Εκχύλιση πρωτεϊνών υπερήχων από καλλιέργειες ιστών και κυττάρων

  • εκχύλιση πρωτεΐνη είναι ένα ουσιαστικό βήμα προετοιμασία του δείγματος στην πρωτεομική.
  • Οι πρωτεΐνες μπορούν να εξαχθούν από φυτικό και ζωικό ιστό, ζύμες και μικροοργανισμούς.
  • Κατεργασία με υπερήχους είναι μια αξιόπιστη, αποτελεσματική μέθοδο εκχύλισης πρωτεΐνης δίνοντας υψηλές αποδόσεις πρωτεΐνης μέσα σε σύντομο χρόνο εκχύλισης.

Εκχύλιση πρωτεΐνης από ιστούς και κύτταρα

Η εκχύλιση πρωτεϊνών από ιστούς και καλλιεργημένα κύτταρα είναι ένα βασικό βήμα προετοιμασίας δείγματος που πραγματοποιείται κατά τη διάρκεια πολλών βιοχημικών και αναλυτικών τεχνικών όπως ELISA, PAGE, Western blotting, φασματομετρία μάζας ή καθαρισμός πρωτεϊνών. Η υπερηχητική διαταραχή των κυττάρων, η λύση και η εκχύλιση είναι μια ακριβώς ελεγχόμενη, μη θερμική τεχνική για την εξασφάλιση υψηλών αποδόσεων πρωτεϊνών.

Αίτηση για πληροφορίες




Σημειώστε τις Πολιτική Απορρήτου.


Οι υπερηχητικοί ανιχνευτές τύπου όπως το UP200St είναι αξιόπιστοι ομογενοποιητές ιστών και χρησιμοποιούνται ευρέως για την προετοιμασία δειγμάτων στη γενετική και πρωτεομική έρευνα.

Εκχύλιση πρωτεϊνών από κύτταρα με το υπερηχητικός καθετήρας UP200St

Πλεονεκτήματα της υπερηχητικής λύσης και της εκχύλισης πρωτεϊνών
 

  • ταχύς
  • υψηλές αποδόσεις
  • υψηλής απόδοσης
  • Ακριβής έλεγχος πάνω παραμέτρων
  • επαναλήψιμα αποτελέσματα
  • γραμμική επεκτασιμότητα

Γενικές οδηγίες για τη λύση υπερήχων και την εκχύλιση πρωτεϊνών

  • Ελεγχος θερμοκρασίας: Για να εξασφαλιστεί μια υψηλή απόδοση πρωτεΐνης χωρίς θερμική μετουσίωση, θερμοκρασία κατά τη διάρκεια εκχύλισης πρέπει να ελέγχεται. state-of-art ομογενοποιητών υπερήχων Hielscher του – ονομάζεται επίσης υπερηχητικός απολυμαντής ή υπερηχητικός – είναι ακριβώς ελεγχόμενη. Έρχονται με έναν αισθητήρα θερμοκρασίας αποσπώμενες. Στις επιλογές ρύθμισης του υπερηχητικού ομογενοποιητή, μια μέγιστη θερμοκρασία μπορεί να ρυθμιστεί. Όταν επιτευχθεί αυτή η θερμοκρασία max, η υπερήχων σταματά αυτόματα μέχρις ότου το δείγμα να κρυώσει.
  • Ρυθμιστής: Η επιλογή ενός κατάλληλου ρυθμιστικού διαλύματος και το δικαίωμα όγκο του ρυθμιστικού διαλύματος ποικίλλει από ιστό σε ιστό και πρέπει να καταλάβει-out από δοκιμές δοκιμής και σφάλματος.
  • Απομόνωση / καθαρισμό: Πρωτεϊνικά λύματα μπορούν να περιέχουν μία περίσσεια βιομορίων όπως το DNA ή υδατάνθρακες, που μπορεί να αφαιρεθεί με καθίζηση πρωτεΐνης (δεοξυχολικό-τριχλωροξικό οξύ) ή ανταλλαγή ρυθμιστικού.

Οι Chittapalo και Noomhorm (2009) ανέφεραν στη μελέτη τους ότι η απόδοση πρωτεϊνών αυξήθηκε χρησιμοποιώντας υπερήχους και ότι η διαδικασία ομογενοποίησης και λύσης υπερηχητικών ιστών μπορεί να ενισχύσει σημαντικά τις υπάρχουσες διαδικασίες εκχύλισης – επιτρέποντας νέες ευκαιρίες εξαγωγής εμπορικά.
 

Υπερήχων CupHorn για την ταυτόχρονη προετοιμασία δείγματος πολλαπλών δειγμάτων υπό τις ίδιες συνθήκες για απομόνωση πρωτεϊνών και κατακερματισμό DNA.

Υπερήχων cuphorn για την ταυτόχρονη, εξαιρετικά αποτελεσματική προετοιμασία δείγματος πολλαπλών δειγμάτων υπό τις ίδιες συνθήκες για απομόνωση πρωτεϊνών και κατακερματισμό DNA.

εκχύλιση πρωτεΐνης από ζωικό ιστό

Υπερήχων UP100H είναι ένας εργαστηριακός ομογενοποιητής που χρησιμοποιείται συχνά για την προετοιμασία δειγμάτων πλακών κυτταροκαλλιέργειας.Για την παρασκευή ιστών ολικού μεγέθους (π.χ. νεφρού, καρδιάς, πνεύμονα, μυς κ.λπ.), ο ιστός θα πρέπει να τεμαχίζεται σε πολύ μικρά κομμάτια με καθαρά εργαλεία, πάνω στον πάγο κατά προτίμηση και όσο το δυνατόν γρηγορότερα για την πρόληψη αποικοδόμησης από πρωτεάσες (π.χ. ρυθμιστικό διάλυμα λύσης όπως RIPA ή υποτονικό ρυθμιστικό διάλυμα λύσης που περιέχει κοκτέιλ πρωτεάσης και αναστολέα φωσφατάσης). Μετά την ανάλυση, το δείγμα βυθίζεται σε υγρό άζωτο για την κατάψυξη. Το δείγμα μπορεί να αποθηκευτεί στους -80 ° C για μεταγενέστερη χρήση ή να διατηρηθεί σε πάγο για άμεση ομογενοποίηση. Αμέσως πριν την εκχύλιση με υπερήχους προστίθεται ταχέως ρυθμιστικό διάλυμα λύσης με παγωμένο ρυθμιστικό διάλυμα λύσης (με αναστολείς πρωτεάσης DTT, λευπεπτίνη και απροτινίνη) στο σωλήνα δειγμάτων (για ~ 10 mg ιστού περίπου ~ 600 μL ρυθμιστικού διαλύματος). Περίπου. Συνιστάται 20-60mg ιστού ανά σωλήνα δειγμάτων.
Υπερήχων ομογενοποίηση, λύση και εκχύλιση πραγματοποιείται με έναν ομογενοποιητή υπερήχων όπως το UP100H ή UP200Ht, εξοπλισμένο με ένα sonotrode μικρο-άκρη. Η διάρκεια υπερήχων είναι 60-90 sec. σε λειτουργία υπερηχητικού κύκλου 15 sec. υπερήχηση και 10 sec. χρόνο ανάπαυσης. Το δείγμα πρέπει να διατηρείται σε πάγο όλη την ώρα.
Μετά υπερηχητική ομογενοποίηση / εκχύλιση, το κυτταρόλυμα υποβάλλεται σε φυγοκέντρηση στα 27.000§ για περ. 20 min. Στη συνέχεια το υπερκείμενο συλλέγεται, έτσι ώστε η συγκέντρωση πρωτεΐνης μπορεί να προσδιορίζεται με μία δοκιμασία πρωτεΐνης όπως Pierce BCA ποσοτικό προσδιορισμό πρωτεϊνών.

Εκχύλιση πρωτεϊνών από ορό του αίματος

Για ένα ομοιογενές μείγμα του ορού και του φωσφορικού ρυθμιστικού διαλύματος, το δείγμα στροβιλίζεται πρώτα πριν από την υπερηχητική κυτταρική λύση. Για την υπερηχητική λύση, το δείγμα υπερήχων με έναν ομογενοποιητή εργαστηρίου υπερήχων όπως το UP100H για 8 κύκλους σε πλάτος 20%, για κύκλους κάθε 5 δευτερόλεπτα και 15 δευτερόλεπτα μακριά. Η εκχύλιση πρωτεϊνών πραγματοποιείται με υπερήχους σε κύκλους (τρόπος παλμών) και τοποθετώντας το δείγμα σε πάγο έτσι ώστε να αποφεύγεται η υπερθέρμανση και η θερμική αποικοδόμηση του δείγματος. Δεδομένου ότι ο ορός περιέχει μεγάλη ποσότητα πρωτεϊνών υψηλού μοριακού βάρους (όπως λευκωματίνη, α1-αντιθρυψίνη, τρανσφερίνη, απτοσφαιρίνη, ανοσοσφαιρίνη G και ανοσοσφαιρίνη Α), οι οποίες παρεμβαίνουν στον διαχωρισμό πρωτεϊνών χαμηλού μοριακού βάρους κατά τη διάρκεια της IEF, συνιστάται η εξάντλησή τους από τον ορό χρησιμοποιώντας μια στήλη εξάντλησης.

εκχύλιση πρωτεΐνης από φυτικό ιστό

Φρέσκο, μαλακό φυτικό ιστό, π.χ. βρύα κλπ, μπορούν εύκολα να διασπαστούν με την απλή τοποθέτηση το ψιλοκομμένο δείγμα υλικού σε ρυθμιστικό διάλυμα λύσης για υπερήχηση. Σκληρή, ligenous φυτικούς ιστούς, όπως οι σπόροι, έλατο βελόνες κ.λπ., θα πρέπει να αλεστεί ξηρά. Μερικά σκληρά, ξυλώδη φυτικά υλικά πρέπει να καταψύχονται και αλέθονται σε υγρό άζωτο πριν εκχυλίζεται με επεξεργασία με υπερήχους. Για εναιωρήματα φυτικών κυττάρων καλλιέργειας, ένας υπερηχητικός θεραπεία μεταξύ 30 και 150 δευτερόλεπτα σε ένα ρυθμιστικό διάλυμα λύσης είναι ως επί το πλείστον επαρκής. Πιο σκληροί υλικό όπως σπόροι κολοκύθας απαιτούν μια πιο έντονη κατεργασία με υπερήχους όπως περιγράφεται παρακάτω.
 

Αυτό το σεμινάριο εξηγεί ποιος τύπος υπερήχων είναι καλύτερος για τις εργασίες προετοιμασίας του δείγματός σας, όπως λύση, κυτταρική διαταραχή, απομόνωση πρωτεϊνών, κατακερματισμός DNA και RNA σε εργαστήρια, ανάλυση και έρευνα. Επιλέξτε τον ιδανικό τύπο υπερήχων για την εφαρμογή σας, τον όγκο δείγματος, τον αριθμό δείγματος και την απόδοση. Hielscher Υπέρηχοι έχει το ιδανικό υπερήχων ομογενοποιητή για σας!

Πώς να βρείτε τον τέλειο υπερήχων για κυτταρική διαταραχή και εκχύλιση πρωτεϊνών στην επιστήμη και την ανάλυση

Μικρογραφία βίντεο

 

Πρωτόκολλο για την υπερηχητική εκχύλιση λευκωματίνης από σπόρους κολοκύθας

Υπερήχων ομογενοποιητή ιστών UP400St με S24d40 - για την εκχύλιση της πρωτεΐνης από φυτικό και ζωικό ιστό (Click για μεγέθυνση!)Για την εκχύλιση με υπερήχους πρωτεΐνης της λευκωματίνης από λεπτή σκόνη σπόρου κολοκύθας, 10 g απολιπανθείσας σκόνης σπόρου κολοκύθας και 100 mL απιονισμένου νερού ως διαλύτη προστίθενται σε γυάλινο ποτήρι ζέσεως 250mL. Η εκχύλιση πρωτεΐνης αποτελείται από δύο στάδια: Πρώτον, το δείγμα υποβάλλεται σε κατεργασία με υπερήχους με ένας υπερηχητικός ανιχνευτής τύπου UP400St (400W, 24kHz) εξοπλισμένος με sonotrode S24d7. Το γυάλινο ποτήρι ζέσεως τοποθετείται σε λουτρό κρύου νερού κατά τη διάρκεια της ομογενοποίησης υπερήχων. Ο pluggable αισθητήρας θερμοκρασίας και οι ρυθμίσεις ελέγχου θερμοκρασίας του υπερήχων UP400St εξασφαλίζουν ότι η θερμοκρασία δείγματος διατηρείται πάντα κάτω από 30 ° C. Με τον ακριβή έλεγχο θερμοκρασίας κατά τη διάρκεια της υπερήχησης, αποφεύγεται η μετουσίωση της λευκωματίνης. Δεύτερον, η εκχύλιση πραγματοποιήθηκε με μίξερ στις 200 στροφές και στους 30°C. Στη συνέχεια, το ποτήρι ζέσεως μεταφέρεται σε θερμοστατικό αναδευτήρα. Η σφαιρίνη απομακρύνεται μέσω αιμοκάθαρσης με απεσταγμένο νερό. Μετά την απομάκρυνση της σφαιρίνης, μπορεί να ληφθεί δείγμα από το πρωτεϊνικό εκχύλισμα για τον προσδιορισμό του προφίλ λευκωματίνης και στη συνέχεια ρυθμίζεται σε pI=3,0 χρησιμοποιώντας 0,1 M HCl για πήξη λευκωματίνης. Η στερεά φάση διαχωρίζεται με φυγοκέντρηση στα 5000g, 20°C και επαναδιαλύεται σε απιονισμένο νερό. Η πήξη της λευκωματίνης εκτελείται δύο φορές για να αυξηθεί η αναλογία πρωτεϊνών στο συμπύκνωμα λευκωματίνης.

Υπερήχων εκχύλιση αλκαλικό πρωτεΐνης για την παρασκευή συμπυκνώματος πρωτεΐνης από πίτουρο ρυζιού δείχνει ότι τα αποτελέσματα της θεραπείας με υπερήχους σε υψηλότερη απόδοση πρωτεΐνης σε ένα σημαντικά βραχύτερο χρόνο εκχύλισης – σε σύγκριση με τις συμβατικές μεθόδους εκχύλισης.

Αυτό το βίντεο κλιπ δείχνει τον ομογενοποιητή υπερήχων Hielscher UP100H, έναν υπερηχητικό που χρησιμοποιείται ευρέως για την προετοιμασία δειγμάτων σε εργαστήρια.

Υπερηχητικός ομογενοποιητής UP100H

Μικρογραφία βίντεο

Δείγμα πρωτόκολλο παρασκευής για λειτουργικό ένζυμο iNOS

Για να αποκτήσετε πλήρως λειτουργικό ένζυμο iNOS (π.χ. για έλεγχο φαρμάκων), συνιστάται το ακόλουθο πρωτόκολλο: Το κυτταρικό εναιώρημα πρέπει να τοποθετείται σε πάγο και να υποβάλλεται με υπερήχους με up100H σε πλάτος 10μm σε λειτουργία κύκλου 5 sec. υπερήχηση και 25 sec. στηρίζεται σε πάγο. Η διαδικασία πρέπει να επαναληφθεί περίπου 3 φορές. Ο χρόνος ανάπαυσης μεταξύ των κύκλων υπερήχων μειώνει την αύξηση της θερμοκρασίας και ως εκ τούτου θα μειώσει τον κίνδυνο μετουσίωσης.

Υπερήχων Πρωτεΐνη διαλυτοποίηση

Η κατεργασία με υπερήχους μπορεί να επιταχύνει την διαδικασία διαλυτοποίησης πρωτεΐνης, η οποία συνήθως απαιτεί αρκετές ώρες. Για να μην υπερθερμανθεί το δείγμα και την πρόληψη αποικοδόμησης των πρωτεϊνών και τροποποιήσεις σε διαλύματα που περιέχουν ουρία, οι ριπές υπερήχων δεν πρέπει να διαρκέσει περισσότερο από λίγα δευτερόλεπτα.

Το VialTweeter είναι ένα μοναδικό σύστημα υπερήχων για την ταυτόχρονη Υπερήχηση έως και 10 φιαλίδια υπό τις ίδιες ακριβώς συνθήκες χωρίς διασταυρούμενη μόλυνση.

Με VialTweeter για Υπερήχηση κλειστών φιαλιδίων

Μικρογραφία βίντεο

Υπερήχων UP200Ht με μικροκλίπωση S26d2 για υπερήχων λύση βιολογικών δειγμάτων

Υπερηχητικός UP200Ht με 2mm microtip S26d2 για την υπερήχηση μικρών δειγμάτων.

Υπερηχογραφικός εξοπλισμός για πρωτεΐνη Εξαγωγή

Hielscher Ultrasonics προσφέρουν ένα ευρύ φάσμα των υπερήχων ΟΜΟΓΕΝΟΠΟΙΗΤΕΣ για την αποσύνθεση των κυττάρων, ιστών, βακτήρια, μικροοργανισμούς, μαγιά, και τα σπόρια.
Hielscher εργαστήριο υπερήχων είναι ισχυρό και εύκολο να λειτουργήσει. Κατασκευασμένες για 24 ώρες το 24ωρο, 7 ημέρες την εβδομάδα λειτουργία, έχουν σχεδιαστεί ως στιβαρές και αποτελεσματικές εργαστηριακές και επιτραπέζιες συσκευές. Για όλες τις συσκευές, η έξοδος ενέργειας και το πλάτος μπορούν να ελεγχθούν με ακρίβεια. Η ευρεία γκάμα αξεσουάρ ανοίγει περαιτέρω επιλογές ρύθμισης. Οι ψηφιακοί υπερήχων όπως το VialTweeter, UP200Ht, UP200St, και UP400St διαθέτουν ενσωματωμένο έλεγχο θερμοκρασίας και ενσωματωμένη κάρτα SD για αυτόματη καταγραφή δεδομένων.
Για την έμμεση, χωρίς διασταυρούμενη μόλυνση και ταυτόχρονη υπερήχηση πολλαπλών δειγμάτων, προσφέρουμε το VialTweeter ή το υπερηχητικό CupHorn.
Ο παρακάτω πίνακας σας δίνει μια επισκόπηση των υπερήχων μας για την προετοιμασία δειγμάτων, τη διάσπαση των κυττάρων και την εκχύλιση. Κάντε κλικ στον τύπο της συσκευής για να λάβετε περισσότερες πληροφορίες για κάθε ομογενοποιητή υπερήχων. Το καλά εκπαιδευμένο και μακροχρόνιο τεχνικό προσωπικό μας θα χαρεί να σας βοηθήσει να επιλέξετε τον πιο κατάλληλο υπερηχητικό για την προετοιμασία του δείγματος σας!
 

Μαζική Όγκος Ρυθμός ροής Προτεινόμενες συσκευές
έως 10 φιαλίδια ή σωλήνες μ.δ. VialTweeter
πλάκες πολλαπλών κοιλοτήτων / μικροτιτλοδότησης μ.δ. UIP400MTP
πολλαπλοί σωλήνες / δοχεία μ.δ. Cuphorn
1 έως 500mL 10 έως 200 ml / λεπτό UP100H
10 έως 1000mL 20 έως 200mL / λεπτό Uf200 ः t, UP200St
10 έως 2000mL 20 έως 400mL / λεπτό UP400St

Ανάλογα με την εφαρμογή, το υλικό, και ο όγκος του δείγματος σας, θα σας προτείνουμε την πιο κατάλληλη ρύθμιση για την προετοιμασία του δείγματος σας. Επικοινωνήστε μαζί μας σήμερα!

Επικοινωνήστε μαζί μας! / Ρωτήστε μας!

Ζητήστε περισσότερες πληροφορίες

Χρησιμοποιήστε την παρακάτω φόρμα για να ζητήσετε πρόσθετες πληροφορίες σχετικά με τους ομογενοποιητές υπερήχων, τις εφαρμογές στη βιοτεχνολογία και την πρωτεωμική καθώς και τις τιμές. Θα χαρούμε να συζητήσουμε μαζί σας τη διαδικασία διάσπασης κυττάρων και εκχύλισης πρωτεϊνών και να σας προσφέρουμε έναν υπερηχητικό που ανταποκρίνεται στις απαιτήσεις σας!









Παρακαλείστε να σημειώσετε ότι η Πολιτική Απορρήτου.


 

Το βίντεο δείχνει το σύστημα προετοιμασίας υπερηχητικών δειγμάτων UIP400MTP, το οποίο επιτρέπει την αξιόπιστη προετοιμασία δείγματος οποιωνδήποτε τυποποιημένων πολυ-φρεγατικών πλακών χρησιμοποιώντας υπερήχους υψηλής έντασης. Οι τυπικές εφαρμογές του UIP400MTP περιλαμβάνουν κυτταρική λύση, DNA, RNA και κουρά χρωματίνης καθώς και εκχύλιση πρωτεϊνών.

Υπερήχων UIP400MTP για πολυ-πηγάδι πλάκα κατεργασία με υπερήχους

Μικρογραφία βίντεο

Hielscher υπερήχων μπορεί να ελεγχθεί εξ αποστάσεως μέσω του ελέγχου του προγράμματος περιήγησης. Οι παράμετροι κατεργασίας με υπερήχους μπορούν να παρακολουθούνται και να προσαρμόζονται με ακρίβεια στις απαιτήσεις της διεργασίας.

Οι ψηφιακοί υπερηχητικοί Hielscher διαθέτουν τηλεχειριστήριο προγράμματος περιήγησης και αυτόματη πρωτοκόλληση δεδομένων σε ενσωματωμένη κάρτα SD.

Υπερήχων VialTweeter συσκευή για την εκχύλιση πρωτεϊνών από δείγματα ιστών (Click για μεγέθυνση!)

VialTweeter για την έμμεση υπερήχους.



Γεγονότα που αξίζει να γνωρίζουμε

Πρωτεομική

Πρωτεομική είναι το πεδίο έρευνας που διερευνά τις πρωτεΐνες και το proteome. Οι πρωτεΐνες τηρούσε μια μεγάλη σειρά από ζωτικές λειτουργίες μέσα οργανισμούς. Το πρωτεώματος είναι το σύνολο των πρωτεϊνών που εκφράζονται από ένα γονιδίωμα, κύτταρο, ιστό, ή τον οργανισμό σε έναν ορισμένο χρόνο. Η πρωτεώματος ποικίλλει με το χρόνο και διακριτές απαιτήσεις, ή τονίζει, ότι ένα κύτταρο ή οργανισμό υφίσταται. Πιο συγκεκριμένα, αυτό είναι το σύνολο των εκφρασμένων πρωτεϊνών σε ένα δεδομένο τύπο κυττάρου ή οργανισμού, σε μια δεδομένη στιγμή, υπό καθορισμένες συνθήκες. Ο όρος είναι ένα μείγμα πρωτεϊνών και γονιδιώματος. Πρωτεομική είναι η μελέτη της proteome.

Πρωτεΐνη

Οι πρωτεΐνες είναι είναι μεγάλα βιομόρια, το λεγόμενο μακρομορίων – που αποτελούνται από μία ή περισσότερες μακριές αλυσίδες υπολειμμάτων αμινοξέων. Οι πρωτεΐνες υπάρχουν σε όλους τους οργανισμούς φυτικής και ζωικής προέλευσης και είναι κρίσιμοι για τις περισσότερες από τις βιολογικές λειτουργίες. Δεδομένου ότι οι πρωτεΐνες περιέχουν πολλές βιολογικές πληροφορίες, εξάγονται για αναλυτικό σκοπό, π.χ. για πρωτεϊνωματική έρευνα. Η πιο σημαντική λειτουργία που ασκείται από τις πρωτεΐνες είναι η κατάλυση των μεταβολικών αντιδράσεων, η αντιγραφή του DNA, η ανταπόκριση στα ερεθίσματα και η μεταφορά μορίων από τη μια θέση στην άλλη. Οι πρωτεΐνες διαφέρουν μεταξύ τους κυρίως στην αλληλουχία αμινοξέων τους, η οποία υπαγορεύεται από την αλληλουχία νουκλεοτιδίων των γονιδίων τους και η οποία συνήθως έχει ως αποτέλεσμα την αναδίπλωση της πρωτεΐνης σε μια συγκεκριμένη τρισδιάστατη δομή που καθορίζει τη δραστικότητα της. Οι πρωτεΐνες είναι – εκτός από τα πεπτίδια – ένα από τα βασικά συστατικά των τροφίμων. Ως εκ τούτου, πρωτεομική είναι ένα ισχυρό εργαλείο στην επιστήμη των τροφίμων για τη βελτιστοποίηση των διαδικασιών, την ασφάλεια των τροφίμων και τη διατροφική αξιολόγηση.

Cloud Point Extraction

Cloud Point Extraction είναι μια προαναλυτική διαδικασία για το διαχωρισμό και την προσυγκέντρωση των προσδιοριζόμενων ουσιών. Σε συνδυασμό με υπερήχους, η εκχύλιση σημείου σύννεφων μπορεί να ενταθεί καθιστώντας τη διαδικασία πιο αποτελεσματική, ταχύτερη και φιλική προς το περιβάλλον. Με υπερήχους, η εκχύλιση σημείου σύννεφων είναι μια σημαντικά πιο αποτελεσματική μέθοδος παρασκευής αναλυτέας ουσίας. Διαβάστε περισσότερα σχετικά με υπερήχων υποβοηθούμενη εκχύλιση σημείου σύννεφων!

gel Ηλεκτροφόρηση

ηλεκτροφόρηση πήγματος είναι η κύρια μέθοδος για διαχωρισμό και ανάλυση των μακρομορίων όπως ϋΝΑ, RNA και πρωτεϊνών, καθώς και θραύσματα αυτών, με βάση το μέγεθος και το φορτίο τους. Χρησιμοποιείται στην κλινική χημεία για το διαχωρισμό πρωτεϊνών με φορτίο ή / και το μέγεθος (IEF αγαρόζη, ουσιαστικά μέγεθος ανεξάρτητος) και στη βιοχημεία, μοριακή βιολογία και πρωτεϊνωματική να διαχωρίσει ένα μικτό πληθυσμό των θραυσμάτων DNA και RNA με μήκος, για να εκτιμηθεί το μέγεθος της DNA και RNA θραύσματα ή για το διαχωρισμό πρωτεϊνών με χρέωση.

καλλιέργειες κυττάρων

Κυτταρική καλλιέργεια είναι η ελεγχόμενη αυξανόμενη διαδικασία με την οποία τα κύτταρα καλλιεργούνται κάτω από ελεγχόμενες συνθήκες. Οι συνθήκες κυτταρικής καλλιέργειας ποικίλει για κάθε κυτταρικό τύπο. Σε γενικές γραμμές, το περιβάλλον μιας κυτταρικής καλλιέργειας αποτελείται από ένα κατάλληλο δοχείο (π.χ. δίσκο Petri) με υπόστρωμα ή μέσο που παρέχει τα απαραίτητα θρεπτικά συστατικά (αμινοξέα, υδατάνθρακες, βιταμίνες, ανόργανα άλατα), αυξητικούς παράγοντες, ορμόνες, και αέρια (CO2Η2), Και ρυθμίζει την φυσιο-χημικό περιβάλλον (ρυθμιστικό διάλυμα ρΗ, ωσμωτική πίεση, θερμοκρασία). Τα περισσότερα κύτταρα χρειάζονται μια επιφάνεια ή τεχνητό υπόστρωμα, ενώ άλλες κυτταρικές καλλιέργειες μπορούν να καλλιεργηθούν δωρεάν επιπλέουν σε μέσο καλλιέργειας (καλλιέργεια εναιωρήματος, εναιώρημα κυττάρων).
Οι Μάζα καλλιέργειες κυτταρικών γραμμών ζώου που χρησιμοποιείται στη βιομηχανική παραγωγή ιικών εμβολίων και άλλων βιοτεχνολογικά παράγωγα προϊόντα. Τα ανθρώπινα βλαστικά κύτταρα καλλιεργούνται για την επέκταση του αριθμού των κυττάρων και διαφοροποίηση των κυττάρων σε διάφορα σωματικά τύπους κυττάρων για σκοπούς μεταμόσχευσης.

Τα δείγματα ιστών

Ο όρος ιστός περιγράφει ένα κυτταρικό ενδιάμεσο, όπου το υλικό κύτταρο είναι σε οργανωτικό επίπεδο μεταξύ κυττάρων και ένα πλήρες όργανο. Εις τον ιστό, παρόμοιο κύτταρα, από την ίδια προέλευση που μαζί πραγματοποιούν μια συγκεκριμένη λειτουργία, συναρμολογούνται. Με τη λειτουργική ομαδοποίηση των πολλαπλών ιστών, οι πολύπλοκες δομές των οργάνων που σχηματίζονται.
Ιστός γίνεται δειγματοληψία για την έρευνα στη βιολογία, ιστολογία / ιστοπαθολογία, παρασιτολογία, βιοχημεία, ανοσοϊστοχημεία καθώς και να καλλιεργήσει και εκχύλιση του DNA. Μπορεί να διακριθεί μεταξύ των ζώων (υποδιαίρεση: θηλαστικού ιστού) και φυτικών ιστών. Οι ιστοί των ζώων ομαδοποιούνται σε τέσσερις βασικούς τύπους των συνδετικών, των μυών, νευρική, και επιθηλιακού ιστού. Φυτικός ιστός υποδιαιρείται στα ακόλουθα τρία συστήματα ιστού: την επιδερμίδα, τον ιστό έδαφος, και του αγγειακού ιστού.
Δείγματα ιστού μπορούν να παρασκευασθούν από ζωικά ή φυτικά μέρη, π.χ. των οστών, των μυών, φύλλα, κλπ

Σωματικά υγρά

Αίμα, ορό, πλάσμα, εγκεφαλονωτιαίο υγρό, σάλιο και υγρά αρθρικό είναι υγρά του σώματος, τα οποία προσφέρουν μια μεγάλη πηγή διαγνωστικά σχετικών πληροφοριών. Ως εκ τούτου, ένα εξελιγμένο παρασκευή δειγμάτων σωματικού υγρού για ανάλυση είναι σημαντική. Η πρώτη δυσκολία συνδέεται με το ευρύ δυναμικό εύρος των συστατικών που υπάρχουν στα σωματικά υγρά.

Προσδιορισμός της συγκέντρωσης πρωτεΐνης

Bradford δοκιμασία, δοκιμασία Lowry και δικιγχονικού οξύ (BCA) είναι κοινές δοκιμασίες για να προσδιορισθεί η συγκέντρωση των πρωτεϊνών. αλβουμίνη βόειου ορού (BSA) είναι μία από τις πιο συχνά χρησιμοποιούμενες πρότυπο πρωτεΐνης.

Ρυθμιστικό λύσης

ρυθμιστικού λύσης πρέπει να επιλεγεί σύμφωνα με το κύτταρο υλικό ή ιστού (καλλιέργεια ιστού, φυτού, βακτήρια, μύκητες, κλπ), και εάν τα κύτταρα βρίσκονται σε μια δομή και τον τύπο της δομής. Ένα ευρύ φάσμα των λύσεως Ρυθμιστικά διαλύματα για την εκχύλιση των πρωτεϊνών, οι μεμβράνες, και οργανίδια συνταγοποιούνται με ένα ή περισσότερα απορρυπαντικά. Το απορρυπαντικό επιλέγεται συνήθως μέσω δοκιμές δοκιμής και σφάλματος ή – εάν είναι διαθέσιμο – σύμφωνα με υπάρχον πρωτόκολλο εκχύλισης πρωτεΐνης. Το απορρυπαντικό πρέπει να είναι συμβατό με την πηγή ιστού και των πρωτεϊνών. Σε γενικές γραμμές, το ηπιότερο απορρυπαντικό που λειτουργεί για ένα ειδικό ιστό / πρωτεΐνη, επιλέγεται προκειμένου να διατηρηθεί η μέγιστη λειτουργικότητα του εκχυλίσματος. Επιπλέον, σε περίπτωση εκχύλισης των μεμβρανών και οργανιδίων, ένα ήπιο απορρυπαντικό διατηρεί η μεμβράνη άθικτη. Συνήθως χρησιμοποιούνται απορρυπαντικά σε ρυθμιστικά διαλύματα λύσης είναι κυρίως μη-ιονικά ή διπολικού ιόντος, π.χ. CHAPS, δεοξυχολικό, Triton ™ Χ-100, ΝΡ40, και Tween 20.
Για παράδειγμα, ιστοί όπως ο εγκέφαλος, το ήπαρ, έντερο, νεφρό, σπλήνα κλπ μπορεί απλά να ρυθμίζεται με RIPA – Ωστόσο θα πρέπει να συμπεριληφθούν αναστολείς πρωτεάσης και ϋΤΤ (π.χ. για ηλεκτροφόρηση πηκτώματος).
ρυθμιστικού λύσης για σκελετικού μυϊκού ιστού (παγωμένο): 20 mM Tris (ρΗ 7.8), 137 mM NaCl, 2.7 mM KCI, 1 mM MgCl2, 1% Triton Χ-100, 10% (νν / ν) γλυκερόλη, 1 mM EDTA , 1 mM διθειοθρεϊτόλη συμπληρωμένο με πρωτεάση και αναστολέα φωσφατάσης κοκτέιλ
Πίνακας των κοινών ρυθμιστικών και περιοχή ρΗ τους. Σε γενικές γραμμές, αυτά τα ρυθμιστικά διαλύματα που χρησιμοποιούνται συνήθως σε συγκεντρώσεις 20-50 mM.
 

Ρυθμιστής περιοχή ρΗ
Κιτρικό οξύ – Naoh 2,2 – 6,5
Κιτρικό νάτριο – Κιτρικό οξύ 3,0 – 6,2
Οξικό νάτριο – οξικό οξύ 3,6 – 5,6
άλας νατρίου κακοδυλικού οξέος – Hcl 5,0 – 7,4
ΜΟΥ – Naoh 5,6 – 6,8
Νάτριο φωσφορικό δισόξινο – όξινο φωσφορικό δινάτριο 5,8 – 8,0
ιμιδαζόλιο – Hcl 6,2 – 7,8
Σφουγγαρίστρες – ΚΟΗ 6,6 – 7,8
υδροχλωρική τριαιθανολαμίνη – Naoh 6,8 – 8,8
Τρις – Hcl 7,0 – 9,0
HEPES – Naoh 7,2 – 8,2
Τρικίνη – Naoh 7,6 – 8,6
τετραβορικό νάτριο – βορικό οξύ 7,6 – 9,2
δικίνης – Naoh 7,7 – 8,9
γλυκίνη – Naoh 8,6 – 10,6

Τα περισσότερα ρυθμιστικά δείχνουν ένα ρΗ-εξάρτηση με τη θερμοκρασία. Αυτό είναι ιδιαίτερα αληθές για Tris ρυθμιστικά διαλύματα. Το ρΚα αλλάζει από 8,06 στους 25 ° C έως 8,85 στους 0 ° C.
(ΡΗ και ρΚα ενός ρυθμιστικού: pH μετρά τη συγκέντρωση των ιόντων υδρογόνου σε υδατικό διάλυμα ρΚα (= διαχωρισμού οξέος σταθερά) είναι ένα σχετικό, αλλά πιο συγκεκριμένο μέτρο, από το ότι βοηθά να προβλέψουμε πώς ένα μόριο θα δράσει σε μια συγκεκριμένη. τιμή ρΗ.)

ΤΚΙζοΙ

ΤΚΙζοΙ είναι μια χημική ουσία διάλυμα που χρησιμοποιείται για την εκχύλιση του RNA / DNA / πρωτεΐνης κατά τη διάρκεια της εκχύλισης θειοκυανικού γουανιδίου-φαινόλης-χλωροφορμίου. Η χρήση της υποβοηθούμενης υπερηχητικά ΤΚΙζοΙ αποτελέσματα εκχύλιση σε υψηλή DNA, RNA, και οι αποδόσεις πρωτεΐνης από το ίδιο δείγμα και υπερέχει έτσι άλλες μεθόδους εκχύλισης.

Λογοτεχνία / Αναφορές

Θα χαρούμε να συζητήσουμε τη διαδικασία σας.

Ας έρθουμε σε επαφή.