α-синуклеиновите фибрили и панделки са фрагментирани в научните изследвания, за да генерират по-малки фибрилни фрагменти или дори отделни протеинови молекули, които могат да бъдат анализирани по-лесно с помощта на различни експериментални техники. VialTweeter Sonicator е един от най-често използваните ultrasonicators за ефективна и надеждна алфа-синуклеинова фрагментация.

α-синуклеин в научните изследвания

Алфа-синуклеиновите фибрили са протеинови агрегати, които са силно свързани с невродегенеративни заболявания като болестта на Паркинсон и някои форми на деменция, включително деменция с тела на Леви. Изследванията, фокусирани върху алфа-синуклеиновите фибрили, имат за цел да разберат тяхната роля в прогресията на заболяването и да развият потенциални терапевтични интервенции. Чрез разграждането на алфа-синуклеиновите фибрили на по-малки фрагменти, изследователите могат да изследват техните специфични структурни характеристики. Например, фрагментирането на алфа-синуклеиновите фибрили позволява на изследователите да изследват взаимодействията им с други молекули, като протеини, липиди или малки молекули. Чрез производството на по-малки фрагменти, местата на свързване и афинитетът към тези взаимодействащи партньори могат да бъдат изследвани по-ефективно. По-малките фрибрили и ленти α-Syn също могат да покажат променена токсичност и биохимични ефекти. Ето защо надеждната и ефективна техника на фрагментация, която води до възпроизводими резултати при бързо и просто третиране на пробите, е от решаващо значение.
Ултразвукова алфа-Syn фрагментация: The VialTweeter соникатор е установената ултразвукова проба подготовка система, която обработва с ултразвук до 10 флакони едновременно при точно същите условия. Програмируемите настройки позволяват простото и бързо повторение на същите експерименти, което дава високо надеждни и възпроизводими резултати при фрагментация на алфа-синуклеин фибрил.

α-синуклеинова подготовка на пробата със соникатор

Един подход за изучаване на алфа-синуклеиновите фибрили включва тяхното извличане и фрагментиране с помощта на техники като ултразвук. Соникацията е процес, който използва високоинтензивни, нискочестотни ултразвукови вълни, за да наруши и разгради протеиновите агрегати, което води до освобождаването на по-малки фибрили или отделни протеинови молекули. Соникаторът VialTweeter е често използвано устройство в α-синуклеинови изследвания, свързани с тази цел.

Многобройни изследвания описват точни протоколи за подготовка на проби от алфа-синуклеинови фибрили ултразвук, които използват Hielscher VialTweeter за ефективна и надеждна α-синуклеинова фибрилна фрагментация. Чрез фрагментиране на фибрилите ултразвуково, изследователите могат да анализират получените продукти и да изследват тяхната структура, токсичност и взаимодействия с други молекули. Това изследване дава важна представа за механизмите, които стоят в основата на невродегенерацията и потенциално идентифицира нови терапевтични цели. Добре установените протоколи за α-синуклеин ултразвук с помощта на VialTweeter соникатор позволяват надеждни и възпроизводими резултати.

Горни изображения: нефрагментирани алфа-синуклеинови фибрили
По-ниски изображения: Ултразвуково фрагментирани алфа-синуклеинови фибрили с VialTweeter соникатор
(проучване и изображения: ©Dieriks et al., 2022)

Ултразвукова фрагментация на α-синуклеинови фибрили – Протоколи

Тъй като много изследователи използват VialTweeter соникатор като предпочитана техника фрагментация за производство на единни α-синуклеин фибрил фрагменти, установени протоколи са лесно достъпни. По-долу можете да намерите няколко примерни протокола за фрагментация.
 

 
ClearTau подготовка на семената: Фибрилите ClearTau се разреждат до 10 μM в dH2O и се обработват с ултразвук при 70% амплитуда за 50 s с 1 s ON 1 s OFF цикъл в тръба с помощта на соникатор UP200St с VialTweeter. Семената се характеризират с електронна микроскопия.
ThS флуоресцентно измерване: Фибрилите ClearTau се разреждат до 2,5 μM в dH2O и се обработват с ултразвук при 70% амплитуда за 50 s с 1 s ON 1 s OFF цикъл в тръба, използвайки UP200St с VialTweeter. 2,5 μM пълнометражен мономер Tau 4R2N е използван като контрола. Към реакцията от 100 μl са добавени 100 μl ThS (10 μM), което води до крайни протеинови концентрации от 1,25 μM. Флуоресценцията на ThS с единична точка е измерена с помощта на 96 добре прозрачни дънни плочи, поставени в четец за микроплаки FLUOstar Omega с възбуждане при 445 nm и емисии при 485 nm.
(срв. Limorenko et al., 2023)
 
Единна дължина α-синуклеин с помощта на ултразвук: Хетерогенността на дължината на α-синните фибрили и панделки е намалена чрез ултразвук за 20 минути върху лед в 2-ml епруветки Eppendorf в VialTweeter, настроен на 75% амплитуда, 0,5 s импулси.
(срв. Bousset et al., 2013)
 
Извършен е качествен контрол на човешкия рекомбинантен мономер WT или S129A a-Syn и фибриларните полиморфи, които те генерират, както и този на a-Syn 1–110. Впоследствие, фибриларните полиморфи са фрагментирани чрез ултразвук в продължение на 20 минути в 2-мл Eppendorf тръби в ултразвук VialTweeter за генериране на фибриларни частици със среден размер 42-52 nm, които са подходящи за ендоцитоза.
(срв. Шривастава и др., 2020)
 

Характеризиране на пет фибриларни α-Syn полиморфи. (А) Показани са трансмисионни електронни микрографии на отрицателно оцветени α-Syn фибриларни полиморфи фибрили, ленти, фибрили-91, фибрили-65 и фибрили-110 преди (горна лента) и след фрагментация с VialTweeter (долната лента). (Б) Показано е разпределението по дължина на фрагментираните фибриларни полиморфи. Посочен е броят (n) на фибриларните възли, от които са получени хистограмите.
(проучване и изображения: Shrivastava et al., 2020)

 
Фибрилите α-Syn се фрагментират чрез ултразвук в продължение на 20 минути в 2 ml епруветки Eppendorf във VialTweeter, за да генерират фибриларни частици със среден размер 42-52 nm, оценени чрез анализ на ТЕМ.
(срв. Negrini et al., 2022)
 
Ресуспендираните фибрили91 (в PBS) са фрагментирани преди добавяне към клетъчни култури чрез ултразвук в продължение на 20 минути в 2 мл епруветки Eppendorf с помощта на соникатора Vial Tweeter, аликвотиран, флаш замразен в течен азот и съхраняван до употреба при -80 ̊C.
(срв. Vajhøj et al., 2021)
 

VialTweeter и лабораторни соникатори за α-Syn фрагментация

Hielscher Ultrasonics е световно признат като водещ производител на авангардни ultrasonicators. Доверени и утвърдени в големи изследователски лаборатории по целия свят, нашите ultrasonicators предлагат несравнимо качество и производителност за вашите критични експерименти.
С Hielscher VialTweeter и всеки друг Hielscher соникатор, вие ще изпитате несравним комфорт на потребителя, тъй като те са внимателно проектирани за възпроизводими резултати, лекота на използване и безпроблемна работа. С функциите за автоматично записване на данни можете да се съсредоточите върху изследванията си, докато нашите ultrasonicators щателно записват важни данни за възпроизводимост и прецизност.
Постигайте последователни и възпроизводими резултати с увереност!
Нашите ultrasonicators са проектирани и произведени в Германия. Немска прецизност и най-високо инженерно качество, за да се осигури надеждна и точна подготовка на пробите като алфа-синуклеинова фибрилна фрагментация всеки път. Без повече притеснения за непоследователни резултати - нашата ултразвукова технология гарантира, че вашите изследвания остават в челните редици на научния напредък.
Но това не е всичко! Нашият ангажимент за съвършенство се простира отвъд нашите продукти. Ние се гордеем с нашето изключително обслужване на клиентите, като предоставяме експертна подкрепа, за да отговорим на всякакви въпроси или притеснения, които може да имате. Нашият специален екип е тук, за да ви помогне на всяка стъпка от вашето изследователско пътуване, като гарантира, че ще извлечете максимума от нашите ultrasonicators.
Изберете иновации, надеждност и изключителен потребителски опит - изберете нашите лабораторни ултразвукови апарати като VialTweeter за фрагментация на алфа-синуклеин фибрил. Възползвайте се от вече установените протоколи и се присъединете към редиците на водещи изследователи, които се доверяват на нашата технология за своите критични изследвания. Издигнете изследванията си и опознайте нови граници в изследванията на деменцията и невродегенеративните заболявания с нашите най-съвременни ultrasonicators.

Проектиране, производство и консултиране – Качество, произведено в Германия

Hielscher ultrasonicators са добре известни със своите най-високи стандарти за качество и дизайн. Здравината и лесната работа позволяват гладкото интегриране на нашите ultrasonicators в промишлени съоръжения. Груби условия и взискателни среди се обработват лесно от Hielscher ultrasonicators.

Hielscher Ultrasonics е сертифицирана по ISO компания и поставя специален акцент върху високопроизводителните ultrasonicators с най-съвременна технология и удобство за потребителя. Разбира се, Hielscher соникатори са съвместими с CE и отговарят на изискванията на UL, CSA и RoHs.
 
Таблицата по-долу ви дава индикация за приблизителния капацитет за обработка на нашите лабораторни ултразвукови апарати: