). Η χρήση αυτής της συσκευής απέφευγε τη μόλυνση. (Laughton et al. 2019)

Αξιόπιστος έλεγχος θερμοκρασίας κατά τη διάρκεια της υπερήχησης με το VialTweeter

Η θερμοκρασία είναι ένας κρίσιμος παράγοντας που επηρεάζει τη διαδικασία και είναι ιδιαίτερα σημαντικός για τη θεραπεία βιολογικών δειγμάτων. Καθώς όλες οι μηχανικές τεχνικές προετοιμασίας του δείγματος, η υπερήχηση δημιουργεί θερμότητα. Ωστόσο, η θερμοκρασία των δειγμάτων μπορεί να ελεγχθεί καλά όταν χρησιμοποιείτε το VialTweeter. Σας παρουσιάζουμε διάφορες επιλογές για την παρακολούθηση και τον έλεγχο της θερμοκρασίας των δειγμάτων σας κατά την προετοιμασία τους με το VialTweeter και VialPress για ανάλυση.

1. Παρακολούθηση της θερμοκρασίας του δείγματος: Ο υπερηχητικός επεξεργαστής UP200St, ο οποίος οδηγεί το VialTweeter, είναι εξοπλισμένος με ένα έξυπνο λογισμικό και έναν αισθητήρα θερμοκρασίας με δυνατότητα σύνδεσης. Συνδέστε τον αισθητήρα θερμοκρασίας στο UP200St και τοποθετήστε το άκρο του αισθητήρα θερμοκρασίας σε έναν από τους σωλήνες δείγματος. Μέσω ψηφιακής έγχρωμης οθόνης αφής, μπορείτε να ορίσετε στο μενού του UP200St ένα συγκεκριμένο εύρος θερμοκρασίας για το δείγμα υπερήχων σας. Ο υπερηχητικός παράγοντας θα σταματήσει αυτόματα όταν επιτευχθεί η μέγιστη θερμοκρασία και θα σταματήσει μέχρι να μειωθεί η θερμοκρασία του δείγματος στη χαμηλότερη τιμή της καθορισμένης θερμοκρασίας ∆. Στη συνέχεια, η υπερήχηση ξεκινά αυτόματα και πάλι. Αυτή η έξυπνη λειτουργία αποτρέπει την υποβάθμιση που προκαλείται από τη θερμότητα.
2. Το μπλοκ VialTweeter μπορεί να προψυχωθεί. Τοποθετήστε το μπλοκ VialTweeter (μόνο το sonotrode χωρίς μετατροπέα!) στο ψυγείο ή τον καταψύκτη για να προψύξετε το μπλοκ τιτανίου βοηθά στην αναβολή της αύξησης της θερμοκρασίας του δείγματος. Εάν είναι δυνατόν, το ίδιο το δείγμα μπορεί να προψυκτιστεί πάρα πολύ.
3. Χρησιμοποιήστε ξηρό πάγο για να κρυώσει κατά τη διάρκεια υπερήχηση. Χρησιμοποιήστε ένα ρηχό δίσκο γεμάτο με ξηρό πάγο και τοποθετήστε το VialTweeter στον ξηρό πάγο, έτσι ώστε η θερμότητα μπορεί να διαλύσει γρήγορα.

Οι πελάτες σε όλο τον κόσμο χρησιμοποιούν το VialTweeter και το VialPress για την καθημερινή τους εργασία παρασκευής δείγματος σε βιολογικά, βιοχημικά, ιατρικά και κλινικά εργαστήρια. Το ευφυές λογισμικό και ο έλεγχος θερμοκρασίας του επεξεργαστή UP200St, η θερμοκρασία ελέγχεται αξιόπιστα και η θερμότητα-προκληθείσα υποβάθμιση δειγμάτων αποφεύχθηκε. Υπερήχων προετοιμασία δείγματος με το VialTweeter και VialPress παρέχει εξαιρετικά αξιόπιστα και αναπαραγώγιμα αποτελέσματα!

Τεχνικές λεπτομέρειες του VialTweeter

Το VialTweeter είναι ένα μπλοκ sonotrode από τιτάνιο που μπορεί να χωρέσει μέχρι 10 φιαλίδια στις οπές εντός του μπλοκ. Επιπλέον, έως και 5 μεγαλύτεροι δοκιμαστικοί σωλήνες μπορούν να στερεωθούν στο μέτωπο vialTweeter χρησιμοποιώντας το VialPress. Το VialTweeter είναι σχεδιασμένο έτσι ώστε η ενέργεια υπερήχων κατανέμεται ομοιόμορφα σε κάθε εισάγεται φιαλίδιο για να εξασφαλίσει αξιόπιστα και ομοιόμορφα αποτελέσματα υπερήχηση. Ένας μικρός άξονας ρυθμίζει το sonotrode VialTweeter σε ανώμαλο έδαφος και ευθυγραμμίζει τους δοκιμαστικούς σωλήνες κάθετα.

Πλεονεκτήματα του VialTweeter με μια ματιά

• Έντονη κατεργασία με υπερήχους έως 10 φιαλίδια ταυτόχρονα
• Έμμεση κατεργασία με υπερήχους σε υψηλή ένταση υπερήχων μέσω τοίχωμα του δοχείου στο δείγμα
• Έμμεση κατεργασία υπερήχων αποφεύγει διασταυρούμενη μόλυνση και απώλεια δείγματος
• Αναπαραγώγιμα αποτελέσματα λόγω ρυθμιζόμενα και ελεγχόμενα εύρος υπερήχων
• Το VialPress σας δίνει τη δυνατότητα να κάνετε υπερήχους μεγαλύτερους σωλήνες
• Ρυθμιζόμενο εύρος από 20 έως 100%
• Λειτουργία ρυθμιζόμενου παλμού από 0 έως 100%
• autoclavable

Το VialTweeter τροφοδοτείται από το UP200St, ένα 200 Watt ισχυρό επεξεργαστή υπερήχων. Το UP200St είναι εξοπλισμένο με ένα έξυπνο λογισμικό που επιτρέπει τον ακριβή έλεγχο όλων των σημαντικών παραμέτρων διαδικασία υπερήχων, όπως το πλάτος, ο χρόνος υπερήχων, παλμούς, και τη θερμοκρασία. Αυτό καθιστά το VialTweeter ένα αξιόπιστο εργαλείο για την επιτυχή αναπαραγώγιμη διαδικασία οδηγεί σε βιολογικά και βιοχημικά εργαστήρια.
Το πλάτος μπορεί να ρυθμιστεί μεταξύ 20 και 100% και επιτρέπει με αυτόν τον τρόπο να προσαρμοστεί η υπερηχητική ένταση στο δείγμα σας. Για παράδειγμα, η διάτμηση και ο κατακερματισμός του DNA και του RNA απαιτεί ένα ηπιότερο πλάτος για να αποτρέψει την παραγωγή των πάρα πολύ μικρών θραυσμάτων DNA, η ομογενοποίηση ιστού του εγκεφάλου ποντικιών χρειάζεται την υπερήχηση υψηλής έντασης. Επιλέξτε το ιδανικό εύρος, την ένταση υπερήχων και τη διάρκεια μέσω του έξυπνου και διαισθητικού μενού στον επεξεργαστή UP200St. Το μενού και οι ρυθμίσεις είναι εύκολα προσβάσιμα και λειτουργούν μέσω έγχρωμης οθόνης αφής. Στις ρυθμίσεις μπορείτε να προ-ορίσετε παραμέτρους υπερήχων, όπως το πλάτος, παλμούς / λειτουργία κύκλου, διάρκεια υπερήχων, συνολική εισροή ενέργειας, και τα όρια θερμοκρασίας. Στην έρευνα και την παραγωγή, η επαναληψιμότητα των δοκιμών και των αποτελεσμάτων των δοκιμών είναι ζωτικής σημασίας. Αυτό σημαίνει ότι η ακριβής καταγραφή των συνθηκών της διαδικασίας και των πρωτοκόλλων υπερήχων είναι απολύτως σημαντική. Η αυτόματη protocolling δεδομένων γράφει όλα τα δεδομένα υπερήχηση σε ένα αρχείο CSV σε μια ενσωματωμένη κάρτα SD, έτσι ώστε να μπορείτε εύκολα να ελέγξετε και να συγκρίνετε διάφορες εκτελέσεις υπερήχων. Όλα τα δεδομένα υπερήχων διαδικασία μπορεί εύκολα να προσεγγιστεί και να μοιραστεί ως αρχείο CSV.
Hielscher Υπερήχων προσπαθεί να σας παρέχει προηγμένη τεχνολογία για τη διευκόλυνση και τη βελτίωση της ερευνητικής εργασίας σας!