Ρυθμιστικά διαλύματα που παρασκευάζονται με υπερήχους
Τα ρυθμιστικά διαλύματα λύσης μπορούν να προετοιμαστούν αποτελεσματικά και γρήγορα χρησιμοποιώντας ομογενοποιητές ιστών υπερήχων. Δεδομένου ότι οι υπερήχων είναι ένα εργαλείο ονείρου για την ανάμειξη, τη διάλυση και τη διασπορά, επιτρέπουν μια αξιόπιστη και φιλική προς το χρήστη προετοιμασία των ρυθμιστικών διαλύματος λύσης.
Υπερήχων προετοιμασία των ρυθμιστικών διαλυμάτων λύσης
Οι ομογενοποιητές ιστών υπερήχων είναι ένα κοινό εργαλείο για τη διαταραχή των κυττάρων, τη λύση και την εκχύλιση, επομένως διατίθεται στα περισσότερα εργαστήρια. Μια δευτερεύουσα εφαρμογή για υπερήχους τύπου καθετήρα είναι η παρασκευή ρυθμιστικών διαλυμάτων λύσης.
Το ρυθμιστικό διάλυμα λύσης είναι ένα διάλυμα που χρησιμοποιείται για να σπάσει τα ανοικτά κύτταρα (λύση) και να απελευθερώσει το περιεχόμενό τους για κατάντη ανάλυση. Η ειδική σύνθεση του ρυθμιστικού διαλύματος λύσης μπορεί να ποικίλει ανάλογα με τον τύπο των κυττάρων που λύονται και την κατάντη εφαρμογή. Ωστόσο, ένα τυπικό ρυθμιστικό διάλυμα λύσης περιέχει συστατικά όπως απορρυπαντικά, άλατα και αναστολείς πρωτεάσης. Ρυθμιστικά άλατα (π.χ. Tris-HCl) και ιοντικά άλατα (π.χ. NaCl) χρησιμοποιούνται συνήθως για τη ρύθμιση του pH και της ωσμωτικότητας του προϊόντος λύσης.
Για να δημιουργηθεί ένα ρυθμιστικό διάλυμα λύσης, τα συστατικά αναμειγνύονται μαζί στις κατάλληλες συγκεντρώσεις και pH. Το μείγμα συνήθως αναδεύεται ή ανακινείται μέχρι να διαλυθούν τα συστατικά και το διάλυμα να είναι ομοιογενές.
Η ομογενοποίηση με υπερήχους είναι μια μέθοδος που μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να βοηθήσει στη δημιουργία ενός καλού ρυθμιστικού διαλύματος λύσης βελτιώνοντας την ανάμιξη και τη διάλυση των συστατικών. Σε αυτή τη μέθοδο, τα κύματα υπερήχων – κανονικά στην περιοχή από 20 έως 30 kHz – εφαρμόζονται στο μείγμα, το οποίο δημιουργεί φυσαλίδες σπηλαίωσης που καταρρέουν και παράγουν έντονη τοπική ενέργεια, οδηγώντας σε μηχανική διάτμηση και ανάμιξη των συστατικών.
Η διαδικασία ομογενοποίησης υπερήχων μπορεί να βοηθήσει να σπάσει τυχόν συστάδες ή συσσωματώματα των συστατικών, και να εξασφαλίσει ότι το διάλυμα αναμειγνύεται ομοιόμορφα. Κατά συνέπεια, ένα τέτοιο βελτιωμένο ρυθμιστικό διάλυμα λύσης μπορεί να οδηγήσει σε αποτελεσματικότερη κυτταρική διαταραχή και υψηλότερες αποδόσεις εκχυλισμένου υλικού. Επιπλέον, η ομογενοποίηση υπερήχων μπορεί να μειώσει το χρόνο που απαιτείται για να γίνει ένα ρυθμιστικό διάλυμα λύσης σε σύγκριση με τις παραδοσιακές μεθόδους ανάδευσης ή ανακίνησης.
Συνολικά, η ομογενοποίηση με υπερήχους είναι ένα ισχυρό εργαλείο για τη βελτίωση της ποιότητας και της αποτελεσματικότητας της προετοιμασίας ρυθμιστικού διαλύματος λύσης.
Ο υπερηχητικός ομογενοποιητής εργαστηρίου UP200Ht είναι δημοφιλές στα ερευνητικά εργαστήρια για προετοιμασία δειγμάτων, λύση, εξαγωγή, κατακερματισμό DNA και διάλυση.
Πρωτόκολλο για την προετοιμασία ρυθμιστικού διαλύματος λύσης υπερήχων
Αυτό είναι ένα γενικό πρωτόκολλο για την κατασκευή ενός ρυθμιστικού διαλύματος λύσης χρησιμοποιώντας έναν υπερηχητικό τύπο καθετήρα:
Υλικά:
- Απορρυπαντικό(-ά) επιλογής (π.χ. Triton X-100, SDS, CHAPS)
- Αλάτι(-τα) επιλογής (π.χ. NaCl, KCl)
- Αναστολείς πρωτεάσης (π.χ. PMSF, απροτινίνη, λευκεπτίνη)
- υπερήχων
- Αναδευτήρα
- Απιονισμένο νερό
- Πεχάμετρο ή λωρίδες pH
Οδηγίες βήμα προς βήμα:
- Προσδιορίστε τη σύνθεση του ρυθμιστικού διαλύματος λύσης με βάση τα κύτταρα ή τους ιστούς που θα λύσετε και τις κατάντη εφαρμογές για τις οποίες θα χρησιμοποιήσετε το προϊόν λύσης. Παρασκευάστε τα αρχικά διαλύματα απορρυπαντικών, αλάτων και αναστολέων πρωτεάσης στις επιθυμητές συγκεντρώσεις.
- Τα αρχικά διαλύματα απορρυπαντικών, αλάτων και αναστολέων πρωτεάσης προστίθενται σε ποτήρι ζέσεως ή φιάλη.
- Προσθέστε απιονισμένο νερό για να αυξήσετε τον όγκο στην επιθυμητή ποσότητα ρυθμιστικού διαλύματος.
- Αναμίξτε τα συστατικά χρησιμοποιώντας έναν αναδευτήρα για να πάρετε ένα διάλυμα προμίγματος.
- Μετρήστε το pH του ρυθμιστικού διαλύματος χρησιμοποιώντας ένα μετρητή pH ή ταινίες pH και ρυθμίστε το pH όπως απαιτείται με μικρές ποσότητες οξέος ή βάσης.
- Χρησιμοποιήστε τον υπερηχητικό τύπο καθετήρα για να ομογενοποιήσετε το διάλυμα προ-μίγματος έτσι ώστε να ληφθεί ένα εξαιρετικά ομοιογενές διάλυμα. Επομένως, υπερήχων το διάλυμα για λίγα δευτερόλεπτα έως ότου το διάλυμα αναμιχθεί επιμελώς και τυχόν συστάδες ή συσσωματώματα διασπώνται. Η διάρκεια και η ισχύς της υπερήχων μπορεί να βελτιστοποιηθεί με βάση το συγκεκριμένο ρυθμιστικό διάλυμα λύσης και υπερήχων που χρησιμοποιείται.
- Μετά από υπερήχους, μετρήστε ξανά το pH του ρυθμιστικού διαλύματος και ρυθμίστε ανάλογα με τις ανάγκες.
- Φιλτράρετε το ρυθμιστικό διάλυμα μέσω φίλτρου 0,2 micron για να αφαιρέσετε τυχόν συντρίμμια ή συσσωματώματα που μπορεί να έχουν σχηματιστεί κατά τη διάρκεια υπερήχων.
- Το ρυθμιστικό διάλυμα λύσης είναι τώρα έτοιμο για χρήση.
Σημείωση: Η ακριβής σύνθεση και το pH του ρυθμιστικού διαλύματος λύσης μπορεί να ποικίλει ανάλογα με τα κύτταρα ή τους ιστούς που λύονται και τις κατάντη εφαρμογές. Το παραπάνω πρωτόκολλο είναι μια γενική κατευθυντήρια γραμμή και μπορεί να χρειαστεί να βελτιστοποιηθεί για συγκεκριμένες εφαρμογές.
Υπερήχων ομογενοποιητές χρησιμοποιούνται συνήθως για την κυτταρική διαταραχή και την εκχύλιση των ενδοκυτταρικών μορίων. Ως εκ τούτου, πολλές εφαρμογές λύσης χρησιμοποιούν κατεργασία με υπερήχους τύπου καθετήρα όχι μόνο για την προετοιμασία του ρυθμιστικού διαλύματος λύσης, αλλά και για τη μηχανική διάσπαση των κυττάρων και την εκχύλιση.
Αυτό καθιστά τους ομογενοποιητές ιστών υπερήχων ένα ευέλικτο εργαλείο για εργαστήρια και εξηγεί την ευρεία χρήση υπερήχων στη μικροβιολογία, τη βιοτεχνολογία και την επιστήμη της ζωής.
Υπερήχων ομογενοποιητές εργαστηρίων
Hielscher Υπέρηχοι κατασκευάζει και προμηθεύει υπερήχων ομογενοποιητές και ανιχνευτές (sonotrodes) σε διάφορες ονομαστικές τιμές ισχύος και όγκους δειγμάτων. Αυτό μας επιτρέπει να σας προσφέρουμε τον καταλληλότερο υπερηχητικό διαταράκτη για την προετοιμασία του δείγματός σας. Εστιάζουμε στην υψηλότερη ποιότητα, εξαιρετική άνεση χρήστη και αξιόπιστα αποτελέσματα υπερήχων. Όλοι οι ψηφιακοί υπερήχων διαθέτουν έξυπνο λογισμικό, προγραμματισμό και προ-ρύθμιση πρωτοκόλλων υπερήχων, τηλεχειριστήριο προγράμματος περιήγησης, έλεγχο θερμοκρασίας, φωτισμό δείγματος καθώς και αυτόματη καταγραφή δεδομένων σε ενσωματωμένη κάρτα SD.
Σχεδιασμός, Κατασκευή και Συμβουλευτική – Ποιότητα Made in Germany
Hielscher υπερήχων είναι γνωστή για την υψηλότερη ποιότητα και τα πρότυπα σχεδιασμού τους. Η ευρωστία και η εύκολη λειτουργία επιτρέπουν την ομαλή ενσωμάτωση των υπερήχων μας σε βιομηχανικές εγκαταστάσεις. Οι σκληρές συνθήκες και τα απαιτητικά περιβάλλοντα αντιμετωπίζονται εύκολα από τους υπερήχους Hielscher.
Hielscher Υπέρηχοι είναι μια πιστοποιημένη εταιρεία ISO και δίνουν ιδιαίτερη έμφαση σε υψηλής απόδοσης υπερήχων που διαθέτουν state-of-the-art τεχνολογία και φιλικότητα προς το χρήστη. Φυσικά, Hielscher υπερήχων είναι CE συμβατό και πληρούν τις απαιτήσεις των UL, CSA και RoHs.
