Фрагментация на алфа-синуклеин с помощта на Sonicator VialTweeter

α-синуклеиновите фибрили и ленти се фрагментират в научните изследвания, за да генерират по-малки фибрилни фрагменти или дори отделни протеинови молекули, които могат да бъдат анализирани по-лесно с помощта на различни експериментални техники. VialTweeter Sonicator е един от най-често използваните ултразвукови апарати за ефективна и надеждна фрагментация на алфа-синуклеин.

α-Синуклеин в изследванията

Алфа-синуклеиновите фибрили са протеинови агрегати, които са силно свързани с невродегенеративни заболявания като болест на Паркинсон и някои форми на деменция, включително деменция с телца на Леви. Изследванията, фокусирани върху алфа-синуклеиновите фибрили, имат за цел да разберат тяхната роля в прогресията на заболяването и да разработят потенциални терапевтични интервенции. Чрез разграждане на алфа-синуклеиновите фибрили на по-малки фрагменти, изследователите могат да изследват техните специфични структурни характеристики. Например, фрагментирането на алфа-синуклеиновите фибрили позволява на изследователите да изследват техните взаимодействия с други молекули, като протеини, липиди или малки молекули. Чрез производството на по-малки фрагменти, местата на свързване и афинитетът към тези взаимодействащи партньори могат да бъдат изследвани по-ефективно. По-малките α-Syn фрибрили и панделки също могат да покажат променена токсичност и биохимични ефекти. Ето защо надеждната и ефективна техника на фрагментиране, която дава възпроизводими резултати при бърза и лесна обработка на пробата, е от решаващо значение.
Ултразвукова алфа-syn фрагментация: Ултразвуковият ултразвук VialTweeter е утвърдена ултразвукова система за подготовка на проби, която извежда звук до 10 флакона едновременно при абсолютно същите условия. Програмируемите настройки позволяват лесно и бързо повторно изпълнение на същите експерименти, което дава много надеждни и възпроизводими резултати при фрагментация на алфа-синуклеин фибрил.

Подготовка на α-синуклеин за проби със соникатор

Един от подходите за изучаване на алфа-синуклеиновите фибрили включва тяхното извличане и фрагментиране с помощта на техники като ултразвук. Соникацията е процес, който използва високоинтензивни, нискочестотни ултразвукови вълни, за да разруши и разгради протеиновите агрегати, което води до освобождаване на по-малки фибрили или отделни протеинови молекули. Ултразвуковият VialTweeter е често използвано устройство в изследователски изследвания, свързани с α синуклеина за тази цел.

Многобройни изследвания описват прецизни протоколи за подготовка на проби за ултразвук на алфа-синуклеинови фибрили, които използват високоговорителя на Hielscher за ефективно и надеждно α-синуклеиново фибрилно фрагментиране. Чрез фрагментиране на фибрилите ултразвуково, изследователите могат да анализират получените продукти и да изследват тяхната структура, токсичност и взаимодействия с други молекули. Това изследване предоставя важна информация за механизмите, лежащи в основата на невродегенерацията, и потенциално идентифицира нови терапевтични цели. Добре установените протоколи за ултразвук на α-синуклеин, използващи ултразвука VialTweeter, позволяват надеждни и възпроизводими резултати.

Горни изображения: нефрагментирани алфа-синуклеинови фибрили
По-ниски изображения: Ултразвуково фрагментирани алфа-синуклеинови фибрили със звуковия уред VialTweeter
(проучване и изображения: ©Dieriks et al., 2022)

Ултразвукова фрагментация на α-синуклеинови фибрили – Протоколи

Тъй като много изследователи използват ултразвука VialTweeter като предпочитана техника за фрагментиране за производство на еднородни фибрилни фрагменти от α-синуклеин, установените протоколи са лесно достъпни. По-долу можете да намерите няколко примерни протокола за фрагментация.
 

 
Подготовка на семената ClearTau: Фибрилите ClearTau бяха разредени до 10 μM в dH2O и ултразвук при 70 % амплитуда за 50 s с 1 s ON 1 s OFF цикъл в тръбата с помощта на ултразвуковия уред UP200St с VialTweeter. Семената се характеризират с електронна микроскопия.
Измерване на флуоресценцията на ThS: Фибрилите на ClearTau се разреждат до 2,5 μM в dH2O и се ултразвукират при 70 % амплитуда за 50 секунди с цикъл на изключване в тръбата с 1 s ON 1 s с помощта на UP200St с VialTweeter. Като контрола е използван мономер Tau 4R2N с пълна дължина 2,5 μM. Към реакцията от 100 μl се добавят 100 μl ThS (10 μM), което дава крайни концентрации на протеин от 1,25 μM. Флуоресценцията на ThS в еднократна точка е измерена с помощта на 96 добре прозрачни долни плочи, поставени в четец на микроплочи FLUOstar Omega с възбуждане при 445 nm и емисия при 485 nm.
(срв. Limorenko et al., 2023)
 
Еднаква дължина на α-синуклеин с помощта на ултразвук: Хетерогенността на дължината на α-syn фибрили и ленти е намалена чрез ултразвук в продължение на 20 минути върху лед в 2-ml епруветки на VialTweeter, настроен на 75% амплитуда, 0,5 s импулси.
(срв. Bousset et al., 2013)
 
Извършен е контрол на качеството на човешкия рекомбинантен мономерен WT или S129A a-Syn и фибриларните полиморфи, които те генерират, както и този на a-Syn 1–110. Впоследствие фибриларните полиморфи са фрагментирани чрез ултразвук в продължение на 20 минути в 2-ml епруветки на VialTweeter, за да се генерират фибриларни частици със среден размер 42–52 nm, които са подходящи за ендоцитоза.
(срв. Shrivastava et al., 2020)
 

Характеризиране на пет фибриларни α-Syn полиморфа. (A) Показани са трансмисионни електронни микрографии на отрицателно оцветени α-Syn фибриларни полиморфи фибрили, ленти, фибрили-91, фибрили-65 и фибрили-110 преди (горна лента) и след фрагментация с VialTweeter (долна лента). (Б) Показано е разпределение на дължината на фрагментираните фибриларни полиморфи. Посочен е броят (n) на фибриларните възли, от които са получени хистограмите.
(проучване и изображения: Shrivastava et al., 2020)

 
α-Syn фибрили са фрагментирани чрез ултразвук в продължение на 20 минути в 2 ml епруветки на Eppendorf във флакон за високи честоти, за да се генерират фибриларни частици със среден размер 42–52 nm, както е оценено чрез TEM анализ.
(срв. Negrini et al., 2022)
 
Ресуспендираните фибрили91 (в PBS) са фрагментирани преди добавяне към клетъчни култури чрез ултразвук в продължение на 20 минути в 2 ml епруветки на Eppendorf с помощта на ултразвука Vial Tweeter, аликотирани, замразени в течен азот и съхранявани до употреба при -80 ̊C.
(срв. Vajhøj и др., 2021 г.)
 

VialTweeter и лабораторни соникатори за α-syn фрагментация

Hielscher Ultrasonics е световно признат като водещ производител на авангардни ултразвукови уреди. Доверени и утвърдени в големи изследователски лаборатории по целия свят, нашите ултразвукови апарати предлагат несравнимо качество и производителност за вашите критични експерименти.
С високоговорителя Hielscher VialTweeter и всеки друг ултразвуков апарат Hielscher ще се насладите на несравним комфорт за потребителя, тъй като те са внимателно проектирани за възпроизводими резултати, лекота на използване и безпроблемна работа. С функциите за автоматично записване на данни можете да се съсредоточите върху изследванията си, докато нашите ултразвукови апарати щателно записват важни данни за възпроизводимост и прецизност.
Постигайте последователни и възпроизводими резултати с увереност!
Нашите ултразвукови апарати са проектирани и произведени в Германия. Немска прецизност и най-високо инженерно качество, за да се гарантира надеждна и точна подготовка на проби като алфа-синуклеинова фибрилна фрагментация всеки път. Няма повече притеснения за непоследователни резултати – нашата ултразвукова технология гарантира, че вашите изследвания остават в челните редици на научния напредък.
Но това не е всичко! Нашият ангажимент за съвършенство се простира отвъд нашите продукти. Ние се гордеем с нашето изключително обслужване на клиентите, предоставяйки експертна подкрепа за отговор на всякакви запитвания или притеснения, които може да имате. Нашият специализиран екип е тук, за да ви помогне на всяка стъпка от вашето изследователско пътуване, като гарантира, че ще извлечете максимума от нашите ултразвукови апарати.
Изберете иновации, надеждност и изключително потребителско изживяване – изберете нашите лабораторни ултразвукови уреди като VialTweeter за алфа-синуклеинова фибрилна фрагментация. Възползвайте се от вече утвърдените протоколи и се присъединете към редиците на водещите изследователи, които се доверяват на нашата технология за своите критични изследвания. Подобрете изследванията си и изследвайте нови граници в изследванията на деменция и невродегенеративни заболявания с нашите най-съвременни ултразвукови апарати.

Проектиране, производство и консултиране – Качество, произведено в Германия

Ултразвуковите апарати Hielscher са добре известни със своите най-високи стандарти за качество и дизайн. Здравината и лесната работа позволяват безпроблемното интегриране на нашите ултразвукови апарати в промишлени съоръжения. Тежките условия и взискателните условия се справят лесно с ултразвуковите апарати на Hielscher.

Hielscher Ultrasonics е сертифицирана по ISO компания и поставя специален акцент върху високопроизводителните ултразвукови уреди, отличаващи се с най-съвременна технология и удобство за потребителя. Разбира се, ултразвуковите апарати Hielscher са съвместими с CE и отговарят на изискванията на UL, CSA и RoHs.
 
Таблицата по-долу ви дава представа за приблизителния капацитет на обработка на нашите ултразвукови апарати с лабораторен размер: