Hielscher ултразвукова технология

Ултразвукова подготовка на пробите за Елайза

Анализи като ELISA се използват широко за ин витро диагностика, за откриване на свързани с болестта протеин и контрол на качеството (напр. мониторинг на хранителните алергени). Ултразвуковата подготовка на пробата е бърза, надеждна и възпроизводима техника за лиза клетка и изолирани вътреклетъчни протеини, ДНК, РНК и органели. Hielscher Ultrasonics предлага различни ултразвукови решения за удобно приготвяне на единични проби, множество флакони, както и за микротитърни плочи и 96-добре плочи.

Elisa – Ензимно-свързан имуносорбентен анализ

ELISA означава ензимно-свързан имуносорбентен тест и е широко използвана техника за биохимичен анализ на категорията на лиган-свързващите тестове. В ELISA се добавя течна проба към неподвижна твърда фаза със специални свойства на свързване. Обикновено неподвижната твърда фаза се нанася като покритие върху плоча за кладенец или ELISA. След това се добавят последователно различни течни реагенти, инкубират се и се измиват, така че накрая в гнезденето да се появи оптична промяна (например, развитие на цвета чрез ензимна реакция). Оптичната промяна позволява да се измери количеството на аналита чрез така наречения “четене". За количественото отчитане се използва спектрофотометър, флуорометър или светлинен теометър за откриване и измерване на интензитета на излъчваната светлина. Чувствителността на детекция се влияе от усилването на сигнала по време на аналитичните реакции. Тъй като ензимните реакции са добре изследвани и надеждни процеси на усилване, ензимите се използват за създаване на сигнала. Ензимите са свързани с откриващи реактиви в постоянни пропорции, за да се позволи точно количествено определяне, което обяснява също така наименованието "ензимно свързани" имуносорбентен тест.
Тъй като тестовете ELISA се извършват в микротитърни пластини / 96-цилинеи, той е известен като метод за анализ на основата на плочки и се използва например при клинична ин-витро диагностика, изследвания, развитие на наркотици и др.
Техниката ELISA често се използва като диагностичен инструмент в медицината, биотехнологиите, патологията на растенията и също така е важно измерване на контрола на качеството в множество индустрии.

Пълна настройка VialTweeter: VialTweeter издатина на ултразвукови процесор UP200St

Ултразвуковата единица за подготовка на проби VialTweeter се използва за клетъчен лизис и екстракция на протеини преди

Искане на информация




Забележете нашите Правила за поверителност,


Ултразвукова подготовка на проби преди ELISA

Преди да може да се извърши Елайза, пробите изискват стъпки от приготвянето на такива клетъчни лизи и екстракция на вътреклетъчни протеини, ДНК, РНК и др. Предимството на ултразвукови клетъчен лизис и изолиране на протеини е неговата висока ефективност, надеждност и възпроизводимост. Всички тези фактори са важни за получаване на висококачествена диагностика и резултати от изследвания

Предимства на ултразвукова лизис преди ELISA

  • Третиране на хомогенна проба
  • Пълна лизис
  • Пълно извличане на протеини (напр. антитела, ДНК)
  • Оптимално адаптиране към типа клетка
  • За всеки размер на извадката
  • възпроизводим
  • Контролирана температура
  • Автоматично протоколиране на данни на SD-карта

Протокол за ултразвукова лизисна ултразвукова клетка

Сонда тип insonifier UP200St за лиза

  • За клетъчни култури: Преди ултразвуковия клетъчен лизис, центрофугирайте клетките в продължение на 5 минути при 270 x g в микроцентрофуга. Отстранява се супернатантът чрез аспирация и ресуспендира клетките в 30 – 100 μl RIPA буфер. След това се инкубира клетката на леда за 30 мин.
  • Сега, пробата от клетки е готова за ултразвуков лизис:
    Използвайте тип сонда ултразвук (напр. Uf200 ः т със S26d2 сонда) или ултразвуково многостранно устройство за вземане на проби (например VialTweeter за едновременно ултразвукиране до 10 флакона или UIP400MPT за микротитърни плочи / 96-ямка плочи) в зависимост от количеството проби, което трябва да подготвите.
    За ултразвукова обработка тип сонда на единична проба, поставете клетките в 1,5 ml микроцентрофужни епруветки.
  • Предварително задаване на ултразвуково времетраене, обща енергия, режим на цикъл и / или температурни ограничения в цифровото меню на ултразвуковия апарат. Това осигурява високо надеждна ултразвук и повторяемост.
  • Включете сонотрода и включете ултразвуковото устройство. Внимателно преместете микро-върха на ултразвуковата сонда през пробата, за да озвучавате равномерно пробата.
    За повечето клетки, ултразвуков лизис ще бъде завършена след 2-4 цикъла на 10 сек звук.
  • След ултразвук, извадете сонотрода от пробата. Пробите се инкубират върху лед в продължение на 5 минути. След това се центрофугира при 10 000 x g за 20 min, за да се пометят отломките. Прехвърлете супернатантите в нова микроцентрофужна епруветка. Етикет на аналитите и съхранявайте при -20°C.
  • Ултразвуковият сонотрод може да се почисти чрез правилно избърсване с алкохол или ултразвук в чаша, пълна с алкохол, например 70% етанол. Всички ултразвукови сонди, направени от титан, са автоклавируеми.

За тъканни хомогенати:

  • Изплакнете тъканта с ледено студен PBS (0.01M, рН = 7.4) за отстраняване на излишната кръв хемолиза.
  • Претеглете тъканта (бъбрек, сърце, бял дроб, далак и т.н.) и я накисне на малки парчета, които се хомогенизират в PBS. Обемът на изискваната PBS е свързан с теглото на тъканта. Като правило за палец, 1g тъкан изисква около. Препоръчително е да добавите някои протеазен инхибитор на PBS. (RIPA или хипотоничен лизисен буфер, съдържащ протеаза и фосфатазен инхибитор коктейл може да се използва алтернативно.)
  • В зависимост от размера на тъканта, кратко вихър лечение (прибл. 1-2 минути. в 15 сек импулси) може да бъде полезно за предварителна обработка на тъканта.
  • Монтирайте микро-връх, например S26d2, на вашия ултразвуков апарат. Поставя се епруветката с тъканта в ледена баня.
  • Обновете пробата с ултразвуков апарат, например UP200St (80% амплитуда) за 1 min. в импулсен режим (15sec on, 15sec пауза). Съхранявайте пробата в ледената баня.
  • След това хомогенатите се центрофугират, за да се получат специфични басейни (цитозоли, ядрени, митохондриални или лизозомни), за да се обогатят протеина за анализ. Чрез центрофугиране на пробата в продължение на 5 минути при 5000×g, се извлича супернатантата.
Сонотрода MTP-24-8-96 има осем ултразвукови сонди за ултразвукова обработка на кладенците на микротитърни плочи.

Сонотрода MTP-24-8-96 има осем ултразвукови сонди за ултразвукова обработка на кладенците на микротитърни плочи.

Надежден контрол на температурата по време на Sonication

Температурата е важен фактор, влияещ върху процесите, който е особено важен за обработката на биологични проби, например за предотвратяване на термичното разграждане на протеините. Както всички техники за механично приготвяне на проба, ултразвукът създава топлина. Въпреки това, температурата на пробите може да бъде добре контролирана при използване на устройства Hielscher Ultrasonics. Ние ви представя различни възможности за наблюдение и контрол на температурата на вашите проби, докато ги подготвя с ултразвуков сонда тип или VialTweeter предварително аналитично.

  1. Наблюдение на температурата на пробата: Всички цифрови ултразвукови процесори Hielscher са оборудвани с интелигентен софтуер и сензор за температура на запушалка. Включете температурния датчик в ултразвуково устройство (напр. Uf200 ः т, UP200St, VialTweeter, UIP400MTP) и поставете върха на температурния датчик в една от епруветките за проби. Чрез цифров цветен сензорен дисплей можете да зададете в менюто на ултразвуковия процесор специфичен температурен диапазон за вашата проба ултразвук. Ултразвукът автоматично ще спре, когато се достигне максималната температура и се спира, докато температурата на пробата достигне до по-ниската стойност на зададената температура ∆. Тогава ултразвукът започва автоматично отново. Тази интелигентна функция предотвратява предизвиканото от топлината разграждане.
  2. Що се отнася до ултразвуковия мулти-проба единица VialTweeter, титан блок, който държите епруветките за проби, може да бъде предварително охладена. Поставете блок VialTweeter (само сонотрода без преобразувател!) в хладилника или фризера предварително охлаждане на титанов блок помага да се отложи повишаването на температурата в пробата. Ако е възможно, самата проба може да бъде предварително охладена.
  3. Използвайте ледена вана или сух лед, за да се охлади по време на ултразвук. Поставете вашата епруветка(и) по време на ултразвук в ледена баня. За VialTweeter използвайте плитка поднос, пълна със сух лед и поставете VialTweeter на сухия лед, така че топлината бързо да се разсее.

Клиентите по целия свят използват Hielscher сонда-ultrasonicators, както и мулти-проби ултразвукови единици VialTweeter и UIP400MTP за ежедневната си подготовка на пробите работа в биологични, биохимични, медицински и клинични лаборатории. Интелигентният софтуер и контрол на температурата на процесорите Hielscher, температурата се контролира надеждно и топлината индуцирана проба деградация избягва. Ултразвукова подготовка на проби с Ултразвукови решения Hielscher осигурява високо надеждни и възпроизводими резултати!

Свържете се с нас! / Попитай ни!

Поискайте повече информация

Моля, използвайте формата по-долу, за да поискате допълнителна информация за ултразвукови процесори, приложения и цена. Ще се радваме да обсъдим процеса с вас и да ви предложим ултразвукова система, която отговаря на вашите изисквания!









Моля, обърнете внимание, че нашите Правила за поверителност,


Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

Hielscher Ultrasonics произвежда високопроизводителни ултразвукови хомогенизатори за смесване на приложения, дисперсия, емулгиране и екстракция на лаборатория, пилот и промишлен мащаб.

Литература / Препратки



Факти заслужава да се знае

Видове Елайза

Има няколко вида elisa, които се отличават с техния принцип на функциониране. Те са известни като директни ELISA, индиректни ELISA, сандвич елайза, конкурентна елайза и обратна elisa. По-долу ви представяме преглед на различните видове Елайза и техните основни характеристики и различия.
Елайза може да се изпълнява в качествен или количествен формат. Качествените резултати дават прост положителен или отрицателен резултат, докато в количествена Елайза оптичната плътност (OD) на пробата се сравнява със стандартна крива, която обикновено представлява серийно разреждане на разтвор с известна концентрация на целевата молекула.

Пряка Елайза

Директната Елайза е най-простата форма на анализ на Елайза, където се използва само основно антитяло с етикет с етикет на ензима и не се изискват вторични антитела. Основният антитяло с етикет на ензима се свързва директно с мишената, т.е. антиген. Буферираният разтвор на антиген се добавя към всяка ямка от микротитърна плака (обикновено 96-ямка, Елайза-плаки), където прилепва към повърхността на пластмасата чрез взаимодействие с напор. Когато ензимът, свързан с първичното антитяло, реагира със своя субстрат, той произвежда видим сигнал, който може да бъде измерен чрез спектрофотометър, флуорометър или светлинен индикатор.

Непреки ELISA

За непряката Елайза тест се изискват както първично антитяло, така и вторично антитяло. Въпреки това, противно на директната Елайза, не основното антитяло, а вторичното антитяло е обозначено с ензим. Антигенът се имобилзира към плаката на габройката и се свързва с първичното антитяло. След това, ензим-белязаното вторично антитяло се свързва с първичното антитяло. Накрая, ензимът, свързан с вторичното антитяло, реагира със своя субстрат, за да произведе видим сигнал, който може да бъде открит.

Сандвич ЕЛИСА

Докато при директните и непреките тестове ЕЛАЙЗА антигенът се обездвижва и се покрива с повърхността на плаката на чашките, в сандвича ЕЛАЙЗА антитяло се обездвижено към пластмасовата повърхност на elisa-табелката. Имобилизираните антитела в сандвича ELISA са известни като улавяне на антитела. Освен улавянето на антитела, в сандвича са необходими и така наречените антитела за откриване. Антителата за откриване включват небелено антитяло с незабелязано първично откриване и антитяло с етикет на ензима.
Стъпаловид антигенът, който представлява интерес, се свързва с улавящото антитяло, имобилизирано към плаката. След това основният антитяло за откриване се свързва с антигена. След това вторичното детекционно антитяло се свързва с основното детекторно антитяло. В крайната реакция, ензимът реагира със субстрата си, за да произведе видим сигнал, който може да бъде открит оптически.

Конкурентна Елайза

Конкурентната ELISA, известна още като "Елайза за инхибиране", е най-сложният тип ELISA, тъй като включва използването на антиген-инхибитор. Всеки от трите формата, преки, косвени, и сандвич ELISA, може да бъде адаптиран към конкурентния формат ELISA. При конкурентна Елайза антигенът на инхибитора и антигенът от интерес се конкурират за свързване с първичното антитяло.
За конкурентна Елайза не е скрито антитяло се инкубира в присъствието на антигена, т.е. проба. Тези свързани комплекси антитяло/антиген се добавят към антигенно покритие добре.
Плаката се измива, така че несвързаните антитела се отстраняват. Конкурентната ELISA има своето име поради факта, че по-големият антиген е в пробата, образуват се повече комплекси с антиген-антитяло. Това означава, че има по-малко свободни антитела, които да се свързват с антигена в чам, а антигените трябва да се конкурират за наличие на антитела. Добавя се вторично антитяло, което отговаря на първичното антитяло. Второто антитяло е свързано с ензима. Когато субстратът се добавя, останалите ензими произвеждат хромогенен или флуоресцентен сигнал.
В този момент реакцията се спира, за да се избегне евентуалното насищане на сигнала.
Някои конкурентоспособни elisa комплекти включват ензимно свързан антиген вместо ензимно-свързано антитяло. Етикетираният антиген се конкурира за местата на свързване на първичните антитяло с антигена на пробата (неподбиран). По-малко антиген в пробата, толкова повече етикетираният антиген се задържа в чам и толкова по-силен е сигналът.

Обратна Елиза

Обратната Елайза не използва добре плаки, но оставя антигените, суспендирани в изпитваната течност. Обратният тест ЕЛАЙЗА измерва количеството на свързаното антитяло чрез антиген. Той е разработен специално за откриване и изследване на протеина от вируса на Западнонил и как е в състояние да открие вирусно-специфични антитела.

Ензимен маркер, използван за ELISA

Списъкът по-долу дава най-често използваните ензимни маркери при тестовете ELISA, които позволяват резултатите от анализа да бъдат измерени при завършване.

  • OPD (о-фенилендиамин дихидрохлорид) превръща кехлибарен за откриване на HRP (Хрян пероксидаза), който често се използва за като конюгиран протеин.
  • 3,3 ТМЛ (3,3′,5,5′-тетраметилбензидин) става син при откриване на HRP и става жълт след добавянето на сярна или фосфорна киселина.
  • Абт технолитър (2,2′-Azinobis [3-етилбензозолин-6-сулфонова киселина]-диамониева сол) става в зелено при откриване на HRP.
  • PNPP (p-нитрофенил фосфат, динатриева сол) става жълт, когато открива алкална фосфатаза.