Elishay tahlillari uchun ultratovush namunasi tayyorlash

Elishay kabi tahlillar in vitro diagnostika, kasallik bilan bog'liq oqsillarni aniqlash va sifatini nazorat qilish uchun keng qo'llaniladi (masalan, oziq-ovqat allergiyasini kuzatish). Ultrasonik namunani tayyorlash - bu hujayralarni lyzalash va hujayra ichidagi oqsillarni, DNK, RNK va organoidlarni ajratish uchun tezkor, ishonchli va takrorlanadigan usul. Hielscher Ultrasonics bitta namunalarni, bir nechta flakonlarni, shuningdek mikrotiter plitalari va 96 quduqli plitalarni qulay tayyorlash uchun turli ultratovushli echimlarni taklif etadi.

Elishay – Fermentlar bilan bog'langan immunosorbentni tahlil qilish

Elishay fermentlar bilan bog'langan immunosorbent tahlilini anglatadi va ligand bilan bog'laydigan tahlillar toifasining keng qo'llaniladigan biokimyoviy tahlil uslubidir. Elishayda suyuqlik biriktiruvchi statsionar qattiq fazaga maxsus bog'lanish xususiyatlariga qo'shiladi. Odatda statsionar qattiq faza quduq plitasi yoki Elishay plastinkasiga qoplama sifatida qo'llaniladi. Keyin har xil suyuqlik reagentlari ketma-ket qo'shiladi, inkubatsiya qilinadi va yuviladi, natijada quduqdagi oxirgi suyuqlikda optik o'zgarish (masalan, fermentativ reaktsiya mahsuloti bilan rang rivojlanishi) sodir bo'ladi. Optik o'zgarish analitik miqdorini miqdoriy deb ataladigan o'lchovga imkon beradi “o'qish ». Miqdoriy o'qish uchun spektrofotometr, florometr yoki lyuminometr uzatiladigan yorug'likning intensivligini aniqlash va o'lchash uchun ishlatiladi. Aniqlanish sezgirligiga analitik reaktsiyalar paytida signalning kuchayishi ta'sir qiladi. Ferment reaktsiyalari yaxshi o'rganilganligi va amplifikatsiya jarayonlari ishonchli bo'lganligi sababli signalni yaratish uchun fermentlardan foydalaniladi. To'g'ri miqdorni aniqlash uchun fermentlar aniqlangan nisbatlarda aniqlanadigan reagentlar bilan bog'langan bo'lib, bu "fermentlar bilan bog'liq" immunosorbent tahlilining nomini ham tushuntiradi.
Elishay tahlillari mikrotiter plitalarida / 96 quduqli plastinkalarda o'tkazilganligi sababli, u plastinka asosidagi tahlil usuli sifatida tanilgan va masalan, antikorlar, peptidlar, oqsillarni aniqlash va miqdorini aniqlash uchun klinik in-vitro diagnostika, tadqiqotlar, dori vositalarini ishlab chiqarishda va boshqalarda qo'llaniladi. va gormonlar.
Elishay texnikasi tibbiyot, biotexnologiya, o'simlik patologiyasida diagnostika vositasi sifatida tez-tez ishlatiladi va ko'plab sohalarda sifatni nazorat qilishning muhim o'lchovidir.

Elishaydan oldin ultratovush namunasini tayyorlash

Elishay tahlilini o'tkazishdan oldin namunalar hujayra lizisini tayyorlash va hujayra ichidagi oqsillarni, DNK, RNK va boshqalarni ajratib olish jarayonlarini talab qiladi, ultratovushli hujayra lizisi va oqsil izolyatsiyasi yuqori samaradorligi, ishonchliligi va takrorlanuvchanligi. Ushbu omillarning barchasi yuqori sifatli diagnostika va tadqiqot natijalarini olish uchun muhimdir

Elishaygacha ultratovushli hujayra lizisi uchun protokol

• Hujayra madaniyati uchun: Ultratovushli hujayra lizisidan oldin mikrosentrifugada 270 xg da 5 minut davomida santrifüj xujayralari. Supernatantni aspiratsiya yo'li bilan olib tashlang va hujayralarni 30 - 100 mL RIPA tamponida qayta ishlab chiqaring. Keyin, hujayra pelletini 30 daqiqa davomida muzga soling.
• Endi hujayra namunasi ultratovushli lizizga tayyor:
  Zond tipidagi ultratovush tekshirgichidan foydalaning (masalan, Uf200 ः t S26d2 probi bilan) yoki ultratovushli ko'p namunali qurilma (masalan, bir vaqtning o'zida 10 flakongacha sonikatsiyalash uchun VialTweeter yoki mikrotitrli plitalar / 96 quduqli plitalar uchun UIP400MPT) tayyorlashingiz kerak bo'lgan namunalarga bog'liq.
  Bitta namunaning prob tipidagi sonikatsiyasi uchun hujayralarni 1,5 ml mikrosentrifugali naychalarga joylashtiring.
• Ultrasonikatorning raqamli menyusida ultratovush davomiyligini, umumiy energiya kiritilishini, tsikl rejimini va / yoki harorat chegaralarini oldindan o'rnating. Bu juda ishonchli sonikatsiyani va takrorlanuvchanlikni ta'minlaydi.
• Sonotrodni o'rnating va ultratovush moslamasini yoqing. Namunani bir xil sonikatsiyalash uchun ultratovush probining mikro uchini namuna orqali muloyimlik bilan harakatlantiring.
  Ko'pgina hujayralar uchun ultratovushli lizis 10 sekund sonikatsiyaning 2-4 tsiklidan so'ng tugaydi.
• Sonikatsiyadan so'ng sonotrodni namunadan olib tashlang. Namunalar 5 daqiqa davomida muz ustida inkübe qilinishi kerak. Keyin, qoldiqlarni peletlash uchun 20 daqiqa davomida 10,000 xg da santrifüj qiling. Supernatantlarni yangi mikrosentrifuga naychasiga o'tkazing. Analitiklarni etiketlang va -20 ° C da saqlang.
• Ultratovushli sonotrodni alkogol bilan to'ldirilgan stakanda alkogol yoki sonikat bilan yaxshilab artib tozalash mumkin, masalan, 70% etanol. Titandan tayyorlangan barcha ultratovushli problar avtoklavlanishga yaroqlidir.

To'qimalarning homogenatlari uchun:

• Haddan tashqari gemoliz qonini yaxshilab tozalash uchun to'qimalarni muzli PBS (0,01M, pH = 7,4) bilan yuvib tashlang.
• To'qimalarni torting (buyrak, yurak, o'pka, taloq va boshqalar) va uni mayda qismlarga bo'ling, ular PBSda bir hil holga keladi. Kerakli PBS hajmi to'qimalarning og'irligi bilan bog'liq. Qoida tariqasida, 1 g to'qima taxminan talab qiladi. 9 ml PBS. PBSga bir oz proteaz inhibitori qo'shilishi tavsiya etiladi. (RIPA yoki proteaz va fosfataza inhibitori kokteylini o'z ichiga olgan gipotonik lizis tamponidan foydalanish mumkin.)
• To'qimalarning kattaligiga qarab, qisqa vorteks bilan davolash (taxminan 1-2 min. 15 sek. Pulslarda) to'qimalarni oldindan davolashda yordam beradi.
• Ultrasonikatoringizga mikro uchini, masalan S26d2 ni ulang. Namuna naychasini to'qima bilan muzli hammomga joylashtiring.
• Namunani ultratovush tekshirgichingiz bilan sonikatsiya qiling, masalan UP200St (80% amplituda) 1 daqiqa davomida. impuls rejimida (15 sekund yoqilgan, 15 sekundlik pauza). Namunani muzli hammomda saqlang.
• Keyin homogenatlar santrifüjlanib, oqsilni tahlil qilish uchun boyitish uchun o'ziga xos hovuzlarni (sitosolik, yadro, mitoxondriyal yoki lizosomal) olish uchun olinadi. 5000 × g gacha bo'lgan namunani 5 daqiqa davomida santrifüjlash orqali, ustki moddalar olinadi.

Sonikatsiya paytida haroratni ishonchli boshqarish

Harorat biologik namunalarni davolash uchun, masalan, oqsillarning termal degradatsiyasini oldini olish uchun juda muhim bo'lgan jarayonga ta'sir qiluvchi hal qiluvchi omil hisoblanadi. Barcha mexanik namunalarni tayyorlash texnikasi kabi ultratovush issiqlikni hosil qiladi. Biroq, Hielscher Ultrasonics qurilmalaridan foydalanganda namunalarning harorati yaxshi nazorat qilinishi mumkin. Sizga proba ultrasonikatori yoki VialTweeter oldindan analitik ravishda tayyorlanganda namunalaringizning haroratini kuzatish va nazorat qilishning turli xil variantlarini taqdim etamiz.

1. Namuna haroratini nazorat qilish: Barcha Hielscher raqamli ultratovushli protsessorlari aqlli dasturiy ta'minot va ulanadigan harorat sensori bilan jihozlangan. Harorat sensori ultratovushli qurilmaga ulang (masalan, Uf200 ः t, UP200St, VialTweeter, UIP400MTP) va namlik naychalarining biriga harorat sensori uchini joylashtiring. Raqamli rangli sensorli displey orqali ultratovushli protsessor menyusida ultratovush namunasi uchun ma'lum bir harorat oralig'ini o'rnatishingiz mumkin. Ultrasonikator maksimal haroratga yetganda avtomatik ravishda to'xtaydi va namuna harorati belgilangan haroratning pastki qiymatiga tushguncha to'xtaydi. Keyin sonikatsiya yana avtomatik ravishda boshlanadi. Ushbu aqlli xususiyat issiqlik ta'sirida buzilishning oldini oladi.
2. VialTweeter ultratovushli ko'p namunali birligi to'g'risida, namunali naychalarni ushlab turadigan titanium blokni oldindan sovutish mumkin. Titan blokini oldindan sovutish uchun muzlatgichga yoki muzlatgichga VialTweeter blokini qo'ying (faqat transdusersiz sonotrod!) Namunadagi harorat ko'tarilishini kechiktirishga yordam beradi. Iloji bo'lsa, namunaning o'zi ham oldindan sovutilishi mumkin.
3. Sonikatsiya paytida sovutish uchun muzli hammom yoki quruq muzdan foydalaning. Sonikatsiya paytida namuna kolbaingizni muzli hammomga joylashtiring. VialTweeter uchun quruq muz bilan to'ldirilgan sayoz laganda foydalaning va issiqlik tezda tarqalishi uchun VialTweeterni quruq muz ustiga qo'ying.

Dunyo bo'ylab mijozlar biologik, biokimyoviy, tibbiy va klinik laboratoriyalarda kundalik namunalarni tayyorlash ishlarida Hielscher prob-ultrasonikatorlari hamda VialTweeter va UIP400MTP ultratovushli ko'p sonli birliklaridan foydalanadilar. Hielscher protsessorlarining aqlli dasturiy ta'minoti va haroratni boshqarish, harorat ishonchli boshqariladi va issiqlik ta'sirida namuna parchalanishiga yo'l qo'yilmaydi. Hielscher ultratovushli echimlari bilan ultratovush namunasini tayyorlash juda ishonchli va takrorlanadigan natijalarni beradi!