Maymunchechak virusiga oid ultratovush qoʻllanilishlari

Ultratovush bilan ishlov berish analitik namunalardan maymunchechak virusini (MPXV) ajratib olish, virus DNKsini fragmentlash hamda maymunchechakka qarshi vaksina ishlab chiqarishda muhim ishlov berish usulidir. Diagnostika va tahlildan (PCR, ELISA va boshqalar) oldin namunalarni tayyorlashda maymunchechak virusini hujayra ichidan chiqarish va / yoki DNKni fragmentlash maqsadida hujayralarni lizis qilish uchun ultratovush bilan ishlov berish qoʻllaniladi. Vaksina ishlab chiqarishda qoʻllanilishlar virus zarrachalari / DNKni tayyorlash, dori tashuvchilariga kapsulalash va inokulumlarni shakllantirishni qamrab oladi.
Quyida maymunchechak virusi namunalarini ultratovush bilan tayyorlash hamda ultratovush yordamida MPXV vaksinasini ishlab chiqarish haqida batafsil maʼlumot topishingiz mumkin.

Ushbu sahifada nimalarni topasiz:

Maymunchechak virusini ajratib olish uchun ultratovushli lizis
Maymunchechak virusi DNKsini ultratovush bilan fragmentlash
MPXV vaksinasini ishlab chiqarishda ultratovushning qoʻllanilishi

Polimeraza zanjir reaksiyasidan (PCR) oldin ultratovushli lizis va DNKni fragmentlash

Maymunchechak virusi infeksiyasi virus DNKsining oʻziga xos ketma-ketliklarini aniqlash uchun real vaqt rejimidagi yoki anʼanaviy polimeraza zanjir reaksiyasi (PCR) yordamida nuklein kislotalarni amplifikatsiyalash testi (NAAT) orqali aniqlanadi. Namunada (masalan, burun-halqumdan olingan surtma yoki teri biopsiyasi namunalarida) virus hujayralar ichida boʻladi.
Tahlil uchun virus hujayralardan chiqarilishi va virus DNKsi PCR uchun fragmentlanishi kerak.

Ultratovushli lizis:

Hujayralarni ultratovush bilan parchalash / lizis qilish hujayra namunalaridan viruslarni ajratib olishning ishonchli va samarali usulidir. Shu sababli u hujayra lizisi va DNKni chiqarish uchun muqobil ravishda qoʻllaniladigan lizotsim, proteinaza K va turli detergentlar kabi kimyoviy vositalarga qaraganda afzalroq usul hisoblanadi.
Biroq bunday kimyoviy reagentlardan foydalanish PCR reaksiyasining ingibirlanishini oldini olish uchun PCR tahlilidan avval namunalarni bir necha bosqichda, koʻp vaqt sarflab tayyorlashni talab qiladi. PCR ingibitorlari amplifikatsiya samaradorligiga taʼsir qilgani sababli, olib tashlanmagan ingibitorlar miqdoridagi kichik farqlar PCR mahsulotining amplifikatsiyasida katta farqlarga olib kelishi mumkin (Diaco, 1995).
Lizis uchun ultratovush bilan ishlov berishning afzalligi shundaki, lizis reagentlari va koʻp vaqt talab qiladigan namuna tayyorlashsiz hujayra tuzilmalarining toʻliq parchalanishi va DNKning chiqarilishi maqsadga muvofiqdir. (qarang: Fykse et al., 2003)

DNKni ultratovush bilan fragmentlash:

DNKni ultratovush bilan fragmentlash oddiy va ishonchli usuldir, chunki u uzunligi sozlanadigan DNK fragmentlarini (asos juftlari, bp) hosil qiladi. Ultratovush yordamida DNKni belgilangan uzunlikkacha samarali fragmentlash mumkin. Ultratovush parametrlarini aniq nazorat qilish va ilgʻor sovitish imkoniyatlari DNK degradatsiyasining oldini oladi.
DNKni ultratovush bilan fragmentlash haqida koʻproq oʻqing!

Videoda istalgan standart ko‘p quduqchali planshetdagi namunalarni yuqori intensivlikdagi ultratovush yordamida ishonchli tayyorlash imkonini beruvchi UIP400MTP tizimi ko‘rsatilgan. UIP400MTP odatda hujayra lizisi, DNK, RNK va xromatinni parchalash hamda oqsillarni ekstraksiya qilish uchun qo‘llaniladi.

Maymunchechak virusiga qarshi vaksinada ultratovushning qoʻllanilishi

Hozirda maymunchechak virusiga qarshi qoʻllaniladigan vaksinalar tirik virusli vaksinalardir. Yangi ishlab chiqilayotgan vaksinalarda boshqa platformalar, masalan, DNKga asoslangan… qoʻllanilishi mumkin. Hozirda tarkibida modifikatsiyalangan Vaccinia Ankara virusi, yaʼni zaiflashtirilgan, replikatsiyalanmaydigan ortopoksvirus mavjud. Shuningdek, tarkibida Tris (tris-aminometan) va natriy xlorid mavjud. Vaksina tarkibida vaksina virusini oʻstirish uchun ishlatiladigan tovuq embrioni fibroblast hujayralaridan olingan oz miqdordagi DNK va oqsil, benzonaza hamda gentamitsin va siprofloksatsin kabi antibiotik birikmalar ham boʻlishi mumkin.

Ultratovushli gomogenizatsiya tirik zaiflashtirilgan virusli vaksinalar, DNK vaksinalari, koʻp valentli DNK aralashmalari, mRNA vaksinalari, rekombinant oqsilli vaksinalar, virusga oʻxshash zarrachali vaksinalar va boshqalarni ishlab chiqarishda qoʻllaniladi.

Vaksina ishlab chiqarishda ultratovushning qoʻllanilishlari quyidagilarni qamrab oladi

virus zarrachalari va faol moddalarni dispersiyalash
emulsiyalash
viruslarni inaktivatsiyalash
dori tashuvchilarini formulatsiyalash (NLC, SLN)
kapsulalash
faol moddalarni eritish
adyuvantlarni tayyorlash
gazsizlantirish / havosizlantirish

Vaksina ishlab chiqarishni yaxshilash uchun ultratovushning qoʻllanilishi haqida yanada batafsil maʼlumot topishingiz mumkin!

Maymunchechak virusini ultratovush yordamida ajratib olish protokoli

Stittelaar tadqiqot guruhi (2005) maymunchechak virusini oʻstirish uchun ishlatilgan xoʻjayin hujayralar kulturasidan hamda zararlangan primatlarning tomogʻidan olingan surtmalardagi hujayralardan chiqarish uchun ultratovushli lizisdan foydalangan.

Maymunchechakka qarshi vaksinani tayyorlash:

Monkeypox viruslari o’ziga xos patogensiz tovuq embrioni fibroblast hujayralarida o’stirilgan. 1 dan 2 kungacha inkubatsiyadan so’ng, virus hujayra suspenziyasi muzdan tushirishning bir bosqichida yig’ib olindi va keyin sentrifugalash orqali konsentratsiya qilindi. Pellet qayta to’xtatildi va ultratovushli homogenlashning bir necha bosqichidan o’tkazildi.

Vaksinatsiya qilingan makakalardan maymunchechak virusini ajratib olish:

Namunalar uch marta muzlatilgan va eritilgan va ultratovushli CupHornda sonikatsiya qilingan. Vero xujayrasi mono qatlamlarini oltitali plastinkalarda emlash uchun 1% homila sigir zardobi bilan to’ldirilgan transport vositasida ikkita suyultirish (1:10 va 1:100) ishlatilgan. 37 ° C da 1 soat inkubatsiyadan so’ng, emlash olib tashlandi va 1% xomilalik sigir zardobi bilan to’ldirilgan madaniy muhit bilan almashtirildi. Bir qatlamli qatlamlar 5 kun davomida 37 ° C da o’stirildi va kristalli binafsha rangli eritma bilan bo’yaldi.
(cf. Stittelaar et al., 2005)

Ushbu videoda gaz bilan purkaladigan shkaf ichida oqimda ishlash uchun mo‘ljallangan 2 kilovattli ultratovush tizimini ko‘rsatamiz. Hielscher deyarli barcha sanoat tarmoqlari, jumladan, kimyo, farmatsevtika, kosmetika, neft-kimyo jarayonlari hamda erituvchilar asosidagi ekstraksiya jarayonlari uchun ultratovush uskunalarini yetkazib beradi. Gaz bilan purkaladigan ushbu zanglamaydigan po‘lat shkaf xavfli hududlarda ishlash uchun mo‘ljallangan. Shu maqsadda buyurtmachi yonuvchan gazlar yoki bug‘larning shkaf ichiga kirishiga yo‘l qo‘ymaslik uchun germetik shkafni azot yoki toza havo bilan purkashi mumkin.

Virus tahlili va vaksina ishlab chiqarish uchun ultratovush qurilmalari

Hielscher Ultrasonics mahsulotlarining keng assortimenti tadqiqot va analitik laboratoriyalar hamda sanoat miqyosida vaksina ishlab chiqarish uchun ideal ultratovush qurilmasini taklif etadi.
Hielscher Ultrasonics tadqiqot va analitik laboratoriyalarda foydalanish hamda sanoat miqyosida vaksina ishlab chiqarishga joriy etish uchun yuqori samarali ultratovush qurilmalari va ultratovushli bioreaktorlarni loyihalash, ishlab chiqarish va yetkazib berishga ixtisoslashgan (masalan, vaksinalar, faol farmatsevtik ingredientlar).
Ultratovush bilan ishlov berishni ochiq idishlarda, yopiq uzluksiz aralashtiriladigan reaktorlarda va uzluksiz oqim oʻtadigan reaktorlarda qoʻllash mumkin. Ultratovush tizimlarining suyuq muhit bilan aloqaga kirishadigan barcha qismlari zanglamaydigan poʻlat, titan yoki shishadan tayyorlangan. Avtoklavda sterilizatsiya qilinadigan qismlar va sanitariya talablariga mos ulash qismlari ishlab chiqarishning farmatsevtik sifat talablariga mos sharoitlarda amalga oshirilishini taʼminlaydi.
Maʼlumotlarni avtomatik qayd etish: Aqlli dasturiy taʼminot ultratovush bilan ishlov berish jarayonining parametrlarini oʻrnatilgan SD xotira kartasiga avtomatik ravishda qayd etadi. Barcha jarayon parametrlarini aniq nazorat qilish takrorlanuvchanlikni, ishlab chiqarishni standartlashtirishni taʼminlaydi va farmatsevtik mahsulotlar xavfsizligi standartlariga rioya qilishni osonlashtiradi.
Hielscher Ultrasonics ultratovushli protsessorlari juda ishonchli va ularni aniq boshqarish mumkin. Barcha sanoat ultratovush qurilmalarini pastroq amplitudalardan juda yuqori amplitudalargacha boʻlgan toʻliq diapazonni taʼminlash uchun sozlash mumkin. Hielscher ultratovush tizimlarining mustahkamligi katta yuklama ostida va murakkab sharoitlarda 24/7 ishlash imkonini beradi.

Quyidagi jadval ultratovush qurilmalarimizning taxminiy ishlov berish quvvati haqida tasavvur beradi:

Partiya hajmi	Hajmiy oqim tezligi	Tavsiya etiladigan qurilmalar
koʻp chuqurchali / mikrotitr plastinkalari	n/a	UIP400MTP
1–500mL	10–200mL/min	UP100H
10–2000mL	20–400mL/min	UP200Ht, UP400St
0,1–20L	0,2–4L/min	UIP2000hdT
10–100L	2–10L/min	UIP4000hdT
n/a	10–100L/min	UIP16000
n/a	kattaroq	quyidagi qurilmalardan iborat klaster: UIP16000

Biz bilan bogʻlaning! / Bizdan soʻrang!

Tegishli mavzular

Adabiyotlar / Manbalar

Stittelaar, Koert; Amerongen, Geert; Kondova, Ivanela; Kuiken, Thijs; Lavieren, Rob; Pistoor, Frank; Niesters, Hubert; Doornum, Gerard; Van der Zeijst, Bernard; Mateo, Luis; Chaplin, Paul; Osterhaus, Albert (2005): Modified Vaccinia Virus Ankara Protects Macaques against Respiratory Challenge with Monkeypox Virus. Journal of Virology 79, 2005. 7845-51.
Shah Purvin, Parameswara Rao Vuddanda, Sanjay Kumar Singh, Achint Jain, and Sanjay Singh (2014): Pharmacokinetic and Tissue Distribution Study of Solid Lipid Nanoparticles of Zidov in Rats. Journal of Nanotechnology, Volume 2014.
J. Robin Harris, Andrei Soliakova, Richard J. Lewis, Frank Depoix, Allan Watkinson, Jeremy H. Lakeya (2012): Alhydrogel® adjuvant, ultrasonic dispersion and protein binding: a TEM and analytical study. Micron Volume 43, Issues 2–3, February 2012, 192-200.
Doron Melamed, Gabriel Leitner, E. Dan Heller (1991): A Vaccine against Avian Colibacillosis Based on Ultrasonic Inactivation of Escherichia coli. Avian Diseases Vol. 35, No. 1 (Jan. – Mar., 1991), 17-22.
Huang C-F, Wu T-C, Wu C-C, Lee C-C, Lo W-T, Hwang K-S, Hsu M-L, Peng H-J. (2011): Sublingual vaccination with sonicated Salmonella proteins and mucosal adjuvant induces mucosal and systemic immunity and protects mice from lethal enteritis. APMIS 119, 2011. 468–78.

Bilishga arziydigan maʼlumotlar

Maymunchechak virusi

Maymunchechak (MPV, MPXV yoki hMPXV) ikki zanjirli DNK virusining bir turi boʻlib, virusli zoonoz kasallikni keltirib chiqaradi. Bu kasallik maymunchechak infeksiyasi deb ataladi va odamlarda hamda hayvonlarda uchrashi mumkin. U Poxviridae oilasining Orthopoxvirus turkumiga mansub. Maymunchechak virusi variola (VARV), sigirchechak (CPX) va vaccinia (VACV) viruslari bilan bir qatorda inson ortopoksviruslaridan biridir. Ortopoksviruslar taxminan 200 000 bp uzunlikdagi ikki zanjirli DNK genomini oʻz ichiga olgan yirik, gʻisht shaklidagi virus zarrachalari bilan tavsiflanadi.

ELISA tahlili

ELISA ferment bilan bogʻlangan immunosorbent tahlilni anglatadi va immunotahlillarning oltin standarti hisoblangan nishonli immunotahlildir. ELISA yuqori diagnostik sezgirligi bilan qadrlanadigan immunologik test boʻlib, antitanalar, antigenlar, oqsillar, glikoproteinlar va gormonlarni oʻz ichiga olgan molekulalarni aniqlash va miqdorini oʻlchash uchun qoʻllaniladi. ELISA tamoyili antigen–antitana oʻzaro taʼsiriga asoslanadi. Ushbu antigen–antitana oʻzaro taʼsiri orqali oʻziga xos antitanalar oʻz nishon antigeniga bogʻlanadi. Faqat oʻzaro taʼsir sodir boʻlgandagina substrat fermentga bogʻlanishi va keyingi substrat oʻzgarishi kuzatilishi mumkin, bu esa musbat natija olinganini anglatadi.