SARS-CoV-2 koronavirusini Sonikatsiyalash bilan inaktivatsiyasi protokoli

Hielscher VialTweeter - bu noyob ultratovushli ko'p namunali tayyorgarlik bo'limi, bu SARS-COV-2 koronavirusini inaktiv qilish uchun ishlatiladi. VialTweeter bir vaqtning o'zida 10 tagacha flakonlarni tayyorlashga imkon beradi va shu bilan namunalarni ommaviy qayta ishlash uchun ideal birlik hisoblanadi.

SARS-CoV-2 koronavirusini VialTweeter yordamida inaktivatsiyasi

Fiksatifni olib tashlaganingizdan so'ng, monelayerlar hujayralarni 1 ml MEM / 5% FBS ga qirib tashlashdan oldin fosfat tamponli sho'r suv bilan (PBS) uch marta yuvilib, Hielscher yordamida sonikatsiyalangan (3 × 10 soniya, 100% quvvat va amplituda 10 soniya o'chirilgan). ultratovushli protsessor VialTweeter bilan UP200St ilova. Supero'tkazuvchilar 10 minut davomida 3000 × g santrifüj bilan aniqlandi. Welch va boshqalarning SARS-CoV-2 koronavirus inaktivatsiyasi uchun bu erda to'liq protokolni o'qing. Quyida (2020):

Hujayralar va viruslar

Vero E6 xujayralari (Vero C1008; ATCC CRL-1586) o'zgartirilgan Eagle-ning minimal zarur muhitida (MEM) 10% (v / h) xomilaning buzoq zardobi (FCS) bilan to'ldirilgan. Virus ishlatilgan SARS-CoV-2 hCOV-19 / Angliya / 2/2020, 29/01/2020 da Buyuk Britaniyadagi birinchi bemorlar klasteridan PHE tomonidan ajratilgan. Ushbu virus 1-parchada olingan va 2 yoki 3-qismda inaktivatsiyani o'rganish uchun ishlatilgan.
SARS-CoV-2 inaktivatsiyasi uchun ishlatiladigan reaktivlar va kimyoviy moddalar hamda sitotoksikani olib tashlash uchun iltimos, Welch va boshqalarning ilmiy hisobotiga qarang. (2020).

Yuvish vositalari bilan virusni inaktivatsiyasi – Welch va boshqalarning SARS-CoV-2 Coronavirus inaktivatsiyasi protokoli. 2020 yil

SARS-CoV-2 inaktivatsiyasi

Tijorat mahsulotlari uchun virus preparatlari (to'qima madaniyati suyuqligi, titrlari 1 × 10 gacha⁶ 1 × 10 gacha⁸ PFU / ml) reaktivlar bilan uch nusxada, konsentrasiyalarda va ishlab chiqaruvchilarning foydalanish yo'riqnomasida tavsiya etilgan aloqa vaqtlarida, agar mavjud bo'lsa yoki sinov laboratoriyalari tomonidan maxsus talab qilingan konsentratsiyalarda va vaqtlarda ishlov berildi. Bir qator kontsentratsiyalar ishlab chiqaruvchi tomonidan berilgan bo'lsa, mahsulot va namunaning eng past nisbati sinovdan o'tkazildi (ya'ni sinov mahsulotining tavsiya etilgan eng past konsentratsiyasi). Namunani tashish naychali reaktivlari, agar ishlab chiqaruvchi tomonidan namunaviy suyuqlik va reaktivning hajm nisbati belgilanmagan bo'lsa, to'qima madaniyati suyuqligining o'n hajmli reaktiviga nisbati yordamida sinovdan o'tkazildi. Yuvish vositalari, fiksatiflar va erituvchilar belgilangan konsentratsiyalarda belgilangan vaqt davomida sinovdan o'tkazildi. Barcha inaktivatsiya bosqichlari xona haroratida (18 - 25 ° C) bajarilgan. Muqobil namuna turlarini sinash uchun virus 1: 9 nisbatda ko'rsatilgan namunaviy matritsaga quyilib, so'ngra yuqoridagi kabi sinov reagentlari bilan ishlangan. Barcha tajribalar sinov reaktivi o'rniga teng miqdordagi PBS bilan uch marta boshqariladigan masxara qilingan namunalarni o'z ichiga olgan. Kerakli aloqa vaqtidan so'ng darhol 1 ml ishlov berilgan namuna tegishli tanlangan filtratsiya matritsasi yordamida qayta ishlandi. Inaktivatsiyani sinab ko'rish uchun reaktivlarni olib tashlash, Pirs 4ml yuvish vositalarini olib tashlash spin kolonnalari (Termo Fisher) yordamida yoki bo'sh Pirs 10 mL quvvatli santrifüj ustunlarini (Thermo Fisher) SM2 Bio-Beads, Sephacryl S-400HR yoki Sephadex LH-20 4ml qadoqlangan boncuklar / qatronlar berish uchun. Amicon filtrlari yordamida tozalash uchun oldin tavsiflangan usul bo'yicha ikkita markazlashtiruvchi filtr yordamida 2 × 500ml namunalar tozalangan, so'ngra birlashtirildi. Formaldegid va glutaraldegidni olib tashlagan formaldegid uchun bitta filtr 1 × 500 mkl hajmdagi namuna bilan ishlatilgan, 500 mkl PBSda qayta ishlangandan keyin qayta to'xtatilgan va 400ul MEM / 5% FBS ga qo'shilgan. Infektsiyani inaktivatsiya qilish uchun bir qavatli qatlamlar, 12,5 sm² Vero E6 hujayralarining kolbalari (2,5 × 10)⁶ hujayralar / kolba 2,5 ml MEM / 5% FBS) MOI 0,001 da yuqtirilgan va 37 ° C / 5% CO da inkubatsiya qilingan.₂ 24 soat davomida. Supernatant olib tashlandi va hujayralar 5 ml formaldegid yoki formaldegid va glutaraldegid yordamida xona haroratida 15 yoki 60 minut davomida o'rnatildi. Fiksifikator olib tashlandi va bitta qatlamlar hujayralarni 1 ml MEM / 5% FBS ichiga qirib tashlashdan oldin PBS bilan uch marta yuvilib, VialTweeter qo'shimchali UP200St (Hielscher ultratovush) yordamida UP200St yordamida sonikatsiyalangan (3 × 10 soniya, 100% quvvat va amplituda 10 soniya yopiq). Texnologiya). Supero'tkazuvchilar 10 minut davomida 3000 × g santrifüj bilan aniqlandi.

Welch va boshqalarning bayonnomasiga binoan ultratovushli VialTweeter yordamida SARS-CoV-2 koronavirus inaktivatsiyasi uchun ishlatiladigan reaktiv tafsilotlari. 2020 yil

Hielscher VialTweeter-dan foydalanishni o'z ichiga olgan to'liq protokolni bu erda topishingiz mumkin:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

Murakkab ultratovushli disembratorlar va hujayralarni buzuvchilar

VialTweeter ko'p namunali ultratovush vositasi biologik, biokimyoviy va klinik laboratoriyalarda namunalarni tayyorlash uchun ko'plab ultratovushli echimlardan biridir. Hielscher Ultrasonics sizning ilovangiz uchun ideal ultratovushli dismembratorni taklif qiladi, masalan, hujayra lizisi, hujayraning ekstraktsiyasi, to'qima homogenizatsiyasi, lizatning eruvchanligi, erishi, namunani degazatsiya qilish va hk.
Agar siz to'g'ridan-to'g'ri yoki bilvosita sonikatsiyani afzal ko'rsangiz va ultratovushli namunani davolashning maqsadi nima bo'lsa, soatiga va kuniga qancha namunani qayta ishlashingiz kerakligini bizga xabar bering. Sizga kundalik ish tartibingiz uchun eng mos ultratovush moslamasini tavsiya qilamiz!
Hielscher Ultrasonics-ning raqamli ultratovushli protsessorlari aqlli dasturiy ta'minot, ma'lumotlarni avtomatik yozib olish, haroratni boshqarish uchun oldindan sozlashning oson variantlari, sonikatsiya davomiyligi, tsikl / impuls rejimi, shuningdek yoritishni va brauzerni masofadan boshqarish bilan jihozlangan. Sizning ultratovushli qurilmalaringizni iloji boricha aqlli qilishga intilamiz, shunda sizning izlanishlaringiz va ishingiz imkon qadar qulay va muvaffaqiyatli bo'ladi.
VialTweeter yordamida ultratovush namunalarini tayyorlash protokollarini o'z ichiga olgan qo'shimcha dasturlarni topish uchun shu erni bosing!