Priprema uzorka sa ultrazvučnim vialtweeterom

Priprema uzorka prije analize može zahtijevati različite predanalitičke procese kao što su homogenizacija tkiva, liza, ekstrakcija proteina, DNK, RNK, organela i drugih intracelularnih supstanci, otapanje i otplinjavanje. VialTweeter je jedinstveni ultrazvučni uređaj koji priprema više epruveta za uzorke istovremeno pod potpuno istim uslovima. Zbog indirektne sonikacije zatvorenih epruveta, izbjegavaju se unakrsna kontaminacija i gubitak uzorka.

ultrazvučna priprema uzorka

Ultrazvuk je uobičajena tehnika obrade uzorka kako bi se uzorak pripremio za analize kao što su lančana reakcija polimera (PCR), Western blots, testovi, molekularno sekvenciranje, hromatografija itd. Ultrazvuk je tehnika koja se široko koristi u laboratorijama za obradu uzoraka prije analitički. Glavna prednost ultrazvuka je da se princip rada ultrazvuka zasniva na čisto mehaničkim silama. Ultrazvučna liza i razbijanje ćelija postižu se sonomehaničkim silama smicanja, što daje prednost ultrazvuku da se rastvarači koji se koriste za ekstrakciju proteina mogu koristiti i tokom lize. Ultrazvučni disruptori ćelija kao što je VialTweeter razbijaju ćelijske zidove / membrane i promovišu prenos mase između unutrašnjosti ćelije i rastvarača. Na taj način se analit (npr. DNK, RNK, proteini, organele itd.) efikasno prenose iz ćelijskog matriksa u rastvarač. To znači da se koraci gašenja i ekstrakcije preklapaju sa procesom ultrazvučnog razaranja ćelija, što ultrazvučnu lizu čini veoma efikasnom. Nadalje, ultrazvučna priprema uzorka ne zahtijeva deterdžente i druge reagense za lizu, koji bi mogli promijeniti i destruirati strukturu lizata i poznati su po kasnijim problemima s pročišćavanjem. Druga metoda lize, enzimsko prekidanje zahtijeva dugo vrijeme inkubacije i daje često neponovljive rezultate. Ultrazvučna priprema uzoraka prevazilazi uobičajene probleme u pripremi uzoraka kao što su homogenizacija tkiva, razbijanje ćelija, liza, ekstrakcija proteina i solubilizacija lizata. Budući da se intenzitet ultrazvučnog tretmana može precizno kontrolisati i prilagoditi biološkom uzorku, izbjegava se degradacija i gubitak uzorka. Automatski nadgledana i kontrolisana temperatura uzorka, pulsni režim i trajanje sonikacije osiguravaju optimalne rezultate.
 

VialTweeter je posebno pogodan za laboratorijske radove koji zahtijevaju istovremenu pripremu više uzoraka pod istim uvjetima. VialTweeter je ultrazvučna blok sonotroda koja može držati do 10 bočica (npr. Eppendorf, centriguga, NUNC cijevi, krio-bočice) i intenzivno ih ultrazvučno obrađuje pod precizno kontroliranim uvjetima. Pošto je ultrazvučna energija spojena kroz zidove bočica u medijum uzorka, bočice ostaju zatvorene tokom tretmana. Time se u potpunosti izbjegava gubitak uzorka i unakrsna kontaminacija.

Bočice i cijevi koje odgovaraju VialTweeteru

VialTweeter je pogodan za držanje 10 uobičajenih konusnih ili okruglih epruveta kao što su Eppendorf, centrifuge, krio-bočice i različiti tipovi NUNC bočica, ali rupe se mogu prilagoditi drugim veličinama bočica i cijevi na zahtjev. Obavijestite nas koju vrstu epruveta želite koristiti kako bismo u skladu s tim mogli modificirati vaš VialTweeter. Za veće epruvete kao što su Falcon epruvete i druge ispitne posude, čaše i posude, VialPress je praktično rješenje.

VialTweeter sa VialPress-om

Dok je sam VialTweeter sa svojih 10 otvora za cijevi već jedinstven i vrlo funkcionalan ultrazvučni uređaj, VialPress dodatak čini VialTweeter još svestranijim i fleksibilnijim za rad. VialPress je dodatak za VialTweeter koji se sastoji od šipke za pričvršćivanje koja omogućava fiksiranje većih epruveta za uzorke kao što su Falcon epruvete ili druge male do srednje čaše za ispitivanje na prednju stranu VialTweetera. Slika lijevo prikazuje VialTweeter koji drži 10 Eppendorf bočica u bloku, dok VialPress fiksira jednu veću epruvetu naprijed za sonikaciju. VialPress može držati do 5 većih epruveta za intenzivnu sonikaciju.

VialTweeter Sample Preparation Protocols

VialTweeter se široko koristi za soniciranje bioloških uzoraka. Prije analize, uzorci se moraju pripremiti za biohemijske ili biofizičke analize i testove, npr. lizom, homogenizacijom tkiva, ekstrakcijom proteina, smicanjem DNK/RNA, degaziranjem itd. VialTweeter pouzdano ispunjava ove ultrazvučne procese i daje ponovljive rezultate. Uobičajena primjena VialTweetera je liza/razbijanje stanica tkiva sisara (ljudskih i životinjskih) kao i bakterijskih ćelija i virusnih čestica. Biološki uzorci koji su uspješno tretirani VialTweeterom uključuju epitelne ćelije ljudskih pluća, hematopoetske matične ćelije, ćelije mijeloične leukemije, Escherichia coli, Bacillus subtilis, Bacillus anthracis, Francisella tularensis, Yersinia pestis, Streptococcus pyogenes, Caulobacter crescentus, Mycoplasma pneumoniae, mikobakterije / kompleks Mycobacterium tuberculosis (MTBC) i mnoge druge bakterijske, botaničke i mikrobne ćelije.
U nastavku možete pronaći nekoliko odabranih protokola koji sadrže VialTweeter.

Liza E.Coli sa VialTweeterom za in-vivo određivanje glutationa

Bakterije Escherichia coli soja MG1655 uzgajane su u MOPS minimalnoj podlozi u ukupnoj zapremini od 200 ml dok se ne postigne A600 od 0,5. Kultura je podijeljena u kulture od 50 ml za liječenje stresa. Nakon 15 minuta inkubacije sa 0,79 mM alicina, 1 mM diamida ili dimetil sulfoksida (kontrola), ćelije su sakupljene na 4000 g na 4°C tokom 10 minuta. Ćelije su dva puta isprane KPE puferom prije resuspenzije peleta u 700 µl KPE pufera. Za deproteinaciju, 300 µl 10% (w/v) sulfosalicilne kiseline je dodano prije razbijanja ćelija ultrazvučnom obradom (3 x 1 min; VialTweeter ultrasonikator). Supernatanti su sakupljeni nakon centrifugiranja (30 min, 13.000 g, 4°C). Koncentracije sulfosalicilne kiseline su smanjene na 1% dodavanjem 3 zapremine KPE pufera. Mjerenja ukupnog glutationa i GSSG su obavljena kao što je gore opisano. Koncentracije ćelijskog glutationa su izračunate na osnovu zapremine ćelija E. coli od 6,7×10-15 litara i gustine ćelija A600 0,5 (ekvivalentno 1×108 ćelija ml-1 kulture). Koncentracije GSH su izračunate oduzimanjem 2[GSSG] od ukupnog glutationa. (Müller et al. 2016.)

Fragmentacija alfa-sinukleinskih fibrila sa VialTweeterom

VialTweeter sonikator se široko koristi za pouzdanu i efikasnu fragmentaciju alfa-sinukleinskih fibrila i traka. Kliknite ovdje da pronađete detaljne opise, protokole i reference za fragmentaciju alfa-sinukleina sa VialTweeterom!

Liza ćelija sa VialTweeter-om prije atomske apsorpcione spektrometrije u grafitnoj peći

Bacillus subtilis 168 (trpC2) je bio izložen 15 minuta antibiotskom stresu, zatim su ćelije sakupljene pri 3,320 xg, isprane pet puta sa 100 mM Tris/1 mM EDTA, pH 7,5, resuspendirane u 10 mM Trisson i disrupcija pH 7.5. u Hielscher VialTweeter instrumentu. (Wenzel et al. 2014.)

Priprema uzorka VialTweeter prije masene spektrometrije

Liofilizirane ćelijske pelete humanih CD34 Ϗ hematopoetskih matičnih/progenitorskih ćelija su resuspendirane u 10 µϏl (200 µl za rasuti preparat HEK293 za seriju razrjeđivanja peptida) 8 M uree u 100 mM hidratiziranog amonijevog karbonata i hidrogen karbonata amonijeva. sa amplitudom od 60%, ciklusom od 60% i trajanjem od 20s za tri puta sa srednjim hlađenjem na ledu. (Amon et al. 2019.)

Protokoli za pripremu uzoraka koristeći VialPress

Svježa zelena salata (Lactuca sativa) homogenizirana je u 0,5 M HEPES puferu (pH 8, prilagođen KOH) u omjeru od 1 g biljke (svježa težina) prema 200, 100, 50 ili 20 mL puferske otopine. Odnos mase biljke i zapremine puferskog rastvora varirao je da bi se ukupna zapremina homogenata održala između 3,5 i 12 mL. Odnos mase biljke i zapremine puferskog rastvora varirao je da bi se zadržao ukupni volumen homogenata između 3,5 i 12 mL, omogućavajući homogenizaciju sondom. Homogenati su zatim podvrgnuti indirektnoj ultrazvučnoj obradi koristeći UP200St sa VialTweeterom opremljenim 200xt VialPress-om (Hielscher Ultrasonics GmbH, Njemačka) u trajanju od 3 minute (80% pulsa i 100% snage). Korištenjem ovog uređaja izbjegnuta je kontaminacija. (Laughton et al. 2019.)

Pouzdana kontrola temperature tokom sonikacije sa VialTweeterom

Temperatura je ključni faktor koji utiče na proces, a posebno je važan za obradu bioloških uzoraka. Kao i sve tehnike mehaničke pripreme uzoraka, sonikacija stvara toplinu. Međutim, temperatura uzoraka se može dobro kontrolisati kada se koristi VialTweeter. Predstavljamo vam različite opcije za praćenje i kontrolu temperature vaših uzoraka dok ih pripremate pomoću VialTweeter-a i VialPress-a za analizu.

1. Praćenje temperature uzorka: Ultrazvučni procesor UP200St, koji pokreće VialTweeter, opremljen je inteligentnim softverom i senzorom temperature koji se može priključiti. Uključite senzor temperature u UP200St i umetnite vrh senzora temperature u jednu od epruveta za uzorke. Preko digitalnog ekrana osetljivog na dodir u boji, možete podesiti u meniju UP200St određeni temperaturni opseg za vaš uzorak ultrazvuka. Ultrasonikator će se automatski zaustaviti kada se dostigne maksimalna temperatura i pauzirati dok temperatura uzorka ne padne na nižu vrijednost postavljene temperature ∆. Tada ultrazvuk počinje automatski ponovo. Ova pametna karakteristika sprečava degradaciju izazvanu toplotom.
2. VialTweeter blok se može prethodno ohladiti. Stavite VialTweeter blok (samo sonotrodu bez sonde!) u frižider ili zamrzivač kako biste prethodno ohladili blok od titana koji pomaže da se odgodi porast temperature u uzorku. Ako je moguće, sam uzorak se također može prethodno ohladiti.
3. Koristite suvi led za hlađenje tokom ultrazvučne obrade. Koristite plitku tacnu napunjenu suvim ledom i postavite VialTweeter na suvi led tako da se toplota brzo rasprši.

Kupci širom svijeta koriste VialTweeter i VialPres za svoj svakodnevni rad na pripremi uzoraka u biološkim, biohemijskim, medicinskim i kliničkim laboratorijama. Inteligentni softver i kontrola temperature UP200St procesora, temperatura se pouzdano kontroliše i izbegava se degradacija uzorka izazvana toplotom. Ultrazvučna priprema uzorka sa VialTweeterom i VialPressom daje visoko pouzdane i ponovljive rezultate!

Tehnički detalji VialTweetera

VialTweeter je blok sonotroda napravljena od titanijuma koja može držati do 10 bočica u rupama unutar bloka. Dodatno, do 5 većih epruveta može se pričvrstiti na prednju stranu VialTweetera pomoću VialPress-a. VialTweeter je tako dizajniran da se energija ultrazvučne obrade ravnomjerno raspoređuje u svaku umetnutu bočicu kako bi se osigurali pouzdani i ujednačeni rezultati sonikacije. Mali stožer prilagođava sonotrodu VialTweeter na neravno tlo i poravnava epruvete okomito.

Prednosti VialTweetera na prvi pogled

• Intenzivna sonikacija do 10 bočica istovremeno
• Indirektna sonikacija visokog ultrazvučnog intenziteta kroz zid posude u uzorak
• Indirektna sonikacija izbjegava unakrsnu kontaminaciju i gubitak uzorka
• Reproducibilni rezultati zahvaljujući podesivoj i kontrolisanoj amplitudi sonikacije
• VialPress vam omogućava ultrazvučnu obradu većih cijevi
• Podesiva amplituda od 20 do 100%
• Podesivi pulsni način rada od 0 do 100%
• autoklav

VialTweeter pokreće UP200St, moćni ultrazvučni procesor od 200 vati. UP200St je opremljen inteligentnim softverom koji omogućava preciznu kontrolu nad svim važnim parametrima ultrazvučnog procesa kao što su amplituda, vrijeme obrade ultrazvukom, pulsiranje i temperatura. Ovo čini VialTweeter pouzdanim alatom za uspješne ponovljive rezultate procesa u biološkim i biohemijskim laboratorijama.
Amplituda se može podesiti između 20 i 100% i na taj način omogućava prilagođavanje ultrazvučnog intenziteta vašem uzorku. Na primjer, smicanje i fragmentacija DNK i RNK zahtijeva blažu amplitudu kako bi se spriječila proizvodnja premalih fragmenata DNK, homogenizacija tkiva mišjeg mozga zahtijeva ultrazvuk visokog intenziteta. Odaberite idealnu amplitudu, intenzitet ultrazvuka i trajanje putem pametnog i intuitivnog menija na procesoru UP200St. Meni i postavkama se može lako pristupiti i njima se može upravljati preko ekrana na dodir u boji. U postavkama možete unaprijed postaviti parametre ultrazvuka kao što su amplituda, pulsiranje/ciklusni način rada, trajanje ultrazvuka, ukupni unos energije i temperaturna ograničenja. U istraživanju i proizvodnji, ponovljivost ispitivanja i rezultata ispitivanja je ključna. To znači da su precizno bilježenje uvjeta procesa i protokola sonikacije izuzetno važni. Automatsko protokoliranje podataka zapisuje sve podatke o ultrazvuku u CSV datoteku na integriranoj SD kartici tako da možete lako provjeriti i uporediti različite izvođenja ultrazvuka. Svim ultrazvučnim procesnim podacima može se lako pristupiti i dijeliti ih kao CSV datoteku.
Hielscher Ultrasonics nastoji vam pružiti naprednu tehnologiju za olakšanje i poboljšanje vašeg istraživačkog rada!