α-sinukleinska vlakna i trake su fragmentirane u naučnim istraživanjima za generiranje manjih fibrilnih isečaka ili čak pojedinačnih molekula proteina, koji se mogu lakše analizirati različitim eksperimentalnim tehnikama. VialTweeter Sonicator je jedan od najčešće korišćenih ultrazvučnika za efikasnu i pouzdanu fragmentaciju alfa-sinukleina.

α-sinuklein u istraživanju

Alfa-sinukleinska vlakna su proteinski agregati koji su snažno povezani sa neurodegenerativnim poremećajima kao što su Parkinsonova bolest i određeni oblici demencije, uključujući demenciju sa Levijevim telima. Istraživanje fokusirano na alfa-sinukleinska vlakna ima za cilj da razume njihovu ulogu u progresiji bolesti i razvije potencijalne terapijske intervencije. Razlaganjem alfa-sinukleinskih vlakana na manje fragmente, istraživači mogu istražiti njihove specifične strukturne osobine. Na primer, fragmentacija alfa-sinukleinskih vlakana omogućava istraživačima da istraže njihove interakcije sa drugim molekulama, kao što su proteini, lipidi ili male molekule. Proizvodnjom manjih fragmenata, mjesta vezanja i afinitet za ove interaktivne partnere mogu se efikasnije ispitati. Manji α-Syn fribrili i trake takođe mogu pokazati izmenjenu toksičnost i biohemijske efekte. Zbog toga je od ključnog značaja pouzdana i efikasna tehnika fragmentacije, koja daje ponovljive rezultate u brzom i jednostavnom tretmanu uzorka.
Ultrazvučna alfa-sinska fragmentacija: VialTweeter sonicator je uspostavljeni ultrazvučni sistem za pripremu uzoraka koji istovremeno zvučno zvučno zračenje pod potpuno istim uslovima. Programabilne postavke omogućavaju jednostavno i brzo ponovno pokretanje istih eksperimenata, što daje visoko pouzdane i ponovljive rezultate u fragmentaciji alfa-sinukleinskih vlakana.

α-sinukleinski uzorak sa sonikom

Jedan pristup proučavanju alfa-sinukleinskih vlakana uključuje njihovu ekstrakciju i fragmentaciju koristeći tehnike kao što je sonifikacija. Sonikacija je proces koji koristi ultrazvučne talase visokog intenziteta, niske frekvencije za ometanje i razgradnju proteinskih agregata, što dovodi do oslobađanja manjih vlakana ili pojedinačnih molekula proteina. Sonicator VialTweeter je uređaj koji se obično koristi u istraživačkim studijama vezanim za α sinukleinom u tu svrhu.

Brojne istraživačke studije opisuju precizne protokole pripreme uzoraka sonicacije alfa-sinukleinskih vlakana, koji koriste Hielscher VialTweeter za efikasnu i pouzdanu fragmentaciju α-sinukleinskih vlakana. Ultrazvučnim fragmentiranjem vlakana, istraživači mogu analizirati rezultirajuće proizvode i ispitati njihovu strukturu, toksičnost i interakcije s drugim molekulama. Ovo istraživanje pruža važan uvid u mehanizme koji leže u osnovi neurodegeneracije i potencijalno identifikuju nove terapijske ciljeve. Dobro uspostavljeni α-sinukleinski protokoli sonicacije pomoću VialTweeter sonikulatora omogućavaju pouzdane i ponovljive rezultate.

Gornje slike: nefragmentirana alfa-sinukleinska vlakna
Donje slike: Ultrazvučno fragmentirana alfa-sinukleinska vlakna sa VialTweeter sonicatorom
(studija i slike: ©Dieriks et al., 2022)

Ultrazvučna fragmentacija α-sinukleinskih vlakana – Protokoli

Budući da brojni istraživači koriste VialTweeter sonicator kao preferiranu tehniku fragmentacije za proizvodnju uniformnih fragmenata α-sinukleinskih vlakana, uspostavljeni protokoli su lako dostupni. Ispod možete pronaći nekoliko primjernih protokola fragmentacije.
 

 
Priprema sjemena ClearTau: Fibrila ClearTau razrijeđena su na 10 μM u dH2O i sonicirana na 70% amplitude za 50 s sa 1 s ON 1 s OFF ciklusom u cijevi koristeći sonicator UP200St sa VialTweeterom. Sjeme je karakterizirano elektronskom mikroskopijom.
Mjerenje fluorescencije: Fibrila ClearTau razrijeđena su na 2,5 μM u dH2O i sonicirana na 70% amplitude za 50 s sa 1 s ON 1 s OFF ciklusom u cijevi koristeći UP200St sa VialTweeterom. Kao kontrola korišten je 2,5 μM Tau 4R2N monomer pune dužine. U reakciju od 100 μl dodano je 100 μl ThS (10 μM), dajući konačne koncentracije proteina od 1,25 μM. Jednokratna tačka ThS fluorescencija izmjerena je pomoću 96 dobro jasnih donjih ploča postavljenih u čitaču FLUOstar Omega mikroploča sa pobuđivanjem na 445 nm i zabilježenom emisijom na 485 nm.
(cf. Limorenko et al., 2023)
 
Ujednačena α-sinukleinska dužina pomoću sonifikacije: Dužina heterogenosti α-syn vlakana i traka smanjena je sonicacijom za 20 min na ledu u 2-ml Eppendorf cijevi u VialTweeteru postavljenom na 75% amplitude, 0,5 s impulsa.
(cf. Bousset et al., 2013.)
 
Provedena je kontrola kvalitete ljudskih rekombinantnih monomernih WT ili S129A a-Syn i fibrilarnih polimorfa koje generiraju, kao i one a-Syn 1–110. Nakon toga, fibrilarni polimorfi su fragmentirani sonicacijom 20 min u 2-mL Eppendorf cijevima u VialTweeter ultrazvučniku za generiranje fibrilarnih čestica prosječne veličine 42-52 nm koje su pogodne za endocitozu.
(cf. Shrivastava et al., 2020)
 

Karakterizacija pet fibrilarnih α-Syn polimorfa. (A) Prikazani su transmisijski elektronski mikrografi negativno obojenih α-Syn fibrillarnih polimorfa, vrpca, vlakana-91, vlakana-65 i fibrila-110 prije (gornja traka) i nakon fragmentacije sa VialTweeterom (donja traka). (b) Prikazana je distribucija dužine fragmentiranih fibrilarnih polimorfa. Prikazan je broj (n) fibrilarnih sklopova iz kojih su izvedeni histogrami.
(studija i slike: Shrivastava et al., 2020)

 
α-Syn fibrila su fragmentirana sonicacijom 20 min u 2 ml Eppendorf cijevi u VialTweeteru za generiranje fibrilarnih čestica prosječne veličine 42-52 nm prema procjeni TEM analize.
(cf. Negrini et al., 2022)
 
Resuspendirana vlakna91 (u PBS-u) fragmentirana su prije dodavanja ćelijskih kultura sonicacijom 20 min u 2 mL Eppendorf cijevi pomoću zvučnika Vial Tweeter, alicitirana, bljeskalica zamrznuta u tekućem dušiku i pohranjena do upotrebe na -80 ̊C.
(cf. Vajhøj et al., 2021)
 

VialTweeter i laboratorijski zvučnici za α-Syn fragmentaciju

Hielscher Ultrasonics je svetski priznat kao vodeći proizvođač najsavremenijih ultrazvučnika. Pouzdani i uspostavljeni u velikim istraživačkim laboratorijama širom sveta, naši ultrazvučnici nude neuporediv kvalitet i performanse za vaše kritične eksperimente.
Sa Hielscher VialTweeter-om i bilo kojim drugim Hielscher sonicatorom, iskusićete neuporedivu udobnost korisnika, jer su zamišljeno projektovani za ponovljive rezultate, jednostavnost upotrebe i besprekoran rad. Sa funkcijama automatskog snimanja podataka, možete se fokusirati na svoje istraživanje dok naši ultrazvučnici pažljivo beleže ključne podatke za ponovljivost i preciznost.
Postignite konzistentne i ponovljive rezultate sa poverenjem!
Naši ultrazvučnici su projektovani i proizvedeni u Nemačkoj. Njemačka preciznost i najviši inženjerski kvalitet kako bi se osigurala pouzdana i precizna priprema uzorka takva alfa-sinukleinska fibrilna fragmentacija svaki put. Nema više brige o nedosljednim ishodima – naša ultrazvučna tehnologija osigurava da vaše istraživanje ostane na čelu naučnog napretka.
Ali to nije sve! Naša posvećenost izuzetnosti prevazilazi naše proizvode. Ponosni smo na našu izuzetnu korisničku uslugu, pružajući stručnu podršku za rešavanje bilo kakvih pitanja ili zabrinutosti koje možda imate. Naš posvećeni tim je tu da vam pomogne na svakom koraku vašeg istraživačkog putovanja, osiguravajući da izvučete maksimum iz naših ultrazvučnika.
Odaberite inovaciju, pouzdanost i iznimno korisničko iskustvo – odaberite naše laboratorijske soničare kao što je VialTweeter za fragmentaciju alfa-sinukleinskih vlakana. Iskoristite već uspostavljene protokole i pridružite se redovima vodećih istraživača koji veruju našoj tehnologiji za svoje kritičke studije. Podignite svoja istraživanja i istražite nove granice u istraživanju demencije i neurodegenerativnih bolesti sa našim najsavremenijim ultrazvučnicima.

Dizajn, proizvodnja i konsalting – Kvalitet proizveden u Nemačkoj

Hielscher ultrazvučni sistemi su poznati po svojim najvišim standardima kvaliteta i dizajna. Robusnost i jednostavan rad omogućavaju nesmetanu integraciju naših ultrazvučnika u industrijske objekte. Teškim uslovima i zahtevnim okruženjima lako upravljaju Hielscher ultrazvučnici.

Hielscher Ultrasonics je ISO sertifikovana kompanija i stavlja poseban naglasak na ultrazvučnike visokih performansi sa najsavremenijom tehnologijom i jednostavnošću upotrebe. Naravno, Hielscher sonicatori su usklađeni sa CE i ispunjavaju zahteve UL, CSA i RoHs.
 
Tabela ispod daje vam naznaku približnog kapaciteta obrade naših ultrazvučnika veličine laboratorije: