Puferi za lizu mogu se efikasno i brzo pripremiti pomoću ultrazvučnih homogenizatora tkiva. Pošto su ultrazvučnici alat iz snova za mešanje, rastvaranje i raspršivanje, oni omogućavaju pouzdanu i jednostavnu pripremu bafera za lizu.

Ultrazvučna priprema pufera za lizu

Ultrazvučni homogenizatori tkiva su uobičajeni alat za poremećaj ćelija, lizu i ekstrakciju, stoga dostupni u većini laboratorija. Sekundarna primjena za ultrazvučnike tipa sonde je priprema pufera za lizu.

Lysis buffer je rastvor koji se koristi za razbijanje otvorenih (liziranih) ćelija i oslobađanje njihovog sadržaja za nizvodnu analizu. Specifični sastav bafera za lizu može varirati ovisno o vrsti ćelija koje se liziraju i nizvodnoj primjeni. Međutim, tipičan pufer za lizu sadrži komponente kao što su deterdženti, soli i inhibitori proteaze. Puferske soli (npr. tris-HCl) i ionske soli (npr. NaCl) obično se koriste za regulaciju pH i osmolarnosti lizata.
Da bi se napravio pufer za lizu, komponente se miješaju zajedno u odgovarajućim koncentracijama i pH. Smjesa se obično miješa ili trese dok se komponente ne rastvore i rastvor homogen.
Ultrazvučna homogenizacija je metoda koja se može koristiti za stvaranje dobrog bafera za lizu poboljšanjem miješanja i rastvaranja komponenti. U ovoj metodi, ultrazvučni talasi – normalno u rasponu od 20 do 30 kHz – se primjenjuju na smjesu, koja stvara mjehuriće kavitacije koji kolabiraju i generiraju intenzivnu lokalnu energiju, što dovodi do mehaničkog smicanja i miješanja komponenti.
Proces ultrazvučne homogenizacije može pomoći u razbijanju bilo kojih grudvica ili agregata komponenti i osigurati da je rastvor ravnomerno pomešan. Shodno tome, takav poboljšani bafer za lizu može dovesti do efikasnijeg poremećaja ćelija i većih prinosa ekstrahovanog materijala. Pored toga, ultrazvučna homogenizacija može skratiti vreme potrebno za pravljenje bafera za lizu u poređenju sa tradicionalnim metodama mešanja ili drhtanja.
Sve u svemu, ultrazvučna homogenizacija je moćan alat za poboljšanje kvaliteta i efikasnosti pripreme pufera za lizu.

Protokol za pripremu bafera za ultrazvučnu lizu

Ovo je opšti protokol za izradu bafera za lizu pomoću ultrazvučnika tipa sonde:
 
Materijale:

• Deterdžent(e) po izboru (npr. Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Sol(e) po izboru (npr. NaCl, KCl)
• inhibitori proteaze (npr. PMSF, aprotinin, leupeptin)
• ultrasonicator
• stirrer
• Deionizovana voda
• pH metar ili pH trake

 
 
Step-by-step instrukcije:

1. Odredite sastav bafera za lizu na osnovu ćelija ili tkiva koje ćete lizati i nizvodnih aplikacija za koje ćete koristiti lizat. Pripremite rastvore deterdženta, soli i inhibitora proteaze u željenim koncentracijama.
2. Dodajte rastvore deterdženta, soli i inhibitora proteaze u pehar ili pljosku.
3. Dodajte dejonizovanu vodu da biste volumen doveli do željene količine bafera.
4. Pomešajte komponente pomoću mešalice kako biste dobili rešenje pre mešanja.
5. Izmerite pH bafera pomoću pH metra ili pH traka i podesite pH po potrebi sa malim količinama kiseline ili baze.
6. Koristite ultrazvučni sistem tipa sonde da biste homogenizovali rastvor pre mešanja tako da se dobije visoko homogeno rešenje. Zbog toga sonicirajte rastvor nekoliko sekundi dok se rastvor temeljito ne pomeša i sve grudvice ili agregati se ne razgrade. Trajanje i snaga sonicacije mogu se optimizirati na temelju specifičnog bafera za lizu i ultrazvučnika koji se koristi.
7. Nakon ultrazvučnosti, ponovo izmerite pH bafera i prilagodite po potrebi.
8. Filtrirajte bafer kroz filter od 0,2 mikrona da biste uklonili sve ostatke ili agregate koji su se možda formirali tokom sonifikacije.
9. Bafer za lizu je sada spreman za upotrebu.

 
Napomena: Tačan sastav i pH pufera za lizu mogu varirati u zavisnosti od ćelija ili tkiva koje se lizira i nizvodnih aplikacija. Gore navedeni protokol je opšta smernica i možda će morati da bude optimizovan za određene aplikacije.
 
Ultrazvučni homogenizatori se obično koriste za ćelijski poremećaj i ekstrakciju unutarćelijskih molekula. Zbog toga mnoge aplikacije za lizu koriste sondičnost tipa sonde ne samo za pripremu bafera za lizu, već i za mehanički poremećaj ćelija i ekstrakciju.
To čini ultrazvučne homogenizatore tkiva svestranim alatom za laboratorije i objašnjava široku upotrebu ultrazvučnika u mikrobiologiji, biotehnologiji i nauci o životu.

ultrazvučna laboratorija Homogenizatori

Hielscher Ultrasonics proizvodi i isporučuje ultrazvučne homogenizatore i sonde (sonotrode) pri različitim ocjenama snage i volumenu uzorka. Ovo nam omogućava da Vam ponudimo najpogodniji ultrazvučni disruptor za pripremu uzorka. Fokusiramo se na najviši kvalitet, izvanredan komfor korisnika i pouzdane rezultate sonicacije. Svi digitalni ultrazvučnici imaju pametan softver, programiranje i prethodno podešavanje protokola za sonicaciju, daljinski upravljač pretraživača, kontrolu temperature, osvjetljenje uzorka kao i automatsko snimanje podataka na ugrađenoj SD-kartici.

Dizajn, proizvodnja i konsalting – Kvalitet proizveden u Nemačkoj

Hielscher ultrazvučni sistemi su poznati po svojim najvišim standardima kvaliteta i dizajna. Robusnost i jednostavan rad omogućavaju nesmetanu integraciju naših ultrazvučnika u industrijske objekte. Teškim uslovima i zahtevnim okruženjima lako upravljaju Hielscher ultrazvučnici.

Hielscher Ultrasonics je ISO sertifikovana kompanija i stavlja poseban naglasak na ultrazvučnike visokih performansi sa najsavremenijom tehnologijom i jednostavnošću upotrebe. Naravno, Hielscher ultrazvučnici su usklađeni sa CE i ispunjavaju zahteve UL, CSA i RoHs.

The table below gives you an overview of our various lab ultrasonicators: