Hajelscher ultrazvuk tehnologije

Cell Lysis of BL21 Cells by Ultrasonication

BL21 ćelije su soj E. coli koji se naširoko koristi u istraživačkim laboratorijima, biotehnologiji i industrijskoj proizvodnji zbog svoje sposobnosti da izraze proteine vrlo efikasno. Ultrazvučni poremećaj ćelije, liza i ekstrakcija proteina je uobičajena metoda izolacije i prikupljanja ciljanih proteina iz ćelijske unutrašnjosti BL21 ćelija. Ultrasonication u potpunosti remeti ćeliju i oslobađa sve ukapirane proteine, što 100% proteina čini dostupnim.

BL21 Ćelije za ekspresiju proteina

E. coli bacteria such as BL21 cells are commonly lysed by ultrasonication in order to release expressed proteins, such as recombinant proteinsBL21 ćelija je hemijski kompetentan E. coli bakterijski naprezanje pogodan za transformaciju i ekspresiju proteina visokog nivoa pomoću indukcionog sistema T7 RNK polimeraze-IPTG. BL21 ćelije omogućavaju visokoeficijencijsku ekspresiju proteina bilo og gena koji je pod kontrolom promotora T7. E. coli soj BL21(DE3) je T7 RNK na bazi polimeraze proizvodnje proteina soj u kombinaciji s T7 promotor-based expression vektori i široko se primjenjuje u laboratorijama i industriji za proizvodnju rekombinantnih proteina. U BL21(DE3), izraz genskog kodiranje rekombinantnog proteina transkribuje hromosomski kodirana T7 RNK polimeraza (T7 RNAP), koja transkribuje osam puta brže od konvencionalne E. coli RNAP. To čini soj BL21(DE3) visoko efikasnim i pretvara ga u jedan od najpoželjenijih proteinskih ekspresionih ćelijskih sistema.

Protokol za ultrazvučnu lizu i ekstrakciju proteina iz BL21 ćelija

Ćelijske lize BL21 ćelija se uglavnom izvode pomoću ultrasonikacije u kombinaciji sa natrijevim lauroil sarkozinatom (poznatom i kao sarkosil) kao liznim baferom. Prednosti ultrazvučnog poremećaja ćelija i ekstrakcije proteina leže u pouzdanosti, reproducibilnosti kao i jednostavnom, sigurnom i brzom rad ultrasonikatora. Protokol ispod daje korak po korak smjer za ultrazvučnu BL21 lizu ćelija:

Sonda tipa insonifier UP200St za lizu

Ultrazvučni poremećaj ćelija UP200St sa mikro-vrhom S26d2 za lizu i ekstrakciju proteina

Informativni zahtev




Zabilježi naš Politika privatnosti.


  • Da bi se uklonili proteini pratioca, BL21 bakterijske kuglice su ponovo ubačene u 50 ml ledene hladnoće Sodium Tris-EDTA (STE) bafer (koji se sastoji u 10 mM Tris-HCL, pH 8,0, 1 mM EDTA, 150 mM NaCl dopunjen sa 100 mM PMSF).
  • Dodaje se 500 ul lizozima (10 mg/ ml) i ćelije se inkubatore na ledu 15 min.
  • Nakon toga, dodaje se 500 ul DTT-a i 7 ml sarkosila (10% (w/v) sačinjene u STE baferu).
  • Od suštinske je važnosti zadržati sve bufere za pročišćavanje ledom hladne i održavati uzorke na ledu cijelo vrijeme. Sve korake za pročišćavanje treba izvršiti u hladnoj sobi ako je moguće.
  • VialTweeter at the ultrasonic processor UP200ST

  • Za ultrazvučnu lizu i ekstrakciju proteina uzorci se sonikuju u VialTweeter MultiSample Ultrasonicator za 4 x 30 sek na 100% amplitude sa 2 min intervala između svake sonication. Alternativno, ultrazvučni homogenizer tipa sonde sa mikro-tipom npr. Uf200 ः t sa S26d2 (3 x 30 sek, 2 min. pauza između ultrazvučnih ciklusa, 80% amplituda) se može koristiti.
  • Za daljnje korake pročišćavanja uzorci se moraju čuvati na ledu ili alternativno čuvati na -80°C do daljnje obrade.

Ultrazvučna liza pod prescise kontrolom temperature

Precizna i pouzdana kontrola temperature je presudna kada se rukuje biološkim uzorcima. Visoke temperature pokreжu termiиki izazvanu degradaciju proteina u uzorcima.
Kao sve mehaničke tehnike pripreme uzoraka, sonication stvara toplotu. Međutim, temperatura uzoraka se može dobro kontrolirati pri upotrebi VialTweetera. Predstavljamo vam razne opcije za praćenje i kontrolu temperature vaših uzoraka dok ih pripremate uz VialTweeter i VialPress za analizu.

  1. Praćenje temperature uzorka: Ultrazvučni procesor UP200St, koji vozi VialTweeter, opremljen je inteligentnim softverom i plugable senzorom temperature. Priključite senzor temperature u UP200St i umetnite vrh senzora temperature u jednu od cijevi za uzorke. Preko digitalnog obojenog touch-displaya možete postaviti u meniju UP200St određenog temperaturnog raspona za sonication uzorka. Ultrasonicator će se automatski zaustaviti kada se dostigne maksimalna temperatura i pauzirati dok temperatura uzorka ne padne na nižu vrijednost postavljene temperature ∆. Onda sonication počinje automatski ponovo. Ova pametna funkcija sprečava degradaciju izazvanu toplotom.
  2. Blok VialTweeter može biti pre-hladan. Stavite blok VialTweeter (samo sonotrode bez sonovoda!) u hladnjak ili zamrzivač kako bi se prethodno ohladio titanijski blok pomaže u odgodi porasta temperature u uzorku. Ako je moguće, i sam uzorak može biti pre-hladan.
  3. Koristite suhi led za hlađenje tokom sonication. Koristite plitku tacnu napunjenu suhim ledom i na led smestite VialTweeter tako da toplota može brzo da se rasipa.

Kupci širom svijeta koriste VialTweeter i VialPress za svoj svakodnevni rad pripreme uzoraka u biološkim, biohemijskim, medicinskim i kliničkim laboratorijama. Inteligentni softver i kontrola temperature procesora UP200St, temperatura je pouzdano kontrolisana i izbjegnuta degradacija uzorka izazvana toplotom. Ultrazvučna priprema uzoraka uz VialTweeter i VialPress dostavlja vrlo pouzdane i reprodukljive rezultate!

Pronađi optimalan ultrazvučni disruptor za svoju aplikaciju za lizu

Hielscher's industrial processors of the hdT series can be comfortable and user-friendly operated via browser remote control.Hielscher Ultrasonics je dugo vremena iskusni proizvođač visokozvodnih ultrazvučnih ćelijskih disruptera i homogenizatora za laboratorije, bench-top i industrijske sisteme vaga. Vaša veličina kulture bakterijskih ćelija, vaš cilj istraživanja ili proizvodnje i volumen ćelije za obradu po satu ili danu su bitni faktori za pronalazak pravog ultrazvučnog poremećaja ćelija za vašu primjenu.
Hielscher Ultrasonics nudi različita rješenja za istovremeno sonikaciju više uzoraka (do 10 bočica s VialTweeterom) i masovnih uzoraka (dakle, Mikrotiterske ploče / ELISA ploče sa UIP400MTP), kao i klasični ultrasonikator sonde tipa laba sa različitim nivoima snage od 50 do 400 vata do potpuno industrijskih ultrazvučnih procesora sa do 16.000watta po jedinici za komercijalne poremećaje ćelija i ekstrakciju proteina u velikoj proizvodnji. Svi Hielscherovi ultrasonicatori su izgrađeni za operaciju 24/7/365 pod punim teretom. Robusnost i pouzdanost su osnovne osobine naših ultrazvučnih uređaja.
Svi digitalni ultrazvučni homogenizatori opremljeni su pametnim softverom, obojenim ekranom na dodir i automatskim protokolom podataka, što ultrazvučni uređaj čini pogodnim radnim alatom u laboratoriji i proizvodnim objektima.
Javite nam, kakve ćelije, kakav volumen, sa kakvom frekvencijom i sa kakvom metom imate za obradu vaših bioloških uzoraka. Preporučit ćemo vam najposlivniji ultrazvučni poremećaj ćelija za vaše procesne zahtjeve.

Tabela ispod vam daje naznaku o približnom kapacitetu obrade naših ultrazvučnih sistema od kompaktnih ručnih homogenizatora i MultiSample Ultrasonicators do industrijskih ultrazvučnih procesora za komercijalne aplikacije:

Batch Volumen protok Preporučeni uređaji
96-dobro / mikrotiter ploče N / A. UIP400MTP
10 bočica à 0,5 do 1,5mL N / A. VialTweeter na UP200St
0.01 do 250mL 5 do 100mL/min UP50H
0.01 do 500mL 10 do 200ml / min UP100H
10 do 2000mL 20 do 400mL / min Uf200 ः t, UP400St
00,1 do 20L 00,2 do 4L / min UIP2000hdT
10 do 100l 2 do 10L / min UIP4000hdT
N / A. 10 do 100L / min UIP16000
N / A. veći klaster UIP16000

Kontaktiraj nas! / Pitajte nas!

Traži više informacija

Molimo koristite formular ispod da Zatražit dodatne informacije o ultrazvučnim procesorima, aplikacijama i cijeni. Biće nam drago da diskutujemo o vašem procesu sa vama i da vam ponudimo ultrazvučni sistem.









Molim vas, obratite se našem Politika privatnosti.


Ultrasonicator UP200Ht with microtip S26d2 for ultrasonic lysis of biological samples

ultrasonicator Uf200 ः t sa 2mm mikrotipom S26d2 za sonikaciju malih uzoraka

Književnost/reference



Činjenice vredi znati

Bakterije Escherichia Coli

Escherichia coli je tip bakterija, koji ne formira spore, Gram-negativan i karakterizira ga njegov oblik ravnog štapa. Bakterije E.coli su prisutne u okolini, hrani, i crijevima ljudi i životinja. E. coli je obično motilan korištenjem peritrihnih flagella, ali postoje i nemotilni tipovi. E.coli su tako zvani fakultetski anaerobni hemoorganotrofi organizmi, što znači da su sposobni i za respiratorni i fermentativni metabolizam. Većina E.coli tipova su benigne i ispunjavaju korisne funkcije u tijelu, npr. potiskujući rast štetnih bakterijskih vrsta, sintezu vitamina itd..
Ćelija bakterija Escherichia coli naziva B tipa je posebna kategorija E.coli soja, koji se u širokoj upotrebi u istraživanjima koriste za istraživanje mehanizama kao što su osjetljivost bakteriofaga ili restrikcijski-modifikacijski sistemi. Nadalje, bakterije E.coli se vrednuju kao pouzdani radni konj za ekspresiju proteina u biotehnologiji i laboratorijama za nauku o životu. Na primjer, E.coli se koriste za sintezu spoja kao što su proteini i oligosaharidi u industrijskim razmjerima. Zbog određenih osobina kao što su nedostatak proteaze, niska proizvodnja acetata na visokom nivou glukoze i poboljšana protjerljivost, E. coli B ćelije su najčešće koristi ćelije domaćina za proizvodnju genetički inžinjernih proteina.

Rekombinantni protein

Rekombinantni proteini (rProt) dobijaju značajnu važnost u mnogodjelnim granama, uključujući u hemijskoj proizvodnji, farmaceutskoj, kozmetičkom, medicini ljudi i životinja, poljoprivredi, hrani kao i industriji tretmana otpadom.
Proizvodnja rekombinantnog proteina zahtijeva upotrebu ekspresionog sistema. Kao izražavanje ćelijskih sistema za proizvodnju rekombinantne DNK, mogu se koristiti i prokariotske i eukariotske ćelije. Dok se bakterijska ćelija najviše koristi za ekspresiju proteina zbog faktora kao što su niska cijena, jednostavna skalavost i jednostavni medijski uslovi, sisački, hvat, alge, insekti i sistemi bez ćelija su uspostavljene alternative. Tip proteina, funkcionalna aktivnost, kao i potreban prinos izraženog proteina utiču na selekciju ćelijskog sistema koji se koristi za ekspresiju proteina.
Da bi se izrazio rekombinantni protein, određena ćelija mora biti transficirana DNK vektorom koji sadrži predložak rekombinantne DNK. Ćelije koje su presavršene sa predlošcima su tada kulturane. Kao posljedica ćelijskih mehanizama, ćelije transkribuju i prevode protein interesa, i time proizvode ciljani protein.
Kako su izraženi proteini utrpani u ćelijsku matricu, ćelija mora biti liznuta (poremećena i slomljena) kako bi se oslobodili proteini. U naknadnom koraku pročišćavanja, protein se odvaja i pročišćava.
Prvi rekombinantni protein korišten u liječenju bio je rekombinantni humani inzulin 1982. Danas se širom svijeta proizvodi više od 170 vrsta rekombinantne proteine za medicinske tretmane. Obično korišteni rekombinantni proteini koji se koriste u medicini su na primjer rekombinantni hormoni, interferoni, interleukini, faktori rasta, faktori tumorske nekroze, faktori zgrušavanja krvi, Trombolitički lijekovi, i enzimi za liječenje glavnih bolesti kao što su dijabetes, patuljasti infarkt, infarkt miokarda, kongestivno zatajenje srca, cerebralna apopleksija, multiple skleroze, neutropenija, thrombocytopenia, anemija, hepatitis, reumatoidni artritis, astma, Crohnina bolest, i terapije raka. (cf. Phuc V. Pham, in Omics Technologies and Bio-Engineering, 2018)


Hielscher Ultrasonics supplies high-performance ultrasonic homogenizers from lab to industrial size.

Ultrazvuka visokih performansi! Hielscherov proizvodni raspon pokriva cijeli spektar od kompaktnog lab ultrasonicatora preko klupa-top jedinica do puno-industrijskih ultrazvučnih sistema.