Puferske otopine pripremljene uz pomoć ultrazvuka

Puferi za lizu mogu se efikasno i brzo pripremiti pomoću ultrazvučnih homogenizatora tkiva. Budući da su ultrasonikatori alat iz snova za miješanje, otapanje i dispergiranje, oni omogućavaju pouzdanu i laku pripremu pufera za lizu.

Ultrazvučna priprema pufera za lizu

Ultrazvučni homogenizatori tkiva su uobičajeno sredstvo za razbijanje ćelija, lizu i ekstrakciju, stoga su dostupni u većini laboratorija. Sekundarna primjena ultrazvučnih aparata tipa sonde je priprema pufera za lizu.

Pufer za lizu je rastvor koji se koristi za razbijanje (lizu) ćelija i oslobađanje njihovog sadržaja za nizvodnu analizu. Specifični sastav pufera za lizu može varirati ovisno o vrsti ćelija koje se liziraju i daljnjoj primjeni. Međutim, tipični pufer za lizu sadrži komponente kao što su deterdženti, soli i inhibitori proteaze. Puferske soli (npr. Tris-HCl) i jonske soli (npr. NaCl) se obično koriste za regulaciju pH i osmolarnosti lizata.
Da bi se napravio pufer za lizu, komponente se miješaju zajedno u odgovarajućim koncentracijama i pH. Smjesa se obično miješa ili mućka dok se komponente ne otope i otopina postane homogena.
Ultrazvučna homogenizacija je metoda koja se može koristiti za stvaranje dobrog pufera za lizu poboljšanjem miješanja i rastvaranja komponenti. U ovoj metodi, ultrazvučni talasi – obično u opsegu od 20 do 30 kHz – se nanose na smjesu, što stvara kavitacijske mjehuriće koji se kolabiraju i stvaraju intenzivnu lokalnu energiju, što dovodi do mehaničkog smicanja i miješanja komponenti.
Proces ultrazvučne homogenizacije može pomoći da se razbiju bilo kakve grudvice ili agregati komponenti i osigura da je otopina ujednačeno pomiješana. Shodno tome, takav poboljšani pufer za lizu može dovesti do efikasnijeg razbijanja ćelija i većeg prinosa ekstrahovanog materijala. Dodatno, ultrazvučna homogenizacija može smanjiti vrijeme potrebno za pravljenje pufera za lizu u poređenju sa tradicionalnim metodama miješanja ili mućkanja.
Sve u svemu, ultrazvučna homogenizacija je moćan alat za poboljšanje kvaliteta i efikasnosti pripreme pufera za lizu.

Protokol za pripremu pufera za ultrazvučnu lizu

Ovo je opći protokol za pravljenje pufera za lizu korištenjem ultrasonikatora tipa sonde:
 
Materijali:

• Deterdžent(i) po izboru (npr. Triton X-100, SDS, CHAPS)
• So po izboru (npr. NaCl, KCl)
• Inhibitori proteaze (npr. PMSF, aprotinin, leupeptin)
• ultrasonicator
• mešalica
• Dejonizovana voda
• pH metar ili pH trake

 
 
Korak po korak uputstva:

1. Odredite sastav pufera za lizu na osnovu ćelija ili tkiva koje ćete lizirati i nizvodnih aplikacija za koje ćete koristiti lizat. Pripremite osnovne otopine deterdženata, soli i inhibitora proteaze u željenim koncentracijama.
2. Dodajte osnovne otopine deterdženata, soli i inhibitora proteaze u čašu ili tikvicu.
3. Dodajte dejoniziranu vodu da dovedete volumen do željene količine pufera.
4. Komponente pomiješajte pomoću miješalice kako biste dobili prethodno miješanu otopinu.
5. Izmjerite pH pufera pomoću pH metra ili pH traka i prilagodite pH prema potrebi malim količinama kiseline ili baze.
6. Koristite ultrazvučni aparat tipa sonde da homogenizujete rastvor prethodnog mešanja tako da se dobije visoko homogena otopina. Stoga, sonikirajte otopinu nekoliko sekundi dok se otopina potpuno ne izmiješa i sve grudice ili agregati se ne razbiju. Trajanje i snaga ultrazvučne obrade mogu se optimizirati na osnovu specifičnog pufera za lizu i ultrasonikatora koji se koristi.
7. Nakon ultrazvučne obrade, ponovo izmjerite pH pufera i prilagodite po potrebi.
8. Filtrirajte pufer kroz filter od 0,2 mikrona da biste uklonili sve ostatke ili agregate koji su se mogli formirati tokom ultrazvučne obrade.
9. Pufer za lizu je sada spreman za upotrebu.

 
Napomena: Tačan sastav i pH pufera za lizu mogu varirati ovisno o ćelijama ili tkivu koje se liziraju i daljnjim primjenama. Gornji protokol je opća smjernica i možda će biti potrebno optimizirati za specifične aplikacije.
 
Ultrazvučni homogenizatori se obično koriste za razbijanje ćelija i ekstrakciju intracelularnih molekula. Stoga mnoge aplikacije za lizu koriste sonikaciju tipa sonde ne samo za pripremu pufera za lizu, već i za mehaničko uništavanje i ekstrakciju ćelija.
Ovo čini ultrazvučne homogenizatore tkiva svestranim alatom za laboratorije i objašnjava široku upotrebu ultrazvučnih aparata u mikrobiologiji, biotehnologiji i nauci o životu.

ultrazvučni laboratorijski homogenizatori

Hielscher Ultrasonics proizvodi i isporučuje ultrazvučne homogenizatore i sonde (sonotrode) različitih snaga i zapremina uzoraka. To nam omogućava da vam ponudimo najprikladniji ultrazvučni disruptor za pripremu uzorka. Fokusiramo se na najviši kvalitet, izvanrednu udobnost korisnika i pouzdane rezultate sonikacije. Svi digitalni ultrasonikatori poseduju pametni softver, programiranje i prethodno podešavanje protokola ultrazvuka, daljinsko upravljanje pretraživačem, kontrolu temperature, osvetljenje uzorka kao i automatsko snimanje podataka na ugrađenu SD karticu.

Dizajn, proizvodnja i konsalting – Kvaliteta Made in Germany

Hielscher ultrasonicatori su poznati po najvišoj kvaliteti i standardima dizajna. Robusnost i jednostavan rad omogućavaju nesmetanu integraciju naših ultrazvučnih aparata u industrijske objekte. Hielscher ultrasonikatori lako se nose sa teškim uslovima i zahtevnim okruženjima.

Hielscher Ultrasonics je ISO sertifikovana kompanija i stavlja poseban naglasak na ultrazvučne aparate visokih performansi koji se odlikuju najsavremenijom tehnologijom i lakoćom korišćenja. Naravno, Hielscher ultrasonikatori su usklađeni sa CE i ispunjavaju zahtjeve UL, CSA i RoH.

Tabela u nastavku daje vam pregled naših različitih laboratorijskih ultrazvučnih aparata: