Sonication bilan SARS-CoV-2 Koronavirusni inaktivatsiya qilish protokoli

Hielscher VialTweeter - bu SARS-COV-2 koronavirusini faolsizlantirish uchun ishlatiladigan noyob ultratovushli ko'p namunali tayyorlash moslamasi. VialTweeter bir vaqtning o'zida 10 tagacha namuna flakonlarini tayyorlash imkonini beradi va shu bilan namunani ommaviy qayta ishlash uchun ideal birlikdir.

SARS-CoV-2 Koronavirusini VialTweeter yordamida inaktivatsiya qilish

Fiksatorni olib tashlaganingizdan so'ng, monoqatlamlar hujayralarni 1 ml MEM/5% FBS ichiga qirqishdan oldin fosfat-buferli sho'r suv (PBS) bilan uch marta yuvildi va Hielscher yordamida sonikatsiya qilindi (3 × 10 soniya yoqilgan, 100% quvvat va amplitudada 10 soniya). ultratovushli protsessor VialTweeter bilan UP200St biriktirma. Supernatantlar 10 daqiqa davomida 3000 × g da santrifüj qilish orqali aniqlandi. Welch va boshqalar tomonidan SARS-CoV-2 koronavirus inaktivatsiyasi uchun to'liq protokolni bu erda o'qing. (2020) quyida:

Hujayralar va viruslar

Vero E6 xujayralari (Vero C1008; ATCC CRL-1586) 10% (v/v) homila buzoq zardobi (FCS) bilan to'ldirilgan o'zgartirilgan Eagle minimal muhim muhitida (MEM) o'stirildi. Virusdan foydalanilgan SARS-CoV-2 shtammi hCOV-19/England/2/2020, PHE tomonidan 29/01/2020 kuni Buyuk Britaniyadagi birinchi bemorlar klasteridan ajratilgan. Ushbu virus 1-bo'lakda olingan va 2 yoki 3-bo'lakda inaktivatsiya tadqiqotlari uchun ishlatilgan.
SARS-CoV-2 inaktivatsiyasi, shuningdek reagent sitotoksikligini yo'qotish uchun ishlatiladigan reagentlar va kimyoviy moddalar uchun Welch va boshqalarning ilmiy hisobotiga qarang. (2020).

Yuvish vositalari bilan virusni inaktivatsiya qilish – Welch va boshqalar tomonidan SARS-CoV-2 Koronavirusni inaktivatsiya qilish protokoli. 2020

SARS-CoV-2 inaktivatsiyasi

Savdo mahsulotlari uchun virus preparatlari (to'qima madaniyati suyuqligi, titrlari 1 × 10 gacha⁶ 1 × 10 gacha⁸ PFU/ml) ishlab chiqaruvchilarning foydalanish bo'yicha ko'rsatmalarida tavsiya etilgan konsentratsiyalarda va kontakt vaqtlarida, mavjud bo'lganda yoki sinov laboratoriyalari tomonidan maxsus talab qilingan konsentratsiyalar va vaqtlarda reagentlar bilan uch nusxada ishlov berildi. Ishlab chiqaruvchi tomonidan konsentratsiyalar oralig'i berilgan bo'lsa, mahsulotning namunaga eng past nisbati sinovdan o'tkazildi (ya'ni sinov mahsulotining tavsiya etilgan eng past konsentratsiyasi). Namuna tashish trubkasi reagentlari, agar ishlab chiqaruvchi tomonidan namunaviy suyuqlikning reagentga nisbati belgilanmagan bo'lsa, bir hajm to'qima madaniyati suyuqligining o'n hajmli reagentga nisbati yordamida sinovdan o'tkazildi. Yuvish vositalari, fiksatorlar va erituvchilar ko'rsatilgan vaqtlarda ko'rsatilgan konsentratsiyalarda sinovdan o'tkazildi. Barcha inaktivatsiya bosqichlari xona haroratida (18-25 ° C) amalga oshirildi. Muqobil namuna turlarini sinab ko'rish uchun virus ko'rsatilgan namuna matritsasiga 1:9 nisbatda kiritildi, so'ngra yuqoridagi kabi sinov reagentlari bilan ishlov berildi. Barcha eksperimentlar sinov reagenti o'rniga PBS ning ekvivalent hajmiga ega bo'lgan uch nusxali nazorat soxtalashtirilgan namunalarni o'z ichiga oladi. Kerakli aloqa vaqtidan so'ng darhol 1 ml ishlov berilgan namuna mos ravishda tanlangan filtrlash matritsasi yordamida qayta ishlandi. Inaktivatsiya sinovi uchun reagentni olib tashlash Pirs 4ml detergent Removal Spin Columns (Termo Fisher) yordamida yoki bo'sh Pirs 10ml sig'imli santrifüj ustunlarini (Termo Fisher) SM2 Bio-Beads, Sephacryl S-40 yoki Sephacryl S-40 bilan to'ldirish orqali kattaroq aylanish ustuni formatida amalga oshirildi. 4 ml berish uchun Sephadex LH-20 qadoqlangan boncuklar / qatronlar. Amicon filtrlari yordamida tozalash uchun 2 × 500 mkl namunalar yuqorida tavsiflangan usul bo'yicha ikkita santrifüj filtr yordamida tozalandi, keyin birlashtirildi. Glutaraldegidni olib tashlash bilan formaldegid va formaldegid uchun 1 × 500 mkl namuna hajmi bilan bitta filtr ishlatilgan, 500 mkl PBS da qayta ishlangandan keyin qayta suspenziya qilingan va 400ul MEM/5% FBS ga qo'shilgan. Infektsiyalanganlarni inaktivatsiya qilish uchun bir qatlamli, 12,5 sm² Vero E6 xujayralari shishalari (2,5 × 10⁶ 2,5 ml MEM/5% FBS dagi hujayralar/kolba) MOI 0,001 da infektsiyalangan va 37°C/5% CO da inkubatsiya qilingan.₂ 24 soat davomida. Supernatant olib tashlandi va hujayralar xona haroratida 5 ml formaldegid yoki formaldegid va glutaraldegid yordamida 15 yoki 60 daqiqa davomida o'rnatildi. Fiksator olib tashlandi va hujayralarni 1 ml MEM/5% FBS ichiga qirqishdan oldin mono qatlamlar PBS bilan uch marta yuvildi va VialTweeter qo'shimchasi (Hielscher Ultrasound) bilan UP200St yordamida sonikatsiya qilindi (3 × 10 soniya yoqilgan, 100% quvvat va amplitudada 10 soniya o'chirilgan). Texnologiya). Supernatantlar 10 daqiqa davomida 3000 × g da santrifüj qilish orqali aniqlandi.

Welch va boshqalarning protokoliga muvofiq ultratovushli VialTweeter yordamida SARS-CoV-2 koronavirusini inaktivatsiya qilish uchun ishlatiladigan reagent tafsilotlari. 2020

Hielscher VialTweeter-dan foydalanishni o'z ichiga olgan to'liq protokolni bu erda topishingiz mumkin:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

Murakkab ultratovushli dismembratatorlar va hujayralarni buzuvchilar

Ko'p namunali ultrasonikator VialTweeter biologik, biokimyoviy va klinik laboratoriyalarda namuna tayyorlash uchun ko'plab ultratovushli echimlardan biridir. Hielscher Ultrasonics sizning ilovangiz uchun ideal ultratovushli dismembratorni taklif qiladi, masalan, hujayra lizisi, hujayra ekstraktsiyasi, to'qimalarni homogenlashtirish, lizat eritish, eritish, namunani gazsizlantirish va boshqalar.
Agar siz to'g'ridan-to'g'ri yoki bilvosita sonikatsiyani afzal ko'rsangiz va ultratovush namunasini davolashning maqsadi nima bo'lsa, soatiga va kuniga qancha namunani qayta ishlashingiz kerakligini bizga xabar bering. Sizga kundalik ish tartibi uchun eng mos ultratovush qurilmasini tavsiya qilamiz!
Hielscher Ultrasonics-ning raqamli ultratovushli protsessorlari aqlli dasturiy ta'minot, avtomatik ma'lumotlarni yozib olish, haroratni nazorat qilish, sonikatsiya davomiyligi, sikl / impuls rejimi uchun oson oldindan sozlash imkoniyatlari, shuningdek, namunali yoritish va brauzerni masofadan boshqarish bilan jihozlangan. Sizning tadqiqotingiz va ish tartibingiz imkon qadar qulay va muvaffaqiyatli bo'lishi uchun biz ultratovush qurilmalarimizni iloji boricha aqlli qilishga intilamiz.
VialTweeter yordamida ultratovush namunalarini tayyorlash protokollarini o'z ichiga olgan qo'shimcha ilovalarni topish uchun shu yerni bosing!