Ο παρακάτω πίνακας σας δίνει μια επισκόπηση των διαφόρων εργαστηρίων υπερήχων μας:
| VialTweeter στο UP200St | 200W | 26kHz | υπερήχους μικρών φιαλιδίων, π.χ. Eppendorf 1.5mL |
| UP50Η | 50W | 30kHz | Φορητός ή standmounted ομογενοποιητής εργαστηρίου |
| UP100Η | 100W | 30kHz | Φορητός ή standmounted ομογενοποιητής εργαστηρίου |
| UP200Ht | 200W | 26kHz | Φορητός ή standmounted ομογενοποιητής εργαστηρίου |
| UP200St | 200W | 26kHz | Standmounted Lab Ομογενοποιητής |
| UP400St | 400W | 24kHz | Standmounted Lab Ομογενοποιητής |
| SonoStep | 200W | 26kHz | εργαστηριακός αντιδραστήρας που συνδυάζει, υπερήχους, αντλία, αναδευτήρας και σκάφος |
| GDmini2 | 200W | 26kHz | κύτταρο ροής χωρίς μόλυνση |
| Cuphorn | 200W | 26kHz | Έντονο λουτρό υπερήχων για φιαλίδια και ποτήρια ζέσεως |
| UIP400MTP | 400W | 24kHz | Σύστημα υπερήχων για πλάκες πολλαπλών φρεατίων? πλάκες μικροτιτλοδότησης |
Υπερήχων CupHorn για την έντονη υπερήχηση κλειστών σωλήνων και φιαλιδίων για στείρα ομογενοποίηση δειγμάτων.
Επικοινωνήστε μαζί μας!? Ρωτήστε μας!
Υπερήχων ομογενοποιητής εργαστηρίων UP400St χρησιμοποιείται συνήθως για την προετοιμασία ρυθμιστικού διαλύματος λύσης και την επακόλουθη διαταραχή των κυττάρων.
Βιβλιογραφία? Αναφορές
- Fernandes, Luz; Santos, Hugo; Nunes-Miranda, J.; Lodeiro, Carlos; Capelo, Jose (2011): Ultrasonic Enhanced Applications in Proteomics Workflows: single probe versus multiprobe. Journal of Integrated OMICS 1, 2011.
- Priego-Capote, Feliciano; Castro, María (2004): Analytical uses of ultrasound – I. Sample preparation. TrAC Trends in Analytical Chemistry 23, 2004. 644-653.
- Welna, Maja; Szymczycha-Madeja, Anna; Pohl, Pawel (2011): Quality of the Trace Element Analysis: Sample Preparation Steps. In: Wide Spectra of Quality Control; InTechOpen 2011.
- Nico Böhmer, Andreas Dautel, Thomas Eisele, Lutz Fischer (2012): Recombinant expression, purification and characterisation of the native glutamate racemase from Lactobacillus plantarum NC8. Protein Expr Purif. 2013 Mar;88(1):54-60.
- Brandy Verhalen, Stefan Ernst, Michael Börsch, Stephan Wilkens (2012): Dynamic Ligand-induced Conformational Rearrangements in P-glycoprotein as Probed by Fluorescence Resonance Energy Transfer Spectroscopy. J Biol Chem. 2012 Jan 6;287(2): 1112-27.
- Claudia Lindemann, Nataliya Lupilova, Alexandra Müller, Bettina Warscheid, Helmut E. Meyer, Katja Kuhlmann, Martin Eisenacher, Lars I. Leichert (2013): Redox Proteomics Uncovers Peroxynitrite-Sensitive Proteins that Help Escherichia coli to Overcome Nitrosative Stress. J Biol Chem. 2013 Jul 5; 288(27): 19698–19714.
- Elahe Motevaseli, Mahdieh Shirzad, Seyed Mohammad Akrami, Azam-Sadat Mousavi, Akbar Mirsalehian, Mohammad Hossein Modarressi (2013): Normal and tumour cervical cells respond differently to vaginal lactobacilli, independent of pH and lactate. ed Microbiol. 2013 Jul; 62(Pt 7):1065-1072.
Hielscher Υπέρηχοι κατασκευάζει υψηλής απόδοσης υπερήχων ομογενοποιητές από εργαστήριο προς βιομηχανικό μέγεθος.