MonkeyPox virusida ultratovushli ilovalar
Ultrasonikatsiya maymunchechak virusini (MPXV) analitik namunalardan ajratib olish, virus DNK parchalanishi, shuningdek, maymunchechakka qarshi vaktsina ishlab chiqarishda muhim ishlov berish usuli hisoblanadi. Diagnostika va tahlil qilishdan oldin namuna tayyorlash uchun (PCR, Elishay va boshqalar) ultratovush yordamida maymunchechak virusini hujayra ichidan chiqarish va/yoki DNKni parchalash uchun hujayralarni lizinglash uchun foydalaniladi. Vaktsina ishlab chiqarishda qo'llaniladigan dasturlar virus zarralari / DNKni tayyorlash, dori tashuvchilarda inkapsulyatsiya va inokulani shakllantirishdan iborat.
Quyida siz ultratovushli maymunchechak virusi namunasini tayyorlash, shuningdek, ultratovush yordamida MPXV vaktsinasini ishlab chiqarish haqida batafsil ma'lumotni topishingiz mumkin.
Ushbu sahifada nimani topasiz:
- Monkeypox virusini ekstraksiya qilish uchun ultratovushli lizis
- Monkeypox virusi DNKsining ultratovushli parchalanishi
- MPXV vaktsinalarini ishlab chiqarishda ultratovushli ilovalar
Uzluksiz oqim uchun 2x 1 kVt ultrasonikatorlarning ushbu tizimi vaktsina ishlab chiqarish korxonasida o'rnatilgan.
Polimeraza zanjiri reaktsiyasidan (PCR) oldin ultratovushli liziz va DNKning parchalanishi
Maymunchechak virusi infektsiyasi virusli DNKning noyob ketma-ketligini aniqlash uchun real vaqt rejimida yoki an'anaviy polimeraza zanjiri reaktsiyasidan (PCR) foydalangan holda nuklein kislotasini kuchaytirish testi (NAAT) orqali aniqlanadi. Namuna (masalan, nazofarengeal almashtirish yoki teri biopsiyalari) hujayralardagi virusni o'z ichiga oladi.
Tahlil qilish uchun virus hujayralardan chiqarilishi va virus DNKsi PCR uchun parchalanishi kerak.
Ultrasonik liziz:
Ultrasonik hujayra buzilishi/lizis hujayra namunalaridan viruslarni ajratib olishning ishonchli va samarali usuli bo'lib, shu bilan lizozim, proteinaza K va hujayra lizisini va DNKni chiqarish uchun muqobil ravishda qo'llaniladigan turli xil yuvish vositalari kabi kimyoviy vositalardan afzalroqdir.
Biroq, bunday kimyoviy reagentlardan foydalanish PCR reaktsiyasining oldini olish uchun PCR tahlilidan oldin bir necha bosqichda namuna tayyorlashni talab qiladi. PCR inhibitörleri amplifikatsiya samaradorligiga ta'sir qilganligi sababli, olib tashlanmaydigan inhibitorlar miqdorining kichik o'zgarishlari PCR mahsulotini kuchaytirishda katta o'zgarishlarga olib kelishi mumkin (Diaco, 1995).
Lizis uchun ultrasonikatsiyaning afzalligi shundaki, hujayra tuzilmalarining to'liq buzilishi va lizing reagentlari va vaqt talab qiladigan namunani tayyorlashga ehtiyoj sezmasdan DNKning chiqarilishi maqsadga muvofiqdir. (Qarang: Fykse va boshqalar, 2003)
Ultrasonik DNK parchalanishi:
Ultrasonik DNK parchalanishi oddiy va ishonchli, chunki uzunligi bo'yicha sozlanishi mumkin bo'lgan DNK fragmentlari hosil bo'ladi (basepairs, bp). Ultratovush yordamida DNKni maqsadli DNK uzunligiga samarali ravishda parchalash mumkin. Ultrasonik parametrlar ustidan aniq nazorat va murakkab sovutish imkoniyatlari DNK degradatsiyasini oldini oladi.
Ultrasonik DNK parchalanishi haqida ko'proq o'qing!
Monkeypox virusiga qarshi vaktsinada ultratovushli ilovalar
Maymunchechak virusiga qarshi ishlatiladigan vaktsinalar hozirda jonli virusli vaktsinalardir. Yangi ishlab chiqilgan vaktsinalar DNKga asoslangan boshqa platformalardan foydalanishi mumkin. Hozirda o'zgartirilgan Vaccinia Ankara viurs, zaiflashtirilgan, takrorlanmaydigan ortopoxvirus mavjud. Shuningdek, u Tris (tris-aminometan) va natriy xloridni o'z ichiga oladi. Vaktsina, shuningdek, vaktsina virusi, benzonaz va gentamitsin va siprofloksatsin kabi antibiotik birikmalarini etishtirish uchun ishlatiladigan tovuq embrioni fibroblast hujayralaridan oz miqdorda DNK va oqsilni o'z ichiga olishi mumkin.
Ultrasonik gomogenizatsiya jonli zaiflashtirilgan virusli vaktsinalar, DNK vaktsinalari, ko'p valentli DNK kokteyllari, mRNK vaktsinalari, rekombinant oqsil vaktsinalari, virusga o'xshash zarrachalar vaktsinalari va boshqalarni ishlab chiqarishda qo'llaniladi.
- virus zarralari va agentlarining tarqalishi
- emülsifikasyon
- viruslarning inaktivatsiyasi
- dori tashuvchisi formulasi (NLC, SLN)
- kapsülleme
- agentlarni eritish
- yordamchi moddalarni tayyorlash
- Degassing / De-Aeration
Monkeypox virusini ultratovush bilan izolyatsiya qilish protokoli
Stittelaar (2005) tadqiqot guruhi maymunpox virusini o'sish xost hujayra madaniyatidan, shuningdek, infektsiyalangan primatlardan tomoq almashinuvi orqali olingan hujayralardan chiqarish uchun ultratovushli lizizdan foydalangan.
Maymunchechak vaktsinasini tayyorlash:
Monkeypox viruslari o'ziga xos patogensiz tovuq embrioni fibroblast hujayralarida o'stirilgan. 1 dan 2 kungacha inkubatsiyadan so'ng virus hujayra suspenziyasi muzdan tushirishning bir bosqichida yig'ib olindi va keyin santrifüj orqali konsentratsiya qilindi. Pellet qayta to'xtatildi va ultratovushli homogenlashning bir necha bosqichidan o'tkazildi.
Emlangan makakalardan maymunchechak virusini ajratish:
Namunalar uch marta muzlatilgan va eritilgan va ultratovushli CupHornda sonikatsiya qilingan. Vero xujayrasi mono qatlamlarini olti quduqli plastinkalarda emlash uchun 1% homila sigir zardobi bilan to'ldirilgan transport vositasida ikkita suyultirish (1:10 va 1:100) ishlatilgan. 37 ° C da 1 soat inkubatsiyadan so'ng, emlash olib tashlandi va 1% homila sigir zardobi bilan to'ldirilgan madaniy muhit bilan almashtirildi. Bir qatlamli qatlamlar 5 kun davomida 37 ° C da o'stirildi va kristalli binafsha eritmasi bilan bo'yaldi.
(Qarang: Stittelaar va boshqalar, 2005)
Viruslarni tahlil qilish va vaktsina ishlab chiqarish uchun ultrasonikatorlar
Hielscher Ultrasonics keng mahsulot portfeli tadqiqot va analitik laboratoriyalar, shuningdek, sanoat vaktsina ishlab chiqarish uchun ideal ultrasonikatorni taklif etadi.
Hielscher Ultrasonics tadqiqot va analitik laboratoriyalarda foydalanish, shuningdek sanoat vaktsinalarini ishlab chiqarishda qo'llash uchun yuqori samarali ultrasonikatorlar va sono-bioreaktorlarni loyihalash, ishlab chiqarish va tarqatish bo'yicha ixtisoslashgan. uyg'otadi, APIlar).
Sonication ochiq idishlarga, yopiq doimiy aralashtiriladigan reaktorlarga va doimiy oqim orqali o'tuvchi reaktorlarga qo'llanilishi mumkin. Ultrasonik tizimlarning suyuq muhit bilan aloqa qiladigan barcha qismlari zanglamaydigan po'latdan, titandan yoki shishadan yasalgan. Avtoklavlanadigan qismlar va sanitariya armaturalari ostida ishlab chiqarishni ta'minlaydi farmatsevtika darajasidagi sharoitlar.
Avtomatik ma'lumotlarni yozib olish: Aqlli dasturiy ta'minotlar SD-karta bilan ulangan sonication jarayonining parametrlarini avtomatik ravishda qayd qiladi. Barcha jarayon parametrlarini aniq nazorat qilishni ta'minlaydi Yinelenebilirliği, ishlab chiqarishni standartlashtirish, va farmatsevtika mahsuloti xavfsizligi standartlarini bajarilishini osonlashtiradi.
Hielscher ultratovush’ ultratovushli protsessorlar juda ishonchli va aniq nazorat qilinishi mumkin. Barcha sanoat ultrasonikatorlar pastdan juda yuqori amplitudalargacha to'liq diapazonni etkazib berish uchun sozlanishi mumkin. Hielscherning ultratovush tizimlarining mustahkamligi og'ir yuk ostida va talabchan muhitda 24/7 ishlash imkonini beradi.
Quyidagi jadval sizga bizning ultrasonicators taxminiy qayta ishlash quvvatiga ega ekanligidan dalolat beradi:
| Buyurtma miqdori | Oqim darajasi | Tavsiya Qurilmalar |
|---|---|---|
| ko'p quduqli / mikrotitrli plitalar | yo'q | UIP400MTP |
| 1 500ml uchun | 10 200ml / min uchun | UP100H |
| 10 2000mL uchun | 20 400ml / min uchun | Uf200 ः t, UP400St |
| 0.1 20L | 04L / min uchun .2 | UIP2000hdT |
| 10 100L uchun | 10L 2 / min | UIP4000hdT |
| yo'q | 10 100L / min uchun | UIP16000 |
| yo'q | katta | Klaster UIP16000 |
Biz bilan bog'lanish! Bizdan so'rang!
Ultratovush DNK Qirqim
CC-BY-SA.03 ostida Jkwchui-dan moslashtirilgan
Adabiyotlar / Adabiyotlar
- Stittelaar, Koert; Amerongen, Geert; Kondova, Ivanela; Kuiken, Thijs; Lavieren, Rob; Pistoor, Frank; Niesters, Hubert; Doornum, Gerard; Van der Zeijst, Bernard; Mateo, Luis; Chaplin, Paul; Osterhaus, Albert (2005): Modified Vaccinia Virus Ankara Protects Macaques against Respiratory Challenge with Monkeypox Virus. Journal of Virology 79, 2005. 7845-51.
- Shah Purvin, Parameswara Rao Vuddanda, Sanjay Kumar Singh, Achint Jain, and Sanjay Singh (2014): Pharmacokinetic and Tissue Distribution Study of Solid Lipid Nanoparticles of Zidov in Rats. Journal of Nanotechnology, Volume 2014.
- J. Robin Harris, Andrei Soliakova, Richard J. Lewis, Frank Depoix, Allan Watkinson, Jeremy H. Lakeya (2012): Alhydrogel® adjuvant, ultrasonic dispersion and protein binding: a TEM and analytical study. Micron Volume 43, Issues 2–3, February 2012, 192-200.
- Doron Melamed, Gabriel Leitner, E. Dan Heller (1991): A Vaccine against Avian Colibacillosis Based on Ultrasonic Inactivation of Escherichia coli. Avian Diseases Vol. 35, No. 1 (Jan. – Mar., 1991), 17-22.
- Huang C-F, Wu T-C, Wu C-C, Lee C-C, Lo W-T, Hwang K-S, Hsu M-L, Peng H-J. (2011): Sublingual vaccination with sonicated Salmonella proteins and mucosal adjuvant induces mucosal and systemic immunity and protects mice from lethal enteritis. APMIS 119, 2011. 468–78.
Bilishingiz kerak bo'lgan dalillar
Maymun pox virusi
Maymun poxi (MPV, MPXV yoki hMPXV) virusli zoonotik kasallikni keltirib chiqaradigan ikki zanjirli DNK virusi turidir. Ushbu kasallik maymun poxi infektsiyasi sifatida tanilgan va odamlar va hayvonlarda paydo bo'lishi mumkin. Poxviridae oilasining Orthopoxvirus turiga kiradi. Maymunchechak virusi variola (VARV), sigir poxi (CPX) va vaccinia (VACV) viruslari bilan bir qatorda inson ortopoksviruslaridan biridir. Ortopoxviruslar katta g'isht shaklidagi virus zarralari bilan ajralib turadi, ular taxminan 200 000 bp bo'lgan ikki zanjirli DNK genomini o'z ichiga oladi.
ELISA tahlili
Elishay ferment bilan bog'langan immunoSorbent tahlili degan ma'noni anglatadi va immunoassayning oltin standarti hisoblanadigan yorliqli immunoassaydir. Elishay immunologik test bo'lib, uning yuqori diagnostik sezgirligi bilan baholanadi, molekulalarni, jumladan, antikorlar, antijenler, oqsillar, glikoproteinlar va gormonlarni aniqlash va miqdorini aniqlash uchun ishlatiladi. Elishay tamoyili antigen-antikor o'zaro ta'siriga asoslangan. Ushbu antigen-antikor o'zaro ta'sirida o'ziga xos antikorlar uning maqsadli antijeni bilan bog'lanadi. Faqat o'zaro ta'sir sodir bo'lganda, substrat ferment bilan bog'lanishi va keyingi substrat konversiyasi kuzatilishi mumkin, bu esa ijobiy natijaga erishiladi.
Hielscher Ultrasonics kompaniyasi yuqori samarali ultratovushli homogenizatorlarni ishlab chiqaradi laboratoriya uchun sanoat hajmi.