Priprema puferskih otopina ultrazvučnom obradom

Puferi za lizu mogu se efikasno i brzo pripremiti pomoću ultrazvučnih homogenizatora tkiva. Budući da su ultrazvučni uređaji savršen alat za miješanje, otapanje i dispergiranje, omogućavaju pouzdanu i jednostavnu pripremu pufera za lizu.

Ultrazvučna priprema pufera za lizu

Ultrazvučni homogenizatori tkiva uobičajen su alat za razgradnju ćelija, lizu i ekstrakciju, pa su stoga dostupni u većini laboratorija. Sekundarna primjena ultrazvučnih uređaja sa sondom jeste priprema pufera za lizu.

Pufer za lizu je otopina koja se koristi za razbijanje (lizu) ćelija i oslobađanje njihovog sadržaja za daljnju analizu. Specifičan sastav pufera za lizu može varirati ovisno o vrsti ćelija koje se liziraju i o daljnjoj primjeni. Međutim, tipičan pufer za lizu sadrži komponente poput deterdženata, soli i inhibitora proteaza. Puferske soli (npr. Tris-HCl) i ionske soli (npr. NaCl) obično se koriste za regulaciju pH vrijednosti i osmolarnosti lizata.
Za pripremu pufera za lizu komponente se miješaju u odgovarajućim koncentracijama i pri odgovarajućoj pH vrijednosti. Smjesa se obično miješa ili mućka dok se komponente ne otope i dok otopina ne postane homogena.
Ultrazvučna homogenizacija je metoda koja se može koristiti kao pomoć pri pripremi dobrog pufera za lizu poboljšanjem miješanja i otapanja komponenti. U ovoj metodi ultrazvučni valovi – uobičajeno u rasponu od 20 do 30 kHz – primjenjuju se na smjesu, čime nastaju kavitacijski mjehurići koji kolabiraju i stvaraju intenzivnu lokalnu energiju, što dovodi do mehaničkog smicanja i miješanja komponenti.
Proces ultrazvučne homogenizacije može pomoći u razbijanju svih grudica ili agregata komponenti i osigurati da je otopina ravnomjerno izmiješana. Posljedično, tako poboljšan pufer za lizu može dovesti do efikasnije razgradnje ćelija i većeg prinosa ekstrahiranog materijala. Osim toga, ultrazvučna homogenizacija može skratiti vrijeme potrebno za pripremu pufera za lizu u poređenju s tradicionalnim metodama miješanja ili mućkanja.
Ukupno gledano, ultrazvučna homogenizacija je moćan alat za poboljšanje kvalitete i efikasnosti pripreme pufera za lizu.

Protokol za ultrazvučnu pripremu pufera za lizu

Ovo je opći protokol za pripremu pufera za lizu pomoću ultrazvučnog uređaja sa sondom:

Materijali:

• Deterdžent(i) po izboru (npr. Triton X-100, SDS, CHAPS)
• So(li) po izboru (npr. NaCl, KCl)
• Inhibitori proteaza (npr. PMSF, aprotinin, leupeptin)
• Ultrazvučni uređaj
• Miješalica
• Deionizirana voda
• pH-metar ili pH trake

 
 
Upute korak po korak:

1. Odredite sastav pufera za lizu na osnovu ćelija ili tkiva koje ćete lizirati i daljnjih primjena za koje ćete koristiti lizat. Pripremite osnovne otopine deterdženata, soli i inhibitora proteaza u željenim koncentracijama.
2. Dodajte osnovne otopine deterdženata, soli i inhibitora proteaza u čašu ili tikvicu.
3. Dodajte deioniziranu vodu da biste dopunili volumen do željene količine pufera.
4. Izmiješajte komponente pomoću miješalice kako biste dobili prethodnu smjesu.
5. Izmjerite pH vrijednost pufera pomoću pH-metra ili pH traka i po potrebi je podesite malim količinama kiseline ili baze.
6. Upotrijebite ultrazvučni uređaj sa sondom da homogenizirate prethodnu smjesu kako bi se dobila visoko homogena otopina. U tu svrhu ultrazvučno obrađujte otopinu nekoliko sekundi dok se otopina temeljito ne izmiješa i dok se sve grudice ili agregati ne razbiju. Trajanje i snaga ultrazvučne obrade mogu se optimizirati prema konkretnom puferu za lizu i korištenom ultrazvučnom uređaju.
7. Nakon ultrazvučne obrade ponovo izmjerite pH vrijednost pufera i po potrebi je podesite.
8. Filtrirajte pufer kroz filter od 0,2 mikrona kako biste uklonili sve ostatke ili agregate koji su se mogli formirati tokom ultrazvučne obrade.
9. Pufer za lizu je sada spreman za upotrebu.

Napomena: Tačan sastav i pH vrijednost pufera za lizu mogu varirati ovisno o ćelijama ili tkivu koje se lizira i o daljnjim primjenama. Gore navedeni protokol je opća smjernica i možda će ga biti potrebno optimizirati za specifične primjene.

Ultrazvučni homogenizatori se obično koriste za razgradnju ćelija i ekstrakciju intracelularnih molekula. Stoga mnoge primjene lize koriste ultrazvučnu obradu sondom ne samo za pripremu pufera za lizu, nego i za mehaničku razgradnju ćelija i ekstrakciju.
Zahvaljujući tome ultrazvučni homogenizatori tkiva su svestran alat za laboratorije, što objašnjava široku upotrebu ultrazvučnih uređaja u mikrobiologiji, biotehnologiji i prirodnim naukama.

Ultrazvučni laboratorijski homogenizatori

Hielscher Ultrasonics proizvodi i isporučuje ultrazvučne homogenizatore i sonde (sonotrode) različitih snaga i volumena uzoraka. To nam omogućava da vam ponudimo najpogodniji ultrazvučni dezintegrator za pripremu vaših uzoraka. Fokusiramo se na najvišu kvalitetu, izuzetnu udobnost korištenja i pouzdane rezultate ultrazvučne obrade. Svi digitalni ultrazvučni uređaji imaju pametni softver, programiranje i prethodno podešavanje protokola ultrazvučne obrade, daljinsko upravljanje putem preglednika, kontrolu temperature, osvjetljenje uzorka, kao i automatsko bilježenje podataka na ugrađenu SD karticu.

Dizajn, proizvodnja i savjetovanje – kvalitet proizveden u Njemačkoj

Hielscher ultrazvučni uređaji poznati su po najvišem kvalitetu i standardima dizajna. Robusnost i jednostavno rukovanje omogućavaju nesmetanu integraciju naših ultrazvučnih uređaja u industrijska postrojenja. Hielscher ultrazvučni uređaji lako se nose s teškim uslovima i zahtjevnim okruženjima.

Hielscher Ultrasonics je ISO certificirana kompanija i poseban naglasak stavlja na visokoučinkovite ultrazvučne uređaje s najsavremenijom tehnologijom i jednostavnošću korištenja. Naravno, Hielscher ultrazvučni uređaji su usklađeni s CE oznakom i ispunjavaju zahtjeve UL, CSA i RoHs.

Tabela ispod daje vam pregled naših različitih laboratorijskih ultrazvučnih uređaja: