Hajelscher ultrazvuk tehnologije

Ultrazvučni uzorak Priprema za ELISA Assays

Assays kao što je ELISA se naširoko koriste za in-vitro dijagnostiku, otkrivanje proteina povezanih s bolestima i kontrolu kvalitete (npr. praćenje alergena hrane). Ultrazvučna priprema uzoraka je brza, pouzdana i razmnožavajuća tehnika za lizaciju ćelija i izolaciju intraćelijskih proteina, DNK, RNK i organela. Hielscher Ultrasonics nudi različita ultrazvučna rješenja za pogodnu pripremu jednostrukih uzoraka, više bočica kao i za mikrotiterske ploče i ploče sa 96 dobro.

Elisa – Enzim-Povezani Imunosorbent Assay

ELISA se zalaže za imunosorbent koji je povezan sa enzimom i široko se koristi biohemijskim analizom tehnike kategorije ligand-vezanih analiza. U ELISA,tečni uzorak se dodaje u stacionarne čvrste faze sa posebnim svojstvima vezivanja. Normalno, stacionarna čvrsta faza se primjenjuje kao premaza na ploču sa dobrom ili ELISA ploču. Zatim, razni tekući reagenti se sekvencalno dodaju, inkubirali i oprali, tako da se konačno optička promjena (npr. razvoj boje produktom enzimske reakcije) dogodi u konačnoj tekućini u izvoru. Optička promjena omogućava mjerenje količine analita tako što se nazove kvantitativni “čitanje". Za kvantitativno očitavanje, spektrofotometar, fluorometar ili luminometar se koristi za otkrivanje i mjerenje jačine prenosive svjetlosti. Na osjetljivost detekcije utiče pojačanje signala tokom analitičke reakcije. Pošto su enzimske reakcije dobro istražene i pouzdani procesi pojačavanja, enzimi se koriste za stvaranje signala. Enzimi su povezani sa detekcionim reagentima u fiksnim proporcijama kako bi se omogućila tačna kvantifikacija, što objašnjava i naziv "enzimom povezan" imunosorbent-a.
Kako se ELISA-ina ispitivanja izvode u mikrotiterskim pločama / 96-dobro-pločama, poznata je kao tehnika ispitivanja na bazi ploča i koristi se npr. u kliničkoj in-vitro dijagnostici, istraživanju, razvoju lijekova itd. za otkrivanje i kvantifikovanje antitijela, peptida, proteina i hormona.
ELISA tehnika se često koristi kao dijagnostički alat u medicini, biotehnici, patologiji biljaka i također je važno mjerenje kontrole kvaliteta u više industrija.

Kompletna VialTweeter setup: VialTweeter dihtovanje na ultrazvučnih procesor UP200St

Ultrazvučna jedinica za pripremu uzoraka VialTweeter koristi se za lizu ćelija i ekstrakciju proteina prije ELISA-e

Informativni zahtev




Zabilježi naš Politika privatnosti.


Ultrazvučni uzorak Prep prije ELISA

Prije nego što se ELISA test može izvesti, uzorci zahtijevaju korake pripreme takve ćelijske lize i ekstrakcije intraćelijskih proteina, DNK, RNK itd. Prednost ultrazvučne lize ćelija i izolacije proteina je njegova visoka efikasnost, pouzdanost i reproducibilnost. Svi ovi faktori su važni kako bi se dobili visokokvalitetan dijagnostički i istraživački rezultati

Prednosti Ultrazvučne lize prije ELISA

  • Homogeni tretman uzorkom
  • Kompletna liza
  • Kompletna ekstrakcija proteina (npr. antitijela, DNK)
  • Optimalna prilagodba tipu ćelija
  • Za bilo koju veličinu uzorka
  • izvodljiv
  • Temperaturno kontrolisano
  • Automatsko protokoliranja podataka na SD-kartici

Protokol za Pre-ELISA ultrazvučnu lizu ćelija

Sonda tipa insonifier UP200St za lizu

  • Za Cell Cultures: Prije ultrazvučne lize ćelija, centrifuge ćelije 5 min na 270 x g u mikrocentrifugu. Ukloni supernatant aspiracijom i resuspend ćelijama u 30 – 100 μL RIPA bafera. Zatim, inkubira ćeliju kuglicu na ledu 30 min.
  • Uzorak ćelije je spreman za ultrazvučnu lizu:
    Koristi ultrasonikator tipa sonde (npr. Uf200 ः t sa sondom S26d2) ili ultrazvučnim više uzorkom uređaja (npr. VialTweeter za istovremeno sonikaciju do 10 bočica ili UIP400MPT za mikrotiterske ploče / 96-dobro ploča) u zavisnosti od količine uzoraka koje trebate pripremiti.
    Za sonikaciju jednog uzorka tipa sonde, ćelije smestite u 1,5 mL mikrocentrifuge cevi.
  • Pre-postavite svoje ultrazvučno trajanje, ukupan unos energije, režim ciklusa i/ili ograničenja temperature u digitalnom meniju ultrazvučnikatora. To osigurava vrlo pouzdano sonication i ponovenost.
  • Uključi sonotrode i uključi ultrazvučni uređaj. Nježno pomaknite mikro vrh ultrazvučne sonde kroz uzorak kako bi se uzorak sonicirao u uniformi.
    Za većinu ćelija, ultrazvučna liza će biti završena nakon 2 -4 ciklusa sonikacije od 10 sek.
  • Nakon sonikacije uklonite sonotrode iz uzorka. Uzorci bi trebali biti inkubirali na ledu 5 min. Zatim, centrifuga na 10.000 x g na 20 min da zalijeće krhotine. Prebaci natprirodne u novu mikrocentrifugnu cijev. Označite analiti i čuvajte na -20°C.
  • Ultrazvučna sonotrode se može očistiti tako što se pravilno briše alkoholom ili sonikira u peklu ispunjenom alkoholom, npr. 70% etanola. Sve ultrazvučne sonde napravljene od titanija su autoklavi.

Za Tkivo Homogenates:

  • Isperite tkivo ledeno hladnim PBS-om (0,01M, pH=7,4) kako bi se temeljito uklonila višak hemolize krvi.
  • Vagati tkivo (bubreg, srce, pluća, slezena itd.) i macerat ga u male komadiće, koji su homogenizirani u PBS-u. Potreban volumen PBS-a je vezan za težinu maramice. Po pravilu palca, 1g tkivo zahtijeva cca. 9mL PBS. Preporučuje se dodati neki inhibitor proteaze u PBS. (RIPA ili hipotonični lizni bafer koji sadrži koktel proteaze i fosfataze može se koristiti alternativno.)
  • U zavisnosti od veličine tkivo, kratki tretman vrtlogom (cca. 1-2 min. u 15 sec. pulsa) može biti od pomoći za pred-liječenje tkivo.
  • Montiraj mikro-vrh, npr. S26d2, na svoj ultrasonikator. Cijev za uzorke s tkivom u ledeno kupatilo.
  • Sonicirajte uzorak svojim ultrasonikatorom, npr. UP200St (80% amplitude) 1 min. u pulsnom modu (15sec on, 15sec pauza). Zadrži uzorak u ledenu kupku.
  • Homogenati se zatim centrifugiraju kako bi se dobili specifični bazeni (cistosolni, nuklearni, mitohondrijski ili lizosomski) kako bi se obogatio protein za analizu. Centrifugom uzorka 5 minuta na 5000×g, supernatant se preuzme.
Sonotrode MTP-24-8-96 ima osam ultrazvučnih sondi za sonication wells of microtiter plates.

Sonotrode MTP-24-8-96 ima osam ultrazvučnih sondi za sonication wells of microtiter plates.

Pouzdana kontrola temperature tokom sonicationa

Temperatura je presudan faktor koji utječe na proces koji je posebno važan za liječenje bioloških uzoraka, npr. za sprečavanje toplinske degradacije proteina. Kao sve mehaničke tehnike pripreme uzoraka, sonication stvara toplotu. Međutim, temperatura uzoraka se može dobro kontrolirati kada se koriste Hielscher Ultrasonics uređaji. Predstavljamo vam razne opcije za praćenje i kontrolu temperature vaših uzoraka dok ih pripremate ultrasonikatorom tipa sonde ili VialTweeterom pre-analitički.

  1. Praćenje temperature uzorka: Svi Hielscherovi digitalni ultrazvučni procesori opremljeni su inteligentnim softverom i plugable senzorom temperature. Uključite senzor temperature u ultrazvučni uređaj (npr. Uf200 ः t, UP200St, VialTweeter, UIP400MTP) i umetnite vrh senzora temperature u jednu od cijevi za uzorke. Preko digitalnog obojenog touch-displaya možete postaviti u meniju ultrazvučnog procesora specifičan temperaturni raspon za sonication vašeg uzorka. Ultrasonicator će se automatski zaustaviti kada se dostigne maksimalna temperatura i pauzirati dok temperatura uzorka ne padne na nižu vrijednost postavljene temperature ∆. Onda sonication počinje automatski ponovo. Ova pametna funkcija sprečava degradaciju izazvanu toplotom.
  2. Što se tiče ultrazvučne multi-uzorka jedinice VialTweeter, titanijumski blok, koji drži cijevi za uzorke, može biti pre-hladjen. Stavite blok VialTweeter (samo sonotrode bez sonovoda!) u hladnjak ili zamrzivač kako bi se prethodno ohladio titanijski blok pomaže u odgodi porasta temperature u uzorku. Ako je moguće, i sam uzorak može biti pre-hladan.
  3. Koristite ledeno kupatilo ili suhi led da se ohladite tokom sonikacije. Cijevi za uzorke tijekom sonikacije posjecite u ledeno kupatilo. Za VialTweeter koristite plitku tacnu napunjenu suhim ledom i vialTweeter posušite na suhi led tako da se toplina može brzo rasipati.

Kupci širom svijeta koriste Hielscher sonde-ultrasonicators kao i multi-uzorak sonication jedinice VialTweeter i UIP400MTP za njihov svakodnevni rad pripreme uzoraka u biološkim, biohemijskim, medicinskim i kliničkim laboratorijama. Inteligentni softver i kontrola temperature Hielscher procesora, temperatura je pouzdano kontrolisana i izbjegnuta degradacija uzorka izazvana toplotom. Ultrazvučna priprema uzorka uz Hielscher ultrazvučna rješenja isporučuje vrlo pouzdane i pomnožive rezultate!

Kontaktiraj nas! / Pitajte nas!

Traži više informacija

Molimo koristite formular ispod da Zatražit dodatne informacije o ultrazvučnim procesorima, aplikacijama i cijeni. Biće nam drago da diskutujemo o vašem procesu sa vama i da vam ponudimo ultrazvučni sistem.









Molim vas, obratite se našem Politika privatnosti.


Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

Hielscher Ultrasonics proizvodi ultrazvučne homogenizatore visokih performansi za miješanje aplikacija, disperziju, emulgaciju i ekstrakciju na laboratorijskim, pilotskim i industrijskim skalama.

Književnost/reference



Činjenice vredi znati

Vrste ELISA

Postoji nekoliko vrsta ELISA, koje se odašilje po njihovom funkcionalnom principu. Poznati su kao direktna ELISA, indirektna ELISA, sendvič ELISA, takmičarska ELISA, a obrnuta ELISA. U nastavku vam predstavljamo pregled nad raznim ELISA tipovima i njihovim glavnim karakteristikama i razlikama.
ELISA se može pokrenuti u kvalitativnom ili kvantitativnom formatu. Kvalitativni rezultati daju jednostavan pozitivan ili negativan rezultat, dok se u kvantitativnoj ELISA optičkoj gusti (OD) uzorka uspoređuje sa standardnom krivinom, što je obično serijsko razrjeđivanje otopine poznate koncentracije ciljne molekule.

Direktna ELISA

Direktna ELISA je najjednostavniji testni oblik Elise, gdje se koristi samo primarno antitijelo označeno enzimom i sekundarna antitijela nisu potrebna. Primarno antitijelo označeno enzimom se vezuje direktno za cilj, to je antigen. Baferiranom otopinom antigena dodaje se svaka bušotina mikrotiterske ploče (obično 96-bušotinske ploče, ELISA-ploče), gdje se pridržava plastične površine kroz interakcije naboja. Kada enzim povezan sa primarnim antitijela reagira sa svojim supstratom, on proizvodi vidljiv signal koji se može mjeriti preko spektrofotometra, fluorometra ili luminometra.

Indirektna ELISA

Za indirektni ELISA test, potrebno je i primarno antitijelo i sekundarno protutijelo. Međutim, suprotno direktnoj ELISA, ne primarno antitijelo, već sekundarno antitijelo je označeno enzimom. Antigen je imobiliziran na ploču sa izvorom i vezan primarnim antitijela. Naknadno, enzimom označeno sekundarno antitijelo se veze za primarno antitijelo. Konačno, enzim povezan sa sekundarnim antitijela reagira sa svojim supstratom kako bi proizveo vidljiv signal koji se može otkriti.

Sendvič ELISA

Dok je u direktnim i indirektnim ELISA testovima, antigen je imobiliziran i premažen na površinu ploče sa dobrom pločom, u sendviču ELISA antitijelo je imobilizirano na plastičnu površinu ELISA-ploče. Imobilizirana antitijela u sendviču ELISA poznata su kao antitijela za hvatanje. Uz hvatanje antitijela, u sendviču ELISA također su potrebna icalled detection antitijela. Detekcijo antitijela uključuju neoznaćeno primarno detekcijo antitijelo i enzimski označeno antitijelo sekundarnog otkrivanja.
Stepwise, antigen interesa se veze za hvatanje antitijela imobiliziranog za tanjur. Zatim, primarno detekcijo antitijelo se veze za antigen. Nakon toga, antitijelo sekundarne detekcije se veze za primarno detekcijo antitijelo. U koraku konačne reakcije enzim reaguje sa svojim supstratom kako bi proizveo vidljivi signal koji se može otkriti optično.

Takmičarska ELISA

Konkurentna ELISA, poznata i kao inhibicija ELISA, je najsložniji ELISA tip jer uključuje upotrebu inhibitorskog antigena. Svaki od tri formata, direktni, indirektni i sendvič ELISA, može se prilagoditi konkurentnom ELISA formatu. U takmičarskoj ELISA, inhibitor antigen i antigen interesa natječu se za vezivanje za primarno antitijelo.
Za konkurentnu ELISA, neobeleženo antitijelo se inkubirao u prisustvu njegovog antigena, to jest uzorka. Ovi vezani antitijelo/antigenski kompleksi se zatim dodaju u antigenom premazivani dobro.
Tanjur je opran, tako da se uklanjaju nevezana antitijela. Konkurentna ELISA ima svoje ime zbog činjenice da što je više antigena u uzorku, formiraju se više antigen-antitijela kompleksi. To znači, postoje manje nevezana antitijela dostupna da se veže za antigen u zlikovcu i antigeni se moraju natjecati za dostupno antitijelo. Dodaje se sekundarno protutijelo, koje odgovara primarnom antitijelo. Ovo drugo antitijelo je povezano sa enzimom. Kada se doda supstrat, preostali enzimi proizvode hromogenski ili fluorescentni signal.
U ovom trenutku, reakcija je zaustavljena kako bi se izbjegla eventualna zasićenost signala.
Neki konkurentni ELISA kits uključuju enzimski povezan antigen umjesto enzimom povezanog antitijela. Označeni antigen se natječe za primarna mjesta vezanja antitijela sa antigenom uzorka (neoznačenim). Što je manje antigena u uzorku, više je označen antigen u zbunjenici i jači signal.

Obrnuto ELISA

Obrnuta ELISA ne koristi dobro ploče, već ostavlja antigene suspendovane u test tečnosti. Obrnuti ELISA test mjeri količinu vezanog antitijela preko antigena. Razvijen je posebno za otkrivanje i istraživanje proteina omotnice virusa zapadnog Nila i kako je u stanju pronaći antitijela specifična za virus.

Enzimski marker koji se koristi za ELISA

Lista ispod daje najčešće enzime markere koji se koriste u ELISA testovima, koji omogućavaju mjerenje rezultata testa po do kraja.

  • OPD (o-fenilenediamin diklorid) pretvara jantar za otkrivanje HRP (Hren peroksidaze), koji se često koristi kao konjugirani protein.
  • TMB (3,3′,5,5′-tetrametilbenzidin) poplavi pri otkrivanju HRP-a i požuti nakon dodatka sumporne ili fosforne kiseline.
  • ABTS (2,2′-Azinobis [3-etilbenzotiazolin-6-sulfonska kiselina]-diamonijeva sol) pri otkrivanju HRP-a postaje zelena.
  • PNPP (p-Nitrofinil fosfat, disodij sol) požuti pri otkrivanju alkalne fosfataze.