Ultrazvučna priprema uzoraka C. Elegans

C. elegani, nematodni crv, je široko korišten model organizma u biologiji. Priprema uzorka prije analize zahtijeva lizu, ekstrakciju proteina i lipida kao i rascjepkanost RNK, koja se može pouzdano izvesti putem sonikacije. Ultrazvučni ćelijski disruptori su pouzdani, sofisticirani i lako za upotrebu uređaji za brzu pripremu uzoraka C. elegana.

Ultrazvučna priprema uzoraka C. Elegans

C. elegani su okrugli crvi, koji se naširoko koriste u istraživačkim laboratorijima za istraživanje genomika, razvojne biologije, i bolesti. Mnogi geni u genomu C. elegana imaju funkcionalne kolege kod ljudi. Time je nematodni crv izuzetno koristan model za ljudske bolesti. Ostale prednosti za široku upotrebu C. elegana su njegova laka i jeftina kultivacija na pločama koje sadrže bakterije (npr. E. coli), njegova transparentnost, zgodno rukivanje, kao i mogućnost da se crvi zamrznu i pohrane duže vrijeme.
Analiza proteina i lipida su redoviti postupci u laboratorijama i ultrazvučna priprema uzoraka je utvrđena metoda za liziranje C. elegana nematoda u svakoj razvojnoj fazi (dakle embrioni, larve L1-L4, odrasli). Budući da se C. elegani koriste i kao sistem ekspresije proteina za previše izražene ciljane proteine, potrebna je pouzdana, razmnožavajuća liza i metoda ekstrakcije proteina, koja daje visoke prinose proteina. Ultrazvučni sistem poremećaja ćelija i ekstrakcije su dostupni kao homogenizatori tipa sonde i kao multi-uzorci ultrasonikatora. Catering na zgodan uzorak pripreme i sve vrste uzoraka veličine brojeva, Hielscher Ultrasonics ima idealan ultrazvučni cell disruptor za vaš laboratorijski postupak.
C. elegans je široko korišten model organizma u biološkim istraživanjima. Ultrazvučna liza je sofisticirana, pouzdana, razmnožavajuća i brza tehnika za pripremu visokokvalitetnih proteinskih ekstrakta iz C. elegana.

Ultrazvučni C. elegans Lysis za

  • Priprema homogenata crva
  • ekstrakcije proteina
  • Ekstrakcija lipida
  • Kvantifikacija proteina
  • Imunoprecipitacija
  • zapadne upijajući
  • Vađenje RNK
  • Enzimski Assays
VialTweeter na ultrazvučnom procesoru UP200ST

VialTweeter jedinica za pripremu više uzoraka za istovremenu sonikaciju 10 testnih cijevi.

Informativni zahtev




Zabilježi naš Politika privatnosti.


Ultrazvučni protokoli za poremećaj i lizu C. Elegans

Ultrazvučna homogenizacija i liza C. elegana i naknadno vađenje proteina i lipida mogu se izvesti pomoću različitih postupaka pomoću različitih homogenizacija i liznih bufera itd. Svi protokoli lize imaju zajedničko da se uzorci moraju kontinuirano držati na ledu kako bi se spriječila degradacija proteina. U nastavku vam predstavljamo neke pouzdane i brze ultrazvučne protokole lize i ekstrakcije za pripremu visokokvalitetnih proteina- ili uzoraka C. elegana koji sadrže lipide.

Prednosti Ultrasonic C. elegans Lysis

  • pouzdan
  • izvodljiv
  • preciznotemperaturno kontroliran
  • pouzdana kontrola procesa
  • nježna metoda
  • jednostavno za nanošenje
  • siguran

Ultrazvučna ekstrakcija proteina iz C. elegansa Uzorci

Ultrazvučna liza i ekstrakcija proteina C. elegans crva može se izvesti koristeći razne protokole. U nastavku vam predstavljamo nekoliko pouzdanih i brzih protokola lize za reprodukljive rezultate ekstrakcije proteina.

Rapid Preparatation of Cytosolic Extract from C. elegans Worms by Sonication

Sa sljedećim protokolom možete pripremiti C. elegans lizate za manje od 30 minuta.
Kolekcija C. elegana
Uberite željene C. elegans crve u 1,5ml cijev fosfata baferiranu otopinu (PBS) ili ih omejte sa ploče sa 1,5ml PBS. Centrifuga na 1min na 2000rpm na pelet. Čuvaj uzorke sve vreme na ledu.
Onda, dva puta omi crve sa PBS-om.
Nakon toga, dva puta oprati crve sa ddH2O.
Resuspend crva u najmanje 500ul od homogenizacije bafer (HB). Uzorci crva su sada spremni za ultrazvučnu lizu.
Za veći kvalitet ekstrakta proteina, možda ćete želeti da smanjite bakterijsku kontaminaciju tako što ćete oprati crve po 5min svaki u PBS i sterilnu, ultra-čistu vodu (ddH2O) ili izvršiti sakroza plutanje. Držite uzorke crva kontinuirano na ledu.

Ultrazvučni C. elegans Lysis Protocol

  • Pobrinite se da pripremite ultrasonicator unaprijed tako da je ultrazvučni homogenizer spreman za upotrebu (sonda montirana, sonication program unaprijed postavljen).
  • Ultrasonicator UP200Ht (200 vata, 26kHz) sa mikrotipom S26d2 za pripremu bioloških uzorakaAko vam je ultrasonicator stand-montiran, ledena kupka s vašim epruvetama ispod ultrazvučne sonde i ubacite ultrazvučnu sondu u cijev od 1,5ml.

  • Za C. elegans lysis sa UP200St ili UP200Ht, ultrasonication bi trebao biti izveden pomoću mikrotip (npr. 2mm sonda S26d2; vidi sliku lijevo) na 40% amplitude za 1sec sa 30sec pauze između. 5 sonication ciklusa za svaku 1 sekundu sa 30sec pauze su idealni za C. elegans lysis. Ako prvi put obavite lizu, možete provjeriti napredovanje lize u malim alikvotima uzorka nakon svakog pulsa pomoću mikroskopa.
  • Liza je uspješno završena kada su crvi poremećeni. Preusmerenost rezultira razbijanjem jezga i postaje vidljiva kada uzorak postane viskozan ili pena. Da biste spriječili degradaciju uzoraka, koristite više impulsa ako je potrebno. Ne povećavajte vrijeme svakog ultrazvučnog ciklusa pulsa kako biste dohvatili visokokvalitetni proteinski ekstrakti.
  • Bistri ćelijski lysat centrifuging ultrazvučno lysed crva na 14.000rpm za 10min na 4ºC.
  • Zatim, prebacite supernatant u svježu cijev i pripremite se za imunoprecipitaciju ili druga ispitivanja.

Napomena za bafer homogenizacije: Pripremite bafer homogenizacije za protokol ultrazvučne lize iznad kako slijedi:

  • 15 mM Hepes pH 7,6 – 15 ml od 0,5 M
  • 10 mM KCl – 2,5 ml od 2 M
  • 1,5 mM MgCl2 – 0.75 ml od 1 M
  • 0.1 mM EDTA – 100 ul od 0,5 M
  • 0.5 mM EGTA – 2,5 ml od 0,1 M
  • 44 mM sakroza – 14,7 ml od 50 %
  • Dodaj odmah prije upotrebe: 1mM DTT – 1000x od 1M
  • plus inhibitor proteaze

 

Ovaj tutorijal objašnjava koji tip sonicatora je najbolji za zadatke pripreme uzorka kao što su liza, poremećaj ćelija, izolacija proteina, fragmentacija DNK i RNK u laboratorijama, analiza i istraživanja. Odaberite idealan tip sonicatora za vašu primjenu, volumen uzorka, broj uzorka i propusnost. Hielscher Ultrasonics ima idealan ultrazvučni homogenizator za vas!

Kako pronaći savršen sonicator za poremećaje ćelija i ekstrakciju proteina u nauci i analizi

Video sličica

 

Visokopropusna liza C. elegans u pločama od 96 bunara pomoću sonikulatora UIP400MTP ploča

C. elegans Lysis (odrasle nematode)
UIP400MTP 80% amplitude, 20 ciklusa (svaki ciklus sonicacije: 30 sec ON, 30 sec OFF)
Međuspremnik za lizu:

  • Opcija 1) 4% SDS, 0,1 M Tris/HCl pH 8,0, 1 mM EDTA
  • Opcija 2) za koimunoprecipitaciju (co-IP): 10 mM Tris HCl (pH 7,5), 150 mM NaCl, 0,5 mM EDTA, 0,5 % NP-40 (Kompletan koktel inhibitora proteinaze)

Visoka propusnost DNK fragmentacije
C. elegans (odrasle nematode) DNK 200-300bp: sonifikator UIP400MTP ploča – 80% amplitude, 30pulses – 30 sec na, 30sec off

UIP400MTP Plate Sonicator za pripremu uzorka visoke propusnosti: UIP400MTP ravnomerno sonicira uzorke u multi-well, mikrotiter pločama i 96-bunarskim pločama koje ometaju ćelije, izdvajaju proteine, fragmentiraju DNK, RNK i alfa-sinukleinska vlakna.

UIP400MTP Ploča Sonicator za pripremu uzorka visoke propusnosti uniformno sonicira uzorke u multi-well, mikrotiter pločama i 96-bunarskim pločama

Ultrazvučna Lysis of C. elegans for Quantitative Affinity Purification Assays

C. elegani embrioni (∼2 miliona po replikatu) su svježe bereni u biološkom triplikatu izbjeljivajući mlade gravidne hermafrodite i sonitirali na ledu (ciklus: 0,5 s, amplitude: 40–45%, 5 poteza/sesije, 5 sesija, interval između sesija: 30 s; UP200S ultrazvučni procesor sa mikro-tipom S26d2 (Hielscher Ultrasonics GmbH)) u lizi baferu (ukupan volumen: ∼600 μl; 50 mm Tris-HCl, pH 7.4, 100 mm KCl, 1 mm MgCl2, 1 mm EGTA, 1 mm DTT, 10% glicarol, smjesa inhibitora proteaze, 0.1% Nonidet P-40 Zamjena). Nakon sonikacije, Nonidet P-40 Zamjena je dodana do 1% i lizati su inkubirali rotacijom glave preko repa na 4°C 30 min, a slijedi centrifugacija na 20.000 × g 20 min na 4°C. Očišćeni lisat je tada aspiriran bez uznemiravanja gornjeg lipidnog sloja i raspolovio se za pola ili u anti-GFP agaroznih perli ili blokiranih kontrolnih perli (40–50 μl). Nakon rotacije glave preko repa na 4°C 60–90 min, kule su jednom oprane lizisnim baferom koji sadrži 0,1% Nonidet P-40 Substitute, Slijedi dva puta pranja ili u baferu I (25 mm Tris-HCl, pH 7.4, 300 mm NaCl, 1 mm MgCl2) ili buffer II (1 mm Tris-HCl, pH 7.4, 150 mm NaCl, 1 mm MgCl2) ili oboje. Za GFP:MBK-2 pull-downs izvedena su dva odvojena eksperimenta koristeći različite uslove za opranje. Proteini su izvađeni orbitalom tresući se u 50 μl od 6 m uree/2 M tiourea na socnoj temperaturi. Za MBK-1::GFP pull-down eksperimente, proteini su dva puta izvađeni tresući se u 50μl od 8 m guanidinium hlorida na 90°C, a slijedile su padavine etanola. Izvađeni uzorci proteina su tada probavili u otopini.
(cf. Chen et al., 2016)

Sonotrode MTP-24-8-96 ima osam ultrazvučnih sondi za sonication wells of microtiter plates.

Sonotrode MTP-24-8-96 ima osam ultrazvučnih sondi za sonication wells of microtiter plates.

Ultrazvučna homogenizacija crva i liza

Za C.elegans lizu i proceduru ekstrakcije proteina, Po uzorku je prikupljeno 30.000 nemotoda relevantne faze i oprano u ledeno hladnoj S-bazali, koncentrirane centrifugacijom na 1500 o/min 2 min., oprane šest puta ledeno hladnom S-bazalnom radi uklanjanja zaostatnih bakterija, a zatim uskladištene na ledu dok nisu spremne za upotrebu. Za ekstrakciju proteina, gravid-odraslim crvima je bilo dozvoljeno da formiraju kompaktnu peletu nakon zadnjeg S-bazalnog opranja. Palice crva su zatim ponovo unete u 1 ml ledeno hladnog Ekstrakcionog bafera [20 mM kalija fosfata, pH 7,4, 2mM EDTA, 1% Triton-X-100, inhibitori proteaze (Sigma P2714)] i odmah obrađeni.
∼30.000 gravid-odraslih crva (što odgovara ∼100 mg mokra težina), sonicirane su na ledu koristeći ultrasonikator tipa sonde (npr. UP50H sa mikrotipom MS2) na 40% amplitudi za 10 ciklusa od 3 sek na, 30 sek off, u 1 ml od ledeno hladnog izvlačnog bafera. (cf. Baskharan et al. 2012)

Ultrazvučna ekstrakcija lipida iz C. elegana

U lipidomiji, grani metabolomike, lipidi komplement bioloških sistema se karakteriziraju i analiziraju. C. elegani se u lipidomiji naširoko koriste za istraživanje interakcije metaboličkih lipida i njihovih efekata na zdravlje i životni vijek.
Ultrazvučna liza i ekstrakcija se koristi za oslobađanje lipida kao što su sfingolipidi iz embrija C. elegana, larvi i odraslih crva. Ultrasonication se koristi za pripremu crv homogenata i naknadno za izdvajanje lipida iz uzorka.
Protokol za ultrazvučnu ekstrakciju lipida iz C. elegana
Otopi C. elegans pelet na ledu i ponovo se otopi sa 0,5 ml ultra vode. 
Sonicirajte uzorke C. elegana u 1,5mL testnim cijevima, dok održavate uzorke kontinuirano na ledu.
Sonication se može izvesti pomoću sonda-ultrazvučnika kao što je Uf200 ः t, ultrazvučna jedinica za pripremu uzoraka VialTweeter (istovremeno sonikacija 10 uzoraka) ili UIP400MTP (za sonication multi-well ploča kao što su 96-well ploče). Za ultrazvučnu lizu sa UP200Ht koristite micro-tip S26d2. Pre-set ultrazvučni ciklus mod u digitalnom meniju. Podesite amplitudu na 10% i sonication cycle mod od 2 sec impulsa od 20 ciklusa sa pauzom od 30 sek. između svake ultrazvučne pulsacije puknu.
Prebaci natprirodne u staklene cijevi sa vijčanom kapom. 
Izvršite Folch ekstrakciju dodavanjem 1 ml ultra vode u svaku staklenu cijev, nakon koje slijedi dodavanje 6 ml hloroforma/metanola (omjer = 2:1) smjese na svaku staklenu cijev.
Vrtlog svake staklene cijevi 30 sek 4 puta. 
Centrifugirajte cijevi na 1.258 x g 15 min (Eppendorf, 5810 R) kako bi dodatno poboljšali razdvajanje faza. 
Prebaci donji hidrofobni dio u čistu staklenu cijev staklenom pašter pipeto. 
Osušite donji hidrofobni dio pod protokom dušika u isparivaču dušika. 
Sušenu kuglicu čuvajte u zamrzivaču od -80 °C do upotrebe.

Ultrazvučna priprema Lysates crva

Worm lysate: L4 stadij crvi su beru i oprali tri puta M9 baferom (42,26 mM Na2HPO4, 22,04 mM KH2PO4, 85,56 mM NaCl, i 0,87 mM MgSO4) kako bi se uklonile sve bakterije. Nakon što su uklonili što je više moguće M9 pufera, crvi su resuspedirani u lizisnom puferu: 50 mM HEPES, 50 mM KCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 5 mM fosfat β-glicerol, 0,1% (v/v) Triton X-100, 50 mM natrijev fluorid, 1 mM natrijev orthovanadat, 5 mM natrijev pirofosfat, 0,2 mM fenilmetanesulfonilfluorid i inhibitor proteaze. Crvi su bili zamrznuti u tekućem dušiku i tri puta su se otopili na 37°C, zatim su crvi sonicirani na suvom ledu ultrazvučnom VialTweeter jedinicom za istovremenu pripremu 10 uzoraka cijevi. Sonication je izvršen na 50% amplitude u 10 ciklusa od 2 sek. sa 30 sec pauze između sonication pukoti. Nakon toga, uzorci su centrifugiran na 12000 o/min na 4°C 15 min. Supernatant je prikupljen i uskladišten na -70°C. Alikvot je korišten za kvantifikaciju proteina od strane Bradfordova atentata.
Određivanje ukupnog glutationa, GSH i GSSG: Za kvantifikaciju glutationa, lizejti i određivanje su napravljeni istog dana. Ličinke L4 su pobrane i oprane M9 baferom tri puta. Nakon što su uklonili što je više moguće M9 bafera, crvi su se ponovo udubljivali u ledeno hladnoj metafosfornoj kiselini (5% w/v), zatim su crvi sonicirane u ledu ultrazvučnim VialTweeterom na 50% amplitudi u deset sonication ciklusa od 2 sek. sa 30 sek. pauza između svakog ciklusa. Nakon toga, centrifugiran na 12000 o/min na 4 ̊C 15 min.
(cf. Alcántar-Fernández et al., 2018)

C. elegans Sample Prep before Immunoprecipitation and Western Blotting

Ukratko, za embrionske ekstrakte, ličinke C. elegans L1 uzgajane su u velikim tečnjacima S-srednje kulture do odraslog dobu. Embrioni su prikupljeni standardnom metodom izbjeljivača i suspendirani u lizisnom baferu (50 mM Tris, pH 7,5, 100 mM KCl, 1 mM EDTA, 1 mM MgCl2, 8,7% glicerola, 0,05% NP-40, 1􏰅 Koktel inhibitora proteaze i 1􏰅 fosfataze Koktel inhibitora I i II), brzo zamrznut u tekućem dušiku, a liznuo ultrazvučnim poremećajem ćelija pomoću ultrazvučnog inhibitora sa mikrotipom kao što je Uf200 ः t sa S26d2 za 10 impulsa preko 10 s na 30% amplitude. Ako se mora pripremiti veći broj uzoraka ultrazvučni VialTweeter ili se preporučuje MultiSample-Ultrasonicator UIP400MTP za dobro-ploče. Nakon sonikacije, ekstrakti su bili prečišćeni centrifugacijom na 30.000g 20 min na 4°C. Pre-očišćeni ekstrakt (300μg ukupnog proteina) inkubiran je sa 40μ􏰂g anti-CDC-25.1 afiniteta pročišćenog antitijela (ova studija) unakrsno povezanog sa proteinom A-agaroze, ili kao kontrola, slična količina zečjeg imunoglobulina (Ig)G unakrsno povezana sa proteinom A-agaroza je korištena u ukupnom volumenu od 200μl liznog pufera koji sadrži 1% NP-40, od čega je uključivanje smanjilo nespecifičko vezivanje proteina sa matriksom. Uzorci su bili rotirani za 1 h na 4°C, plijesi su tri puta oprani liznim baferom, a elutirani sa 30μl glicina/HCl i 200 mM NaCl, pH 2.2. Nakon imunoprecipitacije, eluati su razrijeđeni u 30μ􏰂l bafera uzorka SDS-a, zagrevani na 95°C 4 min, a obično 3% od ukupnog za ulaz i 30% za eluate primijenjeno je na SDS-PAGE, a zatim zapadnjački blotting sa anti-CDC-25.1 (1:400), anti-LIN-23 (1:750), anti-ubiquitin (1:1000), anti-GSK3􏰁 (1:500), ili anti-􏰁β-aktin (1:2000) antitijela. Gdje ekstrakti nisu bili podvrgnuti imunoprecipitaciji, ista količina ukupnog proteina izvedenog iz tih ekstrakta je bila ponovo unesena u SDS bafer uzorka, zagrijana na 95°C, a zatim direktno primijenjena na SDS-PAGE i analizirana zapadnim blottingom. (cf. Segref et al. 2020)

Sonda tipa insonifier UP200St za lizu

Ultrazvučni poremećaj ćelija UP200St sa mikro-vrhom S26d2 za lizu i ekstrakciju proteina

Ultrazvučna liza pod prescise kontrolom temperature

VialTweeter je MultiSample Ultraonicator koji omogućava pouzdanu pripremu uzoraka pod precizno kontroliranim temperaturnim uvjetima.Precizna i pouzdana kontrola temperature je presudna kada se rukuje biološkim uzorcima. Visoke temperature pokreжu termiиki izazvanu degradaciju proteina u uzorcima.
Kao sve mehaničke tehnike pripreme uzoraka, sonication stvara toplotu. Međutim, temperatura uzoraka se može dobro kontrolirati pri upotrebi VialTweetera. Predstavljamo vam razne opcije za praćenje i kontrolu temperature vaših uzoraka dok ih pripremate uz VialTweeter i VialPress za analizu.

  1. Praćenje temperature uzorka: Ultrazvučni procesor UP200St, koji vozi VialTweeter, opremljen je inteligentnim softverom i plugable senzorom temperature. Priključite senzor temperature u UP200St i umetnite vrh senzora temperature u jednu od cijevi za uzorke. Preko digitalnog obojenog touch-displaya možete postaviti u meniju UP200St određenog temperaturnog raspona za sonication uzorka. Ultrasonicator će se automatski zaustaviti kada se dostigne maksimalna temperatura i pauzirati dok temperatura uzorka ne padne na nižu vrijednost postavljene temperature ∆. Onda sonication počinje automatski ponovo. Ova pametna funkcija sprečava degradaciju izazvanu toplotom.
  2. Blok VialTweeter može biti pre-hladan. Stavite blok VialTweeter (samo sonotrode bez sonovoda!) u hladnjak ili zamrzivač kako bi se prethodno ohladio titanijski blok pomaže u odgodi porasta temperature u uzorku. Ako je moguće, i sam uzorak može biti pre-hladan.
  3. Koristite suhi led za hlađenje tokom sonication. Koristite plitku tacnu napunjenu suhim ledom i na suhi led smestite VialTweeter tako da toplota može brzo da se rasipa.

Pronađi optimalan ultrazvučni prekidač ćelija za svoju aplikaciju za lizu

Hielscher Ultrasonics je dugo vremena iskusni proizvođač visokozvodnih ultrazvučnih ćelijskih disruptera i homogenizatora za laboratorije, bench-top i industrijske sisteme vaga. Vaša veličina kulture bakterijskih ćelija, vaš cilj istraživanja ili proizvodnje i volumen ćelije za obradu po satu ili danu su bitni faktori za pronalazak pravog ultrazvučnog poremećaja ćelija za vašu primjenu.
Hielscher Ultrasonics nudi različita rješenja za istovremeno sonikaciju više uzoraka (do 10 bočica) kao i masovne uzorke (dakle, mikrotiterske ploče / 96-dobro ploče), klasični ultrasonikator sonde tipa lab sa različitim nivoima snage od 50 do 400 vata do potpuno industrijskih ultrazvučnih procesora sa do 16.000watta po jedinici za komercijalne poremećaje ćelija i ekstrakciju proteina u velikoj proizvodnji. Svi Hielscherovi ultrasonicatori su izgrađeni za operaciju 24/7/365 pod punim teretom. Robusnost i pouzdanost su osnovne osobine naših ultrazvučnih uređaja.
Svi digitalni ultrazvučni homogenizatori opremljeni su pametnim softverom, obojenim ekranom na dodir i automatskim protokolom podataka, što ultrazvučni uređaj čini pogodnim radnim alatom u laboratoriji i proizvodnim objektima.
Javite nam, kakve ćelije, kakav volumen, sa kakvom frekvencijom i sa kakvom metom imate za obradu vaših bioloških uzoraka. Preporučit ćemo vam najposlivniji ultrazvučni poremećaj ćelija za vaše procesne zahtjeve.

Tabela ispod vam daje naznaku o približnom kapacitetu obrade naših ultrazvučnih sistema od kompaktnih ručnih homogenizatora i MultiSample Ultrasonicators do industrijskih ultrazvučnih procesora za komercijalne aplikacije:

Batch VolumenprotokPreporučeni uređaji
96-dobro / mikrotiter pločeN / A.UIP400MTP
10 bočica à 0,5 do 1,5mLN / A.VialTweeter na UP200St
0.01 do 250mL5 do 100mL/minUP50H
0.01 do 500mL10 do 200ml / minUP100H
10 do 2000mL20 do 400mL / minUf200 ः t, UP400St
00,1 do 20L00,2 do 4L / minUIP2000hdT
10 do 100l2 do 10L / minUIP4000hdT
N / A.10 do 100L / minUIP16000
N / A.većiklaster UIP16000

Kontaktiraj nas! / Pitajte nas!

Traži više informacija

Molimo koristite formular ispod da Zatražit dodatne informacije o ultrazvučnim procesorima, aplikacijama i cijeni. Biće nam drago da diskutujemo o vašem procesu sa vama i da vam ponudimo ultrazvučni sistem.









Molim vas, obratite se našem Politika privatnosti.


Ultrazvučni homogenizatori visoke smice se koriste u laboratoriji, klupi-vrhu, pilotu i industrijskoj obradi.

Hielscher Ultrasonics proizvodi ultrazvučne homogenizatore visokih performansi za miješanje aplikacija, disperziju, emulgaciju i ekstrakciju na laboratorijskim, pilotskim i industrijskim skalama.

Književnost/reference



Činjenice vredi znati

Caenorhabditis elegans

C. elegani su prozirna nematoda (okrugli crv) dužine oko 1 mm, koja se hrani bakterijama (npr. E. coli) i ima relativno kratak životni ciklus. Na 20 °C, laboratorijski soj C. elegana (N2) ima prosječan vijek trajanja oko 2-3 sedmice i vrijeme generacije od 3 do 4 dana. Kada se C. elegani uzgajaju u velikom broju, što se lako može uraditi pod precizno kontroliranim laboratorijskim uvjetima, oni se mogu lako screened za radni princip nove droge kao i njihove efekte i interakciju unutar složenih molekularnih procesa u ljudskoj bolesti. Kratki genom, kratki životni ciklus i jednostavno rukovanje u laboratorijskim postavkama čine C. elegans idealnim modelom organizma za istraživanja kao što su genomika, proteomika, razvojna biologija, istraživanje bolesti, razvoj lijekova itd.
Caenorhabditis elegans crvi mogu biti ili muški ili hermafroditi. Hermafroditi imaju i muške i ženske reproduktivne organe. Međutim, ženske crve ne postoje. Hermafroditi se mogu ili samooplodniti ili se mogu razmnožavati i sa muškim crvima. C. elegani mogu proizvesti preko 1.000 jaja svaki dan.
Pošto je C. elegans jedan od najjednostavnijih organizama sa nervnim sistemom, nematodni crv se koristi od 1963. godine kao model organizma za istraživanje. Neuroni ne ispale akcione potencijale, i ne izražavaju naponski zagađene natrijumske kanale. U hermafroditu, ovaj sistem sačinjava 302 neurona, koji je bio sveobuhvatno mapiran, u onom što je poznato kao konektom.
Mnogi geni u genu C. elegans imaju funkcionalne kolege kod ljudi što ga čini izuzetno korisnim modelom za ljudske bolesti i na primjer se koristi za proučavanje razvojne biologije, starenja i faktora koji utiče na dugovječnost. Nadalje, mutanti C. elegans pružaju modele za mnoge ljudske bolesti uključujući neurološke poremećaje (npr. Alzheimer), urođene bolesti srca i bolesti bubrega.
Ovi faktori su C. elegans učinili veoma vrijednim modelom za mnoga istraživačka polja. Prema tome, C. elegans je bio prvi višećelijski organizam koji je imao sekvencu cijelog genoma. Genom sadrži procijenjenih 20.470 proteinsko kodidih gena. Oko 35% gena C. elegana ima ljudske homologe. Izvanredno, ljudski geni su više puta prikazani kako bi zamijenili svoje C. elegane homologe kada su uvedeni u C. elegans. Suprotno tome, mnogi geni C. elegana mogu funkcionirati slično kao geni sisanika.

Životni vijek C. elegansa je oko 3 sedmice i sastoji se od šest životne faze: embriogeneze (stadijum jaja), četiri larvne faze (L1 do L4), i faze odraslih. Nematodi se izležu iz jaja kao L1 ličinke koje se sačinjavaju od 560 ćelija. Rast tokom svakog ličinskog stadijuma se javlja po podjeli ćelija i po hipertrofijama ćelija. Cuticular molting probija svaku stadiju larve. Ako sušti uslovi okoline signaliziraju crvu u razvoju da uslovi vjerovatno neće podržati plodnost odraslih, C. elegani mogu promijeniti njegov razvoj i formirati alternativni L3 larvni stadij, gdje ličinke idu u fazu dauer. U ovom stanju, životinje su izvanredno stresno tolerantne i dugovječe i mogu preživjeti tri do devet mjeseci. Dauer ličinke se izoluju od nedaća tako što začepe i svoje bukarne i analne šupljine, smanjujući im crijevo, i okrećući se na daf-16/FOXO-ovi ovisni genetski program koji, između ostalog, dovodi do izražaja dauer specifičnog kutikla. (cf. Henderson et al., 2006)

C. elegans Dauer Larvae

Ličinke Dauer je termin za larve nematoda, koje su ušle u alternativnu razvojnu fazu. termin " dauer larve " se posebno koristi za crve porodice rabditida ukljucujuci caenorhabditis elegans . Riječ "Dauer" je njemačkog porijekla i znači "trajanje” u znacenju “vremenski period". Dauer ličinke idu u vrstu staze i mogu preživjeti oštre uvjete. Ako i kada larva uđe u dauer fazu je zavisna od ekoloških uslova. Dauer ličinke se intenzivno proučavaju u biologiji jer larave pokazuju izuzetnu sposobnost da prežive oštar okoliš i žive duže vremenske periode. Na primjer, C. elegans dauer larve mogu preživjeti i do četiri mjeseca, mnogo duže od njihovog prosječnog životnog vijeka od oko tri sedmice tokom normalnog razvoja reprodukcije.

C. elegans životni ciklus

C. elegans razvoj u povoljnim okruženjima:
Caenorhabditis elegans (C. elegans) pokazuju različitu razvojnu progresiju pod povoljnim i nepovoljnim ekološkim uslovima.
 
C. elegans odgovor na povoljne uslove:
U povoljnim uslovima, mikroskopski okrugli crv Caenorhabditis elegans (C. elegans) sledi dobro definisan razvojni put. Nematoda obično prolazi kroz svoj životni ciklus prilično brzo kada su uslovi okoline optimalni, obično na temperaturama između 15°C i 20°C.

  1. Reproduktivni razvoj: C. elegans započinje svoj životni ciklus kao embrion. Zatim napreduje kroz četiri različite faze larve, skraćeno kao L1 do L4.
  2. Faza za odrasle: Nakon završetka četiri faze larve, C. elegans dostiže fazu odrasle osobe za samo 3 do 5 dana. U ovoj fazi su sposobni da se razmnožavaju i nastavljaju da žive još 2 do 3 nedelje, u zavisnosti od faktora životne sredine.

 
C. Elegans Odgovor na nepovoljne uslove:

Međutim, C. elegans je otporan organizam i može se prilagoditi nepovoljnim uvjetima kroz proces koji se naziva dauerovo formiranje.

  1. Dauer formacija: Kada uslovi okoline postanu nepovoljni, kao što su prenatrpanost, ograničeno snabdevanje hranom ili visoke temperature, C. elegans može ući u izvanrednu treću fazu larve pod nazivom “Dauer,” Skraćeno kao L3D.
  2. Dauer Survival: Dauerove larve su posebno prilagođene za preživljavanje u teškim uslovima. Oni mogu da žive nekoliko meseci u ovoj fazi, čuvajući energiju i izdržavajući izazovna okruženja.

 

Oporavak u povoljnim uslovima:
Izuzetan aspekt C. elegans je njegova sposobnost da se vrati u normalan životni ciklus kada se uslovi poboljšaju.

  1. Povratak u povoljne uslove: Kada larve C. elegans dauer ponovo naiđu na povoljne uslove, kao što su obilje hrane, manja gustina naseljenosti i odgovarajuće temperature, osećaju promenu u okruženju.
  2. Oporavak i reprodukcija: Kao odgovor na ove poboljšane uslove, larve dauera prolaze kroz proces koji se naziva “Oporavak.” Tokom oporavka, oni prelaze nazad u larve i na kraju postaju reproduktivne odrasle osobe sa normalnim životnim vekom.

 
Ova sposobnost prebacivanja između razvojnih faza kao odgovor na uslove životne sredine je poseban aspekt biologije C. elegans. Omogućava im da prežive i efikasno se razmnožavaju u širokom spektru uslova, što ih čini vrednim modelnim organizmom za naučna istraživanja, posebno u proučavanju razvoja, genetike i starenja.

Biće nam drago da razgovaramo o vašem procesu.

Stupimo u kontakt.