Подготовка на пробата с ултразвуковия флакон за високи честоти

Подготовката на пробата преди анализ може да изисква различни преданалитични процеси като хомогенизация на тъканите, лизис, екстракция на протеини, ДНК, РНК, органели и други вътреклетъчни вещества, разтваряне и дегазация. VialTweeter е уникално ултразвуково устройство, което подготвя няколко епруветки за проби едновременно при абсолютно еднакви условия. Благодарение на индиректната ултразвук на затворени епруветки се избягва кръстосаното замърсяване и загубата на проба.

Ултразвукова подготовка на проби

Ултразвукът е често срещана техника за обработка на пробата, за да се подготви пробата за анализи като полимерна верижна реакция (PCR), Western Blots, анализи, молекулярно секвениране, хроматография и др. Ултразвукът е техника, широко използвана в лабораториите за предварително аналитично третиране на проби. Основно предимство на ултразвука е, че принципът на работа на ултразвука се основава на чисто механични сили. Ултразвуковият лизис и клетъчното разрушаване се постигат чрез сономеханични сили на срязване, което дава на ултразвука предимството, че разтворителите, използвани за извличане на протеини, могат да се използват и по време на лизис. Ултразвуковите клетъчни разрушители като VialTweeter разрушават клетъчните стени / мембрани и насърчават преноса на маса между вътрешността на клетката и разтворителя. По този начин аналитът (напр. ДНК, РНК, протеини, органели и т.н.) се прехвърлят ефективно от клетъчния матрикс в разтворителя. Това означава, че стъпките на закаляване и екстракция се припокриват с процеса на разрушаване на ултразвуковите клетки, което прави ултразвуковия лизис много ефективен. Освен това, ултразвуковата подготовка на пробата не изисква почистващи препарати и други реагенти за лизис, които могат да променят и разрушат структурата на лизата и са известни с последващите проблеми с пречистването. Друг метод на лизис, ензимното разрушаване изисква дълго време на инкубация и често дава невъзпроизводими резултати. Ултразвуковата подготовка на пробата преодолява често срещани проблеми при подготовката на пробите като хомогенизация на тъканите, клетъчно разрушаване, лизис, екстракция на протеини и разтваряне на лизат. Тъй като интензивността на ултразвуковата обработка може да бъде точно контролирана и адаптирана към биологичната проба, се избягва разграждането и загубата на проба. Автоматично наблюдаваната и контролирана температура на пробата, импулсният режим и продължителността на ултразвука осигуряват оптимални резултати.
 

VialTweeter е особено удобен за лабораторна работа, която изисква едновременно приготвяне на множество проби при едни и същи условия. VialTweeter е ултразвуков блок сонотрод, който може да побере до 10 флакона (напр. Eppendorf, центрофуга, NUNC епруветки, криофлакони) и да ги ултразвуков интензивно при прецизно контролирани условия. Тъй като ултразвуковата енергия се свързва през стените на флаконите в средата за проба, флаконите остават затворени по време на лечението. По този начин загубата на проби и кръстосаното замърсяване са напълно избегнати.

Флакони и туби, подходящи за високоговорителя за високи честоти

VialTweeter е подходящ за побиране на 10 обикновени конусовидни или кръгли тръби като Eppendorf, центрофуга, криофлаци и различни типове флакони UNC, но отворите могат да бъдат персонализирани за други размери на флакони и епруветки при поискване. Моля, уведомете ни какъв вид епруветки искате да използвате, за да можем съответно да модифицираме вашия VialTweeter. За по-големи епруветки като епруветки Falcon и други тестови контейнери, чаши и съдове, VialPress е удобно решение.
Прочетете повече за модела VialTweeter VT26dxx, персонализиран за вашия специфичен размер епруветка, например епруветки Falcon!

VialTweeter с VialPress

Докато самият VialTweeter със своите 10 отвора за тръби вече е уникално и високофункционално ултразвуково устройство, добавката VialPress прави VialTweeter още по-гъвкав и гъвкав за работа. VialPress е аксесоар за VialTweeter, състоящ се от затягаща лента, която позволява фиксиране на по-големи епруветки за проби като епруветки Falcon или други малки до средни тестови чаши към предната част на VialTweeter. Снимката вляво показва VialTweeter, който държи 10 флакона Eppendorf в блока, докато VialPress фиксира една по-голяма епруветка отпред за ултразвук. VialPress е в състояние да побере до 5 по-големи епруветки за интензивно ултразвук.

Протоколи за подготовка на проби VialTweeter

VialTweeter се използва широко за ултразвук на биологични проби. Преди анализа пробите трябва да бъдат подготвени за биохимични или биофизични анализи и анализи, например чрез лизис, хомогенизиране на тъкани, екстракция на протеини, срязване на ДНК/РНК, дегазация и др. VialTweeter изпълнява тези ултразвукови процеси надеждно и осигурява възпроизводими резултати. Често срещано приложение на VialTweeter е лизисът/клетъчното разрушаване на тъканите на бозайниците (човешки и животински), както и на бактериалните клетки и вирусните частици. Успешно третираните с VialTweeter биологични проби включват човешки белодробни епителни клетки, хемопоетични стволови клетки, клетки на миелоидна левкемия, Ешерихия коли, Bacillus subtilis, Bacillus anthracis, Francisella tularensis, Yersinia pestis, Streptococcus pyogenes, Caulobacter crescentus, Mycoplasma pneumoniae, микобактерии / комплекс Mycobacterium tuberculosis (MTBC) и много други бактериални, ботанически и микробни клетки.
По-долу можете да намерите няколко избрани протокола, включващи VialTweeter.

Лизис на E.Coli с VialTweeter за определяне на глутатион in vivo

Бактериите Escherichia coli от щама MG1655 се отглеждат в минимална среда MOPS в общ обем от 200 ml, докато се достигне A600 от 0,5. Културата е разделена на 50 ml култури за лечение на стрес. След 15 минути инкубация с 0,79 mM алицин, 1 mM диамид или диметилсулфоксид (контрола), клетките са събрани при 4 000 g при 4°C за 10 минути. Клетките са промити два пъти с KPE буфер преди ресуспендирането на пелетите в 700 μl KPE буфер. За депротеинизация се добавят 300 μl 10% (w/v) сулфосалицилова киселина преди разрушаване на клетките чрез ултразвук (3 x 1 min; ултразвуков уред VialTweeter). Супернатантите са събрани след центрофугиране (30 min, 13 000 g, 4°C). Концентрациите на сулфосалицилова киселина са намалени до 1% чрез добавяне на 3 обема KPE буфер. Измерванията на общия глутатион и GSSG са извършени, както е описано по-горе. Клетъчните концентрации на глутатион са изчислени въз основа на обем клетки на E. coli от 6,7×10-15 литра и клетъчна плътност A600 0,5 (еквивалентна на 1×108 клетки ml-1 култура). Концентрациите на GSH са изчислени чрез изваждане на 2[GSSG] от общия глутатион. (Müller et al. 2016)

Фрагментация на алфа-синуклеин с високоговорителя за високи честоти

Ултразвуковият уред VialTweeter се използва широко за надеждно и ефективно фрагментиране на алфа-синуклеинови фибрили и ленти. Кликнете тук, за да намерите подробни описания, протоколи и препратки за фрагментацията на алфа-синуклеина с VialTweeter!

Клетъчен лизис с VialTweeter преди атомно-абсорбционна спектрометрия на графитна пещ

Bacillus subtilis 168 (trpC2) са изложени на 15 минути антибиотичен стрес, след което клетките са събрани с тегло 3,320 x g, промити пет пъти със 100 mM Tris/1 mM EDTA, pH 7.5, ресуспендирани в 10 mM Tris, pH 7.5 и нарушени чрез ултразвук в инструмент Hielscher VialTweeter. (Wenzel et al. 2014)

Подготовка на проба от VialTweeter преди масспектрометрия

Лиофилизираните клетъчни пелети от човешки CD34 хемопоетични стволови/прогениторни клетки са ресуспендирани в 10 μ (200 μl за насипен препарат HEK293 за пептидната серия за разреждане на пептиди) на 8 M карбамид в 100 mM амониев хидроген карбонат и лизирани с помощта на ултразвук с високоговорителя на Hielscher при амплитуда 60%, цикъл от 60% и продължителност от 20 секунди в продължение на три пъти с междинно охлаждане върху лед. (Amon et al. 2019)

Протоколи за подготовка на проби с помощта на VialPress

Прясна маруля (Lactuca sativa) е хомогенизирана в 0,5 M HEPES буфер (pH 8, коригирано KOH) в съотношение 1 g растение (прясно тегло) към 200, 100, 50 или 20 ml буферен разтвор. Съотношението на растителната маса към обема на буферния разтвор се променя, за да се запази общият обем на хомогенат между 3,5 и 12 ml. Съотношението на растителната маса към обема на буферния разтвор се променя, за да се запази общият обем на хомогенат между 3,5 и 12 ml, което позволява хомогенизиране със сондата. След това хомогенатите са подложени на индиректна ултразвукова диагностика с помощта на UP200St с VialTweeter, оборудван с 200xt VialPress (Hielscher Ultrasonics GmbH, Германия) за 3 минути (80% импулс и 100% мощност). Използването на това устройство избягва замърсяване. (Laughton et al. 2019)

Надежден контрол на температурата по време на уникиране с VialTweeter

Температурата е решаващ фактор, влияещ върху процеса, който е особено важен за обработката на биологични проби. Както всички механични техники за подготовка на проби, ултразвукът създава топлина. Температурата на пробите обаче може да се контролира добре, когато използвате VialTweeter. Представяме ви различни опции за наблюдение и контрол на температурата на вашите проби, докато ги подготвяте с VialTweeter и VialPress за анализ.

1. Следене на температурата на пробата: Ултразвуковият процесор UP200St, който задвижва VialTweeter, е оборудван с интелигентен софтуер и сензор за температура, който може да се включи. Включете температурния сензор в UP200St и поставете върха на температурния сензор в една от епруветките за проби. Чрез цифров цветен сензорен дисплей можете да зададете в менюто на UP200St специфичен температурен диапазон за ултразвука на вашата проба. Ултразвуковият уред автоматично ще спре при достигане на максималната температура и ще направи пауза, докато температурата на пробата спадне до по-ниската стойност на зададената температурна ∆. След това ултразвукът започва автоматично отново. Тази интелигентна функция предотвратява разграждането, предизвикано от топлина.
2. Блокът VialTweeter може да бъде предварително охладен. Поставете блока VialTweeter (само сонотрода без преобразувателя!) в хладилника или фризера, за да охладите предварително титаниевия блок помага за отлагане на повишаването на температурата в пробата. Ако е възможно, самата проба също може да бъде предварително охладена.
3. Използвайте сух лед за охлаждане по време на ултразвук. Използвайте плитка тава, пълна със сух лед, и поставете VialTweeter върху сухия лед, така че топлината да може бързо да се разсее.

Клиентите по целия свят използват VialTweeter и VialPress за ежедневната си работа по подготовка на проби в биологични, биохимични, медицински и клинични лаборатории. Интелигентният софтуер и контролът на температурата на процесора UP200St, температурата се контролира надеждно и се избягва разграждането на пробата, предизвикано от топлина. Ултразвуковата подготовка на проби с VialTweeter и VialPress осигурява изключително надеждни и възпроизводими резултати!

Технически подробности за VialTweeter

VialTweeter е блок сонотрод, направен от титан, който може да побере до 10 флакона в дупките в блока. Освен това до 5 по-големи епруветки могат да бъдат захванати към предната част на VialTweeter с помощта на VialPress. VialTweeter е проектиран така, че ултразвуковата енергия да се разпределя равномерно във всеки поставен флакон, за да се осигурят надеждни и равномерни резултати от ултразвука. Малко завъртане настройва VialTweeter sonotrode към неравна земя и подравнява епруветките вертикално.

Предимства на VialTweeter с един поглед

• Интензивна ултразвук на до 10 флакона едновременно
• Индиректно ултразвуково озвучаване при висок ултразвуков интензитет през стената на съда в пробата
• Индиректната ултразвук избягва кръстосано замърсяване и загуба на проби
• Възпроизводими резултати благодарение на регулируема и контролируема амплитуда на ултразвука
• VialPress ви позволява да озвучавате по-големи тръби
• Регулируема амплитуда от 20 до 100%
• Регулируем импулсен режим от 0 до 100%
• Автоклавируем

VialTweeter се захранва от UP200St, 200 вата мощен ултразвуков процесор. UP200St е оборудван с интелигентен софтуер, който позволява прецизен контрол върху всички важни ултразвукови параметри на процеса като амплитуда, време на ултразвук, пулсация и температура. Това прави VialTweeter надежден инструмент за успешни възпроизводими резултати от процеса в биологични и биохимични лаборатории.
Амплитудата може да се регулира между 20 и 100% и по този начин позволява да се адаптира ултразвуковият интензитет към вашата проба. Например, срязването и фрагментирането на ДНК и РНК изисква по-лека амплитуда, за да се предотврати производството на твърде малки ДНК фрагменти, хомогенизацията на тъканите на мозъка на миши се нуждае от ултразвук с висока интензивност. Изберете идеалната амплитуда, интензитет и продължителност на ултразвука чрез интелигентното и интуитивно меню на процесора UP200St. Менюто и настройките могат лесно да бъдат достъпни и управлявани чрез цветен сензорен дисплей. В настройките можете предварително да зададете параметри на ултразвука като амплитуда, пулсация / режим на цикъл, продължителност на ултразвука, обща входяща енергия и температурни граници. В научните изследвания и производството повторяемостта на изпитванията и резултатите от тестовете е от решаващо значение. Това означава, че прецизното записване на условията на процеса и протоколите за ултразвук са изключително важни. Автоматичното протоколиране на данни записва всички данни за ултразвука в CSV файл на вградена SD карта, така че можете лесно да проверявате и сравнявате различни пускания на ултразвук. Всички данни от ултразвуковия процес могат да бъдат лесно достъпни и споделени като CSV файл.
Hielscher Ultrasonics се стреми да ви предостави модерна технология, за да улесни и подобри вашата изследователска работа!