Τεχνολογία Υπερήχων Hielscher

Υπερήχων Λύση του Ε. Coli

  • E. coli βακτήρια είναι τα συνηθέστερα χρησιμοποιούμενα βακτήρια στη μικροβιολογία και τη βιοτεχνολογία.
  • διαταράκτες κύτταρο Υπερήχων παραδώσει αξιόπιστα και αναπαραγώγιμα αποτελέσματα για την λύση των E. coli.
  • Έντονη ακόμη επακριβώς ελεγχόμενη σπηλαίωσης και διατμητικές δυνάμεις οδηγούν σε πλήρη αποδιοργάνωση και υψηλές αποδόσεις εκχύλισης (π.χ. πρωτεΐνες, DNA).

Κυττάρων Διακοπής με σπηλαίωση

Τα βακτήρια Escherichia coli λύονται αξιόπιστα με τη χρήση υπερήχων ΟΜΟΓΕΝΟΠΟΙΗΤΕΣ ιστού.Υπερήχων ομογενοποιητές ανιχνευτής τύπου λειτουργούν με περ. 20.000 κύκλους ανά δευτερόλεπτο (στα 20kHz) και να προκαλέσει σπηλαίωση σε υγρά ή supsensions. Ακουστική σπηλαίωση μικροσκοπική περιοχές του κενού που μοιάζει με πιέσεις και υψηλές θερμοκρασίες που δάκρυ κύτταρα χώρια. Παρά το γεγονός ότι οι θερμοκρασίες μπορεί να φτάσει αρκετές χιλιάδες βαθμούς Κελσίου, ο όγκος σπηλαίωση είναι τόσο μικρά που δεν θερμαίνουν σημαντικά τη διαδικασία. Ο υπέρηχος παράγεται ακουστική σπηλαίωση και διατμητικές δυνάμεις διατρυπούν ή να σπάσει την κυτταρική μεμβράνη του E.coli – ανάλογα με τη ρύθμιση της συσκευής του υπερηχητικού ομογενοποιητή.

Πλεονεκτήματα των Υπερήχων Λύσης

  • ακριβή έλεγχο της λύσεως (ένταση, πλάτος, τη θερμοκρασία)
  • βέλτιστη προσαρμογή σε συγκεκριμένες δείγματα
  • έλεγχος θερμοκρασίας
  • για πολύ μικρές έως πολύ μεγάλα δείγματα (μL σε λίτρα)
  • καθαρή μηχανική κατεργασία
  • γραμμική κλίμακα-up από εργαστήριο σε παραγωγή
Η υπερηχητική συσκευή VialTweeter επιτρέπει την ταυτόχρονη παρασκευή δείγματος μέχρι 10 φιαλίδια υπό ίδιες συνθήκες μεθόδου. (Κάντε κλικ για μεγέθυνση!)

VialTweeter για υπερήχων λύση

Αίτηση για πληροφορίες




Σημειώστε τις Πολιτική Απορρήτου.


Ενώ χημικών και enzymtic λύση μπορεί να είναι προβληματική – δεδομένου χημική λύση μπορεί να μεταβάλει τις πρωτεϊνικές δομές και εισάγουν προβλήματα καθαρισμού και ενζυμική λύση απαιτεί μακρούς χρόνους επώασης και δεν είναι αναπαραγώγιμη – υπερηχητική διατάραξη είναι ένα εκλεπτυσμένο, μέθοδος διάσπαση γρήγορα κυττάρου.
Υπερήχων λύση βασίζεται σε μηχανικές δυνάμεις μόνο. Δεν προστίθενται χημικές ουσίες, υπερήχηση σπάει το κυτταρικό τοίχωμα από τις δυνάμεις διάτμησης. Η χημική λύση μπορεί να αλλάξει τη πρωτεϊνική δομή και να εισαγάγει τα προβλήματα καθαρισμού. Η ενζυμική διαταραχή απαιτεί μεγάλους χρόνους επώασης και δεν είναι αναπαραγώγιμη. Υπερήχων διαταραχή των κυττάρων των κυττάρων E.coli βακτήρια είναι γρήγορη, απλή, αξιόπιστη και αναπαραγώγιμη. Αυτός είναι ο λόγος hielscher ultrasonicators χρησιμοποιούνται σε βιολογικά και βιοχημικά εργαστήρια σε όλο τον κόσμο για την προετοιμασία του δείγματος, προ-ανανλυτικά, in vitro διαγόνστικα και πολλαπλές δοκιμασίες.

Γενικές συστάσεις

UP400St υπερήχων με αντιδραστήρα ροήςΚατεργασία με υπερήχους είναι η πιο δημοφιλής τεχνική για τη λύση πολύ μικρές, μεσαίες και μεγάλες ποσότητες κυτταρικών εναιωρημάτων – από pico-λίτρα έως 100L / hr (με τη χρήση υπερήχων κυττάρου ροής). Τα κύτταρα λύονται με υγρή διάτμησης και σπηλαίωση. DNA είναι επίσης ψαλιδισμένα κατά τη διάρκεια της κατεργασίας με υπερήχους, έτσι δεν είναι απαραίτητο να προστεθεί DNase στο κυτταρικό εναιώρημα.
Ελεγχος θερμοκρασίας:
Με προ-ψύξη του δείγματος και κρατώντας το δείγμα κατά τη διάρκεια της κατεργασίας με υπερήχους πάνω σε πάγο, δείγμα θερμική αποικοδόμηση του δείγματος μπορεί να προληφθεί εύκολα.
Ιδανικά, τα δείγματα πρέπει να διατηρούνται παγωμένο κατά τη διάρκεια της λύσης, αλλά για τα περισσότερα δείγματα επαρκεί εάν η θερμοκρασία δεν αυξάνεται πάνω από τη θερμοκρασία του πολιτισμού ή της πηγής ιστού. Ως εκ τούτου, συνιστάται, να κρατήσει το εναιώρημα σε πάγο και να υποβάλλεται σε υπερήχους με αρκετούς σύντομοι υπέρηχοι παλμούς 5-10 sec και παύσεις 10-30 sec. Κατά τη διάρκεια των παύσεων, η θερμότητα μπορεί να διαλυθεί προκειμένου να αποκατασταθεί μια χαμηλή θερμοκρασία. Για μεγαλύτερα δείγματα κυττάρων, Διατίθενται διάφοροι αντιδραστήρες κυψελών ροής με ψυκτικά σακάκια.

Πρωτόκολλα για την Παρασκευή της E. Coli Κυτταρολύματα

ανάλυση Έκφραση και καθαρισμός της ανασυνδυασμένης πρωτεΐνης

Το σφαιρίδιο E. coli υποβλήθηκε σε υπερήχους με ένα υπερηχητικό σύστημα UP100H (Hielscher). Για το σκοπό αυτό, το κυτταρικό ίζημα επαναιωρήθηκε σε παγωμένο ρυθμιστικό λύσης (50 mM Τπδ-ΗΟΙ ρΗ = 7,5, 100 mM NaCI, 5 mM DTT, 1 mM PMSF) και ψύχθηκε σε πάγο για 10 λεπτά. Στη συνέχεια, το κυτταρικό εναιώρημα υποβλήθηκε σε κατεργασία με υπερήχους με 10 μικρές ριπές των 10 δευτερολέπτων ακολουθούμενες από διάστημα 30 δευτερολέπτων για ψύξη. Τελικά, τα κυτταρικά συντρίμματα απομακρύνθηκαν με υπερφυγοκέντρηση στους 4 ° C για 15 λεπτά στις 14000 rpm. Για επιβεβαίωση της έκφρασης rPR, το υπερκείμενο υγρό διεξήχθη σε πήκτωμα πολυακρυλαμιδίου 12% και αναλύθηκε με δϋδ-ΡΑΟΕ και Western blotting. Ο καθαρισμός του rPR πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας Νί2 +ΝΤΑ ρητίνη (Invitrogen, USA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Σε αυτό το στάδιο, χρησιμοποιήθηκε μητρική μέθοδο καθαρισμού. Η καθαρότητα της καθαρισμένης πρωτεΐνης εκτιμήθηκε χρησιμοποιώντας ηλεκτροφόρηση στο πήκτωμα πολυακρυλαμιδίου 12% και επακόλουθη χρώση με μπλε Coomassie. Καθαρισμένη συγκέντρωση πρωτεΐνης μετρήθηκε με κιτ δοκιμασίας πρωτείνης Micro BCA (PIERCE, USA). (Azarnezhad et al. 2016)

Υπερήχων UP100H διάρρηξης κυττάρων (100W) για λύση, κυτταρική διάσπαση και DNA διάτμηση.

Υπερήχων ομογενοποίησης UP100H 100W

Ανάπτυξη των κυττάρων, Η διασύνδεση και Παρασκευή Ε Εκχυλίσματα coli κύτταρο

Για SeqA και RNA πολυμεράση ChIP-Chip E. coli MG1655 ή MG1655 ΔseqA αναπτύχθηκε στους 37 ° C σε OD600 περίπου 0,15 σε 50 ml LB (+ 0,2% γλυκόζη) πριν προστεθούν 27 μΐ φορμαλδεΰδης (37%) ανά ml μέσου (τελική συγκέντρωση 1%). Η σταυροσύνδεση διεξήχθη με αργή ανάδευση (100 rpm) σε θερμοκρασία δωματίου για 20 λεπτά ακολουθούμενη από σβέση με 10 ml 2,5 Μ γλυκίνης (τελική συγκέντρωση 0,5 Μ). Για πειράματα θερμικού σοκ, το Ε. Coli MG1655 αναπτύχθηκε σε 65 ml μέσου LB στους 30 ° C σε OD600 περίπου 0,3. Στη συνέχεια 30 ml καλλιέργειας μεταφέρθηκαν σε προθερμασμένη φιάλη στους 43 ° C και το υπόλοιπο διατηρήθηκε στους 30 ° C. Η σταυροσύνδεση και η απόσβεση ήταν όπως περιγράφηκε παραπάνω εκτός του ότι τα κύτταρα διατηρήθηκαν στους 30 ή 43 ° C για 5 λεπτά πριν από την περαιτέρω αργή ανακίνηση σε θερμοκρασία δωματίου. Τα κύτταρα συλλέχθηκαν με φυγοκέντρηση και πλύθηκαν δύο φορές με ψυχρό TBS (ρΗ 7,5). Μετά την επαναιώρηση σε 1 ml ρυθμιστικού διαλύματος λύσης (10 mM Tris (ρΗ 8.0), 20% σακχαρόζη, 50 mM NaCI, 10 mM EDTA, 10 mglml λυσοζύμη) και επώαση στους 37 ° C για 30 λεπτά ακολουθούμενη από προσθήκη 4 ml IP ρυθμιστικό διάλυμα, τα κύτταρα υπέστησαν κατεργασία με υπερήχους σε πάγο με 12 φορές 30 δευτερόλεπτα και διαλείμματα 30 δευτ. σε ένα UP400St υπερήχων επεξεργαστή (Hielscher Ultrasonics GmbH) με 100% της ισχύος. Μετά από φυγοκέντρηση για 10 λεπτά στα 9000 g, 800 μΙ aliquotes του υπερκειμένου φυλάχθηκαν στους -20 ° C. (Waldminghaus 2010)

Υπερπαραγωγή και καθαρισμός των ενζύμων.

Για υπερπαραγωγή decahistidine (His10) σημασμένο με επισύναψη πρωτεΐνες, E. coli BL21 (DE3) μετασχηματίστηκε με pET19b κατασκευάσματα. Μια ολονύκτια προκαλλιέργεια συλλέχθηκε με φυγοκέντρηση, και το 1% χρησιμοποιήθηκε για να εμβολιάσει μια καλλιέργεια έκφρασης. Κύτταρα που φέρουν pET19mgtB αναπτύχθηκαν στους 22 ° C μέχρις ότου μία οπτική πυκνότητα στα 600 nm (OD600) 0,7. Η καλλιέργεια μεταφέρθηκε σε 17 ° C και επάγονται από 100 μΜ IPTG. Μετά από 16 ώρες, η καλλιέργεια συλλέχθηκε με φυγοκέντρηση στα 7.500 χ g στους 4 ° C. Τα κύτταρα επαναιωρήθηκαν σε 50 mM ισοτονικό ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικού (PBS) με 0.3 Μ NaCl σε ρΗ 7.4 και διασπάστηκαν με υπερήχους με ένα S2 sonotrode μικρο-tip κατά τη UP200St υπερήχων (Hielscher, Teltow, Γερμανία) σε έναν κύκλο 0,5 και ένα πλάτος των 75%.
Η υπερπαραγωγή των decahistidine-tagged GtfC επήχθη στους 37 ° C σε μια OD600 0,6 με 100 μΜ IPTG. Τα κύτταρα στη συνέχεια επωάστηκαν για 4 ώρες, συλλέχθηκαν, λύθηκαν και όπως δηλώνεται παραπάνω για MgtB.
Ακατέργαστα κυτταρικά εκχυλίσματα φυγοκεντρήθηκαν στα 15,000 χ g και 4 ° C για να καθιζάνουν τα συντρίμματα των κυττάρων. Τα καθαρισμένα εκχυλίσματα φορτώθηκαν σε 1-ml HisTrap FF Ακατέργαστες στήλες χρησιμοποιώντας ένα σύστημα ÄKTAprime Plus (GE Healthcare). Τα ένζυμα καθαρίστηκαν σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή για βαθμίδος εκλούσεως His-tagged πρωτεΐνες. Τα εκλουσμένα διαλύματα πρωτεΐνης υποβλήθηκαν σε διαπίδυση δύο φορές έναντι 1.000 όγκους 50 mM PBS, ρΗ 7.4, με 0.3 Μ NaCl στους 4 ° C. Ο καθαρισμός αναλύθηκε με 12% SDS-PAGE. Η συγκέντρωση της πρωτεΐνης προσδιορίστηκε με τη μέθοδο Bradford χρησιμοποιώντας Roti-Quant (Carl Roth GmbH, Καρλσρούη, Γερμανία). (Rabausch et al. 2013)

Εκχύλιση πρωτεΐνης από Βακτήρια E. coli
Μια πρωτεΐνη δόλωμα ενδιαφέροντος (σε αυτήν την περίπτωση, MTV1 του Arabidopsis thaliana) συντήκεται με μια ετικέτα GST και εκφράζονται σε BL21 Escherichia coli (E.coli) κύτταρα.
1. Πάρτε ένα σφαιρίδιο από GST-MTV1 και GST (που αντιστοιχεί σε 50 ml βακτηριακής καλλιέργειας) και επαναιώρηση καθένα σε 2.5 mL παγωμένου ρυθμιστικού διαλύματος εκχύλισης.
2. Χρησιμοποιήστε ένα υπερήχων UP100H (Εξοπλισμένη με MS3 microtip-sonotrode για μικρούς όγκους (2-5ml)) για τη διάρρηξη των βακτηριακών κυττάρων μέχρις ότου λύονται, η οποία υποδεικνύεται από μειωμένη αδιαφάνεια και αυξημένο ιξώδες. Αυτό πρέπει να πραγματοποιείται σε πάγο, και συνιστάται να υποβάλλοντάς τα σε υπερήχους σε διαστήματα (π.χ. 10 sec υπερήχηση που ακολουθείται από 10 δευτερόλεπτα σε πάγο και ούτω καθεξής). Μέριμνα πρέπει να ληφθεί για να μην υποβάλλοντάς τα σε υπερήχους με πολύ υψηλή ένταση. Εάν αφρισμού ή ο σχηματισμός ενός λευκού ιζήματος ανιχνεύεται, η ένταση πρέπει να μειωθεί.
3. Μεταφέρετε το λύονται λύση βακτηρίων σε σωλήνες μικροφυγοκέντρου 1,5 ml και φυγοκέντρηση σε 4 ° C, 16.000 χ g για 20 λεπτά.

Allicin-τροποποιημένες πρωτεΐνες σε E.coli

Η VialTweeter είναι ένα άνετο υπερήχων για μικρά ομογενοποίηση του δείγματοςΠροσδιορισμός της Σουλφυδρυλο Περιεχόμενα από 5,5'-διθειοδις (2-νιτροβενζοϊκό οξύ) (ϋΤΝΒ) Δοκιμασία
Μια ολονύκτια καλλιέργεια Ε coli MG1655 χρησιμοποιήθηκε για να εμβολιάσει MOPS ελάχιστο μέσο (1: 100). Η καλλιέργεια αναπτύχθηκε αερόβια έως ότου επιτεύχθηκε μια Α600 0.4. Η καλλιέργεια χωρίστηκε σε τρία 15-ml καλλιεργειών για θεραπεία άγχους. Μια χωρίς αγωγή καλλιέργεια χρησίμευσε ως αρνητικός έλεγχος. 0.79 mM allicin (128 μg ml-1) Ή 1 mM διαμιδίου προστέθηκε σε μία από τις εναπομένουσες δύο καλλιέργειες καθένα. Οι καλλιέργειες επωάστηκαν για 15 λεπτά. 5 ml από κάθε καλλιέργεια συλλέχθηκαν με φυγοκέντρηση (8525 χ g, 4 ° C, 10 min). Τα κύτταρα πλύθηκαν δύο φορές με 1 ml PBS (137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM ΚΗ2Po4, ρΗ 7.4, αποθηκεύτηκε αναερόβια πριν από τη χρήση) και φυγοκεντρήθηκε (13.000 χ g, 4 ° C, 10 λεπτά). Τα κύτταρα επαναιωρήθηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα λύσης (PBS με 6 mM γουανιδίνιο HCl, ρΗ 7.4) πριν από τη διακοπή στους 4 ° C με υπερήχους (VialTweeter υπερήχων, Hielscher GmbH, Γερμανία) (3 × 1 λεπτό). Τα κυτταρικά υπολείμματα δισκιοποιούνται δια φυγοκεντρήσεως (13.000 χ g, 4 ° C, 15 min). Το υπερκείμενο μεταφέρθηκε σε ένα 3,5-ml QS-μακρο κυψελίδα (10 mm) με μία μαγνητική ράβδο ανάδευσης και αναμίχθηκαν με 1 ml ρυθμιστικού διαλύματος λύσης. Εξαφάνιση των δειγμάτων παρακολουθήθηκε στα 412 nm με ένα φασματοφωτόμετρο Jasco V-650 εξοπλισμένο με ελεγχόμενης θερμοκρασίας κάτοχο κυττάρου PSC-718 (Jasco) σε θερμοκρασία δωματίου. Προστέθηκαν 100 μΙ ενός διαλύματος 3 mM διθειοδις (2-νιτροβενζοϊκό οξύ). Απόσβεση παρακολουθήθηκε μέχρι να φθάσει σε κορεσμό. Υπολογισμός της συγκέντρωσης θειόλης διεξήχθη με τη χρήση του συντελεστή απόσβεσης ε412 = 13.700 Μ-1 εκ-1 για θειο-2-νιτροβενζοϊκό οξύ (ΤΝΒ). Cellular συγκεντρώσεις θειόλη υπολογίστηκαν με βάση έναν όγκο κύτταρα E.coli από 6.7 × 10-15 λίτρο και μια πυκνότητα κυττάρων του Α600 = 0.5 (ισοδύναμο με 1 × 108 κύτταρα ml-1 καλλιέργειας). (Müller et al. 2016)

In Vivo γλουταθειόνη Προσδιορισμός

E.coli MG1655 αναπτύχθηκε σε ελάχιστο μέσο MOPS σε ένα συνολικό όγκο των 200ml μέχρι ενός Α600 του 0,5. Η καλλιέργεια χωρίστηκε σε καλλιέργειες 50 ml για θεραπεία στρες. Μετά από 15 λεπτά επώασης με 0,79 mM αλλικίνη, 1 mM διαμίδιο ή διμεθυλοσουλφοξείδιο (συγκριτικό), τα κύτταρα συλλέχθηκαν σε 4.000 g στους 4 ° C για 10 λεπτά. Τα κύτταρα πλύθηκαν δύο φορές με ρυθμιστικό διάλυμα ΚΡΕ πριν από την επαναιώρηση των σφαιριδίων σε 700 μΐ ρυθμιστικού διαλύματος ΚΡΕ. Για αποπροστασία, προστέθηκαν 300 μΐ 10% (β / ο) σουλφοσαλικυλικού οξέος πριν από τη διάσπαση των κυττάρων με υπερήχους (3 χ 1 λεπτό, VialTweeter υπερήχων). Τα υπερκείμενα συλλέχθηκαν μετά από φυγοκέντρηση (30 λεπτά, 13.000 στροφές, 4 ° C). Οι συγκεντρώσεις σουλφοσαλικυλικό οξύ μειώθηκαν σε 1% δια της προσθήκης 3 όγκων ρυθμιστικού KPE. Μετρήσεις της συνολικής γλουταθειόνης και GSSG διεξήχθησαν όπως περιγράφεται παραπάνω. Cellular συγκεντρώσεις γλουταθειόνης υπολογίστηκαν με βάση έναν όγκο του E.coli κύτταρα του 6,7×10-15 λίτρο και μια πυκνότητα κυττάρων του Α600 0.5 (ισοδύναμο με 1×108 κύτταρα ml-1 Πολιτισμός). Οι συγκεντρώσεις GSH υπολογίστηκαν με αφαίρεση των 2 [GSSG] από το σύνολο των γλουταθειόνης. (Müller et al. 2016)

Υπερήχων διαταραχή για την λύση των κυττάρων και την εξαγωγή του βιολογικού υλικού (Κάντε κλικ για μεγέθυνση!)

Probe-τύπου υπερήχων UP400St

Έκφραση Ανθρώπινου mAspAT σε E.coli

Υπερήχων διάρρηξης κυττάρων UP400St (400W) για την εξαγωγή των ενδοκυτταρικών ύλης (π.χ. πρωτεΐνες, οργανίδια, DNA, RNA κλπ)Η μοναδική αποικία του E.coli BL21 (DE3) που φέρει το φορέα έκφρασης σε 30 mL Luria-Bertani (LB) μέσο που περιέχει 100 μg / mL αμπικιλλίνη, και στη συνέχεια καλλιεργούνται στους 37 ° C έως ότου η οπτική πυκνότητα (OD600) Ανήλθαν σε 0,6. Τα κύτταρα συλλέχθηκαν με φυγοκέντρηση στα 4.000 χ g για 10 λεπτά, και επαναιωρήθηκαν σε 3L φρέσκο ​​μέσο LB το οποίο περιέχει 100 μg / mL αμπικιλλίνη.
Ακολούθως, η έκφραση πρωτεΐνης επάχθηκε με 1 mM ισοπροπυλ β-ᴅ-1-θειογαλακτοπυρανοσίδη (IPTG) για 20 ώρες στους 16ºC. Τα κύτταρα συλλέχθηκαν με φυγοκέντρηση στα 8.000 χ g για 15 λεπτά και πλύθηκε με ρυθμιστικό διάλυμα Α (20 mM ΝαΗ2ΡΟ4, 0.5 Μ NaCl, ρΗ 7.4). (Υγρό βάρος) κύτταρα κατά προσέγγιση 45g ελήφθησαν από 3 καλλιέργεια L. Μετά από φυγοκέντρηση, τα σφαιρίδια του κυττάρου επανααιωρήθηκε σε 40 κ.εκ. (για 1 λίτρο καλλιέργειας) παγωμένου εκχύλιση ρυθμιστικό διάλυμα Α, και λύθηκαν με υπερήχους σε θερμοκρασία παγωμένου χρησιμοποιώντας ένα UP400St όργανο (Δρ Hielscher GmbH, Γερμανία). Η λύση των κυττάρων υποβλήθηκε σε φυγοκέντρηση σε 12,000 rpm για 15 λεπτά για να διαχωριστεί το διαλυτό (υπερκείμενο) και καταβυθίζεται (σβώλος) κλάσματα. (Jiang et al. 2015)

Ο παρακάτω πίνακας σας δίνει μια ένδειξη για την κατά προσέγγιση ικανότητα επεξεργασίας των υπερήχων μας:

Μαζική Όγκος Ρυθμός ροής Προτεινόμενες συσκευές
0.5 έως 1.5mL μ.δ. VialTweeter
1 έως 500mL 10 έως 200 ml / λεπτό UP100H
10 έως 2000mL 20 έως 400mL / λεπτό Uf200 ः t, UP400St
0.1 έως 20 λίτρα 0.2 έως 4 λίτρα / λεπτό UIP2000hdT
10 έως 100L 2 έως 10 λίτρα / λεπτό UIP4000
μ.δ. 10 έως 100 λίτρα / λεπτό UIP16000
μ.δ. μεγαλύτερος σύμπλεγμα UIP16000

Επικοινωνήστε μαζί μας! / Ρωτήστε μας!

Χρησιμοποιήστε την παρακάτω φόρμα, εάν επιθυμείτε να ζητήσετε πρόσθετες πληροφορίες σχετικά με την ομοιογενοποίηση με υπερήχους. Θα χαρούμε να σας προσφέρουμε ένα υπερηχητικό σύστημα που θα ικανοποιεί τις απαιτήσεις σας.









Παρακαλείστε να σημειώσετε ότι η Πολιτική Απορρήτου.


Λογοτεχνία / Αναφορές



Γεγονότα που αξίζει να γνωρίζουμε

Ε. Coli

Το Escherichia coli (Ε. Coli) είναι ένα gram-αρνητικό, προαιρετικά αναερόβιο, σε σχήμα ράβδου, κολοβακτηριδιακό βακτήριο του γένους Escherichia το οποίο βρίσκεται συνήθως στο κατώτερο έντερο των θερμών αιμοφόρων οργανισμών (ενδοθερμίες). Υπάρχει ένας μεγάλος αριθμός στελεχών (ή υποτύπων) Ε. Coli με ποικίλα χαρακτηριστικά. Τα περισσότερα στελέχη του Ε. Coli είναι αβλαβή για τον άνθρωπο, π.χ. στελέχη Β και Κ-12 που χρησιμοποιούνται συνήθως για ερευνητικές εφαρμογές σε εργαστήρια. Ωστόσο, ορισμένα στελέχη είναι επιβλαβή και μπορούν να προκαλέσουν σοβαρή ασθένεια.
E. coli διαδραματίζει σημαντικό ρόλο στη σύγχρονη βιολογική μηχανική και βιομηχανική μικροβιολογία δεδομένου ότι τα βακτήρια είναι εύκολο να χειραγωγήσουν. Κοινή εφαρμογές εργαστήριο οι οποίες συνεπάγονται συχνά τη χρήση της E. coli, π.χ. για να δημιουργήσει ανασυνδυασμένο δεσοξυριβονουκλεϊκό οξύ (DNA) ή για να ενεργεί ως πρότυπος οργανισμός.
E. coli είναι ένα πολύ ευπροσάρμοστο ξενιστή για την παραγωγή ετερόλογων πρωτεϊνών, και πολλαπλή συστήματα έκφρασης πρωτεΐνης είναι διαθέσιμη για την παραγωγή ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών σε E.coli. Χρησιμοποιώντας τα πλασμίδια τα οποία επιτρέπουν υψηλού επιπέδου έκφραση της πρωτεΐνης, τα γονίδια μπορούν να εισάγονται εντός των βακτηριδίων, η οποία επιτρέπει την παραγωγή τέτοιων πρωτεϊνών σε υψηλές ποσότητες σε διαδικασίες βιομηχανικής ζύμωσης.
E.coli χρησιμοποιούνται ως κύτταρο εργοστάσια για την παραγωγή ινσουλίνης. Περαιτέρω εφαρμογές περιλαμβάνουν τη χρήση των τροποποιημένων κυττάρων E. coli για την ανάπτυξη και την παραγωγή εμβολίων και ακινητοποιημένα ένζυμα, για την παραγωγή βιοκαυσίμων, καθώς και για βιοεπανόρθωση.
Το στέλεχος Κ-12 είναι μια μεταλλαγμένη μορφή της E. Coli που υπερ-εκφράζει το ένζυμο αλκαλική φωσφατάση (ALP). Αυτή η μετάλλαξη εμφανίζεται οφείλεται σε ελάττωμα στο γονίδιο που συνεχώς κωδικοποιεί για το ένζυμο. Εάν ένα γονίδιο παράγει ένα προϊόν χωρίς καμία αναστολή αυτό είναι γνωστό ως συστατική δραστικότητα. Αυτή η συγκεκριμένη μεταλλαγμένη μορφή χρησιμοποιείται για την απομόνωση και τον καθαρισμό το ένζυμο ALP.

Υπερήχων DNA διάτμηση

Υπερήχων δυνάμεις διάτμησης είναι μια ευρέως χρησιμοποιούμενη μέθοδος για το διαχωρισμό από το κύτταρο και να σπάσει κλώνους DNA σε κομμάτια. Ακουστική σπηλαίωση σπάει τα κυτταρικά τοιχώματα και οι μεμβράνες για την εκχύλιση του DNA από κύτταρα και παράγουν θραύσματα των περίπου 600 – 800 bp σε μήκος, το οποίο είναι ιδανικό για την ανάλυση.
Κάντε κλικ εδώ για να μάθετε περισσότερα σχετικά με υπερήχους Ομογενοποιητές για τον κατακερματισμό του DNA!